人体血清蛋白昆明醋酸纤维维膜电泳在临床上有何意义

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血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验探讨
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血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验探讨
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单项选择题在正常人血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳图谱中泳动最慢的是()
B.&1球蛋白&
C.&2球蛋白&
D.&球蛋白&
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B.&1球蛋白&
C.&2球蛋白&
D.&球蛋白&
2A.检测分析过程中的误差 B.控制与分析有关的各个环节 C.特异性 D.防止得出不可靠的结果 E.敏感性 3A.核左移 B.核右移 C.退行性变 D.中毒颗粒 E.空泡 4A.正常人外周血网织红细胞不超过红细胞总数的2% B.网织红细胞增高,说明骨髓造血功能明显活跃 C.网织红细胞长期增多,而不伴有红细胞增多者为骨髓发育不全,即红系成熟受阻 D.网织红细胞降低,表示骨髓功能减低或衰竭 E.网织红细胞增多或降低不代表骨髓造血功能 5A.铁粒幼细胞性贫血 B.再生障碍性贫血 C.巨幼细胞性贫血 D.溶血性贫血 E.感染性贫血
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血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告怎么写?
cc晨晨°UYME
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你们没有实验报告吗?先按照上面的写清楚1,试验目的 2,试验器材药品 3,试验步骤(操作过程),注意写清实验问题分析,最后是实验结论.注意生化不像生理等科目,它主要是以验证性的实验为主,也就是说实验结论都是不用你再去另外思考的,书上应该有(好像是“醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白质分成五个区带”)
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血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 烟大化院 贺君 实验四
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 cellulose acetate membrane electrophoresis 实验四
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 【实验目的】
掌握电泳法分离血清蛋白质的原理
掌握血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的操作方法及临床意义 电泳:带电粒子在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象 电泳技术:利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术 【实验原理】 H+ OH- H+ OH- pH&pI
pH&pI 电泳速度:带电粒子在电场中运动时,单位电场强度内粒子运动的速度,以u表示,即
V—粒子运动的速度
X—电场强度 Q—粒子所带电荷
r—粒子的半径 η—介质的粘度 影响电泳速度的因素 1.样品本身: 分子形状:形状越小,与支持物介质摩擦越小,u越大。
球形分子 & 纤维状分子 Q越多,u越大; 分子小,r越小,u越大; 2.缓冲溶液: pH值:(pH-pI)越大,Q越多,u越大 离子强度(I):
I越大,电动电势越小,u越小;
I越小,电动电势越大,u越大, 但样品易扩散。 离子强度如果过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定
选择离子强度时要两者兼顾,一般离子强度的选择范围在0.02~0.2之间。 电场强度:电泳支持物上每厘米的电位降,也称电势梯度。 3.电场强度(X) X越大,u越快。 支持物越短, X越大, u越快。
电场强度越大或支持物越短,电流将随之增加,产热也增加,影响分离效果。
在进行高压电泳的时候必须用冷却装置,否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离 4.支持介质: ①纤维薄膜(玻璃纤维薄膜,醋酸纤维薄膜) ②凝胶(琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶) 负极 正极 - - - - - - - - 表面带负电荷 带正电荷的水层携带粒子向负极移动
如果样品原本是移向负极的,则泳动的速度加快; 如果样品原本是移向正极的,则泳动的速度减慢。
电渗作用: 电渗:在电场作用下液体对固体支持物相对移动的现象。 + + + + + + + + 以纸电泳为例: 区带电泳的分类
(一)支持物物理性状 1.滤纸及其它纤维(如玻璃纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯纤 维薄膜)电泳 2.粉末电泳:如纤维素粉、淀粉电泳; 3.凝胶电泳:如琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳; 4.丝线电泳:尼龙丝、人造丝电泳。 (二)支持物装置形式: 1.平板式电泳:支持物水平放置; 2.垂直板式电泳:聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳; 3.垂直柱式电泳:聚丙烯酰胺盘状电泳 (三)pH连续性: 1.连续pH 电泳:即整个电泳过程pH 保持不变,如常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。 2.非连续pH 电泳:缓冲液和电泳支持物间有不同的pH 的电泳,如聚丙烯酰胺凝胶盘状电脉,等电聚焦电泳等
醋酸纤维薄膜为支持物
pH=8.6的巴比妥缓冲液
血清蛋白的pI均小于8.6
电泳时向正极移动
由于迁移率不同而被分离 γ
α2 α1 清蛋白
分子越小,泳动速度越快
带电量越多,泳动速度越快
膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带。 2.定性,定量
各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比。
可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中。
用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 醋酸纤维薄膜:
醋酸纤维加工的细密且薄的微孔膜
广泛应用医学临床各种生物分子的分离分析
血清蛋白、血红蛋白、球蛋白
脂蛋白、糖蛋白
甲胎蛋白、类固醇及同工酶等 优点: 简单快速 缺点 分辨率较低(聚丙烯酰胺凝胶电泳,PAGE) 不适于制备(薄膜厚度约10~100μm,样品用量很少) 【器材及试剂】 1、器材:
醋酸纤维薄膜(2×8cm)
常压电泳仪
人血清或鸡血清
粗滤纸 2、试剂:
巴比妥缓冲液
氨基黑10B0.25染色液
透明液 [操作] (一)仪器与薄膜的准备 1、醋酸纤维素薄膜的润湿与选择 2.电泳槽的准备 3、电极槽的平衡 (二)点样
取出薄膜,无光泽面向上平放在滤纸上
点样区距阴极端1.5 cm
血清均匀涂在点样器表面
将点样器轻轻印在点样区内,使血清完全渗透至薄膜内
形成一定宽度、粗细均匀的直线
实验的关键,是获得具有清晰区带的电泳图谱的重要环节 (三)电泳
点样端薄膜平贴阴极电
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