用吉姆萨染液染色,看在显微镜下看到的整个细胞都是蓝色,请问这是什么原因?
估计是压片时候用力过大,把细胞压破了的原因
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瑞氏吉姆萨复合染色液
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&&W​r​i​g​h​t​-​G​i​e​m​s​a​ ​s​t​a​i​n​以​进​口​的​瑞​氏​色​素​和​吉​姆​萨​色​素​为​主​要​原​料​,​通​过​研​磨​配​制​而​成​,​能​呈​现​出​清​晰​的​细​胞​染​色​效​果​。​经​常​用​于​血​液​和​细​胞​涂​片​、​骨​髓​细​胞​涂​片​、​细​菌​染​色​。​细​胞​质​呈​红​色​,​细​胞​核​及​细​菌​呈​蓝​色​,​嗜​酸​性​颗​粒​呈​橘​红​色​。​染​液​中​加​中​性​甘​油​,​防​止​甲​醇​挥​发​或​氧​化​,​同​时​也​可​使​血​细​胞​染​色​较​清​晰​。​L​e​a​g​e​n​e​ ​W​r​i​g​h​t​-​G​i​e​m​s​a​ ​s​t​a​i​n​的​特​点​：​ ​由​瑞​氏​-​吉​姆​萨​复​合​染​色​液​和​磷​酸​盐​缓​冲​液​组​成​,​等​量​混​合​使​用​或​分​别​处​理​标​本​使​用​。
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你可能喜欢实验一、免疫细胞的形态观察
一、实验目的
1、掌握微量采血及血涂片的制作方法。
2、在光学显微镜下观察免疫细胞。
二、实验原理
血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。
三、实验器材
1、器材：医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片。
2、试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏染料0.1克溶于60mL甲醇中，过滤。贮藏褐色瓶中备用。（配制时，要先将瑞特氏染料置研钵内边研磨边滴加甲醇，使染料溶解的更好。）
四、实验步骤
采血前用75%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）。
挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以30~40度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（如图），推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀。
待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液盖满血膜为止，染色1~3min。然后滴加等量的缓冲液（pH6.4）或蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。
经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶保存。
分别用低倍、高倍和油镜观察血涂片，分辨不同的血细胞类型。
五、实验结果
拍摄血细胞照片，标出并分析比较各种免疫细胞类型和形态特征。
实验二、中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验）
一、实验目的
1、熟悉中性粒细胞的吞噬作用的原理和方法。
2、通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
二、实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。
在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒在一定条件下共同孵育后，显微镜观察可见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。计数吞噬有细菌或异物颗粒的中性粒细胞占中性粒细胞总数的百分率和每个中性粒细胞平均吞噬的细菌或异物颗粒，可反映中性粒细胞的吞噬功能。有助于对疑有吞噬细胞功能障碍的疾病作出诊断。该试验常用白色葡萄球菌作为中性粒细胞的吞噬物。
三、实验材料
1、待测样本：新鲜抗凝静脉血。（肝素溶液浓度为25U/ml，以生理下水配制）
2、被吞噬物：白色葡萄球菌。
3、试剂：肉汤培养基，琼脂，无菌生理盐水，甲醇，瑞氏－吉姆萨染液。 瑞氏－姬姆萨染色液配制：
原料：A：瑞氏染粉0.8--1克；吉姆萨染粉0.5克；B：甘油33ml；C：甲醇500ml。 配法：将A放入研钵中，加入少量B研磨，再加入少量B磨，再加入少量B磨……倒出，
将未溶部分，继续加入B磨……&全溶，加入C，或中间加入C亦可。
4、器材：血红蛋白吸管，采血针，试管，EP管，平皿，75%酒精棉球、载玻片，微量移液器、恒温箱，显微镜（香柏油，二甲苯）等。
四、实验方法
1、白色葡萄球菌液的制备
用无菌生理盐水洗下白色葡萄球菌接种于普通斜面18～24h 培养物，置100℃水浴
815min杀死细菌，经菌液计算后用生理盐水调整至6×10/ml，置4℃备用。
2、待测样本制备
于洁净的0.5mlEP管内加20μl肝素溶液，用75%酒精棉球对受试者耳垂或指腹消毒，干燥后用采血针针刺，轻轻揉挤出血，用血红蛋白吸管吸取40μl，与EP管内的肝素溶液轻轻吹吸混匀。
待测样本中加入白色葡萄球菌液20μl轻轻吹吸混匀，放入恒温箱37℃孵育30min，期间每隔10min摇匀一次。
取一小滴孵育后的待测样本于洁净载玻片上，用另一载玻片推成薄血膜，晾干后甲醇固定4～5min。
5、瑞氏－吉姆萨染色：滴加瑞氏－吉姆萨染液染色1～2min，水洗，晾干。
置油镜下观察计数，计算吞噬率和吞噬指数。
五、实验结果
计数200个中性粒细胞，分别记录吞噬细菌的细胞数和每个中性粒细胞吞入的细胞数，按下式计算吞噬率和吞噬指数。
吞噬率＝(200个中性粒细胞中吞噬细菌的细胞数/200)×100%
吞噬指数＝(200个中性粒细胞中吞噬细菌的总数/200)×100%
【注意事项】
1、所用器材要清洁。
2、如细菌数太多可增加稀释倍数作平皿培养后计数。
3、血膜必须充分干燥，否则在染色过程中易脱落。
4、染液不可过少，以防止蒸发干燥，沉着于血片上不易冲掉。
5、冲洗时应以流水将染液冲去，不可先倒掉染液，以免染料沉着于血膜上。
6、越接近推片末梢，细胞数越多。计数时应取玻片前、中、后三段计数，以提高准确率。
【思考题】
1、简述中性粒细胞吞噬功能测定的原理。
2、该实验过程中应注意哪些事项？
附：小鼠中性粒细胞吞噬功能试验
一、实验目的：同前。
二、实验原理：同前。
三、实验材料
1、金黄色葡萄球菌悬液。
2、瑞氏染液、双蒸水。
3、试管、玻片、采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油。
四、实验方法
1、取小鼠一只，给腹腔注射金黄色葡萄球菌悬液0.6ml，10～15min。
2、取小鼠腹腔液。
3、置37℃水浴箱水浴15分钟，中途混匀一次。
4、取出小试管，用吸管将试管中血液打匀后取血半滴于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片。
5、待血片自干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色法：取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。然后加等量蒸馏水，轻轻晃动混匀，继续染5分钟，水洗，用吸水纸吸干后镜检。
五、结果观察
油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
中性粒细胞吞噬试验计数：
1、吞噬百分率：观察100个中性粒细胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
2、吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算其中被吞噬的细菌总数，平均每个中性粒细胞吞噬
的细菌数即为吞噬指数。专业文档和设计素材分享社区
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1瑞氏剂（1）瑞氏I液）瑞氏染色粉1g，姬姆萨染粉醇（500性甘油瑞氏染粉和吉姆萨染粉置洁净研钵中，加中性甘油研磨，再放入37℃孵箱孵育24小时后，加入少量甲醇研磨，吸出上液，如此连续几次，共用甲醇500收集于棕色玻璃瓶中存放一周即能使用。存储时间越久染色效果越好。中性甘油可防止甲醇挥发，使细胞染色较清晰。（2）磷酸盐缓冲液（）（磷酸二氢钾酸氢二钠12磷酸盐调整蒸馏水至10006.操作方法（1）染色将玻片滴加瑞氏I液）3～5滴，使其迅速盖满涂片，再按11或12的比例滴加磷酸盐缓冲液（），轻轻摇动玻片使染液充分混合。9．正常结果范围及结果解释1.染色结果偏酸者，则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞的核呈浅色或不着色。2.染色结果偏碱，所有红、白细胞染灰蓝色，颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑紫色或蓝色。中性颗粒也偏碱（紫黑色）。遇此种情况应更换缓冲液。2铁粒染色（2．实验原理正常人骨髓中以含铁血黄素的形式储存的铁粒属细胞外铁而幼红细胞的胞质中含有的铁颗粒属于细胞内铁，这种细胞称为铁粒幼细胞。骨髓中细胞外铁和幼红细胞内的铁颗粒与酸性亚铁氰化钾溶液作用，发生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化钾沉淀，定位于含铁的部位。剂配制性亚铁氰化钾溶液200g亚铁氰化钾溶于1000馏水中。500g/L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓缓加入1盐酸。临用前新鲜配制。g/L核固红－硫酸铝溶液取硫酸铝10g加入100加入核固红品于37℃水浴中1小时，并经常振荡，使溶解，过滤后使用。贴上2g/L核固红－硫酸铝溶液的标签并注明配制日期和失效日期。室温保存。质控标准正常的阳性结果为外铁为＋～＋＋，铁粒幼红细胞＞20。6．操作方法骨髓小粒丰富的骨髓涂片，用甲醇固定10分钟。（这一步骤可省略）片上滴加酸性亚铁氰化钾，染色30分钟。（可置于37℃）。洗后用核固红染液复染10～15分钟。水冲洗，晾干，油镜检查。用低倍镜判断细胞外铁，再用油镜计数100个幼红细胞，观察铁颗粒的多少。37．结果报告胞外铁的判断用低倍镜观察涂片的骨髓小粒，根据骨髓小粒和巨噬细胞的胞质内出现的蓝色颗粒状、小珠状或团块状的多少，把细胞外铁分为五级。－无颗粒＋有少数铁颗粒或偶见铁小珠＋＋有较多的铁颗粒和小珠＋＋＋有很多的铁颗粒，小珠和少数小块状＋＋＋＋有极多的铁颗粒，小珠并有很多的小块，密集成堆粒幼细胞的判断胞浆内出现蓝绿色颗粒的幼红细胞即为铁粒幼细胞。阳性程度的标准为Ⅰ型仅含1个铁颗粒Ⅱ型含2～5个铁颗粒Ⅲ型含6～9个铁颗粒Ⅳ型含10个以上的铁颗粒形铁粒幼细胞的判读标准含铁颗粒6个以上，其中2/3以上的铁颗粒4围绕核周围排列成完全环形或不完全环形（围绕核周围指分布紧靠着细胞核或靠近细胞核的1/3胞浆内，铁颗粒增多时，可分布于外2/3的胞浆内。8．结果解释常人细胞外铁＋～＋＋。幼红细胞染为鲜红色，胞浆成淡黄红色，铁粒呈蓝绿色，定位于胞浆中含铁的部位。铁性贫血时，骨髓细胞外铁和内铁显著减少或消失，铁粒幼红细胞阳性率为0～16，平均为4，铁颗粒极少并着色浅，以Ⅰ型为主，Ⅱ型者极少，Ⅲ型以上者不见。血性贫血，巨幼红细胞贫血，脾亢，慢性肾炎伴尿毒症和多次输血等病人的细胞外铁可以增高，细胞内铁以Ⅰ型和Ⅱ型为主，可以见到Ⅲ型，不见Ⅳ型。因此有助于鉴别非诊断铁粒幼红细胞贫血的重要依据，能发现数量不等的环状铁粒幼红细胞，并且多见粗颗粒的Ⅲ型和Ⅳ型铁粒幼红细胞。髓增生异常综合征时，细胞外铁丰富。铁粒幼红细胞的百分比增高，常见环状铁粒幼红细胞。在铁粒幼细胞性难治性贫血中，环状铁粒幼红细胞≥15时，对诊断有重要意义。9．注意事项片必须经无铁处理将新玻片经清洁液浸泡24小时，取出后反复水洗浸入95酒精24小时，晾干，再浸泡在5盐酸中24小时，用复洗玻片，取出烤干后备用。性亚铁氰化钾液必须新鲜配制。好用骨髓小粒丰富的骨髓涂片进行染色并作细胞外铁观察。5过氧化物酶染色2．实验原理粒细胞和一部分单核细胞胞浆内含有过氧化物酶，此酶可将底物中的过氧化氢分解，产生新生态的氧，使联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物。其蓝色或棕色的过氧化物酶阳性颗粒定位于胞浆中。剂配制复方联苯胺（液将16％的亚硝基铁氰化钠溶液与99无水乙醇混合，再加入使其溶解。室温保存。3过氧化氢3过氧化氢和27馏水混合，配制成3的过氧化氢。室温保存。稀过氧化氢把1滴3的过氧化氢溶液加入5馏水中，用时新鲜配制。质控标准正常的阳性结果为中性分叶粒细胞胞浆内充满粗大而密集的蓝黑色颗粒。失控措施如果质控涂片的结果不能接受，应进行以下的检查否正确。配制试剂后再进行染色。6．操作方法于新鲜干燥的涂片上滴加复方联苯胺染液3～8滴，使涂片盖满。1～2分钟后加入等量的稀过氧化氢溶液。4～8分钟后用水冲洗，空气中晾干。6用瑞氏染液复染，干后用油镜观察。油镜下计数100个原始细胞，计算原始细胞的阳性率。7．结果报告结果判读标准如下阴性无颗粒。弱阳性颗粒小，分布稀疏。阳性颗粒中等大小，有少量堆积分布。强阳性颗粒粗大，堆积分布。8．结果解释过氧化物酶的阳性颗粒呈蓝色或蓝黑色，定位于胞浆中。常是过氧化物酶阳性，而淋巴细胞是阴性。不仅粒细胞和单核细胞中的嗜天青颗粒是阳性反应，而且嗜酸和嗜碱细胞的特异性颗粒也是阳性。为过氧化物酶阳性。原粒细胞的过氧化酶阳性颗粒较多较粗单核细胞的颗粒细小弥散。然而大多数的原单核细胞过氧化物酶呈阴性反应。已证实一些骨髓增生异常综合征的病人和遗传性过氧化酶缺乏的病人，其中性粒细胞的过氧化物酶为阴性。9．注意事项血涂片和骨髓片都应新鲜制备,血涂片的放置时间不能超过6小时。7过氧化氢需新鲜配制，若涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，表示浓度过高//若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则可能示其无效。试剂应置于低温暗处或用棕黑色纸遮蔽，防止光线照射失效。8中性粒细胞碱性磷酸酶染色（2．实验原理细胞中的冲液中能使基质中的磷酸萘酚钠水解，释放出萘酚。后者与一种稳定的重氮盐（常用有固紫固蓝联，生成不溶性的偶氮染料，沉积于细胞上。剂1．α2。固酱紫3。羟甲基胺基甲烷缓冲液4。95乙醇5。甲绿制羟甲基胺基甲烷缓冲液（1）A液（0.2称取于100毫升蒸馏水中。（2）B液（把升37的盐酸加入蒸馏水中，使成100毫升。（3）冲液A液25毫升加B液5毫升，加蒸馏水至100贴上冲液标签并注明配制日期和失效日期。4℃保存。基质液称取克的α于20毫升蒸馏水中，再与20毫升冲液混合，最后加入固酱紫40即溶解混匀。临用前新鲜配制。2甲绿溶液称取1克甲绿溶于100毫升蒸馏水中。贴上2甲绿的标签并注明配制日期和失效日期。室温保存。质控标准9正常的阳性结果为中性分叶细胞胞浆内有较多的粉红色或红色的颗粒。6．操作方法5乙醇中固定10分钟。室温或37℃作用30分钟，快速水洗。绿复染5分钟。油镜下计数100个成熟中性粒细胞，先计数有几个阳性，算出阳性百分率，再将全部分数相加，算出积分数。7．结果报告在证实了质控标本的结果可靠性后，才可以出具报告结果。结果判读标准如下根据染色的强度和红色颗粒的多少，共分为以下5级。特点分数胞浆内无红色的颗粒0弥散的红色，偶见颗粒1弥散的红色，有中等量的颗粒2显著的红色，有较多的颗粒3显著的红色，有充满胞浆的粗大颗粒4计数100个成熟中性粒细胞，先计数有几个阳性，算出阳性百分率，再将全部分数相加，算出积分数。8．结果解释色时，细胞核染淡绿色，阳性颗粒呈红色或棕红色，定位于胞浆中。参考值各地的报道差异极大，一般认为成人阳性率为10～40，积分为13～80之间，小儿稍高，60岁以上老年人较低。存在于成熟的中性粒细胞中，特别是中性分叶细胞。网状细胞，骨髓基质也会出现阳性。高在化脓性感染，类白血病反应，骨纤，10神经母细胞瘤，巴瘤，妊娠期，垂体分值均升高。低色瘤，淋巴肉瘤，网状内皮细胞增多症，恶性贫血，病毒感染，传单。色对以下疾病的鉴别诊断有一定参考价值类白血病反应显降低，积分常常为零，一般积分小于13分，个别人的以增高而类白血病反应时则显著增高，积分值常在200以上。者常降低增高，如果中性粒细胞愈少，贫血愈重，愈高。病情好转时下降。降高;白血病前期与增生性者可降低后者可增高。9．注意事项般认为以95乙醇较满意，但细胞易破碎，可用10甲醛甲醇液结果满意。薄适宜，标本保存过久，酶活性减低，一般在一周内进行染色观察。用水快速冲洗，否则会影响结果。11过碘酸2．实验原理过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成双醛基，醛基进而与液反应，使无色品红变成紫红染料而附着于含糖的组织上。制高碘酸1g高碘酸和100馏水混合，配制成10g/L高碘酸溶液。贴上10g/L高碘酸的标签并注明配制日期和失效日期。4℃保存。液蒸馏水100沸后，待片刻，加入碱性品红荡数分钟使品红溶解，冷至50℃加入1M的盐酸20匀。待冷却至25℃加入偏重亚硫酸钠合，置于带塞的棕色瓶中，放于暗处24小时，染液应为无色。如为微红则加活性炭1～2g，混合过滤，如过滤液仍有红色，应再加少许活性炭，至红色完全被吸收为止。贴上液的标签并注明配制日期和失效日期。4℃保存。苏木素于10乙醇，20g钾明矾溶于（可加热），然后将苏木素液加入明矾液中混合，用强火煮沸后加氧化汞速搅拌，成深紫色，迅速移入冷水中，次日过滤，临用时取此液95冰醋酸5使细胞着色清楚。室温保存。质控标准正常的阳性结果为中性分叶细胞胞浆呈弥散的红色。6．操作方法新鲜血片或骨髓片用95乙醇固定10分钟。过碘酸液作用20分钟。涤几次，晾干。12液，60分钟。5分钟（细水长流冲洗）。0分钟。5分钟，待干。00个原始细胞，计算原始细胞的阳性率，并根据反应强度计算阳性积分。当幼红细胞为阳性时，则计算幼红细胞的阳性率，并根据反应强度计算阳性积分。7．结果报告结果判读标准中性粒细胞＋胞浆内呈淡红色，无颗粒＋＋胞浆内呈粉红色，有少量的细小颗粒＋＋＋胞浆内呈片状深红色＋＋＋＋胞浆内呈深紫红色计数100个成熟中性粒细胞，先计数有几个阳性，算出阳性百分率，再将全部分数相加，算出积分数。＋胞浆内呈弥散淡红色或有少数颗粒（小于9个）＋＋胞浆内弥散较深的淡红色或有少数颗粒（大于10个）＋＋＋胞浆内有较粗颗粒或少数小块或大块红色物质＋＋＋＋胞浆内有多数细颗粒并有大块红色物质计数100个淋巴细胞，先计数有几个阳性，算出阳性百分率，再将全部分数相加，算出积分数。13＋胞浆内有少数分散颗粒或呈淡红色＋＋胞浆内有1～10个浓的颗粒环或中度红色＋＋＋胞浆内有11～20个较粗颗粒或深红色＋＋＋＋胞浆内有大量浓的颗粒环或深红色计数100个有核红细胞，先计数有几个阳性，算出阳性百分率，再将全部分数相加，算出积分数。－胞浆内没有糖元，但胞浆内弥散着色，此系其它糖类物质＋含少量糖元，含数小块糖元，糖元常定位于近核膜＋＋胞浆内含有中等量的糖元，许多小块或少数大块糖元＋＋＋胞浆内含有大量糖元，呈大块状，其总面积约占胞浆面积的1/5以上8．结果解释原阳性反应，胞浆呈红色，阴性反应，胞浆呈无色。细胞系统●随着细胞发育成熟而阳性增强，成熟中性粒细胞阳性最强，浆中充满细小的红色颗粒。●原粒和早幼粒细胞含有很少的阳性颗粒，胞浆呈淡红色。●嗜酸和嗜碱粒细胞的胞浆呈糖原阳性，但特异性颗粒为糖原阴性。●在急性粒细胞白血病时，原粒细胞阴性，早幼粒细胞可有分散的很细小的阳性颗粒。●慢性粒细胞白血病时，糖元积分正常，，原始粒细胞可为性，因此有人将血象中出现4标。细胞系统正常血片和骨髓中染色。正常时骨髓中各期幼红细胞均为阴性。在骨髓增生异常综合征和红白血病时，有核红细胞一般呈较强的红细胞的颗粒可呈弥散的散大颗粒。常时单核细胞的胞浆染成淡红色，可含有细小的阳性颗粒。在急性单核细胞白血病时，原单和幼单的阳性率和积分可以较高，颗粒细小。在急性粒，原粒常为阴性，而原单和幼单的阳性颗粒细小而且弥散于胞浆中。常的淋巴细胞糖原染色为阴性，但有极少数的淋巴细胞可为阳性，在淋巴细胞的胞浆内可见少许小的淡红色或红色颗粒。在，其糖原阳性增加，特别是在儿童的急性淋巴细胞白血病时。对于T细胞而言，其糖原反应常呈弱阳性或阴性。常的骨髓中，巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色，血小板染成深红色。织细胞阳性颗粒较粗，可呈细长的纤维状或棒状，分布于胞浆较丰富的一端。血重型地中海贫血的有核红细胞呈较强的糖元反应//在轻型地中海贫血，溶贫，淋巴瘤中，有核红细胞则呈弱阳性。//幼红细胞贫血，红细胞增多症为阴性。胞和不典型巨核细胞的鉴别，前者阴性或很弱的阳性，后者强阳性。胞与胞的鉴别前者阳性，后者阴性或很弱的阳性。9．注意事项尽量不与空气接触，以免染液还原。不同厂的碱性品红配制可有不同的结果，应注意选用。偏重亚硫酸钠或用重亚硫酸钠的量要充足，此药易于分解，若刺激性气味不强或消失，表明该药变性已不能使用。照可用同一标本一片，经固定后加新鲜唾液，置于37℃30分钟后用水冲洗，再按上法染色，糖元可被唾液淀粉酶水解，使反应呈阴性。15α酚酯酶染色α．实验原理细胞中αα解，产生α再与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于有酯酶活性部位。制磷酸盐缓冲液（1）A液称取磷酸氢二钠含12蒸馏水至100（2）B液称取磷酸二氢钾蒸馏水至100（3）液25毫升加B液5毫升，为果为通过调整液的量，使到4℃保存。10g/醋酸萘酚（1）A液将50毫升丙酮与50毫升蒸馏水混合。（2）称取1克α00毫升A液中。4℃保存。基质液磷酸盐缓冲液50入10g/醋酸萘酚分振荡，直至最初产生的浑浊物大部分消失为止，加坚牢蓝荡，过滤。临用前新鲜配制2甲绿溶液称取1克甲绿溶于100毫升蒸馏水中。室温保存。质控标准阳性结果为单核细胞内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀。6．操作方法37℃孵箱中用甲醛熏蒸10水冲洗5干。37℃）1h，水洗。16甲绿水溶液复染5～15分水洗，待干，镜检。1用液中加入化钠，其余按本染色法进行，染色步骤同上。油镜下计数100个原始细胞，计算原始细胞的阳性率。7．结果判定在证实了质控标本的结果可靠性后，才可以出具报告结果。结果判读标准如下阴性无色素沉淀。弱阳性淡灰黄色沉淀。阳性胞浆的1/2至3/4区域出现灰黑色或棕黑色沉淀。强阳性胞浆内充满棕黑色沉淀或深黑色团块状沉淀。8．临床意义在中性时用α正常单核细胞和原始单核及幼稚单核细胞均呈阳性反应，其他血细胞则呈阴性和弱阳性反应，故α核细胞酯酶，结合氟化钠抑制实验，对鉴别单核细胞白血病有重要价值。正常血细胞染色反应原始单核细胞为阴性或弱阳性反应，幼稚单核细胞及组织细胞为阳性反应;各期粒细胞为阴性反应，少数为弱阳性反应巨核细胞和血小板为阴性反应幼红细胞和淋巴细胞呈阴性反应浆细胞呈阴性反应。急性单核细胞白血病时，原始单核细胞可呈阳性反应，幼稚单核细胞和单核细胞为阳性反应，但能被氟化钠抑制。急性粒细胞白血病时，原始粒细胞呈阴性反应，少数可呈阳性反应，且不被氟化钠抑制。17急性淋巴细胞白血病时，原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞呈阴性反应，T淋巴细胞性白血病时原始淋巴细胞可呈阳性反应，且不被氟化钠抑制。急性粒，部分白血病细胞呈阳性反应，单核细胞系细胞能被氟化钠所抑制。红血病和红白血病时，异常幼红细胞可呈阳性反应。9．注意事项于取材后2小时内染色。醋酸萘酚与β－醋酸萘酚的比较，用β显示白细胞的非特异性酯酶，其反应产物为紫红色，色泽比较鲜明，但一般不呈颗粒状。当用α反应产物为棕黑色，颗粒一般比较明显，定位清楚。，坚牢蓝坚牢蓝B的染色效果为好。
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