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高效液相色谱法测定五加茸血口服液中异嗪皮啶的含量
目的:测定五加茸血口服液中异嗪吡啶的含量。方法:用高效液相色谱法，以ODSC18柱（150mm×4.6mmID，5μm）为固定相，乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）为流动相，检测波长为342nm。结果:异嗪吡啶在18.752～187.52×10 -3 μg范围内呈现良好线性，相关系数r=0.9997。平均加样回收率95.26%，RSD为1.31%（n=6）。结论:方法简便、准确、重现性好。论文论文参考网【关键词】
异嗪皮啶;高效液相色谱法;刺五加　　五加茸血口服液处方由刺五加、鹿茸血、鹿茸、维生素B 1 与几种辅料组成。具有健脑增髓，补血壮腰，安眠强胃，补肾强身，提神回春之功。用于体虚贫血，阳痿肾寒，神经衰弱等症。方中刺五加含有多种皂甙类，生物碱类化合物，主要成分之一是异嗪皮啶，其在药材中含量亦相对较易测定。本文以五加茸血中的主要有效成分异嗪皮啶为指标，采用高效液相色谱法，以乙腈、磷酸为流动相，测定其含量，该法简便、准确、精密度高、重现性好，为控制质量标准提供了可靠的依据。
　　1 仪器与试剂
　　日本岛津LC-10Avp系列高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测仪;CLASS-VP数据处理机;对照品异嗪皮啶（批号:;供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供）。甲醇、乙腈为色谱纯，水为注射用水，基耸试剂均为分析纯。五加茸血口服液由吉林敖东药业集团延吉股份有限公司提供（批号、、、061210）　　2 色谱条件
　　色谱柱:KromasilC18柱（150mm×4.6mmID，5μm）;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）;检测波长:342柱温:30℃;流速1.0ml.灵敏度:0.08AUFS。
　　3 线性范围的考察
　　精密称取异嗪皮啶对照品适量约10mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释制刻度，摇匀，再精密吸取1ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成每1ml含10μg的溶液，精密吸取异嗪皮啶（9.376μg.ml）对照品溶液2、4、8、12、16、20μl注样。记录色谱图，测定其峰面积，结果见表1。并以峰面积 值（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线方程。
　　表1 异嗪皮啶对照品测定结果（略）　　以峰面积值（A）对进样量（C）作图，得一直线，A=3.3C，r=0.9997。结果表明，在18.752～187.52×10 -3 μg范围内，异嗪皮啶峰面积值与进样量有良好的线性关系。　　4 精密度试验
　　精密吸取样品（061201）供试液10μl，重复进样5次，测定其峰面积，异嗪皮啶峰面积值的RSD=0.99%，结果见表2。
　　表2 精密度试验结果（略）　　试验结果表明，精密度良好。　　5 稳定性试验
　　取样品（061201）供试液分别于0、4、8h，分别进样10μl，测得样品中异嗪皮啶峰面积值的RSD=1.01%，结果见表3。　　表3 稳定性试验果结（略）　　试验结果表明，样品供试液在8h内稳定性良好。论文参考网　　6 重现性试验
　　按拟定的含量测定方法，对同一批样品（061201）制备样品供试液，测得峰面积值并计算含量，其异嗪皮啶峰面积值的RSD=0.84%;异嗪皮啶含量的RSD=0.85%，结果见表4。
　　表4 重现性试验结果（略）　　注:A:异嗪比啶;A的浓度:9.376μg.A的峰面积值:283181。（下同） 试验结果表明，本方法重现性良好。　　7 回收率试验
　　精密量取已知含量的样品（ml，分别加入异嗪皮啶（25.52μg.ml）对照品溶液0.85ml，1.03ml，1.20ml按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算回收率，结果见表5。　　表5 回收率试验结果（略）　　试验结果表明，回收率在95%～100%之间，加样回收良好。　　8 空白试验
　　精密量取除刺五加的阴性对照液50ml按上述样品制备方法
法和色谱条件，制备阴性对照溶液并注入高效液相色谱仪，见图1、2、3。结果表明在被测成分异秦皮啶的保留时间处无干扰。 　　图1 五加茸血阴性对照HPLC（略） 　　图2 异嗪皮啶对照品溶液HPLC（略） 　　图3 五加茸血供试品HPLC（略） 　　9 样品测定
　　对照品溶液的制备:精密称取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每1ml中含10μg的溶液，即得。供试品溶液的制备:精密量取供试品50ml，加水饱和醋酸乙酯提取4次（30，30，30，20ml），合并醋酸乙酯层，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定法:分别精密吸取异嗪皮啶（9.376μg.ml）对照品溶液与10批样品供试液各10μl，按上述色谱条件测定，结果见表6。　　表6 样品测定结果（略）　　10 讨论
　　10.1 检测波长的选择 利用UV-2401PC型紫外分光光度仪，对异嗪皮啶对照品，在200～400nm波长下进行紫外扫描，结果在342nm波长处有最大吸收，因此选择342nm为检测波长。
　　10.2 提取溶剂的选择 用水饱和醋酸乙酯提取时，分层快，界面清晰，有利于快速测定，而且样品图谱中杂峰少，故选用水饱和醋酸乙酯为提取溶剂。
　　10.3 提取次数考察 分别用水饱和醋酸乙酯提取1，2，3，4，5，6次，结果表明提取4次以后，异嗪皮啶基本提尽。
　　10.4 流动相的选择 本文分别用4种流动相进行试验，结果表明流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（80:20）时，效果最佳，柱压低，峰型尖锐，阴性无干扰［1-3］ 。【参考文献】
　　［1］刘丽娟，张清波，张树杰.刺五加药材指纹谱（HPLC-FPS）分析方法研究及不同产地药材谱比较［J］.中成药，）:781-783.　　［2］乔 菲，张清波，卢守奇，等.HPLC法测定刺五加制剂中异嗪皮啶的含量［J］.药物分析杂志，）:50.　　［3］周国平，刘红宇，徐天华，等.血康口服液中异嗪皮啶含量的HPLC测定［J］.中成药，）:203-204.--博才网
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五加茸血口服液
用于肾阳亏虚引起的腰酸腿软、畏寒肢冷、精冷等症。具有温补肾阳的功效。
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五加茸血口服液
刺五加、鹿茸血、鹿茸等。
用于肾阳亏虚引起的腰酸腿软、畏寒肢冷、精冷等症。具有温补肾阳的功效。
肾阳亏虚引起的腰酸腿软、畏寒肢冷、精冷等患者。
(10ml*10支)
口服。一次1支，一日2次。限定疗程为一个月。
吉林敖东延边药业股份有限公司
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【药品名称】
&nbsp&nbsp 通用名称：五加茸血口服液
&nbsp&nbsp 商品名称：五加茸血口服液
&nbsp&nbsp 拼音全码：WuJiaRongXueKouFuYe(AoDong)
【主要成份】刺五加、鹿茸血、鹿茸等。
【性 状】本品为棕色至红棕色的液体；味甘、微酸。
【适应症/功能主治】用于肾阳亏虚引起的腰酸腿软、畏寒肢冷、精冷等症。具有温补肾阳的功效。
【规格型号】10ml*10支
【用法用量】口服。一次1支，一日2次。限定疗程为一个月。
【不良反应】尚不明确。
【禁 忌】尚不明确。
【注意事项】1.忌不易消化食物。 2.感冒发热病人不宜服用。 3.糖尿病患者及有高血压、心脏病、肝病、肾病等慢性病严重者应在医师指导下服用。 4.儿童、孕妇、哺乳期妇女应在医师指导下服用。 5.阴虚火旺者慎用。 6.服药4周症状无缓解，应去医院就诊。 7.对本品过敏者禁用，过敏体质者慎用。 8.本品性状发生改变时禁止使用。 9.儿童必须在成人监护下使用。10.请将本品放在儿童不能接触的地方。 11.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。
【药物相互作用】如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。
【贮 藏】密封。
【包 装】10ml*10支/盒。
【有 效 期】24&nbsp 月
【执行标准】WS-5985（B-0985）-2002
【批准文号】国药准字B
【生产企业】吉林敖东延边药业股份有限公司
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