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仿野生灵芝种植技术
作者：陈孝&&&&来源：江苏东台市菇神食用真菌研究所&&&&点击数：&&&更新时间：日
　　品种选择
&&& 仿野生灵芝&长脚紫芝07～6&、&弯脚紫芝06～5.5&两个紫芝（黑芝）品种株形端正，色泽油亮，品种适应性强.海拔300米以上地区均可种植。
　　栽培材料选择
&&& 主要以阔叶段木为主。选用材质硬、单宁含量高的树种材料做栽培菌材产量高、质量好、回报期长，而选用材质疏松的树种材料做菌材则出菇期短、产量低、质量差。研究表明，麻栎、栓皮栎、梨树、杨梅树、青岗、枫香为上，桃树、泡桐、盐肤木次之，锯末农用下脚料更次，尽量不要用含有芳香油的树种及针叶木。
　　栽培菌材制备
&&& 所选用菌材树龄以5～20年为宜，于农历9月落叶后至翌年2月抽枝前砍伐，削平树钉截成15厘米长，装入26厘米&50厘米&0.05毫米的灵芝专用栽培袋中，注意不要让木质纤维扎穿袋子，以免造成后期污染。
　　混合料的加入与比例
&&& 混合料是填充袋内段木与段木之间的主要物质，它是灵芝菌丝体最初的营养源。其配方为：阔叶木屑75%、细米糠或麦麸21%、白糖或红糖1%、石膏1%、硫酸镁0.1%、合成色素0.3%、合成蛋白胨0.54%、灵芝生物素0.06%、腐质土1%，料水比为5∶5。将硫酸镁、生物素、色素、合成蛋白胨、白糖溶入水中，与上述原料拌匀，填人已装好段木的栽培袋中，注意段木与段木之间的空隙一定要填实，料面超出段木面2厘米即可封袋，并立即进入灭菌程序。
&&& 灭菌可采用高压或常温锅炉，无论采用哪一种灭菌，都要考虑料之间的水蒸气流通，以收到充分灭菌的效果，采用高压灭菌的，升火前应打开放气阀门，当水蒸气大量喷发时，关闭放气阀，加大火力，当压力表盘为0.15帕第一次放气时开始计时，在此气压下持续4个小时即可停火。当压力表降至0帕时，打开放气阀排气，把压力锅门打开自然降温。采用常用灭菌的，在蒸笼底部一角放一支温度计，升火后温度至100℃时开始计时，维持12个小时后停火，闷上一夜，然后打开蒸笼门让其自然降温。
&&& 当料温降至40℃时，移入接种袋或接种箱中，然后放入酒精、棉塞、包扎带、气雾消毒盒、火机、接种钩、菌种，菌种最好用百菌清或5%升汞水浸洗，同时清除有红、绿、黄等色杂菌的菌种，每四筒料放一包菌种。一切就绪后封闭接种箱，点燃消毒盒20分钟后可实现接种，接种时操作人员预先用75%酒精消毒双手，然后小心伸入接种箱中，从尾部撕开种袋接种，种头接近棉塞处的表皮弃之不用。
&&& 接种完毕。筒料马上放入培养室培养，此时培养室温度保持24～30℃。12小时后种子开始萌发吃料，20天后当菌丝长至筒料一半时，把接种端袋口稍稍打开通气培养，菌丝长满后，零星出现原基时，进入菌棚排场管理。
　　入土排场管理
　　场地选择背风、水源好、日照短的场所，搭好遮朋棚，高度要求2米以上，阴度要求五分阴五分阳，四周开排水沟，中间开厢，厢宽2.5米，长不限，厢与厢之间留30厘米人行道，把移到芝场已长好的筒料外袋撕掉。并排紧靠人行道两旁，然后用地膜覆盖防雨，在地膜上撒上细土，以不见地膜为宜，4～5天后扒开细土，撕开地膜，观察菌丝已恢复。并且相互连接时.即可把地膜全部取走，盖上细土，土高出筒料2厘米，上面撒上树枝、树叶等，此后经常喷水保湿，当气温升至18～24℃时会大量现蕾，此时可根据需要，摘除太密的菌蕾，以防灵芝开伞时形成连体芝。如需要制作特大灵芝，可加厚，在需要长芝的地方让菌筒小面积裸露，用草木灰水喷洒这个部位，进行定点刺激、定点出菇，如在这个部分出现多个芝柄。即可以除小留大，选无虫害的一个芝柄。制作一个特大灵芝需要做好预算：&长脚紫芝07～6&每百公斤柴种一年可产五年，第一年可产1公斤干品，第二年可产2公斤干品，第三年可产1.5公斤干品，第四年可产1公斤干品，第五年可产0.5公斤干品。如果想入土当年制作一个5公斤重的灵芝，则一定要放足500公斤菌材。如果想制作更大的灵芝，那么就要考虑配方上的生物素的加足量。灵芝是保健品，所以整个制作过程中不能用多菌灵、敌敌畏等含硫物质。如果灵芝出现害虫，可用紫外线灯于夜间灭杀。每晚灭杀4个小时即可，每50平方米放上一支紫外线灯。如菌体上已经出现害虫，那就只能用手工捉杀，或摘除出售。
　　常用计量单位符号　1、时间：d（天）、h（小时）、min（分）、s（秒）。　2、长度：km（千米）、m（米）、cm（厘米）、mm（毫米）。　3、面积：m2（平方米）、667m2（亩）、hm2（公顷）。　4、体积：m3（立方米）、L（升）、ml（毫升）、μl（微升）。　5、质量：t（吨）、kg（公斤 千克）、g（克）、mg（毫克）、μg（微克）。　6、浓度：mg/L、mg/kg（ppm,1×10-6）。
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[Ganoderma lucidum (Leyss.)Karst.]
又称赤芝、红芝。
子实体中等至大型。菌盖半圆形，肾形或近圆形，木栓质，人工栽培是子实体宽5-15cm，厚0.8-1cm，红褐色并有油漆光泽，菌盖上具有环状棱纹和辐射状皱纹，边缘薄，往往内卷。菌肉白色至淡褐色，管孔面初期白色，后期变浅褐色，褐色，平均每毫米3―5个，柄侧生，与菌盖近垂直，少数偏生呈扇状，长宽8-15cm，粗1-3cm，紫褐色，有光泽，生于阔叶树伐木桩旁。
分布于我国河北、山西、 山东、江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、广东、香港、广西、四川、河南、湖南、湖北、陕西、甘肃、贵州、云南、西藏等地。
从古代以来即有药用记载。可治疗神经衰弱、头昏、失眠、肝炎、支气管哮喘等，还可治积年胃病和用做中毒的解毒剂。对小白鼠肉瘤180和艾氏癌的抑制率分别为70―80%。此菌可利用菌丝体进行深层发酵培养。目前用它做原料加工生产多种保健品或药用产品。
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高等药用真菌产灵芝酸研究取得新进展
[发布时间]: 日
[责任编辑]: 解丛君 思源
高等药用真菌是生产具有多样生物活性的次级代谢物的重要资源。灵芝酸是高等药用真菌灵芝中的三萜类化合物，十多年来，上海交大生命学院钟建江教授课题组运用生物工程先进技术，成功从灵芝菌丝体发酵中获得了多种灵芝酸单体，并且药理药效研究证明他们具有抗肿瘤、抗肿瘤转移、逆转多药耐药性等重要药理活性，为癌症治疗配伍药物的研制提供了物质基础。最近，该实验室研究生王家乐等对于灵芝酸粗提液提出了“酸解-乙酰化-酸解”的预处理策略，使抗癌化合物灵芝酸T在粗提液中的质量含量及分离度分别提升了4倍和7倍，建立了化学反应预处理联合反相色谱分离的高效制备灵芝酸T的工艺技术，可用于今后灵芝酸T大规模生产制备。该成果申请了国家发明专利，有关论文发表在今年3月份出版的Biotechnology and Bioengineering期刊上（1）。
由于灵芝酸较低的生产率制约着它的各种应用。钟建江教授课题组提出了信号转导工程作为提高次级代谢产物产量的一种有效策略，并利用该策略成功地提升了灵芝酸的生物合成效率。针对在两阶段培养过程中的静置培养阶段，在其开始时点即在培养基中添加10 mM钙离子，使胞内钙离子浓度上升，激发了钙调磷脂酶信号途径，上调了灵芝酸合成关键基因hmgr,，sqs和ls的转录水平，最终使灵芝酸产量有效提高了4.5倍。该研究成果已在线发表在Biotechnology Advances杂志上（2）。另外，该课题组发现通过添加钠离子开启钠离子/钙离子交换通道，引起胞内钙离子浓度上升，也能有效激发钙调磷脂酶信号途径，上调灵芝酸合成关键基因hmgr,，sqs和ls转录水平，使灵芝酸产量提高2.8倍，该结果赢得刚刚在韩国闭幕的第15届国际生物技术大会(IBS2012)的好评，博士生徐轶宁也因此获得了IBS 2012 Organizing Committee Poster Award（大会墙报奖）。该研究为利用信号途径，调控和高效生产三萜类次级代谢产物灵芝酸提供了有用的信息。
钟建江课题组还进一步尝试通过基因工程的手段改善萜类生物合成途径，但至今在蘑菇类高等真菌中尚未见成功事例。该课题组的博士后徐军伟等最近成功建立了灵芝同源转化系统，并通过染色体步移以及定点突变的方法，获得了灵芝同源转化筛选标记cbxR，并利用cbxR建立了农杆菌介导的灵芝转化系统。进一步利用建立的转化系统高表达了灵芝酸生物合成途径的关键酶3-羟甲基戊二酰辅酶A还原酶 (HMGR)，使工程菌株中灵芝酸的含量比野生型菌株提高了2倍，中间代谢物鲨烯和羊毛甾醇的积累也高于相应的野生型菌株，关键基因 hmgr,，fps，sqs和ls的转录水平分别是野生型10，6.8，6.8和9.1倍，表明高表达tHMGR基因增强了灵芝细胞合成灵芝酸的能力。该成果展示了在高等真菌灵芝中采用基因工程手段提高灵芝酸积累的方法，为抗癌次级代谢物灵芝酸的高效生产及其调控提供了重要平台。以上结果在线发表在Applied and Environmental Microbiology上（3）。上述工作受到973项目和国家自然科学基金的资助。
相关链接：
1) Wang JL; Gu T; Zhong JJ. Enhanced recovery of antitumor ganoderic acid T from Ganoderma lucidum mycelia by novel chemical conversion strategy. Biotechnology and Bioengineering, : 754-762.
2) Xu YN, Zhong JJ. Impacts of calcium signal transduction on the fermentation production of antitumor ganoderic acids by medicinal mushroom Ganoderma lucidum. Biotechnology Advances, 2011, DOI: 10.1016/j.biotechadv..
3) Xu JW, Xu YN, Zhong JJ. Enhancement of ganoderic acid accumulation by overexpression of an N-terminal truncated 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase gene in basidiomycete Ganoderma lucidum. Applied and Environmental Microbiology, 2012, DOI: 10.1128/AEM.01263-12.
[作者]: 生命学院&
[供稿单位]:
[阅读]: 人次
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