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& SN/T 6 化妆品微生物检验方法 第1部分：沙门氏菌
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&&SN/T 6 化妆品微生物检验方法 第1部分：沙门氏菌
本标准代替
SN/T 2206的本部分规定了化妆品中沙门氏菌的常规检验方法。
本部分适用于化妆品中沙门氏菌的检验。
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鲁ICP备号-1化妆品微生物检验方法 第1部分：沙门氏菌
标 准 号： SN/T 6 替代情况：
发布单位： 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局起草单位： 中华人民共和国广东出入境检验检疫局
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本部分适用于化妆品中沙门氏菌的检验。
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& 化妆品常用防腐剂特点以及其检测方法
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化妆品常用防腐剂特点以及其检测方法
来源：检测通 时间：
　　中国《化妆品卫生标准》(87年版)中对66种防腐剂在化妆品组分中的含量和种类及条件做了相应的规定，化妆品常用及其特征见下表：
作&用&范&围
对皮肤刺激性
对羟基苯甲酸(甲、乙、丙、丁)酯(尼泊金酯)
主要抗真菌和革兰氏阳性细菌，对假单胞菌的作用差
对氯间二甲酚
抗细菌、真菌和酵母
苯氧基乙醇
作用范围广，对革兰氏阴性菌特别有效
pH值容限广
布罗波尔(Bronopol)
对革兰氏阴、阳性菌均有效
0.01%~0.05%
季胺-15(Dowicil&200)
对革兰氏阴、阳性菌均有效
咪唑烷基脲(杰马115，Germall&115)
对革兰氏阴、阳性菌均有效(包括绿脓杆菌)
抗细菌、酵母、真菌
0.02%~0.2%
抗霉菌和酵母
0.03%~0.10%
卡松(凯松)
对细菌、真菌和酵母均有效
0.003%~0.1%
甘油单月桂酸酯
抗革兰氏阳性菌、酵母菌、真菌和包有类酯的病毒
＜6.0~＞7.5
重氮烷基脲
对假单胞菌、细菌、霉菌、酵母菌及变异革兰氏阴性菌均有效
0.03%~0.3%
羟甲基海因
使用范围广，对酵母菌不太有效
二羟甲基二甲基海因
使用范围广，对酵母菌不太有效
0.15%~0.4%
　　化妆品防腐剂常规检测方法
&&& HPLC法防腐剂测定方法主要有分光光度法，滴定法，气相色谱法，薄层色谱法和高效液相色谱法，这些方法都具有定的局限性.由于大多数防腐剂都具有紫外吸收的特性..因此，HPLC法在此领域应用较为广泛.采用HPLC法测定对羟基苯甲酸酯类(尼泊金酯类)，苯甲醇，苯甲酸，卡松，IPBC化妆品中常用防腐剂，具有检出限低，分析灵敏度高，可同时分离检测多种防腐剂等优点.
　　FPD-GC法卡松是CIT和MIT的混合物，《化妆品卫生规范》中卡松的测定方法是HPLC，但通过实验证明，HPLC法的灵敏度较难满足其限量的要求(最大容许浓度为0.0015%).GC测定卡松要优于HPLC.气相色谱FPD检测器是对含硫磷物质有响应的特舁性检测器.利用卡松分子中含硫的特性，采用FPD-GC法检测化妆品中的卡松，方法灵敏度得到大大提高，FPD-GC法的检出浓度为0.75}&g/g，而HPLC法的检出浓度为4}～g/g.同时由于FPD检测器只对含S成分有响应，样品基质对测定干扰相对HPLC法要小，因此，在对卡松定性和定量方面，FPD-GC法比HPLC法具有较大的优越性.样品中所有卡松的检出均是由FPD-GC法测得.
　　FID-GC法IPBC是氨基酸类衍生物，是一种较为新型的化妆品用防腐剂.我国《化妆品卫生规范》已将IPBC纳入限用防腐剂，我省也有不少厂家将IPBC与双咪唑烷基脲复配使用，但目前国内尚未有相应检测方法.采用FID.GC法测定化妆品中IPBC，最低检出浓度为1.8}～g/g，最低定量浓度为6g/g.线性范围在O-lOOg/ml内，峰面积与样品浓度呈良好线性关系，相关系数&0.995.为验证实验结果的可靠性，利用气相色谱一质谱联用仪进一步确证.有7份样品检出IPBC，使用浓度范围在0.014%- 0.083%.
泉州中检石化检测有限公司
广州腾安产品测试服务有限公司（TOS）是一家UL/TUV/ITS/CSA/NEMKO 认可授权的CNAS实验
关注检测通微信公众号济南市食品药品检验检测中心& 250000
摘要：本文通过对化妆品实施致病指标菌检验能力的验证，对我国市场化妆品检测实验室的致病菌检测的宁里和水平进行相应的了解，对实验室中存在的差异进行识别，有效的帮助实验室发现存在的问题并实施相对的改善政策，从而使检测能力不断的得到提升。文中采用包含设计方案、准备五种样品，包括了样品Ａ无菌样品、样品Ｂ金黄色葡萄球菌、样品Ｃ铜绿假单胞菌、样品D表皮葡萄球菌以及样品E金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等，对它们进行一致性和稳定性实验和结果评价等方式，对全国186家化妆品进行了实验，结果在对186实验室进行实验之后，有132家实验的结果被评为满意，占总比例的71%。有54家实验室结果是不满意，占总比例的29%。五种样品的误差分别是16.7%、2.15%、9.14%、3.76％、2.69％。综合上述结果可以看出参加本次致病菌检验能力验证的大部分实验室都能够准确的检测出样品中的致病菌，其中样品Ａ的误判率最为准确，说明还是有大部分实验室的环境控制能力有必要做出提升。
关键词：化妆品；细菌；实验室能力验证
&&&&&&& 我国对化妆品的明确规定是化妆品中致病菌验证的指标是金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌，在每克或每毫升化妆品样品中不能同时含有两种致病菌，通过针对这两种指标存在与否来确定化妆品中是不是含有致病菌。由于这两种细菌是可能使人体局部化脓性病灶的细菌，它们入侵伤口后会引发化脓性炎症，情节严重的可能会出现败血症，所以检测机构能否准确检出化妆品中是不是含有的这两种致病菌是对产品进入市场的有力保障，评价检测机构化妆品中致病指标菌检测能力是相当重要，不可忽视的。
1 材料和方法
1.1 材料和试剂
&&&&&&& 仪器设备 采用德国 CHＲIST 型实验室冷冻干燥机、日本三洋超低温冰箱（SANYO）、恒温培养箱、梅里埃浊度计、梅里埃 API 鉴定仪、搅拌器等。试剂运用脱脂奶粉（英国 OXOID 公司），梅里埃 API20E 生化鉴定试剂盒，SCDLP 液体培养基，十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板（TSA），乙酰胺培养基，绿脓菌素培养基，7.5%氯化钠肉汤，Baird Parker平板、血琼脂培养基，甘露醇发酵培养基等。
1.2试验方法
&&&&&&& 增菌 先在洁净实验室采用无菌操作技术打开菌种管，吸取少量 SCDLP 增菌液将菌种管内的粉末溶解，移至 90 mL SCDLP 液体培养基中，置于 37 ℃温箱中培养 18 ～24 h 进行增菌培养。分离、培养、鉴定 按&化妆品卫生规范&要求进行分离培养、鉴定。结果评价方法 本计划能力验证，每个参试实验室均检测了 5 种样品，评价的原则是以能否准确检测出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌以及能否排除干扰菌干扰作为主要依据。每家实验室的 5 种样品的预期结果（指定值）均包括无菌、金葡、铜绿、表葡、金葡 + 铜绿 5 个结果；5 种相应样品的检验结果均符合以上预期结果，评为&满意&；如表葡样品检验结果描述为&杂菌&、&G + 菌&或表葡以外的其他细菌名称，排除了所检样品检验结果为金葡和铜绿，另外 4 种样品检验结果与预期结果完全一致者，仍可评为&满意&；除表葡样品以上描述的情况，5 种样品中有 1 份样品检验结果不符合以上预期结果的，评为&不满意&。
2.1 样品制备情况
&&&&&&& 2.1.1 一致性试验 5 种样品各抽取 36 份样品进行一致性试验，所有检测结果均与预期结果（指定值）相吻合，而且同种样品的每 1 份之间都是一致的，表明所制备的样品是均匀、一致的，满足能力验证样品的要求。
&&&&&&& 2.1.2 稳定性试验 不同存放温度下，样品的可检出期限见表 1。
将 5 种样品放置在 4 ℃、25 ℃ ～ 28 ℃、37 ℃、42 ℃ 环境中，若干天检测 1 次，在 42 ℃ 环境中最短存活期为 16 d（样品 B、D）。结果表明所制样品稳定性能够满足能力验证样品的要求。
&&&&&&& 2.2 能力验证结果 186家实验室按要求反馈了检验结果，132 家实验室检验的 5 种样品结果与预期结果完全一致，被评为满意结果，占 71%；54家实验室因 1 种以上的样品检测结果与预期结果不一致，被评为不满意，占 29%。
&&&&&&& 能力验证是实验室工作质量监控的重要手段，是实验室内部质量控制的补充。此次化妆品中致病指标菌检验能力验证结果表明，大部分化妆品检测实验室具备快速、准确检测化妆品中致病指标菌的能力。同时，能力验证结果也反映了一些实验室的存在问题，这些问题的发现和改进，将促进实验室化妆品致病指标菌检验能力的不断提高。样品制备是能力验证的核心内容，本次能力验证一致性试验共做了 180 份样品，每种样品做 36份，检测结果均与预期结果（指定值）相吻合；稳定性试验采用室内不同温度存放稳定性和运输过程稳定性测试 2 种方式，室内存放试验 300 份样品，运输过程试验 15 份样品，均满足能力验证样品的要求。本次计划共有 186家实验室参加，分布于疾病预防控制机构、出入境检验检疫机构、产品质量监督检验机构、食品药品检验机构和科研单位及企业，其满意 率 分 别 为 76.6%、73.0%、68.0%、78.0%、75.0%，不同系统间的差距不明显。
&&&&&&& 本计划制备的样品 B（金葡）、样品 C（铜绿）、样品 E（金葡和铜绿）是为检测能力考核而设计的，理论上混合菌检测难度较单一菌高，目的是检验各单位的化妆品致病指标菌的检验能力，出现误判现象的实验室源于基本功不够扎实，有必要针对性进行训练和提高。只有控制好检测每个关键环节，才能保证检验结果准确有效。
参考文献：
［1］ 陈文胜，谭慧嘉，罗建波，等． 化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检测能力验证实施研究［J］． 中国卫生检验杂志，）：366 － 369．
［2］ 刘佛民，刘礼平，谭海玲，等． 食品中副溶血性弧菌检测能力验证研究［J］． 中国职业医学，2010，37（增刊）：1 －3．
［3］ 罗建波，杨杏芬． 公共卫生实验室能力验证实施指南［M］． 北京：中国标准出版社，2012：96 －107．
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