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1、2021/3/231血细胞分析仪血细胞分析仪检测原理与影响因素检测原理与影响因素2021/3/232前言n传统的血常规分析法完全采用手工法。传统的血常规分析法完全采用手工法。n2020世纪世纪5050年代年代, ,库尔特（库尔特（W. H. CoulterW. H. Coulter）先生）先生根据电阻抗原理根据电阻抗原理, ,又称库尔特原理又称库尔特原理,
,生产出第一生产出第一台血细胞计数仪台血细胞计数仪, ,开创了血细胞分析仪的新纪开创了血细胞分析仪的新纪元元, ,使人工计数实现自动化。使人工计数实现自动化。n随着科学技术的发展随着科学技术的发展, ,血细胞分析仪也日新月血细胞分析仪也日新
2、月异异, ,目前己普及至县或卫生院。目前己普及至县或卫生院。 2021/3/233前言n美国美国COULTERCOULTER公司的公司的STKSSTKS、MAXMMAXM系列血细胞分析仪系列血细胞分析仪 -电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法
nBayerBayer公司的公司的Advia120Advia120型和新近推出的型和新近推出的Advia Advia 21202120型血细胞分析仪型血细胞分析仪 -激光和细胞化学法激光和细胞化学法 n日本东亚公司的日本东亚公司的NE1500NE1500、SYSMEXSYSMEX公司的公司的SE9000SE9000血血
3、细胞分析仪细胞分析仪-电阻抗和射频电导联合检测法电阻抗和射频电导联合检测法 nABBOTTABBOTT公司的公司的CD3000,CD3500CD3000,CD3500血细胞分析仪血细胞分析仪-多多角度激光偏振光散射检测法角度激光偏振光散射检测法 n 常用的血细胞分析仪常用的血细胞分析仪: : 2021/3/234血细胞分析仪的主要功能n血细胞计数功能血细胞计数功能
测量WBC、 RBC 、 PLT 、MCV、RET等n白细胞分类功能白细胞分类功能 测量NE%、LYM%、MO%、EO%、BA%等n血红蛋白检测功能血红蛋白检测功能 测量HGB2021/3/235血细胞计数的检测原理n电阻抗法n流式
4、细胞术与光散射法检测原理2021/3/236电阻抗法检测原理n血细胞具有血细胞具有相对非导电相对非导电的性质的性质n 悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒通过计数小孔悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒通过计数小孔 时可引起时可引起电阻电阻及及电压电压的变化的变化, ,出现出现脉冲信号脉冲信号n 脉冲的数量脉冲的数量=细胞的数量细胞的数量n
脉冲的大小脉冲的大小=细胞的大小细胞的大小n 该原理又称该原理又称库尔特原理库尔特原理（Coulter principleCoulter principle）n 测量测量 RBC,WBC,PLT,MCV,MPVRBC,WBC,PLT,MCV,MPV2021/3/237
5、电阻抗法检测原理2021/3/238电阻抗法影响因素n白细胞白细胞: :n 由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转 移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷冷 球蛋白球蛋白,
,或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、糖尿病 病人血中存在有病人血中存在有冷纤维蛋白冷纤维蛋白等等, ,均可导致血液中某些物质凝集均可导致血液中某些物质凝集, , 致使致使白细胞计数增高白细胞计数增高。此时将稀释标本放在。此时将稀释标本放
6、在3737度水浴度水浴10min10min后后 立即计数可消除此影响立即计数可消除此影响. .n 有核红细胞出现使有核红细胞出现使白细胞计数假性增高白细胞计数假性增高; ;n 低色素性贫血或红细胞内含大量低色素性贫血或红细胞内含大量sHbsHb或或HbCOHbCO, ,或某些新生儿及某或某些新生儿及某 些肝病病人些肝病病人红细胞膜脂类异常红细胞膜脂类异常,
,从而产生抗溶血剂作用从而产生抗溶血剂作用, ,红细胞红细胞 溶解不完全溶解不完全; ;n 多发性骨髓瘤的多发性骨髓瘤的M M蛋白增多时蛋白增多时,PH,PH低的情况下低的情况下, ,M M蛋白可与溶血剂蛋白可与溶血剂 发生反应而使结果偏高
7、发生反应而使结果偏高; ;n 各种病理引起的血栓前状态使血小板易于聚集各种病理引起的血栓前状态使血小板易于聚集, ,上机时影响结果上机时影响结果2021/3/239电阻抗法影响因素n 红细胞红细胞: :n 血小板血小板: :红细胞碎片和脂血中与血小板大小相似的乳糜红细胞碎片和脂血中与血小板大小相似的乳糜 微粒等作为血小板计数微粒等作为血小板计数,
,导致血小板计数偏高。导致血小板计数偏高。n RBCRBC: :在某种病理情况下在某种病理情况下, ,如白血病如白血病, ,白细胞数明显增加而又白细胞数明显增加而又 伴严重贫血时伴严重贫血时, ,即可使所得各项参数产生明显误差。即可使所得各项参数产生
8、明显误差。n MCHMCH: :不能探测单个红细胞的结构（不能探测单个红细胞的结构（MCH=MCH=总总HGB/RBCHGB/RBC）n MCVMCV及及MCHCMCHC : :红细胞通过小孔时经受一定的形态学变化红细胞通过小孔时经受一定的形态学变化, ,红细红细 胞形态与细胞质黏度有关胞形态与细胞质黏度有关,
,细胞质黏度受细胞细胞质黏度受细胞HGBHGB含量影响含量影响, , 因此因此HGBHGB浓度可影响细胞形态浓度可影响细胞形态, ,进而影响进而影响MCVMCV及及MCHCMCHC的准确性的准确性 （MCHC=HGB/HCT)MCHC=HGB/HCT)2021/3/2310流式细胞术与
9、光散射法检测原理n 白细胞计数白细胞计数n 红细胞和血小板计数红细胞和血小板计数n 网织红细胞计数网织红细胞计数n 有核红细胞计数有核红细胞计数2021/3/2311流式细胞术与光散射法检测原理n白细胞计数白细胞计数n利用流式细胞术利用流式细胞术, ,单个细胞单个细胞随着流体动力聚集的随着流体动力聚集的鞘流液通过激光照射的检测区时鞘流液通过激光照射的检测区时,
,使光束发生使光束发生折折射射、衍射衍射和和散射散射n散射光由光检测器接受后产生散射光由光检测器接受后产生脉冲脉冲n脉冲的大小脉冲的大小与被照与被照细胞的大小细胞的大小成成正比正比n脉冲的数量脉冲的数量代表代表细胞的数量细胞的数量202
10、1/3/2312流式细胞术与光散射法检测原理n红细胞和血小板计数红细胞和血小板计数n在红细胞在红细胞/ /血小板通道中血小板通道中,RBC/PLT,RBC/PLT试剂与血液混合反应试剂与血液混合反应, ,将将自然状态下的红细胞自然状态下的红细胞/
/血小板变成球形并经戊二醛固定后使血小板变成球形并经戊二醛固定后使单个细胞单个细胞逐个逐个经过检测器经过检测器n低角度前向激光（低角度前向激光（2 23 3）测量单个细胞）测量单个细胞体积体积与与总数总数 n高角度激光（高角度激光（5 51515）测量单个细胞的）测量单个细胞的折射指数折射指数(RI(RI)n根据单个细胞根据单个细胞体积体积和其相应细
11、胞的和其相应细胞的折射指数折射指数, ,可将可将红细胞红细胞和和血小板血小板区分开来区分开来, ,并准确得出相应的参数。并准确得出相应的参数。n细胞的折射指数细胞的折射指数(RI): (RI): 反映细胞内容物的浓度反映细胞内容物的浓度。2021/3/2313流式细胞术与光散射法检测原理n红细胞和血小板计数红细胞和血小板计数
红细胞体积和血红蛋白浓度散射图红细胞体积和血红蛋白浓度散射图n1 1 低角度光散射（低角度光散射（2 2-3-3）n2 2 高角度光散射（高角度光散射（5 5-15-15）n3 3 含有红细胞的含有红细胞的MieMie图图 n4 4 红细胞方法中检测的血小板红细胞方法中检
12、测的血小板2021/3/2314流式细胞术与光散射法检测原理n网织红细胞计数网织红细胞计数n网织红细胞分析采用某些网织红细胞分析采用某些染染料（如核酸染料料（如核酸染料Oxazine Oxazine 750750）染色的原理）染色的原理, ,并将细胞球形化并将细胞球形化,
,用激光二维法对网用激光二维法对网织红细胞进行分析测定。织红细胞进行分析测定。n前向角光散射强度前向角光散射强度=细胞大小细胞大小n荧光强度荧光强度=胞内胞内RNARNA浓度浓度n根据荧光强度根据荧光强度,可将网织红细胞分成可将网织红细胞分成低吸收荧光强度网织低吸收荧光强度网织红细胞红细胞（LFR)、中吸收荧光强度网织红细胞
13、中吸收荧光强度网织红细胞(MFR)和和高高吸收荧光强度网织红细胞吸收荧光强度网织红细胞(HFR)三部分。三部分。n幼稚网织红细胞显示最强的荧光幼稚网织红细胞显示最强的荧光2021/3/2315流式细胞术与光散射法检测原理n仪器还可提供仪器还可提供网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数（reticulocyte mature
index,RMIreticulocyte mature index,RMI）。）。nRMI=RMI=n网织红细胞计数网织红细胞计数n RMI RMI增高增高与骨髓移植、慢性溶血、近期出血或疗效与骨髓移植、慢性溶血、近期出血或疗效 反应有关反应有关; ;n RMIRMI降低降
14、低通常提示骨髓衰竭或无效造血。通常提示骨髓衰竭或无效造血。 HFR+MFR HFR+MFR LFR LFR2021/3/2316流式细胞术与光散射法影响因素n 病人样品中的病人样品中的有核红细胞有核红细胞 ( (尤其是新生儿样品尤其是新生儿样品) )能够使白细能够使白细 胞计数假性升高。胞计数假性升高。n
样品的样品的冷凝集现象冷凝集现象可能引起可能引起红细胞计数假性降低红细胞计数假性降低 n 出现在出现在镰形红细胞贫血镰形红细胞贫血中的一些不可逆的中的一些不可逆的镰形细胞镰形细胞在本系在本系 统中可能不完全呈圆球形统中可能不完全呈圆球形, ,从而导致从而导致RDW RDW 升高升高, ,因而
15、也低因而也低 估了估了MCVMCV值。镰形细胞可能引起其它红细胞参数的错误。值。镰形细胞可能引起其它红细胞参数的错误。2021/3/2317流式细胞术与光散射法影响因素n接受全肠道外营养的接受全肠道外营养的(TPN)(TPN)病人样品病人样品, ,其中包括其中包括高脂剂高脂剂,
,可能出现可能出现血小板计数假性升高血小板计数假性升高。这些样品能够包含。这些样品能够包含脂脂滴滴, ,并且这些脂滴会出现在血小板计数区域。并且这些脂滴会出现在血小板计数区域。 n血小板大量聚集时血小板大量聚集时,有时造成血小板假性降低有时造成血小板假性降低,且无且无报警提示报警提示2021/3/2318白细胞分类的功
16、能n白细胞二分群、三分群计数原理白细胞二分群、三分群计数原理n白细胞五分类计数原理白细胞五分类计数原理n
容量、电导、光散射法容量、电导、光散射法n激光与细胞化学法激光与细胞化学法n电阻抗与射频法电阻抗与射频法n多角度偏振光散射检测原理多角度偏振光散射检测原理2021/3/2319白细胞二分群、三分群计数原理白细胞二分群、三分群计数原理n根据电阻抗的原理根据电阻抗的原理,
,不同体积的白细胞通过小孔时不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异产生的脉冲大小有明显的差异, ,根据脉冲的大小根据脉冲的大小, ,血细胞仪对白细胞进行分群。血细胞仪对白细胞进行分群。n 经溶血素处理后经溶血素
17、处理后, ,红细胞迅速溶解红细胞迅速溶解, ,白细胞胞质白细胞胞质 经细胞膜渗出经细胞膜渗出, ,胞膜紧裹在胞膜紧裹在细胞核细胞核或或颗粒颗粒周围脱周围脱 水的细胞体积与其自然体积无关水的细胞体积与其自然体积无关, ,取决于取决于脱水后脱水后 细胞内有形物质的多少细胞内有形物质的多少。n
仪器将体积为仪器将体积为3535450fL450fL的血细胞分为的血细胞分为256256个通道个通道, , 每个通道为每个通道为1.64fL1.64fL, ,根据根据细胞大小细胞大小初步确认初步确认细胞群细胞群, , 并显示出白细胞体积直方图并显示出白细胞体积直方图2021/3/2320白细胞二分群、三分群计
18、数原理白细胞二分群、三分群计数原理n根据电阻抗的原理根据电阻抗的原理, ,不同体积的白细胞通过小孔时不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异产生的脉冲大小有明显的差异, ,根据脉冲的大小根据脉冲的大小,
,血细胞仪对白细胞进行分群。血细胞仪对白细胞进行分群。淋巴细胞淋巴细胞中性粒细胞中性粒细胞单核细胞单核细胞,嗜酸粒细胞嗜酸粒细胞嗜碱粒细胞嗜碱粒细胞,白血病细胞白血病细胞核左移的各阶段幼稚细胞核左移的各阶段幼稚细胞2021/3/2321白细胞二分群、三分群计数影响因素白细胞二分群、三分群计数影响因素n电阻法只是根据细胞体积的大小电阻法只是根据细胞体积的大小,
,将白细胞分成几个群体
19、。将白细胞分成几个群体。在一个群体中在一个群体中, ,可能发某种细胞为主（如小细胞区主要是可能发某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞）淋巴细胞）, ,但由于细胞体积间的交叉但由于细胞体积间的交叉, ,可能还有其它细胞可能还有其它细胞的存在。的存在。任何一类任何一类白白细胞的增多细胞的增多, ,均可使直方图产生相似均可使直方图产生相似变化变化,
,直方图只是提示检查者粗略判断细胞比例变化或有直方图只是提示检查者粗略判断细胞比例变化或有无明显的异常细胞出现无明显的异常细胞出现, ,进而在显微镜下检查中注意这些进而在显微镜下检查中注意这些变化变化, ,实际分类以手工分类为准。实际分类以手工分类为准
20、。n 外周血出现外周血出现有核红细胞有核红细胞或或巨大血小板巨大血小板, ,采血时由于技术问采血时由于技术问 题造成题造成血小板聚集血小板聚集或或某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有 抵抗作用抵抗作用, ,使红细胞溶血不完全使红细胞溶血不完全, ,致待测标本中有大量红致待测标本中有大量红 细胞膜碎片等情况细胞膜碎片等情况,
,均可使白细胞直方图在均可使白细胞直方图在50fl50fl以下区域以下区域 出现一个或大或小的小峰。使小细胞区计数出现一个或大或小的小峰。使小细胞区计数假性升高假性升高2021/3/2322容量、电导、光散射法检测原理容量、电导、光散射法检测原理
21、n在测试的标本内加溶血剂在测试的标本内加溶血剂,使使红细胞溶解红细胞溶解n加入抗溶血稳定剂加入抗溶血稳定剂,中和溶血剂的作用中和溶血剂的作用,使使白细胞白细胞表面、胞质及细胞大小表面、胞质及细胞大小等特征仍保持与体内时等特征仍保持与体内时相相同同的状态的状态n使用使用鞘流技术鞘流技术,使溶血后液体内白细胞分别使溶血后液体内白细胞分别单个单个通通过激光检测区接受检测过激光检测区接受检测nVSCVSC技术是技术是全血未经任何处理全血未经任何处理,
,血细胞保持与体内血细胞保持与体内形态形态完全相同完全相同状态下得出的检测结果状态下得出的检测结果2021/3/2323容量、电导、光散射法检测原理n电
22、阻抗原理电阻抗原理:
:检测检测细胞体积细胞体积n电导技术电导技术:根据细胞壁能产生高频电流的性能根据细胞壁能产生高频电流的性能,用高频用高频电磁探针测量电磁探针测量细胞内部结构细胞内部结构,通过通过细胞核和细胞质的细胞核和细胞质的比例比例、细胞内颗粒的大小和密度细胞内颗粒的大小和密度,辨别辨别体积相同体积相同、但、但性质不同性质不同的两个细胞群体的两个细胞群体,
,如如LYLY和和BABA n光散射技术光散射技术: :来自激光源的单色光直接扫描计数敏感来自激光源的单色光直接扫描计数敏感区的细胞区的细胞, ,根据细胞产生的不同角度散射光（根据细胞产生的不同角度散射光（10107070）, ,提
23、供提供细胞形态细胞形态、胞核结构胞核结构等光散射信息等光散射信息, ,并并鉴别细胞颗粒的构型核质量鉴别细胞颗粒的构型核质量（粗颗粒的光散射比细（粗颗粒的光散射比细颗粒的更强）颗粒的更强）, ,可区别出粒细胞（可区别出粒细胞（NENE、BABA、EO)EO)的类的类型型2021/3/2324容量、电导、光散射法检测原理n根据根据VSCVSC原理原理,
,可显示可显示 三种细胞散点图三种细胞散点图nDF1DF1: :体积值和散射光值体积值和散射光值nDF2DF2: :体积值和电导值体积值和电导值nDF3DF3: :体积值和电导值体积值和电导值, ,但但除去了除去了EOEO和和NENE部分部分, ,
24、只显只显示示嗜碱粒细胞群嗜碱粒细胞群2021/3/2325容量、电导、光散射法影响因素n幼稚细胞等白血病细胞使分类异常幼稚细胞等白血病细胞使分类异常n未成熟粒细胞与核左移细胞常引未成熟粒细胞与核左移细胞常引起起MO%MO%假性假性升高升高2021/3/2326激光与细胞化学法检测原理激光与细胞化学法检测原理n血样和过氧化物酶试血样和过氧化物酶试剂混合后剂混合后,
,溶解溶解RBCRBC试剂试剂 1试剂试剂 2, 3细细 胞胞EONeutM o noBasoRBCLymphAB.C被固定的胞内PEROX酶酶反应沉积部位A：外周血各种血细胞B：RBC被溶解，WBC胞浆渗出，PEROX酶被固定。C：
25、底物显色并沉积在酶反应部位。过氧化物酶通道反应示意图n过氧化物酶通道过氧化物酶通道n白细胞与过氧化物酶白细胞与过氧化物酶试剂反应试剂反应, ,染色深浅染色深浅 与与细胞过氧化物酶活细胞过氧化物酶活性性成成正比正比n过氧化酶活过氧化酶活性性: :EONEMOEONEMO LYM
LYM与与BABA无活性无活性2021/3/2327激光与细胞化学法检测原理n根据胞浆中根据胞浆中过氧化物酶染色深浅过氧化物酶染色深浅和激光法测量的和激光法测量的细胞细胞大小大小不同不同, ,将白细胞分成嗜酸性粒细胞、单核细胞、将白细胞分成嗜酸性粒细胞、单核细胞、中性粒细胞、大而未染色细胞、淋巴和嗜碱细胞中性粒细胞、大而
26、未染色细胞、淋巴和嗜碱细胞n淋巴淋巴和和嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞由于大小相似而不能分开。由于大小相似而不能分开。 过氧化物酶通道白细胞分类原理反应示意图1 红细胞碎片2 有核红细胞3 聚集的血小板4 淋巴与嗜碱性细胞5 大的不染色细胞6 单核细胞7 中性粒细胞8 嗜酸性粒细胞2021/3/2328激光与细胞化学法检测原理n嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞/
/分叶核通道分叶核通道嗜碱性粒细胞/分叶核通道反应示意图n 血样和嗜碱反应试剂混合后血样和嗜碱反应试剂混合后, ,由由 于试剂中苯二甲酸和表面活性剂于试剂中苯二甲酸和表面活性剂 的作用的作用, ,红细胞和血小板溶解红细胞和血小板溶解, , 除除嗜碱
27、性粒细胞嗜碱性粒细胞外外, ,其他白细胞其他白细胞 膜破裂而失去胞浆膜破裂而失去胞浆n根据细胞核的形状和复杂性根据细胞核的形状和复杂性,将白将白细胞分成细胞分成单个核单个核和和多形核细胞多形核细胞,并并可对中性粒细胞分叶程度进行分可对中性粒细胞分叶程度进行分析。析。n嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞保持完整保持完整, ,体积较体积较大大,
,很容易从小细胞群中识别开很容易从小细胞群中识别开来。来。 2021/3/2329激光与细胞化学法检测原理n当嗜碱性粒细胞与其它被溶解了细胞膜的细胞核流入激光二维当嗜碱性粒细胞与其它被溶解了细胞膜的细胞核流入激光二维检测系统检测系统, ,根据前向角和散射角检测的结果
28、根据前向角和散射角检测的结果, ,产生了二维细胞图产生了二维细胞图, ,进而将白细胞进一步进行分类。结合根据过氧化物酶通道的结进而将白细胞进一步进行分类。结合根据过氧化物酶通道的结果果, ,将白细胞进行完整的分类。将白细胞进行完整的分类。 1 噪音 2 母细核 3 单个核白细胞（单核细胞和淋巴细胞）4 嗜碱性粒细胞 5 可疑嗜碱性粒细胞 6 饱和度 7
多核白细胞（嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞）嗜碱粒细胞/分叶核通道白细胞分类原理图2021/3/2330激光与细胞化学法影响因素n病理情况下病理情况下,嗜酸粒细胞分类受标本白细胞形嗜酸粒细胞分类受标本白细胞形态异常影响假性升高态异常影响假性升高n幼
29、稚细胞等白血病细胞使分类异常幼稚细胞等白血病细胞使分类异常2021/3/2331电阻抗与射频法检测原理n嗜酸性粒细胞检测系统嗜酸性粒细胞检测系统: :血液进入仪器后血液进入仪器后, ,经分血器使经分血器使血液与血液与嗜酸性粒细胞特异计数的溶血剂嗜酸性粒细胞特异计数的溶血剂混合混合, ,由于其由于其特殊的特殊的PHPH,
,使除嗜酸性粒细胞以外的所有细胞溶解或使除嗜酸性粒细胞以外的所有细胞溶解或萎缩萎缩, ,含有含有完整的嗜酸性粒细胞完整的嗜酸性粒细胞的液体通过小孔时的液体通过小孔时, ,使使计数电路产生脉冲而被计数。计数电路产生脉冲而被计数。n 嗜碱性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统: :计
30、数原理与嗜酸性粒细胞相计数原理与嗜酸性粒细胞相 同同, ,由于碱性溶血剂只能保留与血液中嗜碱性的粒细由于碱性溶血剂只能保留与血液中嗜碱性的粒细 胞胞, ,因此根据脉冲的多少即可求得嗜碱性粒细胞数。因此根据脉冲的多少即可求得嗜碱性粒细胞数。n 上述二种方法除需要使用专一的溶血剂外上述二种方法除需要使用专一的溶血剂外, ,还需还需特定特定
的作用温度和时间的作用温度和时间。2021/3/2332电阻抗与射频法检测原理n淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）的检测系统的检测系统:n 这个系统采用这个系统采用电阻抗电阻抗与与射频射频联合检测的方式联合检测的
31、方式n 本法使用的溶血剂的作用较轻本法使用的溶血剂的作用较轻, ,细胞形态改变不大。细胞形态改变不大。n 在小孔的内外电极上存有直流（在小孔的内外电极上存有直流（DCDC）和高频（）和高频（RFRF）两个）两个 放射器放射器, ,因此细胞进入小孔时产生因此细胞进入小孔时产生两个两个不同的脉冲信号不同的脉冲信号n
脉冲的高低分别代表细胞的大小和核内颗粒的密度脉冲的高低分别代表细胞的大小和核内颗粒的密度, ,n 以以DCDC信号为横坐标信号为横坐标,RF,RF为纵坐标为纵坐标, ,就可根据就可根据2 2个信号把个信号把 同一个细胞定位于同一个细胞定位于二维的细胞散射图二维的细胞散射图上。上。n 由
32、于由于LYMLYM、MOMO及粒细胞及粒细胞的的细胞大小细胞大小、细胞质含量细胞质含量, ,胞质内胞质内 颗粒的大小与密度、细胞核的形态与密度颗粒的大小与密度、细胞核的形态与密度不同不同, ,DCDC及及RFRF 的脉冲信号有较大的差异的脉冲信号有较大的差异, ,定位在各自散射的区域定位在各自散射的区域, ,通通
过扫描技术得出各类细胞比例过扫描技术得出各类细胞比例2021/3/2333电阻抗与射频法检测原理n幼稚细胞检测系统幼稚细胞检测系统:n此胞膜上脂质较成熟细胞少的现象此胞膜上脂质较成熟细胞少的现象,在细胞悬液加入硫化在细胞悬液加入硫化氨基酸后氨基酸后,由于由于细胞上脂质占位不同细胞上脂
33、质占位不同,故结合在幼稚细胞的故结合在幼稚细胞的硫化氨基酸较成熟的细胞多硫化氨基酸较成熟的细胞多,且对溶血剂有抵抗作用且对溶血剂有抵抗作用。n当加入溶血剂后当加入溶血剂后,成熟细胞被溶解成熟细胞被溶解,如果悬液中存在幼稚细如果悬液中存在幼稚细胞胞,其形态不受破坏其形态不受破坏,因此可通过电阻抗的方法检测出来。因此可通过电阻抗的方法检测出来。2021/3/2334多角度偏振光散射检测原理n一定体积的全血标本用鞘液按适当比例稀释。一定体积的全血标本用鞘液按适当比例稀释。n
其白细胞内部结构近似于自然状态其白细胞内部结构近似于自然状态, ,因因嗜碱性粒细胞颗粒嗜碱性粒细胞颗粒 具有吸湿的特性具有吸湿
34、的特性, ,所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改变。所以嗜碱性粒细胞的结构有轻微改变。n 红细胞内部的渗透透压高于鞘液的渗透压而发生改变红细胞内部的渗透透压高于鞘液的渗透压而发生改变, , 红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来红细胞内的血红蛋白从细胞内游离出来, ,而鞘液内的水份而鞘液内的水份 进入红细胞中进入红细胞中, ,细胞膜的结构仍然完整细胞膜的结构仍然完整,
,但但此时的红细胞此时的红细胞 折光指数与鞘液的相同折光指数与鞘液的相同, ,故红细胞不干扰白细胞检测。故红细胞不干扰白细胞检测。n 在鞘液的作用下在鞘液的作用下, ,样本被集中为一个直径为样本被集中为一个直径为30m30m的小股的小股
35、液流液流, ,该液流将稀释细胞该液流将稀释细胞单个排列单个排列, ,因是单个通过激光束因是单个通过激光束, , 故故在各个方向都有其散射光在各个方向都有其散射光。2021/3/2335多角度偏振光散射检测原理n可以从四个角度测定散射光的密度可以从四个角度测定散射光的密度: :n 0 0: :前角光散射（前角光散射（1 13
3）粗略地测定）粗略地测定细胞大小细胞大小; ;n 10 10: :狭角光散射（狭角光散射（7 71111）测）测细胞结构及其复杂性细胞结构及其复杂性 的相对特征的相对特征; ;n 90 90:90:90消偏振光散射（消偏振光散射（7070110110）, ,基于颗粒可以基
36、于颗粒可以 将垂直角度的偏振激光消偏振的特性将垂直角度的偏振激光消偏振的特性, ,将将嗜酸细胞嗜酸细胞从中性从中性 粒细胞和其它细胞中分离出来。粒细胞和其它细胞中分离出来。n 90 90: :垂直光散射（垂直光散射（7070110110）主要）主要对细胞内部颗粒和对细胞内部颗粒和 细胞成分进行测量细胞成分进行测量。n
可以从这四个角度同时对单个白细胞进行测量可以从这四个角度同时对单个白细胞进行测量, ,将白细胞将白细胞 分为分为EOEO、NENE、BABA、LYMLYM和和MONO5MONO5种。种。2021/3/2336血红蛋白检测原理血红蛋白检测原理稀释血液稀释血液+ +溶血剂溶血剂溶血剂
37、中溶血剂中某些成分某些成分+血红蛋白衍生物血红蛋白衍生物形成形成比色（比色（:530:530550nm)550nm)RBCRBC溶解释溶解释放放HGBHGBn
吸光度变化与稀释液吸光度变化与稀释液HGB含量成正比含量成正比nICSH推荐使用氰化高铁法推荐使用氰化高铁法nHICN最大吸收峰在最大吸收峰在540nmn各型号血细胞分析仪必须各型号血细胞分析仪必须以以HICN值为标准进行校正值为标准进行校正n非氰化溶血剂非氰化溶血剂:SLS,十二烷基月桂酰硫酸钠十二烷基月桂酰硫酸钠HGBHGB测试系统测试系统2021/3/2337血红蛋白检测影响因素血红蛋白检测影响因素n高白细胞计数高白细胞计数的样品
38、的样品(60 x 10(60 x 109 9细胞细胞/L)/L)、或、或有有血小板凝块血小板凝块、或、或新生儿样品新生儿样品可能干扰血红蛋可能干扰血红蛋白的检测。白的检测。n过度脂血过度脂血、乳糜微粒乳糜微粒, ,高胆红素高胆红素或或血红蛋白过血红蛋白过高高的样品可能干扰样品的检测结果、使采所得的样品可能干扰样品的检测结果、使采所得的结果升高的结果升高,
,而而MCHCMCHC也升高。也升高。 2021/3/2338小结小结血细胞仪的比较血细胞仪的比较n五分类的血细胞仪从技术上较前上了一个更高的五分类的血细胞仪从技术上较前上了一个更高的平台平台, ,特别是特别是血小板计数更加可靠血小板计数更加
39、可靠, ,五分类比三分五分类比三分群又增加一些新的参数群又增加一些新的参数, ,五分类必将取代三分群的五分类必将取代三分群的仪器仪器, ,这是必然趋势。这是必然趋势。 n三分类其实是将细胞按照体积大小进行了三分类其实是将细胞按照体积大小进行了简单的简单的分群处理分群处理, ,实际上是实际上是不科学不科学的的,
,因此国内专家和学因此国内专家和学者建议将此分类统一称呼为分群（者建议将此分类统一称呼为分群（groupgroup）, ,即三即三分群型血细胞分析仪。实际细胞分类需做细胞染分群型血细胞分析仪。实际细胞分类需做细胞染色镜检。色镜检。2021/3/2339小结小结血细胞仪的比较血细胞仪的比较
40、n目前目前BAYERBAYERADVIAADVIA120120是是唯一唯一可对可对红细胞的体积和红细胞的体积和色素含量色素含量进行分析的仪器。进行分析的仪器。 nBAYERBAYERADVIAADVIA120120同时直接检测同时直接检测单个红细胞的单个红细胞的HGBHGB,
,可以同氰化高铁法通道检测的血红蛋白浓度相比可以同氰化高铁法通道检测的血红蛋白浓度相比较较, ,减少因高白细胞数或脂血等因素造成的影响减少因高白细胞数或脂血等因素造成的影响n在白细胞分类方面在白细胞分类方面,激光与细胞化学法激光与细胞化学法与与容量、电容量、电导、光散射法导、光散射法相比相比,有较强的筛选能力有较强的筛选
41、能力,但在但在EO%分类分类方面方面,BAYERBAYERADVIAADVIA120120逊色于逊色于Coulter 2021/3/2340小结小结-血细胞分析仪的发展近况和展望血细胞分析仪的发展近况和展望 n血常规检验多参数化血常规检验多参数化:
:近年来许多仪器都在增加新的近年来许多仪器都在增加新的参数以满足临床在诊断和鉴别诊断方面的需求参数以满足临床在诊断和鉴别诊断方面的需求, ,但很但很多的新参数目前仍不能应用于临床多的新参数目前仍不能应用于临床, ,仅限定在实验室仅限定在实验室中中, ,或供研究使用。或供研究使用。n多功能合成扩展多功能合成扩展: :如增加网织红细胞如增加网织红细胞,
,幼稚细胞幼稚细胞, ,有核有核红细胞红细胞, ,脑脊液细胞等的分析功能脑脊液细胞等的分析功能n检测速度的提高检测速度的提高: :BAYERBAYERADVIAADVIA21202120等仪器可以达到等仪器可以达到每小时每小时120120个标本个标本 n方法的改进

美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell）
产品型号：Cell Lab Quanta SC
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新旧程度：全新
有效期至：0000-00-00
所在地：
产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等
详细信息
仪器简介：
T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19,
κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。
抗体的质量控制是实验的关键环节。抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。对这一些，一些商业化的公司对常用单抗的检验均推出了一系列质控物。如BECKMAN COULTER公司的Cyto-Trol、Immuno-Trol等（见表一）。
（三）染色方法
细胞表面染色：大多数免疫表型分析均采用此方法。但由于许多抗原也同时存在细胞内，所以在细胞表面抗原检测时应特别注意保持细胞膜的完整以保证检测的特异性。表面标记又分溶血前标记和溶血后标记。若红细胞对标记有影响或血浆成分对标记有影响的，适合溶血后标记，但要注意溶血剂膜抗原的影响，所以，溶血剂一般不含固定剂。如免疫球蛋白轻链检测和阵发性血红蛋白尿的检测等。
细胞内染色：有些胞内抗原的检测对白血病的免疫分型尤为重要，如TdT, MPO, cCD3, cCD79a
。胞内染色的关键是使细胞膜通透，把抗体或核酸染料导入胞内而不影响细胞骨架的完整性。还要保证固定和透膜的步骤不影响有关抗原与相应抗体的结合力和核酸与染料的结合。某些适用于胞内染色的试剂可能不适于表面标记分析。通常胞内染色不能与细胞活性的检测同时进行，除非用EMA的方法。对于胞内染色，所用的荧光素应足够小到能穿透到胞膜内。对于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）为活细胞染料，无需固定或透膜。
胞膜和胞内染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，最后是DNA染色。
三、数据的获取和分析
流式细胞仪数据的获取必须是在仪器性能的校准均合格的基础上进行。由于流式细胞仪是基于对散射光信号和荧光信号进行分析的仪器，因此，仪器散射光和荧光信号的光电倍增管电压、增益、颜色补偿等参数的设定直接影响结果。同型对照的设定尤为重要。同型对照是指与单抗种宿来源相同、亚型相同、标记荧光素相同的未免疫动物的免疫球蛋白。同时考虑浓度、F/P值尽量相同，这样阳性阈值的界定才比较准确，特别是对于弱表达抗原阳性率的测定。而DNA倍体分析中参照物的设定非常重要，一般鸡红细胞作为内参照物。为了结果的可靠性，对获取的细胞量至少应在10000-20000个。但不同的实验目的对于获取的细胞量要求一般是不一样的，如DNA倍体分析，至少应获取10000个细胞；微小残留病灶（MRD）的检测，要求达到10-4数量级水平，则应至少分析100000个细胞；干细胞移植中CD34的检测，应至少获取100个CD34阳性细胞或75000个有核细胞。
对于获取的数据，应保存在listmode文件中，便于分析。设门（gating）对于流式数据分析至关重要。设门实际就是确定分析区域。在DNA倍体分析中，设门实际就是圈定
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