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即送15丁当
请问怎么提全血的RNA？红细胞中有RNA吗？
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这个帖子发布于12年零252天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如果想把全血的RNA都提取出来，而不是只提一种细胞的RNA，应该怎么办？多谢！
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红细胞里面的RNA应该不是很多，但是红细胞里面的蛋白质很多，会影响RNA提取，你可以选择两种试剂盒：
第一种： e.z.n.a total RNA Kit（omegabiotek公司）
50次　　836元　以全血为起始样品，所以可以提取全血的RNA.或其它试剂盒如trizol, RNA-solv(omega biotek);
第二种：e.z.n.a blood RNA Kit（omegabiotek公司）
50次　　836元　将新鲜的全血为样品，然后将红细胞裂解。　　这两种产品最大的差别，第一种产品所有的全血样品是相当有限的，一般1ml 的Trizol or RNA Solv reagnet只能提取100ul的全血样品，这样可以得到全血样品中的RNA，但是得到的ＲＮＡ会很少，而且纯度不是很高；　　第二种产品，因为将红细胞裂解并离心去除红细胞，收获得白细胞，这样就可以把用大量的血液，用这种产品可以加入1ml全血样品。收获得RNA可以更多。　　如果需要更多的信息，请联系我。　　朱添洋，qitec_.cn
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你好，谢谢你的热心的指导。我是南开大学生科院的一名硕士，现在试验刚起步，所以对很多问题不是很懂。我想问你有没有关于提取全血RNA的实验流程？能给我发过来一份，或者告诉我哪里可以找到吗？先在这里谢谢你了。以后有什么问题希望可以多向你请教，祝好。想给你发信，可是好像你的E-mail有点问题哦。
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对了，我的地址是coollee_,李乐。
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我也正要做，能否也给我发一份 .cn
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我比较omega 的RNA solv和invitrogen的Trizol提取全血的RNA。0.25ml全血+0.75ml试剂omega的不行，invitrogen还可以但是 结果不稳定，郁闷！！！！omega的e.z.n.a. blood rna kit 50 次要美元180.00，人民币要多少呀！！！！
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亲爱的小伙伴们，我是个新手，准备做动物血液RNA的提取与序列分析这一实验，可是有好多地方不明白，希望可以和亲们交流交流，共同进步！谢谢~为什么从动物全血中提取RNA时，要将红细胞裂解了，提取白细胞中的RNA呢？红细胞不也有吗？
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关于丁香园从全血中分离红细胞的方法
专利名称从全血中分离红细胞的方法
技术领域本发明涉及一种从人全血中分离红细胞的方法，特别是一种涉及使用预包被 植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球分离人全血中的红细 胞的方法。本发明可广泛应用于临床检验和医学科学研究等大量使用人全血标本 的领域。
背景技术血液标本是临床和科研使用最多的标本，但一般仅限于去除红细胞的血清或 血浆，因此在很多情况下需要对全血标本进行从中分离出红细胞的预处理。临床 和科研上分离全血中的红细胞的方法有多种，包括自然沉降、离心、排阻过滤和 吸附过滤等。这些方法各有特点，但都需要耗费较长的时间，操作较复杂。
本发明的一个目的是提供一种快速高效分离人全血红细胞的方法，特别是提 供一种使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球作 为载体，从人全血中分离红细胞的方法。
本发明的另一个目的是提供一种分离人全血红细胞的装置，特别是提供了一 种使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球作为载 体，将该载体与全血标本混合后，使用外置或内置永磁体或电磁体提供的磁力吸 附作用，将吸附了红细胞的磁性微球从全血中分离开出来的装置。
本发明的分离方法包括以下步骤将预包被了植物凝集素或抗红细胞抗体的 磁性聚合物微球加到全血中并混合均匀达到均相互溶状态，然后利用永磁体或电 磁体，将吸附了红细胞的磁性微球从全血中分离开出来。本方法的特征在于使用 预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的磁性聚合物微球，并使用磁力分相达到快速 分离的目的。本发明所说的"均相互溶状态"是指红细胞与全血中的其他成分处于均匀混 和的状态。
本发明所说的"异相分离状态"是指红细胞在空间上富集在一起且与全血的 其他绝大部分成分分开，处于相对分离的状态。
本发明提供一种快速高效分离人全血红细胞的方法，特别是提供一种使用预 包被了植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球作为载体，借助 外加磁力从全血中分离出红细胞的方法。
为了克服现有技术中的缺陷和不足，本发明提供了一个适于快速高效分离人 全血中红细胞的方法，该方法包括(1)将植物凝集素或抗红细胞抗体预包被于 磁性聚合物微球上；(2)将微球加到人全血中并混合均匀；(3)利用磁力吸附具 磁性的微球，吸附了红细胞的微球在磁力作用下从均相互溶状态转变为异相分离 状态，从而达到分离全血红细胞的目的。
根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的"人全血"是指从人体新鲜采 集的，未经自然分离或人工分离的全血标本。
根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的"植物凝集素"采用从红豆中 提取的植物凝集素。
根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的"抗红细胞抗体"是使用人红 细胞免疫小鼠，常规制备的抗红细胞单克隆抗体。
根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的"磁性聚合物微球"是平均直 径为10 — 20微米，掺入了四氧化三铁的聚苯乙烯微球。
根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的"磁力"是由永磁铁或电磁铁 提供的。
根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的植物凝集素来源于红豆提取 物。将红豆用纯水洗净并浸泡约24小时后机械粉碎成乳浆状，然后离心(6000g， 30min)分离上清并使用饱和硫酸氨法进一步提纯。
根据本发明的一个优选实施方案，可以按下述方法使用凝集素或抗红细胞抗 体包被磁性聚合物微球预先将磁性聚合物微球溶于PBS缓冲液(50mM, pH7.4)中(浓度为10%， m/v)，快速搅拌下加入凝集素或抗红细胞抗体并室温 搅动(100转/分钟)反应30分钟，然后加入牛血清白蛋白(BSA)至终浓度0.2%， 再次室温下搅动(100转/分钟)反应15分钟，最后10000g离心20分钟后弃上清，再用PBS缓冲液(50mM， pH7.4)重悬沉淀，即得到标记好的磁性聚合物 微球溶液。
现针对本发明的几个主要步骤，分别详述如下
1. 将植物凝集素或抗红细胞抗体预包被于磁性聚合物微球上
本发明采用的是优化的包被方法首先优化了包被pH值，比较了在pH5.0、 pH6.0、 pH7.0、 pH8.0、 pH9.0、 pH10.0时的包被效率，结果发现pH7-8时最好， 继续优化比较，发现pH7.4时包被效率最高，并将PBS缓冲液盐浓度从lOmM 提高到50mM，有助于包被后的稳定性，尤其是加入到全血样品后的稳定性，减 少植物凝集素或抗红细胞抗体的脱落，提高吸附效率。另外采用高磁性四氧化三 铁制备的聚合物(聚苯乙烯、聚乙烯)微球，可以大大提高借助磁力分离的速度， 同时也比较了不同的微球直径(40nm、 60nm、 100nm、 150nm、 200nm、 300nm) 的包被及分离效果，结果100nm的微球的包被和分离效率是最好的。
2. 利用磁力分离红细胞 本发明采用的磁力来源可以是永磁体或电磁体，永磁体包括普通的磁铁和高
磁力的合金磁铁。其中优选的是电磁体。电磁铁可以控制磁力通断，可在不移动 容器的情况下实现同位置分离红细胞。磁体可置于容器的多个位置，包括底部、 侧壁、顶端甚至容器内部等，可以是一端，也可以环绕于容器。
如前所述，由于本发明采用了强磁性的聚合物微球和强磁力的永磁体，使得 磁力分离的速度大大加快。另外，本发明可采用各种磁体，便于设计不同成本和 性能的装置，满足不同应用和需求，利于推广应用。
图1显示底端固定磁体的磁力分离装置分离全血红细胞的示意图。
具体实施例方式
以下结合附图详细描述本发明方法的优选实施方案。
实施例l:采用植物凝集素包被磁性颗粒分离红细胞的方法
取100g红豆，用纯水洗净，浸泡于200ml纯水中24小时，用榨汁机将红豆 打碎成豆乳浆，打碎过程中加入50ml纯水以提高研磨效率，乳浆于6000g离心 30分钟，保留上清并用饱和硫酸氨法进一步提纯，获得植物凝集素纯品备用。按照每毫升10%浓度的磁性聚合物微球(平均直径lOOnm)溶液包被20ug 植物凝集素的比例，预先将磁性聚苯乙烯微球溶于PBS (50mM， pH7.4)缓冲 液中(浓度10%， m/v)，在快速搅拌的情况下加入植物凝集素，室温下搅动(100 转/分钟)反应30分钟。然后加入BSA至终浓度0.2M，室温下搅动(100转/分 钟)反应15分钟，最后10000g离心20分钟后弃上清，用PBS (50mMpH7.4) 缓冲液重悬沉淀，获得标记好植物凝集素的磁性聚苯乙烯微球溶液(微球终浓度 10% (m/v)。
采集新鲜正常人全血样本5ml，不加任何凝集素或其它试剂，备用。同时准 备一个底部预置好磁铁的试管架，按照每毫升全血加入0.2毫升微球溶液的比例 加入标记好植物凝集素的磁性聚苯乙烯微球溶液，混匀后置于试管架上，静置 IO分钟后可见明显的分层现象上层是清亮的血清/血浆，下层是红色的红细胞。
经红细胞计数检测分离后的上清，计算得该方法分离红细胞的效果达到99% 以上。
实施例2:采用抗红细胞抗体包被磁性颗粒分离红细胞的方法
取购自北京新创生物工程有限公司的抗红细胞抗体lmg。按照每毫升10% 浓度的磁性聚乙烯微球(平均直径100nm)溶液包被20ug抗红细胞抗体的比例， 预先将磁性聚乙烯微球溶于PBS缓冲液(50mMpH7.4)中(浓度10%， m/v)， 在快速搅拌的情况下加入抗红细胞抗体，室温下搅动(100转/分钟)反应30分 钟，加入BSA至终浓度0.2%，室温下搅动(100转/分钟)反应15分钟，最后 10000g离心20分钟后弃上清，用PBS (50mM pH7.4)缓冲液重悬沉淀，获得 标记好抗红细胞抗体的磁性聚乙烯微球溶液(微球终浓度10% (m/v))。采集新 鲜正常人全血样本5ml，不加任何凝集素或其它试剂，备用。 准备一个底部预置好磁铁的试管架，按照每毫升全血加入0.2毫升磁性聚乙烯微 球溶液的比例加入标记好植物凝集素的磁性聚合物微球溶液，混匀后置于试管架 上，静置10分钟后，可见明显的分层现象上层是清亮的血清/血浆，下层是红 色的红细胞。
经红细胞计数检测分离后的上清，计算得该方法分离红细胞的效果达到99% 以上。
1. 一种分离人全血红细胞的方法，该方法包括以下步骤(1)将植物凝集素或抗红细胞抗体预包被于磁性聚合物微球上；(2)将微球加到人全血中混合均匀；(3)利用由永磁体或电磁体提供的磁力吸附具磁性的微球，将被微球吸附的红细胞从均相互溶状态转变为异相分离状态，从而达到分离全血红细胞的目的。
2. 根据权利要求1的方法，其中所说磁性聚合物微球是掺入了磁性物质的各种 聚合物微球。
本发明涉及一种新型快速分离人全血中红细胞的方法，特别是涉及使用预包被植物凝集素或抗红细胞抗体的含有磁性材料的聚合物微球分离人全血中的红细胞的方法。本发明的方法可以快速且高效地从人全血标本中分离红细胞。
文档编号C12N5/08GKSQ
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者王言帅 申请人:英科新创(厦门)科技有限公司关注今日：3 | 主题：507999
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【求助】血细胞各组分如何分离
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这个帖子发布于3年零29天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
各位砖家，想通过密度梯度离心法（暂不考虑流式细胞分离）一次完成对人血液中淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、血小板、红细胞进行分离，应该怎么做啊？
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能分的这么细么？我只知道用密度梯度分离PBMC
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丁香园准中级站友
biansc 各位砖家，想通过密度梯度离心法（暂不考虑流式细胞分离）一次完成对人血液中淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、血小板、红细胞进行分离，应该怎么做啊？ 倒是可以，不过你要有大量的blood吧。原理如下１.可以用Ficoll得到PBMC，其中有淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞。然后再做MACS分离。２.最下面的是RBC３.上面的是有血小板，参见/index.html?pageconfig=resource&rid=14322
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太感谢了，谢谢指导
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hbezyr @biansc：各位砖家，想通过密度梯度离心法（暂不考虑流式细胞分离）一次完成对人血液中淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、...倒是可以，不过你要有大量的blood吧。原理如下１.可以用Ficoll得到PBMC，其中有淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞。然后再做MACS分离。２.最下面的是RBC３.上面的是有血小板，参见/index.html?pageconfig=resource&rid=14322中性粒细胞应该是在最下面的RBC层～
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连续密度梯度和不连续密度梯度分层还是不太一样吧
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话说我回复你一下你把那两个叮当给我呗
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关于丁香园君，已阅读到文档的结尾了呢~~
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3秒自动关闭窗口血液分离机厂家详细介绍应用和操作方法-机械
血液分离机厂家详细介绍应用和操作方法
发布时间： 0:33
血液分离机厂家& 血液分离机的利用越来越广泛，所涉及的行业也由原来单一的食品行业扩展为饲料、生物制品等行业。我公司设计研发的新一代血液分离机广泛应用于人、猪、牛、羊、鸡等多种血液的血浆与血细胞的分离。 该机的主要特点是血浆收益率高，且在分离过程中把血球的破碎率降至最低。该机与物料接触部分均由不锈钢制成，可满足制药行业GMP要求。
在体外进行细胞免疫检测时，首先必须进行淋巴细胞的分离。分离淋巴细胞的方法很多，但不管采用哪种方法，均要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多，而且不丧失活性，同时也要求分离技术简单、操作方便。 &外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一，两类细胞的大小和密度不同，其沉降速度也就不同。红细胞的自然沉降率较快，加入高分子量的聚合物，如明胶、右旋糖酐等还可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度离心法或二者结合，可以将淋巴细胞从血液中分离出来。这种分离出的淋巴细胞一般包括单核细胞。除去单核细胞，可以利用单核细胞的吸附功能，如铁颗粒、玻璃面或尼龙网等，除去（或分离）单核细胞，从而提纯淋巴细胞。
（二）操作方法 & 1．采血抗凝，即为红细胞。由于红细胞与白细胞的比例相差悬殊，一般白细胞混杂在其中，忽略不计。& &2．根据红细胞的用途，可做进一步的处理。如计算红细胞，可直接稀释计数。如需做补体结合反应，或其它溶红细胞反应，则需将红细胞进行充分的清洗，以除去附着在红细胞膜表面的血浆。一般用等渗的稀释液连续清洗， 2 000r/min离心10min，重复3~4次。 & 3．如需储藏备用，则以阿氏液做抗凝剂采血，混匀后置4℃冰箱保存，可保存2周，其活性尚可。血液分离机 高速离心机维护保养
（1）离心盖上不要放置任何物质，每次使用完毕，务必清理内腔和转头。 （2）离心机如较长时间未使用，在使用前应将离心机盖开启一段时间，干燥内腔。 （3）电机的碳刷在使用3000小时后，应及时更换，以免磨损整流子。 （4）离心机经长期使用，磨损属正常现象。本企业将继续提供优质服务。 高速离心机安全须知： （1）开机时如发现电源指示灯不亮，应立即停机检查。 （2）严禁在未装转头的情况下空载运行。 （3）运行前应检查转头有无腐蚀损伤。 （4）当转头运行时不要开启离心机盖，不要接触正在运行的转头。 （5） 严禁转头在装载不平衡的状态下运转。