如何用叶绿素荧光测定方法素酶分析测定患者癌症标志物？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2014-12-22 05:40 标签： 双荧光素酶报告基因
&&HIF-1 luciferase reporter plasimd荧光素酶报告基因（报告基因质粒）
HIF-1 luciferase reporter plasimd荧光素酶报告基因（报告基因质粒）
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利用萤光素酶标记的肿瘤细胞建立肝癌原位移植模型及其活体成像目​的​：​利​用​生​物​发​光​成​像​技​术​非​侵​入​性​地​监​测​活​体​裸​鼠​原​位​肝​癌​发​展​过​程​。​方​法​：​将​包​含​有​萤​火​虫​萤​光​素​酶​基​因​的​p​C​I​-​n​e​o​-​L​u​c​载​体​转​染​人​肝​癌​H​e​p​G细​胞​系​,​筛​选​获​得​具​有​高​萤​光​素​酶​活​性​的​细​胞​克​隆​;​利​用​流​式​细​胞​仪​对​萤​光​素​酶​表​达​的​稳​定​性​进​行​初​步​研​究​,​并​分​析​细​胞​的​生​物​发​光​情​况​;​持​续​表​达​萤​光​素​酶​的​肿​瘤​细​胞​培​养​扩​增​后​被​植​入​裸​鼠​皮​下​,周​后​以​形​成​的​异​体​瘤​作​为​供​体​瘤​,​进​行​肝​脏​原​位​移​植
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同期刊文献　　报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应。Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。但是报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响，例如培养细胞的数目和活力的差别、细胞转染和裂解的效率、以及加样操作过程中引起的变异。Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。共转染的“对照”报告基因会作为内对照，减小细胞活性和转染效率对实验的影响。因此双报告系统减少了外部干扰，使得实验数据更可信。Promega提供了一种先进的双报告基因技术（Dual-reporter assays）,结合了萤火虫荧光素酶测试和海肾荧光素酶测试，该技术同时使用两个独立的报告基因以提高实验的准确性，Biotek synergy 系列微孔板检测仪作为双报告基因的检测分析平台获得了Promega DLR 认证。
*Let Professionals Serve Professionals基因有限公司 *
在双报告基因系统中，通常一个报告基因用于检测特定实验条件下待测物的反应，即“实验”reporter，另一个报告基因用来检测实验条件，类似于内部对照，用于校准“实验”reporter的数据。通过这种方法，可减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，例如：转染效率、细胞活性、细胞裂解差异以及加样操作过程中引起的差异。Promega公司的Dual-Luciferase系统利用萤火虫和海肾荧光素酶的活性分别检测实验组和对照组。萤火虫荧光素酶是一种分子量为61KD的单体酶，分两步催化虫荧光素的氧化反应，产生560nm的光，海肾荧光素酶是一种分子量为36KD的单体酶，催化海肾荧光素的氧化反应，产生中心波长为480nm的蓝光。萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶没有种源同源性，对应不同的反应底物，反应中没有任何的交叉干扰。
虫荧光素酶和海肾荧光素酶催化的生物发光反应
Biotek Synergy系列多功能酶标仪配置灵活、功能全面、性能优异，是微孔板检测仪器中的佼佼者！ 带有双自动进样器的Biotek Synergy系列多功能酶标仪具有完成Promega公司的Dual-luciferase assays试剂盒相关实验的优异能力。此试剂盒需要配合双自动进样器向反应体系中加入两种不同的试剂。由于这些试剂彼此之间会发生反应，必须采用两个独立的光路，Biotek Synergy系列多功能酶标仪配备两个完全独立的自动进样器，每个进样器都可以用Gen5软件独立控制，并且可以应用在同一个程序中。这些功能使得Synergy系列微孔板检测仪成为进行Dual-luciferase双荧光素酶检测的理想选择。
如需更多信息，请联系基因有限公司各办事处（）。(/)
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