结合珠蛋白在正常人皮肤内的表达及相关性研究--《中国医科大学》2002年博士论文
结合珠蛋白在正常人皮肤内的表达及相关性研究
【摘要】：
表皮由角质形成细胞(keratinocytes，KC)、朗格汉斯细胞(Langerhans cells，LC)、黑色素细胞、未定型细胞、Merkel细胞、淋巴细胞等组成，其中KC占表皮细胞总数的95％左右，LC约占表皮细胞总数的2％-5％。
KC不仅在皮肤屏障功能中起着重要作用，同时也是皮肤免疫系统的重要组成部分。研究证明KC除了能产生许多细胞角蛋白及粘多糖等保持皮肤生化及物理的完整性外，还产生多种细胞因子，如：IL-1、IL-6、IL-7、IL-8、TNF-α、GM-CSF、IL-3、TGF等，调节淋巴细胞和LC活性。
人角质形成细胞HaCaT细胞系是由Norbert E．Fusenig从正常人皮肤分离出的第一个永久性人角质形成细胞系。目前，HaCaT细胞系细胞被认为是在体外培养中自发转变的、可永久传代的非肿瘤性细胞。
LC能捕获外来抗原，并将其递呈给引流淋巴结内的T细胞。LC因其抗原递呈功能而被认为对维持皮肤免疫的自身平衡有重要的作用，但其功能易受内外环境因子影响。新分离的(或位于表皮内的)LC可以激活异体T细胞，但不能激活自身未致敏的(naive)淋巴细胞。当在培养液中加入GM-CSF后，培养的LC表面的MHC Ⅰ、Ⅱ类抗原明显增加，并可表达多种对未致敏T细胞有协同刺激作用的因子，如B7、ICAM-1、CD40及IL-1β。同时，LC的功能也发生变化，可以在体外激活自身T细胞，即功能上由不成熟向成熟转变。但局部或周身给予外源性GM-CSF却不能诱导表皮LC在表皮内发生功能转变。同时发现，患有可以分泌GM-CSF的肿瘤的小鼠血中GM-CSF水平虽然很高，但其表皮内的LC却没有“培养后的”表型，也没有抗原递呈功能。谢勇等认为在血清中存在一种可以抑制LC受GM-CSF作用而发生功能转变的因子。经分析，确定这种分子就是结合珠蛋白(haptoglobin，Hp)(α_1链)。
Hp是一种α_2-唾液酸糖蛋白(α_2-sialoglycoprotein)，分布于人及其他哺乳动物的大部分体液内。Hp主要在肝脏合成，在脂肪组织、肺及其他
多种组织中也可以合成。Hp是一种活跃的急性期蛋白(acute phase pro-
tein)，在炎症、各种病因的感染、创伤、组织损伤及恶性肿瘤时血浆内饰
水平明显升高，但在血管内溶血及肝功能衰竭时血浆水平明显下降。
谢勇等用免疫荧光双标记法观察到表皮LC内有Hp蛋白。并且，他们
还发现如果将含有LC的表皮放在培养液内培养几天，LC内的Hp蛋白会
迅速减少，除非向培养基内加人人血清或Hp纯品。以上实验结果提示LC
可能自身不能合成Hp。
但是，有关人皮肤(表皮、真皮)中Hp mRNA或蛋白表达研究目前尚未
见报告。D’A二iento等曾发现在小鼠全层皮肤中有Hp mRNA表达，但没
有进一步明确其在表皮及真皮中的分布。
为了明确正常人皮肤是否有合成Hp的能力，我们做了如下工作:
1.用RT一PCR法检测了14例正常人皮肤(表皮及真皮)中Hp mRNA
2.用原位杂交方法检测了Hp mRNA在正常人表皮各种细胞中的表
3.用RT一PCR及原位杂交法分别检测了Hp mRNA在人KC细胞系
HaCaT细胞中的表达;
4.用免疫组织化学法及Westem免疫印迹法检测了正常人表皮及
HaCaT细胞中Hp蛋白的表达。
材料和方法
一、标本资料:
(一)正常人皮肤标本:22例正常人皮肤标本均取自于整形美容手术
1.用于RT一PCR的标本14例。部位:包皮3例，面部4例，胸部5例，
腹部1例，臀部1例。其中，男7例，女7例。年龄:29一54岁，平均年龄:
2.用于原位杂交及免疫组织化学染色的标本8例。部位:面部3例，
胸部5例。其中，男3例，女5例。年龄:22一51岁，平均年龄:38.875岁。
(二)HacaT细胞:是1 988年由Fusenig等从正常人躯干皮肤中分离并
培育的人KC细胞系，2000年10月由何春涤教授从德国Free Universityof
Beilin引进并冻存于液氮中。使用前复苏并培养1周，取1 xl护个细胞用
(三)肝HePGZ细胞由华中科技大学同济医学院龚非力教授于2001年
6月惠赠，冻存于液氮内。使用前复苏并培养1周，取1 xl护个细胞用于实
二、RNA提取及翩A浓度测定:
1.皮肤组织RNA提取:用EDTA一N、液分离表皮及真皮，用Trizol总
RNA提取试剂盒提取各份表皮、真皮标本总RNA。
2.细胞RNA提取:分别取1 x106个HacaT细胞及1 xl护个肝H叩G2
细胞，用Trizol总RNA提取试剂盒提取各份细胞总RNA。
3.提取的RNA用紫外分光光度仪测定在260nln及Zsorun处的光密度
(oPtic滋density，oD)值，并根据此OD值计算RNA的浓度和纯度。
三、引物设计:
Hp引物采用以人Hpp链cDNA序列为模板设计的一对引物，产物大
PCR内对照采用人p一球蛋白(p一globin)引物对GHZo/PC04，产物大
小为286bpo
四、RT一PCR:
1.用Rav逆转录酶将各份表皮、真皮及HaCaT细胞、肝HePGZ细胞总
RNA逆转录为cDNA;
2，用Hp引物对及GH20/PC04引物对，PCR扩增各份表皮、真皮及
HaCaT细胞、肝HepGZ细胞的eDNA;
3.设立阴性对照:用各份标本的RNA代替模板cDNA进行PCR扩增;
4.设立空白对照:用灭菌双蒸水代替模板cDNA进行PCR扩增。.
【关键词】：
【学位授予单位】：中国医科大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2002【分类号】：R751【目录】：
一、 中文摘要4-10
二、 英文摘要10-17
三、 英语缩略语17-19
四、 学位论文19-62
论文一: 正常人表皮、真皮结合珠蛋白mRNA表达研究19-30
1 前言19-20
2 实验材料20-22
3 实验方法22-24
4 实验结果24
5 讨论24-27
6 结论27-28
7 参考文献28-30
论文二: 正常人表皮细胞结合珠蛋白mRNA表达研究30-40
2 实验材料30-32
3 实验方法32-35
4 实验结果35
5 讨论35-37
6 结论37-38
7 参考文献38-40
论文三: 人角质形成细胞系细胞(HaCaT细胞)结合珠蛋白mRNA表达研究40-49
2 实验材料40-42
3 实验方法42-45
4 实验结果45
5 讨论45-46
6 结论46-47
7 参考文献47-49
论文四: 正常人表皮及角质形成细胞系细胞(HaCaT细胞)结合珠蛋白表达研究49-62
1 前言49-50
2 实验材料50-54
3 实验方法54-57
4 实验结果57
5 讨论57-59
6 结论59-60
7 参考文献60-62
五、 论文图片及说明62-67
六、 致谢67-68
七、 文献综述68-84
八、 个人简介84-85
九、 在学期间发表论文85
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【共引文献】
中国期刊全文数据库
解渝,张芝兰;[J];现代中西医结合杂志;2003年12期
王东生,袁肇凯,黄献平,谢梦洲,卢芳国,殷文学;[J];安徽中医学院学报;2003年02期
施宗高,许良中,药锦娟,杨文涛,朱伟萍;[J];癌症;2001年01期
王孝养,张珍祥,徐永健,何敏,陈仕新,方慧娟;[J];癌症;2001年06期
张宏,肖文华,梁后杰;[J];癌症;2001年11期
洪桂云,陈宏权;[J];安徽农业大学学报;2004年04期
程安春,汪铭书,刘菲,宋涌,袁桂萍,韩晓英,徐超,廖永洪,周伟光,文明,贾仁勇,陈孝跃;[J];病毒学报;2004年04期
吴彩云,蔡俊鹏,杨汝德,陈清,罗立新,吴后波,俞守义;[J];水产科学;2004年05期
陈志娟,侯林,林盛国,徐明玉,王璐;[J];水产科学;2005年02期
高蕾,陈幸华,张曦,彭贤贵,孔佩艳,刘林,刘红,张怡,刘耀;[J];重庆医学;2005年09期
中国重要会议论文全文数据库
杨桂梅;高洪;徐自忠;花群义;周晓黎;;[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库
王昌源;[D];重庆医科大学;2003年
蒋国芳;[D];陕西师范大学;2000年
赵越;[D];湖南农业大学;2001年
张万君;[D];第二军医大学;2001年
王凤阳;[D];中国人民解放军军需大学;2001年
郭建增;[D];重庆医科大学;2001年
郭波;[D];第三军医大学;2001年
刘建平;[D];第三军医大学;2001年
周艳春;[D];第三军医大学;2001年
刘仲荣;[D];第三军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库
姜红;[D];中国医科大学;2003年
黄志峰;[D];暨南大学;2000年
桑红;[D];第二军医大学;2000年
侯玉峰;[D];南京农业大学;2000年
任晓峰;[D];东北农业大学;2001年
杨中汉;[D];暨南大学;2001年
吴明玮;[D];暨南大学;2001年
刘滔滔;[D];广西医科大学;2001年
张增利;[D];苏州大学;2001年
陈雷;[D];扬州大学;2001年
【相似文献】
中国期刊全文数据库
姜红,何春涤,王雅坤,肖汀,李萍,陈洪铎;[J];中华皮肤科杂志;2005年02期
沈霞,陶美华,李春海,任会明;[J];检验医学;1990年02期
徐建业;[J];重庆医学;1986年06期
梅善宗;[J];皖南医学院学报;1994年03期
张连杰，王方;[J];日本医学介绍;1995年03期
王合,王雅坤,李萍,高兴华,陈洪铎;[J];中国皮肤性病学杂志;2004年01期
刘丽华，李钢，汪渊，周青;[J];中华医学遗传学杂志;1995年01期
楼敏;;[J];传染病信息;1996年04期
刘道传,赵建玉,曹启华;[J];解放军医学杂志;1987年06期
冯泰宝;[J];广州医药;1994年02期
中国重要会议论文全文数据库
华潞;刘红;韩璐璐;郭婷婷;段兵;高晓晶;贾友宏;刘玉清;;[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年
张舒;舒宏;康晓楠;陆豪杰;刘银坤;;[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年
喻翠翠;孟宪荣;栗绍文;梅仕林;张望;周蕾蕾;陈辉;毕丁仁;;[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
张茜;;[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
吴福根;李莉;程亦斌;;[A];首届中国法医物证学术交流会论文汇编[C];1993年
董波;王治东;陈肖华;张军权;饶亚岚;高荣莲;侯丽莉;毛秉智;;[A];第七届全军防原医学专业委员会第五届中国毒理学会放射毒理专业委员会学术会议论文汇编[C];2004年
刘继勇;王玫;李凤前;朱全刚;孙华君;胡晋红;;[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
刘建军;何浩伟;张兵;龚春梅;蒋英芝;庄志雄;;[A];中国环境诱变剂学会第14届学术交流会议论文集[C];2009年
周雪丽;阎石;王薇;王昕;陆荣;闫莉娜;;[A];中国输血协会第三届输血大会论文专辑[C];2004年
闵玮;骆丹;林向飞;王宝涛;;[A];2006中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库
周林;[N];中国医药报;2004年
田学科;[N];科技日报;2004年
阿胜;[N];医药经济报;2004年
中国博士学位论文全文数据库
王合;[D];中国医科大学;2002年
夏立新;[D];中国医科大学;2005年
李萍;[D];中国医科大学;2003年
郭哲;[D];中国医科大学;2006年
康尔恂;[D];中国协和医科大学;2005年
杨晓红;[D];浙江大学;2007年
陈洁;[D];第二军医大学;2007年
侯素春;[D];大连医科大学;2008年
马蕾;[D];中国医科大学;2009年
阎衡;[D];第三军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库
姜红;[D];中国医科大学;2003年
周春林;[D];中国医科大学;2007年
王志东;[D];第二军医大学;2001年
陈祥国;[D];青岛大学;2003年
黄绵庆;[D];青岛大学;2004年
井莉;[D];第二军医大学;2004年
王平;[D];中国协和医科大学;2010年
喻翠翠;[D];华中农业大学;2010年
张宇;[D];郑州大学;2011年
周春蕾;[D];第二军医大学;2002年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号2016年检验科三基考试试卷_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
2016年检验科三基考试试卷
||文档简介
总评分4.1|
浏览量28491
&&三基考试试卷
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩6页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢结合珠蛋白的研究进展_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
结合珠蛋白的研究进展
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩4页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢