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HIV多表位核酸疫苗构建及其免疫原性
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HIV多表位核酸疫苗构建及其免疫原性
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布氏杆菌pCDNA3．1-L7／L12核酸疫苗的构建及其免疫学评价
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中国人兽共患病学报
中国人兽共患病学报
2004年&20卷&04期 刊出日期&
问号钩体外膜蛋白基因特征分析
于洋,郭晓奎,张怡轩,白秀峰,赵国屏
目的　钩体病是一种人畜共患的 ,由致病性钩体引起的世界范围内广泛流行的传染病 ,至今仍没有高效、广谱疫苗 ,因此预测和研究钩体外膜蛋白基因结构特征 ,有助于研制新疫苗。方法　使用NCBI/Blast,SwissProt/TrEMBL ,ProDom/Blast,Pfam ,ClustW诠释问号钩体赖型赖株全基因组ORF基因 ,对编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析。结果　获得了可能用于防治钩体病高效疫苗的外膜蛋白的基因特征信息 ,并对OmpL1、LipL36、LipL32、Li pL4 1、Qlp4 2进行了详细分析。 结论　本文通过对钩体外膜蛋白基因预测与功能分析 ,认为OmpL1、LipL36、LipL32、LipL4 1、Qlp4 2可作为疫苗开发的靶基因。
2004&Vol. 20&(04):&269-274
幽门螺杆菌临床株粘附素HpaA基因的克隆表达及在诊断中的价值
吴利先,杨致邦,林珊珊,刘淼
目的　构建表达幽门螺杆菌临床株粘附素 (HpaA)的重组质粒 ,在大肠杆菌中表达获得重组蛋白 ,探讨重组蛋白作为Hp抗原在感染诊断中的价值。 方法　用PCR方法从幽门螺杆菌临床株DNA中扩增HpaA基因片段。克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达 ,表达产物经纯化和Westernblot鉴定后 ,作为Hp抗原 ,ELISA法对 10 0例临床标本进行相应抗体检测 ,并与细菌培养、组织学染色和快速尿素酶试验比较来评价其应用的可行性。结果　经酶切、测序分析插入的基因片段全长 783bp ,与基因文库中的粘附素基因同源性达 98 87%。表达蛋白经SDS -PAGE分析 ,相对分子量 (Mr)约为 300 0 0 ,可溶性表达占全菌的 4 1 6 7%以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 90 %以上的重组蛋白。Westernblot证实了其免疫反应性。通过对临床病例的检测结果显示细菌培养、组织学染色、快速尿素酶试验和HpaA抗体检测的敏感性、特异性和准确性分别为 10 0
0 % ;和 90
8% ;93 3%和 85
9% ,相差不多。结论　HpaA能在大肠杆菌中高效表达 ,具有较强的免疫反应性 ,作为检测试剂敏感性和特异性均较好 ,有望成为Hp新的非侵入性的检测方法。
2004&Vol. 20&(04):&275-278
恙虫病东方体Gilliam株56kDa外膜蛋白基因的克隆与表达
陈唯军,陈香蕊,张雪颖,牛东升,陈梅玲,崔红,魏文进,温博海
目的　表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法　采用PCR方法 ,从Ot Gilliam株菌种基因组DNA中扩增出 5 6kDa外膜蛋白基因片段 ,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30 ,再用重组质粒转化大肠杆菌 ,最后用IPTG诱导转化菌 ,SDS -PAGE和Western -blotting检测重组质粒目的基因的表达。结果　 (1)获得长约 15 0 0bp的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因 ,SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量5
6× 10 4处有表达带 ;(2 )DNA测序证明重组质粒 pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报告的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因序列基本一致。 (3)诱导表达菌体经超声破碎后 ,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4 )免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为 5
6× 10 4的独特蛋白带 ,该蛋白约占细菌蛋白总量的 2 9 4 %。结论　Ot Gilliam株5 6kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性 ,与Ot Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印迹中呈阳性反应。
2004&Vol. 20&(04):&279-283
青海省新发现原双蚤指名亚种自然感染鼠疫
祁美英,于守鸿,杨永海,王国钧,辛有全
2004&Vol. 20&(04):&283-283
小鼠肺炎支原体肺炎模型的建立及干扰素-γ的变化
刘晓红,辛德莉,侯安存,魏田力,叶慧初,李靖,张长淮,陈光勇
目的　探索小鼠急性肺炎支原体感染的过程及干扰素 γ的变化规律。方法　BALB/c小鼠按体重随机分组 ,在0、1、2d滴鼻感染肺炎支原体菌液 ,在 0～ 2 1d分批宰杀 ,并分批设立滴注培养基的对照组 ,以 0～ 2 6分的组织病理学评分来确定肺部的炎症反应程度 ,所有实验组动物的病原学诊断均作了肺匀浆支原体培养或 /和肺匀浆的支原体PCR鉴定 ,于感染1、3、4、6、8、14天以ELISA方法检测了血清干扰素 -γ的含量。结果　经接种菌液于感染后第一天每 1例小鼠肺部均出现炎症反应 ,组织病理学评分平均为 6
32分 ,于第 3、4天达到最重 ,为 11 6 0和 9 5 8分 ,以后逐渐减轻 ,于第 2 1天炎症基本消失。本实验组中动物的组织病理学评分为 0～ 19分。培养基对照组未出现肺部炎症反应。感染后 1、2、3、4d肺组织培养和PCR检测均有肺炎支原体生长 ,检出率为 10 0 %。在 6、8、14、2 1d大部分未检测出支原体 ;随着肺炎的出现 ,在病程第 3、4天有γ -干扰素的显著降低 ,于第 6天逐渐恢复接近于对照组水平。结论　经 3天滴鼻感染肺炎支原体菌液 ,经组织病理学和肺组织培养和PCR检测证实可使小鼠出现明显的肺炎 ,并有不同程度的干扰素 -γ的降低。小鼠的mp肺炎的动物模型已经建立 ,组织病理学评分方法可以区分肺炎的严重程度 .
2004&Vol. 20&(04):&284-287
抗弓形虫单克隆抗体免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库
吴翔,蒋立平,舒衡平,蔡力汀,张祖萍,沈杰
目的　探讨自制的抗弓形虫单克隆抗体 (McAb)相应抗原的分子结构机制 ,为弓形虫疫苗的研制寻找有效抗原提供依据。方法　用自制的抗弓形虫速殖子的McAb免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库 ,对阳性克隆cDNA插入片段进行PCR鉴定并测序分析。结果　 2个McAb第一轮分别获得 6个和 3个阳性克隆。分别进行第 2轮筛选 ,选取其中持续阳性最强的2个进行体外剪切 ,提取质粒DNA并进行PCR扩增和序列测定 ,经核苷酸同源性比较 ,可能为 2个新基因 ,其中 7C3-C3筛选的基因命名为WX2 (GenBank登录号为 :AY2 38892 ) ,2B9-G1筛选的基因命名为WX(GenBank登录号为 :AY2 0 8994 ) ,并用蛋白质分析软件对新基因编码的蛋白质结构和功能进行预测。结论　自制的具有一定保护性效果的McAb免疫筛选获得的阳性克隆插入基因片断的表达产物 ,可能具有抵抗弓形虫感染的作用 ,值得进一步深入研究。
2004&Vol. 20&(04):&288-290
黑胸大蠊不同发育阶段可溶性抗原特征分析
徐绍锐,汪世平,吴仕筠,吕志跃,李文凯,彭先楚,何卓
为了对黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原进行免疫生化特性分析 ,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定通过酶联免疫印迹 (ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性。四种抗原蛋白经SDS -PAGE后银染色 ,均得到清晰的蛋白显色带。卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见 13、2 8、2 6和 4 1条蛋白区带 ,其中主带分别为 2、10、10、13条 ,分子量大多位于 10kDa - 97kDa范围。具有免疫原性的蛋白质大多分布在 4 3kDa以上分子量范围 ,四种抗原组分相互之间有交叉抗原的存在。结果表明不同发育阶段黑胸大蠊的蛋白质组分从卵 -若虫 -成虫出现次第增多现象并趋于复杂化 ,这对研究黑胸大蠊的发育生物学特征具有一定的潜在意义。
2004&Vol. 20&(04):&291-294
同时产PER-1型和TEM-1型β内酰胺酶铜绿假单胞菌的检出
侯天文,尹晓琳,王永祥,陈兴,李烛,张林,李玮
目的　分析多重耐药铜绿假单胞菌临床株 (编号 0 10 7)对 β内酰胺类抗生素耐药情况及其原因。 方法　用改良三维试验分析 0 10 7株产生的 β内酰胺酶表型 ,以碱裂解法提取质粒 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增质粒的酶基因型别 ,并对阳性产物测序。结果　 0 10 7号铜绿假单胞菌临床株产生超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ,携有blaPER - 1基因 ,同时还有blaTEM - 1型基因。结论　 0 10 7号菌株耐 β内酰胺类抗生素耐药的可能原因是产生PER - 1型的ESBLs和TEM - 1型的广谱酶。
2004&Vol. 20&(04):&295-298
日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗的构建及其对家兔保护性免疫作用的研究
刘彦,肖建华,廖力,张愉快,曾谷清
目的　体外扩增日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白抗原的部分基因序列 ,构建日本血吸虫pcDNA3 1(+) /MLP核酸疫苗 (SJP) ,免疫新西兰家兔 ,观察它在肌肉组织中的表达、及其对家兔的保护性免疫作用。方法　分子克隆常规操作构建SJP疫苗 ,免疫家兔 ,家兔肌肉组织体外扩增查MLP基因 ,并通过免疫组化观察重组蛋白在局部肌组织中的表达 ;做血清抗体及细胞因子分析 ,计算减虫率及减卵率。结果　经酶切、PCR及测序鉴定表明所构建的SJP中含有目的基因序列 ;免疫家兔 8周后可以在免疫家兔肌肉中检测到MLP基因 ,免疫组化结果阳性 ;可诱导IgA、IgG1及INF -γ变化 ,减虫率为2 4
10 % ,减卵率为 2 8 10 %。结论　成功地构建了含目的基因的核酸疫苗SJP ,SJP免疫家兔后 ,肌组织有重组蛋白的表达 ,并可产生一定的免疫保护性作用。
2004&Vol. 20&(04):&299-302
葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)
孙爱华,邵浙新,阮萍,毛亚飞,严杰
目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA获得的 pUCm -T -SEA基因片段与真核表达载体 pPIC9K连接。采用电融合法将重组真核载体pPIC9K -SEA转化入P pastorisGS115株 ,构建成真核表达系统 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。采用含G4 18抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。 0
5 % (V∶V)甲醇诱导下 ,采用SDS -PAGE检查BMMY液体培养基上清中重组SEA(rSEA)的表达情况。结果　可从S aureusATCC135 6 5株DNA中扩增获得SEA目的片段。与报道的SEA基因序列 (GenBankNo :AP0 0 4 82 8andL2 2 5 6 6 )比较 ,所克隆的SEA基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。在甲醇的诱导下 ,pPIC9K -SEA -P pastorisGS115能表达在SDS -PAGE图谱位于预期位置的rSEA。结论　我们成功地构建了能表达SEA的真核表达系统 ,为进一步分析SEA分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。
2004&Vol. 20&(04):&303-306
斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶差异表达与疟原虫卵囊黑化关系的研究
杨松,黄复生,况明书,段建华
目的　探讨斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶与疟原虫卵囊黑化的相互关系。方法　斯氏按蚊分吸糖水组、吸正常小白鼠血组、吸约氏疟原虫感染血组和吸硝喹糖水组 ,挤压法收集雌斯氏按蚊血淋巴 ,解剖后取吸硝喹糖水蚊第 1、2和 3天斯氏按蚊中肠 ,超声提取中肠蛋白 ,Bradford法检测血淋巴总蛋白浓度 ,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS -PAGE ,Western印迹电转移后检测前酚氧化酶。结果　四组血淋巴前酚氧化酶和用药后中肠前酚氧化酶均呈现一条阳性蛋白带 ,分子量分别均约 6 6kDa,与吸糖水组比较 ,吸正常小白鼠血组血淋巴前酚氧化酶表达增强 ,而感染后血淋巴前酚氧化酶表显著增强。硝喹诱导黑化后血淋巴前酚氧化酶表达水平呈逐日下调趋势 ,而硝喹诱导黑化过程中中肠前酚氧化酶量逐渐增加。结论　斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶参与疟原虫卵囊黑化反应。
2004&Vol. 20&(04):&307-310
问号钩端螺旋体检测基因芯片的研制
唐雨德,陶开华,李越希,金慧英,张锦海,郭恒彬
目的　制备一种用于快速检测、鉴定问号钩端螺旋体的DNA微阵列芯片。方法　从Genbank中选取钩体 2 3SrDNA序列 ,设计一对种特异性引物和DNA探针 ,通过Blast的基因同源性比较 ,验证引物和探针的通用性与特异性。将合成的探针点样到玻片上制备成基因芯片。用Cy3标记引物 ,通过不对称PCR反应获取荧光素标记的靶序列 ,然后与制备的芯片杂交。结果　设计的引物与探针仅同时与问号钩体 2 3srDNA完全同源。该引物可扩增我国 18个血清群的 2 5株钩体 ,均出现单一 4 82bp的扩增产物 ,而双曲钩体及其他螺旋体、病原、空白对照均无任何DNA扩增条带。芯片杂交结果与常规PCR方法结果一致 ,敏感性高于PCR。结论　基因芯片可以快速、灵敏、特异地检测问号钩端螺旋体。
2004&Vol. 20&(04):&311-314
汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠效果的实验
石永兵,诸葛洪祥,金东华,许菊,钱峰,张学光
目的　观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻免疫诱导机体产生的免疫应答 ,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法　用重组质粒PcDNA3 1B -S1 3 经滴鼻接种BALB/c小鼠 ,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及流式细胞仪等方法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应。结果　免疫小鼠血清IgG及粪便IgA明显增高 (P <0
0 1) ,且IgA增幅较大 ;实验组淋巴细胞增殖反应明显 ,刺激指数 (SI)显著增大 (P <0
0 5 ) ;免疫后CD+ 4 、CD+ 8T细胞均增加 (P 0
0 5 )。结论　汉滩病毒重组质粒滴鼻免疫能诱导机体产生了特异的系统免疫和较强的粘膜免疫 ,滴鼻的疫苗免疫途径有着潜在的应用价值。
2004&Vol. 20&(04):&315-317
徐州市大肠埃希菌O157∶H7宿主动物带菌情况及毒力研究
余加席,赵广法,倪大新,杨晋川,汪华,顾玲,郭喜玲
目的　了解徐州地区O15 7∶H7大肠杆菌宿主动物带菌情况及其毒力基因阳性率。方法　采集流行区内猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本 ,用免疫磁珠法进行病原菌分离培养 ,并用多重引物PCR进行毒力基因分析。结果　共采集猪、鸡、羊、牛等家畜家禽粪便标本 92 5份 ,检出O15 7∶H7大肠杆菌 12 7株 ,检出率为 13 73%。其中 ,以牛、羊检出率较高 ,分别为18 6 0 %和 16
0 1%。对 4 2株菌株进行了SLT1、SLT2、eaeA和Hly四种毒力基因的检测 ,85
71%的菌株毒力基因阳性 ,且以同时带有SLT2、eaeA和Hly三种毒力基因最为常见 ,占带毒菌株的 80
5 6 %。病家分离的菌株带毒率 (96
4 3% )明显高于外对照 (6 4
2 9% ) (P <0
0 1)。结论　加强宿主动物O15 7∶H7监测 ,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义。
2004&Vol. 20&(04):&318-320
直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌
黄金林,焦新安,文其乙,潘志明,张小荣,张如宽,刘秀梵
目的　通过样品试验 ,得到优化的沙门氏菌检测方法。方法　在单抗直接ELISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上 ,将PCR法和单抗直接ELISA两种快速检测方法进行比较研究。结果　直接ELISA方法结合PCR方法对城区 14 1份水样、2 0 0 2年春季饮食行业工作人员健康检查的 14 2 6份人粪便样品 ,并与常规国标方法对比 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 2 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试 ,最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。结论　PCR法的敏感性优于直接ELISA法。对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;需要确定血清型时则用国标方法。
2004&Vol. 20&(04):&321-323
革螨、恙螨感染汉坦病毒最小感染阈值及增长的动态观察
张云,朱进,吴光华,王敬军,张家驹,邢爱华
目的　研究螨 (革螨、恙螨 )感染汉坦病毒 (HantavirusHV)阈值和潜伏期。方法　采用革螨、恙螨叮刺不同感染剂量HV的乳鼠 ;用组织培养半数感染剂量 (5 0 %tissuecultureinfectivedose,TCID50 )测定、计算螨最小感染HV阈值 ;并动态观察HV在螨体内增殖 ,计算HV在螨体内的潜伏期。结果　在测定的 8组中革螨除 1 5LD5 0未感染外 ,其余 7组均能使革螨感染 ,HV在革螨体内开始增殖时间约在叮刺后第 2 5～ 30d。恙螨在测定的 8组中除 1 5和 5LD5 0未感染外 ,其余 6组均能使革螨感染 ,HV在恙螨增殖时间约在叮刺后第 30～ 4 0d。原位分子杂交检测发现HV阳性信号多见于螨的中肠细胞内 ,卵巢、卵细胞较少。结论　革螨感染HV的最小阈值为 5TCID50 ,HV在革螨体内潜伏期约 2 5～ 30d。恙螨感染HV最小阈值为10TCID50 ,HV在恙螨体内潜伏期为 30～ 4 0d。
2004&Vol. 20&(04):&324-327
细胞外基质促日本血吸虫培养细胞贴壁作用的研究
朱俊勇,董惠芬,蒋明森,钟沁萍,张兆仁,胡世全
目的　研究肝、肺生物基质及鼠尾胶三种细胞外基质 (ECM )对日本血吸虫培养细胞的促贴壁作用。方法　灌注法获取 2 1d虫龄的日本血吸虫虫体 ,冷消化法制备细胞悬液 ,将密度为 2× 10 6/ml的细胞悬液分别接种于均匀铺敷三种基质及未铺敷基质 (对照 )的各组培养瓶中进行培养 ,定时计数贴壁细胞数 ,计算贴壁率。结果　随着培养时间从 8h— 4 8h ,各组日本血吸虫细胞的贴壁率逐渐增高 ,4 8h后下降。同一培养时间 ,基质不同 ,细胞的贴壁率不同。培养 4 8h时细胞的贴壁率 ,鼠尾胶组、肝与肺基质组分别为 6 3 2 7%、4 8 95 %、4 5
36 % ;统计学处理发现 ,它们之间差异显著 ;鼠尾胶组与肝、肺基质组比较 ,p <0
0 1;肝与肺基质组之间比较 ,p <0
0 5 ;对照组与各基质组比较 ,均具显著差异 (p <0
0 1)。 结论　ECM对日本血吸虫培养细胞具有明显的促贴壁作用。其中 ,鼠尾胶对日本血吸虫细胞的促贴壁作用最强 ,其次是肝生物基质 ;肺生物基质的促贴壁作用相对较弱 ,但也强于对照组 (p <0
2004&Vol. 20&(04):&328-331
一株炭疽杆菌无毒株的建立
王秉翔,彭玉芬,韩少波,胡海涛,虞雪梅
目的　建立无毒炭疽菌株 ,为炭疽疫苗研究和免疫检测打基础。方法　用传统的高温减毒法 ,将当前用于生产炭疽疫苗的减毒菌株进一步减毒。结果　对筛选的一株炭疽杆菌AAT12 1株进行全面检定 ,证实它已失去其亲代株A16R所具有的 pXO1质粒 ,并因此失去了产生毒素的能力 ,成为炭疽杆菌“无毒株” ;同时也几乎完全失去了生成芽胞的能力 ;其它的生物和生化学性质未发现变化。结论　炭疽减毒株也可用高温减毒法进一步减毒为无毒株 ,以便有关研究中应用。
2004&Vol. 20&(04):&332-333
嗜水气单胞菌β-hemA重组菌的优化培养及其生长曲线的测定
方勤美,林天龙,龚晖,陈红燕,陈日升,欧阳岁东
用正交试验探讨温度、培养基、时间三个因素对嗜水气单胞菌 β -hemA重组菌E coliDH5α(PCB)基因产物表达量的影响 ,通过优化培养 ,选择最佳培养条件 ,显著提高了 β溶血素基因 (β-hemolysisgene ,β -hemA)产物的产量。实验结果表明 :该重组菌株在 10 0mlTSB(添加 0
0 5 %酵母浸提物 ,1 8μg/mlZncl2 ) ,37℃培养 30h收获 ,其毒素蛋白含量为 32 5 8μg ,毒素溶血价为 17 4 4hu/ μg ,而在LB(10 0ml)和营养内汤 (10 0ml)中最高蛋白量和溶血活性分别为 12 6 0 μg ,14hu/ μg和 1199μg ,8 2 2hu/ μg。所选择的三个因子中对毒素蛋白质含量影响最大的是培养基 ,其次是温度 ;而对溶血素影响最大的则是温度 ,其次为时间。最佳生长曲线测定结果表明 ,在培养基预热至 37℃的情况下 ,PCB 6h能进入对数期。
2004&Vol. 20&(04):&334-336
PCP大鼠肺泡巨噬细胞C/EBPε、IL-6、TNFαmRNA表达的研究
谭映霞,杜季梅,章圣辉,蒋磊,吴建波,陈成水
目的　研究脂多糖 (LPS)刺激PCP大鼠肺泡巨噬细胞后C/EBPε、IL - 1、IL - 6、TNFα的mRNA表达和相互调变关系及其对PCP大鼠肺泡巨噬细胞的免疫调节作用。方法　取PCP大鼠的肺泡巨噬细胞 ,加入LPS培养 ,分别于 1h、4h、8h及2 4h取贴壁细胞 ,提取总RNA ,用半定量RT -PCR检测C/EBPε、IL - 6、TNFα的mRNA表达。结果　我们发现 ,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的诱导下 ,TNFα和IL - 6的表达在 1～ 2 4h内表达均明显增强 (p <0
0 5 ) ,C/EBPε的表达呈逐渐上升趋势 ,8h后可见高表达 (p <0
0 5 ) ,C/EBPε达到高峰的时间较TNFα和IL - 6晚。 结论　PCP大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的诱导下 ,产生具有免疫活性的细胞因子 (如IL - 6、TNFα等 )明显增加 ,这些细胞因子作为生物信息正反馈回上游基因 ,进一步引起C/EBPε表达增强。
2004&Vol. 20&(04):&337-340
旋毛虫抗原模拟表位抗原性的鉴定
潘虹,姜昌富,李天群,时红波,朱晓华,雷家慧,魏兰英
目的　鉴定旋毛虫十二肽模拟表位的抗原性。方法　筛选噬菌体十二肽库获得旋毛虫抗原模拟表位 ,随机挑选2 4个克隆 ,利用酶联免疫吸附试验 (ELISA)选取灵敏性较好的 6个克隆 (T1～T6 ) ,检测其敏感性和特异性。结果　 6个克隆均与旋毛虫病患者血清反应 (10 0 % ) ;其中T6克隆特异性最好 ,无交叉反应 ;其余克隆与卫氏并殖吸虫和日本血吸虫病患者血清存在不同程度的交叉反应 (0 %～ 4 0 % )。结论　用噬菌体十二肽库筛选得到的旋毛虫抗原模拟表位具有较好的灵敏性和特异性 ,作为新的旋毛虫病诊断试剂有较好的应用前景。
2004&Vol. 20&(04):&341-343
随机扩增多态性DNA技术检测不同地区田鼠型鼠疫耶尔森氏菌基因结构
目的　了解不同地区田鼠型鼠疫耶尔森氏菌 (以下简称鼠疫菌 )之间的亲缘关系和基因类型。方法　随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果　扩增的 13株田鼠型鼠疫耶尔森氏菌在凝胶电泳所显示的条带 ,除 3株菌缺少部分条带外 ,其余菌株基本相同。结论　青海田鼠型鼠疫耶尔森氏菌和布氏田鼠型鼠疫耶尔森氏菌具有相似性 ,在遗传学上属于同源。
2004&Vol. 20&(04):&344-345
异种生物人工肝和猪逆转录病毒
2004&Vol. 20&(04):&346-347
出血性大肠杆菌O157∶H7基因多样性与噬菌体的关系
严亚贤,陆承平
2004&Vol. 20&(04):&348-349
东南亚的Nipah病毒
2004&Vol. 20&(04):&350-352
牛海绵状脑病/Prion病
彭辂,杨建发
2004&Vol. 20&(04):&353-355
四川省石渠县鼠疫流行特点及其控制
程海萍,魏柏青,于晓涛
2004&Vol. 20&(04):&356-357
人体蝇蛆病三例临床分析
2004&Vol. 20&(04):&357-357
幼儿肺吸虫病合并大量血性胸水及心包积液1例
潘海英,张九成,干小仙,张源
2004&Vol. 20&(04):&358-358
一起暴发旋毛虫病报道
罗志勇,李伟,申丽洁
2004&Vol. 20&(04):&359-359
流行性乙型脑炎患儿血清及脑脊液中IL-2变化的研究
刘薇,余光开,邓正华
2004&Vol. 20&(04):&360-361
重症疟疾伴血小板显著减少分析
展凤霞,李超
2004&Vol. 20&(04):&361-361
妇科疾病与弓形虫感染关系的探讨
张荣富,刘琦,丁杰锋
2004&Vol. 20&(04):&362-336
“SARS”冠状病毒的超微结构特征
郑铃,洪新如
2004&Vol. 20&(04):&363-364
中国人兽共患病学报
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