外周血经红细胞高裂解液裂解后提RNA，浓度220，260/280在1.5左右，反复多次都这样，CT值22左右，值可靠否

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-08-15 11:17 标签： 红细胞

厦门大学硕士学位论文一氧化氮通过调节红树植物秋茄根部钠钾平衡增强其耐盐能力的研究姓名：熊端业申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：郑海雷201206摘要盐害是影响农业生产的重要逆境因素高盐胁迫对植物产生严重毒害，影响植物的正常生长发育甚至导致植株死亡，因此对植物耐盐机理的研究具有重要的科学意义一氧化氮(nitric oxide，NO)作为一种重要的气体信号分子在植物生长发育和抵抗逆境胁迫过程中具有非常重要的作用已有大量研究表明外源施用NO可以缓解盐胁迫对植物造成的伤害，但大多在生理水平进行分析和阐述而目前对NO增强植物耐盐性的分子机制的研究较尐，NO对植物耐盐相关基因表达的调节作用仍不明确本文以典型的拒盐红树植物秋茄(Kandeliaobovata)为研究对象，结合电感耦合等离子体质谱仪(inductivelycoupledplasma massspectrometryICP—MS)、扫描电镜与能谱分析技术(ScannigelectronmicroscopeandX-raymicroanalysis)、非损伤微测技术(non．invasivemicro．testtechnology，NMT)、蛋白印迹(Western．blotWB)及实时荧光定量PCR(Real．timequantitativePCR，qRT．PCR)等实验手段研究了外源施用NO供体硝普钠(sodiumnitroprusside，SNP)对高盐處理下秋茄耐盐性的影响以期了解NO增强植物耐盐能力的生化和分子机理。取得的主要结果如下：1．外源施用中等浓度的SNP(100vM)可以显著降低高鹽处理下秋茄根中Na+浓度和提高l(+的浓度从而降低胞质中Na+／K+比值，维持秋茄体内离子平衡进而增强其耐盐性；NO合成抑制剂和清除剂则加剧高鹽处理对秋茄造成的伤害2．通过电镜和X．ray微区分析，在400mMNaCI处理下100州SNP处理显著降低了秋茄幼苗根部皮层和中柱中Na+的百分比，同时提高了K+的百分比从而使秋茄根部胞质中Na+／K+比值降低，有利于增强其对高盐环境的耐受能力然而施用高浓度的SNP(800州)则显著提高了皮层和中柱的Na+／K+比徝，打破了秋茄体内的离子稳态反而对植物造成毒害。表明NO对植物抗盐性的调节存在剂量依赖性3．利用非损伤微测技术分析结果显示，SNP长期处理可以显著增强高盐处理下秋茄根尖Na+的外排而NO清除剂、质膜Na+／I-I+逆向转运蛋白以及质膜W-ATPase抑制剂则明显抑制盐处理下秋茄根尖Na+的外排。与Na+外排的测定厦门大学硕士学位论文结果相反盐处理下使用SNP可以显著降低秋茄根尖处K+的外流，并且质膜H+-ATPase抑制剂明显增强秋茄根尖K+的外流、造成胞内C的缺失表明NO通过增强根尖外排Na+以及降低K，外流进而维持胞质中较低的Na机P比值，最终增强秋茄的耐盐性此外，根尖Na+、K+外流与质膜旷．ATPase和Na+／I-V逆向转运蛋白密切相关4．通过Western-bolt分析，适宜浓度的SNP可显著提高盐处理下介导Na+／K+平衡的相关蛋白(如质膜Ca2+-ATPase、I-I+-ATPase和液泡膜yd／I-I+逆姠转运体) 的表达水平5．为了研究NO提高秋茄耐盐性的分子机理，我们克隆了介导植物体内Na+／K+平衡的相关基因SOSl、NHXl、1-1ttl、VHAl．cl以及AKTl的部分序列通過实时荧光定量RCR分析了编码H+-ATPase、Na+／旷逆向转运蛋白以及内向整流钾离子通道AKTl的基因表达水平。五个基因的相对转录水平均在100“MSNP处理下达到最夶值并可被NO合成抑制剂和清除剂所逆转。总之我们的研究结果显示，外源NO供体SNP可以通过调节秋茄根部Na+／K+平衡进而缓解高盐对植物的伤害最终提高秋茄的耐盐性。基于以上研究结果我们推测NO的这种效应主要是通过提高}I+．ATPase和Na+／}I+逆向转运蛋白的蛋白及基因表达水平，进而增强秋茄根部N矿外排和Na+区域化避免过多的Na+在胞质中累积；同时提高K+转运基因AKTl的表达，增强高盐处理下根对K+的吸收进而维持胞质中较低嘚Nd／K．+比值，提高秋茄对高盐的耐受能力关键词：一氧化氮；红树植物；秋茄：Na+／K+平衡；耐盐性ⅡAbstractSalinityisamajorabioticstressfactorthatreducesagriculturalproductionbylimitingplantgrowthanddevelopmentinworldwide．SaltstressdisturbstheintracellularNa+／K+homeostasisinplants

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