波尔山羊除精浆冷冻精液机理的研究--《西北农林科技大学》2002年硕士论文
波尔山羊除精浆冷冻精液机理的研究
【摘要】：
本研究以波尔山羊精液为实验材料，采用二步稀释法在降温前以脱脂乳-卵柠液为洗涤液，应用离心洗涤法去除精浆，并采用超微结构分析，谷草转氨酶活力测定，以及异种穿卵试验等多种方法，探讨除精浆对山羊精子冷冻保存效果的影响，并对其机理进行分析。实验结果如下：
以脱脂乳-卵柠液为离心介质，以1000r／min离心精子2次，每次8min，解冻后精子活率为0.367±0.032、复苏率为56.422±2.481％、顶体完整率为50.142±2.298％、精子畸形率为16.173±2.187％、存活时间为9.517±0.631h：而以未离心、未除精浆的精液为对照组的上述各指标依次为0.378±0.031、59.068±2.289％、51.743±2.272％、14.265±2.323％和9.603±0.764h，两者相比差异均不显著(P＞0.05)，说明仅离心处理对山羊精液上各指标无显著影响(P＞0.05)。而在该离心条件下通过洗涤法去除精浆，则解冻后各项指标依次为0.467±0.041、70.431±6.825％、57.913±2.609％、9.305±2.534％和9.638±0.847h，同对照组相比，精子存活时间差异不显著(P＞0.05)，而其它指标差异均极显著(p＜0.01)，说明去除精浆对解冻后山羊精液品质有极显著提高作用。这种作用可能与去除了原精液中有害物质等因素有关。
利用透射电子显微镜对冷冻前后精子超微结构的变化进行观察，发现离心处理使冷冻前精子质膜稍扩张，而去除精浆后对冷冻前精子超微结构无显著影响；冷冻后发现未去除精浆可造成解冻后精子出现典型的“假顶体反应”，顶体酶提前释放，线粒体鞘受损严重：而去除浆精后，精子所受冷冻损伤程度明显减少，这可能是除精浆后精子受精能力显著提高的重要原因之一。
以精子逸出的谷草转氨酶活力为检测指标，研究除精浆对精子质膜透通性的影响，发现除精浆后精子内逸出的谷草转氨酶显著增多，其活力从降温前、平衡后、解冻后分别为280.8±60.8U、376.08±76.5U和492.88±93.5U；而对照仅为209.8±16.7U、268.8±47.5U、259.4±29.4U，两者差异极显著(p＜0.01)，表明除精浆后精子质膜通透性明显增大。
利用去透明带仓鼠检测解冻后精子受精能力，去除精浆后精子穿卵率可达82.312±7.478％，而未去除精浆时则仅为69.398±2.904％，两者差异极显著(p＜0.01)，表明去除精浆后精子受精能力显著提高。
【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2002【分类号】：S827.3【目录】：
第一章 家畜精液冷冻保存技术研究概况8-34
1 家畜精液冷冻保存技术研究进展8-10
1．1 家畜精液冷冻保存技术研究的沿革8-9
1．2 山羊精液冷冻保存技术的进展9-10
2 精液冷冻保存的机理10-18
2．1 概论10-11
2．2 精液保存的细胞学基础11-12
2．2．1 过冷溶液及冰结晶11-12
2．2．2 水形成冰晶的过程12
2．3 冷冻对细胞造成的损伤12-14
2．3．1 细胞内外的溶质浓度12-13
2．3．2 细胞脱水13
2．3．3 蛋白质变性13
2．3．4 细胞膜的损伤13-14
2．4 精液冷冻过程中的变化14-18
2．4．1 冷冻过程中精液中水分、盐及胶体物质的变化14-15
2．4．2 精子遭受低温损伤后的变化15-16
2．4．3 精子正常结构在受精作用中的重要性16-18
3 精液冷冻保存技术18-25
3．1 稀释液18-21
3．1．1 稀释液的成分及其作用18
3．1．2 防冻害保护剂18-19
3．1．3 低温保护剂19-20
3．1．4 维持渗透压物质20-21
3．1．4 抑菌物质21
3．1．5 其他添加剂21
3．2 精液冻前处理21-25
3．2．1 稀释倍数21-23
3．2．2 稀释方法23-24
3．2．3 冻前的降温和平衡24-25
4 除精浆冷冻精液研究进展25-33
4．1 家畜精液的化学成分和生理生化特性25-26
4．2 精液的成分及其作用26-30
4．2．1 无机物26
4．2．2 糖类26
4．2．3 蛋白质26-27
4．2．4 酶27-29
4．2．5 核酸29
4．2．6 脂类29-30
4．2．7 维生素30
4．3 精浆中降低精子品质的因素30-31
4．4 除精浆冷冻精液研究进展31-33
5 小结与展望33-34
第二章 试验研究34-49
2 材料与方法34-39
2．1 材料34-35
2．1．1 实验动物34
2．1．2 主要试剂34-35
2．1．3 主要设备35
2．2 方法35-39
2．2．1 各处理组的设立35-36
2．2．2 精液的采集，离心处理，冷冻和解冻36
2．2．3 精子品质的检测36-39
3 结果39-43
3．1 不同阶段精子活率及复苏率的改变39-40
3．2 不同处理阶段精子的顶体完整率与畸形率40-41
3．3 精子存活时间41
3．4 精子超微结构观察41-42
3．5 谷草转氨酶（GOT）活力的检测结果42-43
3．6 精子的受精能力43
4 讨论43-49
4．1 离心方法对精子品质的影响43-44
4．2 洗涤法去除精浆对精子形态的影响44-45
4．3 除精浆对精子膜通透性的影响45-46
4．4 精液除精浆的作用46-47
4．5 精子受精能力的检测47-48
4．6 除精浆精液的种间差异问题48-49
参考文献51-58
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