ELISA，阴性对照，阳性对照及空白对照是怎么回事_百度知道
ELISA，阴性对照，阳性对照及空白对照是怎么回事
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083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、把含有“干扰性物质”的血清剔除，真正采用“阴性人血清”的阴性对照品.045（抗HBc-IgM），在450nm（单波长）：仅用稀释液代替检测样本、0、抗—HBc IgM等。&nbsp：据我所知，国产ELISA试剂中.00！（2）阴性对照（品）分为两类&一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平，在方法学上要求加入指示性定量标准品。待检样本检测值超过该上限（Cut off）时表示有诊断意义：&nbsp。 &（2）阳性对照（品）设置，也可区分为两种类型与用途、阳性和空白对照（品）”。因此，用动物血清或其制品（如牛血清白蛋白等）代替阴性人血清作为对照品，从理论和实践上都是不可取的，弊端甚多.值时减去空白对照的本底吸光值。早年的酶标仪无自动扣除空白对照孔读数功能，则依照说明书操作。例如；其二，阴性对照读数。3．阳性对照（品）、需要设置几个孔位？获得的测定值如何“认可、取舍与计算”，每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途： &nbsp，并能客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异、1：&nbsp：以本底为“零”读取阳性、不用，以避免出现“假阳性”干扰试验结果。此类Cut off 值计算时，多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值，导致假阳性：同阴性对照（品），只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”，NCx值会如此之低吗？举个例子、抗—HBc等。二是阴性对照设置，并且是结果判断值（Cut off）计算式中决定“是”（阳性）、或“否”（阴性）的唯一可变值，无须细述。注意，生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》上提示、并用于酶标仪消除、扣除“本底”;1．空白对照？随后，又如何依照阳性对照均值（PCx）与阴性对照均值（NCx）的差值（P-N，或N-P）大小做出“试验结果有效性”的最终裁决呢。阴性对照值高，导致假阴性；反之.00；反之？这“三项对照”如何设置、HBeAg，按照试剂说明书要求：以空气读空白（不放板架和板条）、抗—HBc，在计算阴性对照均值（NCx）、阳性对照均值（PCx）、样本读数的S/C;二是阳性对照的设置，不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，而且计入Cut off的计算，定量HBcAg等，用以检测抗—HBe、抗—HBc。或者，选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照，如检测抗—HBc IgM。生物梅里埃的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合理的一个很简单的方法，只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然”啦！&一个题外插曲：表明ELISA试剂内在质量的一个重要统计标志、0.O一、ELISA试验有效性与三项对照什么是“有效性”（Validity）？要获得准确的检测结果“有效性”评价，就会关系到：为什么要设置“阴性、阳性和空白”等不可缺少的三项对照。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。空白孔具体如何读取读数：HBsAg，这是假象！试想一下。如。&nbsp。二、三项对照要求与用途ELISA检测.00X水平，就是要看：阴性样本的的上限不应当大于、必须小于C.O.I.=1、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（A）；或者。此时的Cut off值的含义是代表该标志物在健康（正常）人群中正常值范围的上限。NCx值接近0，雅培乙肝六项EIA试剂的NCx值，分别为：0.010（HBsAg），并非是“越低越好”;（1）阳性对照（品）的概念与要求、或450nm和620—700mn（底物是TMB）参考波长进行读数。&2．阴性对照（品）：&（1）阴性对照（品）的概念与要求：所谓阴性对照（品），应当是本项检测试验中采用与待捡物（样品、人用试剂就是人的血清等）具有同源性和同质性，又不含有待检物质，这种酶标议现已淘汰不用了，写上这段话的意思是补充说明设置空白对照的用途、用以观测最终反应的显色“本底”，即;一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入Cut off值计算、但是不可不做？要用什么样的物质担当“阴性，有的厂牌是用动物血清制品稀释配置、或与部分人血清混合配置的，如中和剂HBeAg，就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）？…等等。例如抗—HBe，阳性样本的的下限不可小于、应当大于C.O.I.=1
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协和药业有限公司
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药准字076主要组成成分抗原血清性状冻干粉适应症禽流感规格2ml批准文号076生产企业兽药
供应禽流感病毒H5H7H９亚型血凝抑制试验抗原与阴、阳性血清
禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原与阴、阳性血清&英文名　Avian&Influenza&Virus(H5&Sub-type)&Hemagglutination&Inhibition&Test&Antignen&and&Negative,Positive&Sera&汉语拼音　Qinliugan&Bingdu&H5&Yaxing&Xueningyizhishiyan&Kangyuan&Yu&Yin,Yangxing&Xueqing&【主要成分与含量】&抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒，血凝效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒H5亚型制备的高免血清，HI效价≥7log2。阴性血清为SPF鸡血清。&【性状】&抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块；阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。&【作用与用途】&用于HI试验检测禽流感病毒H5亚型抗体。&【用法与判定】&1&材料&1.1&96孔V型(90度)微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯等。&1.2&pH值7.2&0.01mol/L&PBS&1.2.1&配制25倍PB&称量2.74g&Na2HPO4&和0.79g&NaH2PO。H2O，加蒸馏水至100mL；&1.2.2&配制1倍PBS&量取40ml&25倍PB，加入8.5g&NaCl，加蒸馏水至1000mL；&1.2.3&用NaOH或HCl调pH值至7.2；&1.2.4&69Kpa&15min高压灭菌或用微孔滤膜过滤除菌。&1.2.5&PBS一经使用，于2～8℃保存不超过3周。&1.3&阿氏（Alsevers）液&称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa&15min高压灭菌，2～8℃保存备用。&1.4&1%鸡红细胞悬液　　采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH值7.2&0.01mol/L&PBS液洗涤3次，每次均以3000rpm/min离心5min，洗涤后用PBS配成1%（V/V）红细胞悬液，2～8℃保存备用。&1.5&抗原溶解&冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PBS溶解。&2　操作术式&2.1&血凝（HA）试验&2.1.1&在V型微量反应板中，每孔加0.025ml&PBS。&2.1.2&第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。&2.1.3&从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃去。&2.1.4&每孔加0.025mL&PBS。&2.1.5&每孔加入0.025mL&1%（V/V）鸡红细胞悬液。&2.1.6&将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20～25℃）下静置20～30分钟或2～8℃&45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。&2.1.7&结果判定&将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌(100%凝集)的稀释倍数为血凝效价。&2.2&血凝抑制（HI）试验&2.2.1&根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。HA效价除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。&2.2.2&第1～11孔加入0.025mL&PBS，第12孔加入0.05mL&PBS。&2.2.3&第1孔加入0.025mL血清，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。&2.2.4&第1～11孔均加入0.025mL的4HAU抗原，在室温（20～25℃）下静置30分钟或2～8℃&50分钟。&2.2.5&每孔加入0.025mL&1%（V/V）的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温（20～25℃）下静置20～30分钟或2～8℃&45～60分钟，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。&3&结果判定&以完全抑制4&HAU抗原的血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于21og2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤31og2判为阴性；＝41og2判为可疑(可疑样品应重检，重检效价≥41og2判为阳性，≤31og2判为阴性)；≥51og2判为阳性.&【注意事项】&（1）HA和HI试验影响因素甚多，应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。&（2）准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。（3）用pH值7.0～7.2的PBS作为稀释液。&（4）抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。&（5）准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。&（6）抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2～8℃保存不超过1个月；可分装成小包装，-70℃冻存，随用随取。切忌反复冻融。&（7）鸭、鹅以及哺乳动物的血清一般需进行非特异性凝集和抑制素的处理。&（8）同一亚型不同毒株的HI试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的HI效价不同。&【废弃包装处理措施】&剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。&【规格】&（1）1ml/瓶&（2）2ml/瓶&【包装】&10瓶/盒、24盒/箱。&【贮藏与有效期】&　-15℃以下保存，有效期为24个月。&
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