什么是三联elisa棋盘法法?

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ELISA 直接法与间接法的区别
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英文名:Mouse interleukin 1,IL-1 ELISA KIT种属:小鼠编号:ARB12901规格:96T/盒品牌:百奥莱博产地:国产(默认)|进口(需核实有无)保存温度:2~8℃有效期:180天提示:本品仅用于科研实验,不能用作医疗及临床诊断。 &小鼠白介素1(IL-1)ELISA***运用一步孵育,一步洗板,比同类产品缩短1-2个小时,操作时间仅需90分钟,标准品梯度已经稀释好了,大大节省实验时间及减少操作的出错几率,公司严把质量关,三包政策(包邮、客观因素包换、包教)赢天下客户心。我公司的ELISA方法检测IL-1***,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销售下列产品:BL1265 离心式过滤柱癸二酸 4-Methoxyacetophenone 111-20-6ARB14046 猴γ干扰素(IFN-γ)定量分析 Monkey interferon γ ,ifn-γ ELISA KITARB13607 兔子***坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)Elisa分析 Rabbit tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,traIL-r3 ELISA KITBTN130805 单细胞悬浮液 Single Cell Suspension SolutionCBZ-L-谷氨酰胺 DEAE Sephadex A-25 ARB11588 人基质裂解素2(ST-2)检测服务 Human stromelysin-2,st-2 ELISA KITKG202 GMO作物提取检测***BTN70908 DNA PAGE胶回收*** PAGE DNABACKSJ0683 50bp plusARB11149 人***标志物(CA724)elisa检测操作说明书 Human ca724 ELISA KITARB10420 人丙氨酸转氨酶/谷丙转氨酶(ALT/GPT)酶联免疫定量检测 Human alanine aminotransferase,alt/gpt ELISA KITARB11922 人髓磷脂碱性蛋白(MBP)酶标法分析 Human myelin basic protein,mbp ELISA KITARB10499 人白血病抑制因子受体(LIFR)免费代测 Human leukemia inhibitory factor receptor,lifr ELISA KITARB12145 大鼠白介素1(IL-1)elisa检测说明书 Rat interleukin 1,IL-1 ELISA KITARB10360 人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)Elisa定量检测 Human heart fatty acid binding protein,h-fabp ELISA KIT三羟***氨基甲烷乙酸盐 Neodymium(III) chloride BTN81214 Tricine-SDS-PAGE阳极电泳液(干粉) Tricine-SDS-PAGE Cathod Buffer六偏磷酸钠 2′-dU 110-26-9 N,N-Methylene Bisacrylamide &甲叉双丙烯酰胺ARB12973 小鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)酶免分析 Mouse creatine kinase mb isoenzyme,ck-mb ELISA KITARB11945 大鼠8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG)含量分析 Rat 8-oxoguanine dna glycosylase,ogg ELISA KITARB11578 人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)尿液中含量检测 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 2,timp-2 ELISA KITARB11342 人亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA检测服务 Human leucine aminopepridase,lap ELISA KITARB11320 人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)***中含量检测 Human fetal sulfoslycoprotein antigen,fsa ELISA KITELISA方法检测IL-1***关键词:白介素1,IL-1,***定量分析实验原理:本***应用双***夹心法测定标本中白介素1(IL-1)水平。用纯化的白介素1(IL-1)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入白介素1(IL-1),再与HRP标记的白介素1(IL-1)抗原结合,形成***-抗原-酶标***复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素1(IL-1)呈正相关。用***在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中白介素1(IL-1)浓度。·人腺病毒抗原(ADV-Ag)代做ELISA实验编号:ARB11771 英文名称:Human adenovirus antigen,adv-ag ELISA KIT·牛白细胞介素6(IL-6)酶联免疫定量检测编号:ARB13358 英文名称:Bovine interleukin 6,IL-6 ELISA KIT·人胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)免费代测编号:ARB11331 英文名称:Human cytosolic phospholipase a2,cpla2 ELISA KIT·大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA代测服务编号:ARB12061 英文名称:Rat aspartate aminotransferase,ast ELISA KIT·人热休克蛋白40(HSP-40)elisa测定使用说明书编号:ARB11429 英文名称:Human heat shock protein 40,hsp-40 ELISA KIT·人套膜蛋白(INV)检测服务编号:ARB11448 英文名称:Human involucrin,inv ELISA KIT·人偏肺病毒IGM(HMPV)尿液中含量检测编号:ARB11601 英文名称:Human involucrin,inv ELISA KIT·小鼠高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)代做ELISA实验编号:ARB13211 英文名称:Human involucrin,inv ELISA KIT·人凋亡相关因子(FAS/CD95)Elisa定量检测编号:ARB11547 英文名称:Human factor-related apoptosis,fas ELISA KITELISA方法检测IL-1***关键词:白介素1,IL-1,*** &运输:快递运输(可根据客户要求,选择具体的运输方式,无特殊要求我公司一般为中通快递)用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断本公司的小鼠白介素1(IL-1)ELISA***,品质高,灵敏度好,曲线漂亮,无效包换,还可提供免费代测服务,各种种属、各种系列ELISA科研实验检测***,详情可来电咨询我公司销售人员或咨询我公司在线客服QQ。邻氯青霉素钠 o-Cresolphthalein complexon BTN51101 常态转化液 TranzolBTN111201 痰液DNAOUT Sputum DNAOUT2-碘丙烷 Phenacetin 75-30-9BL1223 GoldViewⅠ型核酸染色剂(10000×)ARB11042 人环磷酰胺(CTX)Elisa方法检测 Human cyclophosphamide,ctx ELISA KITARB12163 大鼠白介素2可溶性受体(IL-2sR)elisa检测操作说明书 Rat soluble interleukin 2 recepter,IL-2sr ELISA KITCYB161040 猪IgG(液体-pH7.2PBS)BFD049 克伦-莱克-沙丁-三联检测卡ARB12287 大鼠抗子宫内膜***(EMAb)酶联免疫定量检测 Rat endometrium antibody,emab ELISA KITJ0309 兔抗小鼠IgG(H+L)抗*** 1ml/10mlARB12781 小鼠α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA代测服务 Mouse α2-antiplasmin,α2-ap ELISA KIT &我公司生产的小鼠白介素1(IL-1)ELISA***未申请注册文号,产品仅作为科学研究领域内的实验、课题设计参照用!不作为较为严格的临床范围检测使用!性能:敏感性高,特异性强,重复性好规格:96T,可以检测90个样本,5个标准孔,一个空白孔对照 &小鼠白介素1(IL-1)ELISA******说明:96T的ELISA***最多可检测90个样本(不做复孔的情况下),其中拟合标准曲线6个酶标空(5个标准空,一个空白对照)。适用种属:人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测***等种属。北京百莱博科技有限公司是小鼠ELISA***产品的专业生产供应销售商,恭候您的咨询选购。
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【求助】间接ELISA法棋盘滴定结果分析
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这个帖子发布于6年零234天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人刚学习ELISA不久,现采用间接ELISA法测定抗血清的效价。棋盘滴定的结果如下,其中1-11列分别为包被浓度由1mg/ml至0.5mg/ml的抗原,第12列为阴性对照(包被液)。按行分别是由1:100-1:12800倍比稀释的抗血清。1.714
1.679 1.516
1.135 1.127
0.686 0.768
0.499 0.490
0.372 0.344
0.359 0.238
0.271 0.187
0.241 抗原包被浓度不同的列没有出现梯度。在版内搜索了很多帖子,我分析可能是包被浓度太高了,大家包被的浓度好像都是ug/ml级的。但是最后一列阴性对照为什么也偏高?不是要求阴性值在0.1~0.2或0.1以下,阳性在0.8以上或接近于1.0吗?请教各位高手,由上面的结果能得出什么结论呢?另外想请教各位ELISA阳性的判定依据是:OD接近于1.0且P/N值≥2者为阳性,≤2者为阴性吗?请各位高手不吝赐教,急啊,非常感谢!!
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包被后有没有进行封闭啊?
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对照组的梯度居然这么好,认为你洗板可能存在问题,还有棋盘滴定的时候,梯度拉开点较好。还有阴阳性的判断,还是一定要看看资料,知道所谓的P/N值是个什么概念,为什么选择P/N大于2或者3的意思。
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多谢各位。包被后用5%的脱脂奶粉封闭了2h。阴性对照组本底偏高,是因为我洗板有问题吗?洗板我用的是浸泡式洗涤法,即将洗涤液PBST(含0.05% Tween-20的PBS)注满板孔,放置2-3 min,再震荡1 min后,甩去液体,用吸水纸上拍干,重复洗涤5-6次。对于阴阳性结果的判定,我看资料上说P/N是指标本/阴性对照的比值。
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好奇问下楼主,根据我对你的描述的理解,第12列是没有包被任何抗原的,只是空白包被液进行的一个拟包被过程。照理说,这样的孔进过封闭之后是不应该吸附抗体的。但实际上根据你的结果,我看到了一个非常好的梯度结果,这个结果与你加入的抗体的量成正比。也就是说,在你这个实验体系中,即使没有抗原包被,只用空板子,也能根据加入的抗体的不同浓度作出一条标准曲线。你不觉得奇怪吗?
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多谢daydezzz。我也一直觉得很奇怪,用包被液包被的阴性空白也会出现梯度。我用的是Corning的96孔平底酶标板,是酶标板有问题吗?还是因为我用的包被液和洗涤液不是现配的?
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康宁的板子还是很不错的,你用的是辐照的还是非辐照的?其实我觉得你的体系里面,酶标板本身没有什么问题,问题在于你手上的被检测抗体和封闭液是不是有非特异性吸附。建议:1.尝试更换封闭液,我不知道你做的什么项目,所以不能确定你这边用什么封闭液会比较好,你可以自己尝试下10%的牛血清,马血清,山羊血清等等。2.包被后不封闭,直接重复前面的实验,看结果如何。3.用空白板子重复前面的实验,看结果如何。以上实验目的为确认因何种原因导致未包被板子出现阳性结果。另:你的ELISA反应步骤是怎么样的?
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多谢daydezzz。我用的应该是非辐射的板子,是非灭菌的那种。我觉得daydezzz说的挺有道理的,可能是我的被测一抗与封闭液脱脂奶粉有非特异性的吸附吧,要不然阴性空白的梯度怎么会那么好?我做的是用抗原免疫家兔制备多抗血清后,用间接ELISA测定多抗的效价。我看有的文献上说对于多抗,用脱脂奶粉封闭效果较好。我再用别的封闭液试试。daydezzz建议“包被后不封闭”,我想那样的话非特异性吸附肯定会有的吧?我之前用0.5%BSA封闭过,因为用的BSA浓度低,封闭效果很差,TMB显色后都出现了褐色的沉淀。另外我的ELISA步骤就是常规的抗原包被后,4度放置过夜;PBST洗涤5-6次后,满孔加5%脱脂奶粉37度封闭1.5-2h;PBST洗涤5-6次后,加倍比稀释的待测多抗,37度温育1h;PBST洗涤5-6次后,加HRP标记的羊抗兔二抗,37度温育1h;PBST洗涤5-6次后,加TMB 37度显色15min后加2M硫酸终止;测定OD450。
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不知你是如何稀释待检抗体和二抗的??我的一点建议,5%脱脂奶粉PBS 4度封闭过夜(8-12H)你的待检抗体和二抗都得用5%脱脂奶稀释!非特异性可降下来。还有就是,兔血清的本地要高些。
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不知道楼主用的抗原分子量大不大,如果太小的话,包被的结合效率会比较让人郁闷的。另,酶标板辐照不是为了灭菌,而是为了增加吸附性。
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非常感谢各位!我都是用PBS稀释待测一抗和二抗的。alishang建议用5%脱脂奶稀释,那样的话脱脂奶和抗体不会竞争性结合所包被的抗原吗?还有就是用5%脱脂奶粉PBS 4度封闭过夜和37度封闭2h的效果会有明显差异吗?我所用的抗原分子量分布很广,但之前实验室有人也做过类似的抗原,从结果看包被效率似乎还不错。继续郁闷中......希望各位能多多指教!
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我觉得用pbs稀释没有很大问题,我自己一直是这样弄的。不过你可以试一下版主给你的建议。如果你的抗体不是抗奶粉抗体的话,应该不会有竞争性结合的。封闭是4度过夜还是37度2小时这个无所谓的,效果都很好,没有很大差异。
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多谢各位!我最近更换了封闭液以之前相同的步骤又做了一次阴性空白(包被液包被),结果如下:第1、2列封闭液是5%脱脂奶,3、4列为用10%的胎牛血清封闭、5、6列为用2%BSA封闭。封闭液均用pH 7.4 PBS稀释。1.066
1.629 0.702
1.209 0.511
0.846 0.319
0.570 0.213
0.378 0.171
0.276 0.159
0.228 0.157
0.165 又是让人郁闷的结果啊!daydezzz分析我之前的结果可能是我的被测一抗与封闭液脱脂奶粉有非特异性的吸附,导致阴性空白呈现梯度。可用牛血清和BSA封闭后,阴性仍然有梯度,而且用脱脂奶封闭的本底还相对较低。请各位大侠再帮我分析分析吧!非常感谢!
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楼主试一下空板子不封闭直接做实验吧,看看结果再做判断。
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我认为是因为你的一抗与牛的蛋白有交叉反应,而且反应强度大,应该试一下用正常兔血清、羊血清之类非牛蛋白封闭。
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多谢各位!最近我按照daydezzz的建议,用空板子不封闭直接做了一次,结果如下:按行分别是抗血清由1:100-1:12800倍比稀释。可见非特异性吸附很强。1.820
1.898 1.745
1.685 1.758
1.668 1.648
1.725 1.694
1.673 1.651
1.673 1.715
1.678 1.685
1.846 后来我试了试版主的建议,用5%脱脂奶稀释待检一抗体,二抗还是用PBS稀释的。结果如下:1-2列为未包被抗原的阴性对照(包被液),3-4列包被了抗原。包被抗原的孔反而OD值减小了!我分析可能是脱脂奶和抗体发生了竞争性的结合?!0.739
0.193 0.420
0.154 0.289
0.122 0.197
0.142 0.144
0.110 0.106
0.092 0.102
0.110 0.107
0.123 另外vivid_zhang认为我的一抗与牛的蛋白有交叉反应,我的免疫抗原是中药的提取物,但我查了查文献,没有见到类似的报道。请各位大侠再帮忙分析分析吧!非常感谢!
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