在细菌感染性疾病，我们已经习惯了用白细胞总分检查来了解感染的状态和做出相应的处理。作为细胞免疫重要内容的T淋巴细胞及亚群的检测在一些疾病中也有相应的结果，根据这些结果可以解释发病机理、对患者的免疫功能和预后做出判断以及指导治疗。这些疾病主要包括：1.病毒感染性疾病;2.肿瘤性疾病;3.自体免疫性疾病;4.器官移植患者;5.其他免疫缺损或异常的患者。在各大型医院，T细胞亚群已经成为以上疾病中常规使用的项目。
在白细胞中淋巴细胞是非常重要的一类。它分为主要参与细胞免疫的T淋巴细胞(CD3+)和主要参与体液免疫的B淋巴细胞(CD19+)。而T淋巴细胞又分为辅助性T淋巴细胞(CD3+CD4+)和抑制性/细胞毒性T淋巴细胞(CD3+CD8+)。在正常情况下，各群淋巴细胞的数目和相对比例都在一定的范围内。
1.总T(CD3+)淋巴细胞的绝对计数：
就如白总分中的白细胞计数一样，该细胞的绝对计数(个/ul)一般也在一定范围内。在一些情况下，如病毒感染、化学和物理因素、免疫系统的衰竭或其它功能紊乱、造血系统异常等疾病时此值可能会有异常。曾有人报道淋巴瘤患者的淋巴细胞数目多时预后较好。由此可以推测，肿瘤患者的T淋巴细胞数目较高时(在正常范围内)预后也应该较好。
2.辅助T(CD3(+)CD4(+))细胞的绝对计数和百分比。
3.抑制T(CD3(+)CD8(+))细胞的绝对计数和百分比。
4.CD3(+)细胞中的CD4、CD8双阳性或双阴性细胞：
在淋巴细胞的分化增殖异常时，CD4、CD8双阳性或双阴性细胞的数量和百分比会有相应的升高和降低。
5.CD4(+)和CD8(+)细胞的比值
在淋巴细胞的分化中产生的总T细胞的数量是有限的，加之在病变中主要为辅助T或抑制T的升高或降低，因而CD4(+)和CD8(+)细胞的比值会发生相应的变化，该值就成为一个简单和明确的指标，常用的正常参考值为1.4～2.5。若其比值&2.5表明细胞免疫功能处于&过度活跃&状态，容易出现自体免疫反应。CD4/CD8&1.4一般被称为&免疫抑制&状态，常见于(1)免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于0.5;(2)恶性肿瘤;(3)再生障碍性贫血、白血病;(4)某些病毒感染;(5)自体免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等的活动期。当CD4(+)/CD8(+)降低到1.0以下时我们习惯称之为&倒置&,是较为明显的异常了。
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由然, 龚岩, 屈晨雪, 汪旸, 袁家颖, 陆遥, 汤晓凌. 皮肤T细胞淋巴瘤外周血淋巴细胞免疫表型的变化及其意义[J].检验医学, 2015,(3): 195-200
YOU Ran, GONG Yan, QU Chenxue, WANG Yang, YUAN Jiaying, LU Yao, TANG Xiaoling. Change and significance of peripheral blood lymphocyte immunophenotype in cutaneous T-cell lymphoma[J].Labratory Medicine,
2015,(3): 195-200&&
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皮肤T细胞淋巴瘤外周血淋巴细胞免疫表型的变化及其意义
1.北京大学第一医院检验科,北京100034
2.北京大学第一医院皮肤科,北京100034
作者简介：由 然,女,1975年生,硕士,主管技师,主要从事血液学检验工作。 通讯作者：屈晨雪,联系电话：010-。
目的探讨外周血淋巴细胞免疫表型分析在皮肤T细胞淋巴瘤中的应用价值。方法采用流式细胞术检测52例确诊皮肤疾病患者[包括31例皮肤T细胞淋巴瘤（恶性皮肤病组）、21例炎症性皮肤病（良性皮肤病组）]外周血淋巴细胞免疫表型并进行形态学检查。比较良性和恶性皮肤病淋巴细胞亚群、免疫表型特点及其外周血形态学特点。结果恶性皮肤病组CD4/CD8 双阴性T淋巴细胞明显高于良性皮肤病组（ P&#x）,而恶性皮肤病组B淋巴细胞百分比明显低于良性皮肤病组（ P&#x）。恶性皮肤病组中Sézary综合征亚组T淋巴细胞百分比、CD4/CD8比值以及CD4/CD8 双阴性T淋巴细胞百分比高于其他恶性皮肤病亚组以及良性皮肤病组（ P&#x）,B淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞百分比降低（ P&#x）。恶性皮肤病组中有14例（45.1%）免疫表型异常,有15例（48.4%）外周血淋巴细胞形态异常;良性皮肤病组中有5例（23.8%）免疫表型异常,有6例（28.6%）外周血淋巴细胞形态异常。结论外周血淋巴细胞免疫表型分析可为皮肤T细胞淋巴瘤的临床诊断提供佐证,有助其鉴别诊断。
皮肤T细胞淋巴瘤;
中图分类号:R446.11
文献标志码:A
文章编号:（5-06
DOI: 10.3969/j.issn.16.03.010
Change and significance of peripheral blood lymphocyte immunophenotype in cutaneous T-cell lymphoma
GONG Yan1,
QU Chenxue1,
WANG Yang2,
YUAN Jiaying1,
TANG Xiaoling1
1. Department of Clinical Laboratory,Peking University First Hospital,Beijing 100034,China
2. Department of Dermatology,Peking University First Hospital,Beijing 100034,China
Objective To investigate the application significance of peripheral blood lymphocyte immunophenotype in cutaneous T-cell lymphoma. Methods Peripheral blood lymphocyte immunophenotype was analyzed by flow cytometry and morphology in 52 patients diagnosed as skin disorders [31 cases of cutaneous T-cell lymphoma（malignant skin disorder group）and 21 cases of inflammatory skin disorders（benign skin disorder group）]. The characteristics of lymphocyte subset,immunophenotype and morphology between benign and malignant skin disorder groups were compared. Results CD4/CD8 double negative T lymphocyte in malignant group was significantly higher than that in benign group （ P < 0.05）,and B lymphocyte percentage in malignant group was significantly lower than that in benign group （ P < 0.05）. In malignant group,T lymphocyte percentage,CD4/CD8 ratio and CD4/CD8 double negative T lymphocyte percentage in Sézary syndrome subgroup were higher than those in benign group and other malignant skin disorder subgroups （ P < 0.05）,meanwhile B lymphocyte and natural killer（NK） cell percentage decreased （ P < 0.05）. There were 14 abnormal cases of malignant group（45.1%） and 5 abnormal cases of benign group（23.8%） for immunophenotype. There were 15 abnormal cases of malignant group（48.4%） and 6 abnormal cases of benign group（28.6%）for morphology. Conclusions Peripheral blood lymphocyte immunophenotype can provide a reference for the diagnosis of cutaneous T-cell lymphoma,and it is helpful with the differential diagnosis.
Key words:
Cutaneous T-cell lymphoma;
Lymphocyte;
Immunophenotype
原发性皮肤T细胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma, CTCL）属于结外非何杰金淋巴瘤的一种, 为原发于皮肤的由T淋巴细胞克隆性增生造成的疾病, 由一组临床表现、组织学特征及病程预后各不相同的疾病组成[]。目前, CTCL常规诊断是以临床表现和组织病理检查为基础[]。但因其疾病具有多样性及复杂性, 特别是早期病例及罕见病例, 临床表现可多种多样, 病理上常需要反复的活组织检查, 有时要待病情进一步发展才能确诊, 导致CTCL与良性淋巴增殖性疾病或皮肤炎症性疾病难以鉴别[]。流式细胞仪具有快速、定量、同时分析多种细胞类别的优势, 故运用流式细胞术检测特定细胞可协助皮肤病理学对CTCL进行诊断与鉴别诊断[]。然而, 关于CTCL患者外周血淋巴细胞免疫表型的变化是否对此类疾病有价值, 尚未见大量报道。为此, 我们回顾性分析了北京大学第一医院CTCL患者的外周血淋巴细胞免疫表型和形态学特征, 旨在探讨免疫表型和形态学检查在CTCL诊断中的应用价值。材料和方法一、研究对象选择2012年12月至2015年9月北京大学第一医院31例皮肤T细胞淋巴瘤患者（恶性皮肤病组）及21例炎症性皮肤病患者（良性皮肤病组）, 其中男29例, 女23例, 年龄22~83岁。患者均经临床及皮肤组织病理学确诊, 按2005年世界卫生组织— 欧洲癌症研究与治疗组织（World Health Organization-European Organisation for Research on Treatment of Cancer, WHO-EORTC）皮肤淋巴瘤分类标准进行分类[]。恶性皮肤病组包括蕈样肉芽肿16例、皮肤淋巴瘤7例、Sé zary综合征3例、EB病毒相关性淋巴细胞增生性疾病3例、淋巴瘤样丘疹病2例; 良性皮肤病组包括天疱疮3例、湿疹4例、药疹2例、真菌病2例、麻风病1例、Sweet病1例、嗜酸细胞增多性皮肤病1例、朗格汉斯组织细胞增生症1例、皮肌炎1例、慢性药物超敏反应综合征1例、带状疱疹1例、其他良性皮肤疾病3例。二、仪器和试剂FACS CANTOII流式细胞仪[美国Becton Dickinson（BD）公司]。8色荧光素标记异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）, 藻红蛋白（phycoerythrin, PE）, 多甲藻叶绿素蛋白（peridinin chlorophyll protein, PerCP）, 藻红蛋白偶联物（PE-Cy7）, 别藻青蛋白（allophycocyanin, APC） , 别藻青蛋白偶联物（APC-H7）, V450和V500的单克隆抗体cCD3、cMPO、cCD79a、CD34、CD117、CD19、CD7、CD61、GlyA、CD33、CD13、CD56、CD38、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD25、CD56、CD1a、TCRα β 、TCRγ δ 、CD123、HLA-DR、CD45均购于美国BD公司。破膜剂（IntraSure kit A/B）和溶血素（FACS Lysing Solution）购自美国BD公司。瑞氏姬姆萨染液购自贝索公司。三、方法1. 形态学检查 采集患者乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid, EDTA）抗凝静脉血2mL, 制备血涂片并染色, 具体步骤参考《全国临床检验操作规程》（第4版）[]。油镜下观察血涂片是否有异常细胞并记录。2. 免疫表型分析 （1）细胞表面标记：取EDTA抗凝血50~100  L, 每管中分别加入混合好的8色荧光标记单克隆抗体, 混匀后室温避光反应15 加入溶血素2 mL, 充分混匀, 室温避光反应10 300 × g离心5 min, 弃上清; 加入2 mL的磷酸盐缓冲生理盐水（phosphate- buffered saline, PBS）, 混匀后300 × g离心5 min, 弃上清; 各管加入0.5 mL PBS重悬细胞, 进行流式细胞仪分析; （2）细胞内标记：取EDTA抗凝血50~100  L, 加入50  L试剂A, 室温避光孵育5 加入溶血素2 mL, 充分混匀, 室温避光反应10 500 × g离心5 min, 弃上清, 加入25  L试剂B, 分别加入5  L胞内抗体, 充分混匀, 室温避光反应15 加入2 mL PBS, 500 × g 离心5 min, 弃上清; 各管加入0.5 mL PBS重悬细胞。采用仪器自带软件FACSDiva 进行样本检测和数据分析, 使用同型对照和补偿对照检查仪器获取条件（包括电压、阈值和补偿设置）。依次检测同型对照管和试验管, 获取各管数据, 每管收集10 000 个以上有核细胞。以CD45/侧向散射光（side scatter, SSC）二维散点图设门, 区分出淋巴细胞、单核细胞、粒细胞以及原始、幼稚细胞等。进一步分析不同细胞群的抗原表达情况。四、统计学方法采用SPSS 14.0软件进行数据分析。数据用中位数（M）（范围）表示, 多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用Mann-Whitney U检验。以P< 0.05为差异具有统计学意义。结 果一、恶性皮肤病组和良性皮肤病组淋巴细胞亚群的比较统计结果显示恶性皮肤病组和良性皮肤病组T淋巴细胞百分比、自然杀伤（natural killer, NK）细胞百分比及CD4/CD8比值差异无统计学意义（P> 0.05）。恶性皮肤病组CD4/CD8 双阴性T淋巴细胞（double negative T lymphocyte, DNT）明显高于良性皮肤病组（P< 0.05）, 而恶性皮肤病组的B淋巴细胞百分比明显低于良性皮肤病组（P< 0.05）。进一步比较恶性皮肤病组内不同疾病的淋巴细胞亚群, 结果显示蕈样肉芽肿组DNT细胞比例明显高于良性皮肤病组和其他恶性皮肤病组（P< 0.05）。Sé zary综合征组T淋巴细胞百分比、CD4/CD8比值及DNT百分比明显高于良性皮肤病组和其他恶性皮肤病组（P< 0.05）, B淋巴细胞和NK细胞百分比则明显降低（P< 0.05）。其他皮肤淋巴瘤组B淋巴细胞百分比明显高于良性皮肤病组和其他恶性皮肤病组（P< 0.05）。EB病毒相关性淋巴细胞增生性疾病组T淋巴细胞百分比明显高于良性皮肤病组、蕈样肉芽肿组和其他皮肤淋巴瘤组（P< 0.05）。见。表1表1
表1 恶性皮肤病组和良性皮肤病组淋巴细胞亚群比较 [M（范围）]组别例数T淋巴细胞百分比（%）CD4/CD8比值DNT（%）B淋巴细胞百分比（%）NK细胞百分比（%）良性皮肤病组2172.10（63.13~95.6）1.65（0.75~19.4）0.6（0.1~16.9）13.00（1.34~27.2）10.00（0.8~28.71）恶性皮肤病组3179.90（40.1~98.0）1.48（0.72~478.0）2.2（0.1~89.6）* 6.36（0.1~29.1）* 9.58（0.1~54.96）蕈样肉芽肿1676.30（40.1~95.7）△ 1.41（0.97~3.8）△ 2.6（0.13~89.6）8.40（0.2~29.1）△ 10.40（2.0~54.96）△ Sé zary综合征395.10（89.8~98.0）* 18.36（15.2~478.0）* 2.2（0.6~10.4）* #1.60（89.8~98.0）* △ 0.50（0.4~4.40）* 其他皮肤淋巴瘤781.80（43.3~98.0）△ 1.42（0.81~7.7）△ 1.6（0.1~10.5）#△ 24.75（0.5~11.8）* △ 9.58（1.5~54.20）△ EB病毒相关性淋巴细胞增生性疾病393.19（83.3~97.3）* △ 1.00（0.72~1.9）△ 0.1（0.1~6.5）#△ 0.10（0.1~12.0）△ 0.10（0.1~5.00）△ 注： 与良性皮肤病组比较, * P< 0.05; 与蕈样肉芽肿组比较, #P< 0.05; 与Sé zary综合征组比较, △ P< 0.05
表1 恶性皮肤病组和良性皮肤病组淋巴细胞亚群比较 [M（范围）]二、恶性皮肤病组和良性皮肤病组免疫表型的比较恶性皮肤病组中有14例（45.1%）免疫表型异常, 其中5例是蕈样肉芽肿, 主要表现为CD4、CD7和CD8的表达缺失及DNT 细胞增多（> 9.3%）; 3例为Sé zary综合征, 主要表现为CD2和CD7的表达缺失或降低; 3例为皮肤淋巴瘤, 主要表现为CD4、CD7和CD8的表达缺失或降低; 2例为EB病毒相关性淋巴细胞增生性疾病, 主要表现为CD7的表达降低和CD2的表达异常; 1例为淋巴样丘疹病, 主要表现为CD5的表达缺失。良性皮肤病组中有5例（23.8%）免疫表型异常, 主要表现为CD5/CD23共表达（1例红斑型天疱疮）、CD4和CD8双阴性（1例药疹）、CD5和CD7减弱（1例药疹）、CD68阳性（1例带状疱疹）、T细胞比例增加（占淋巴亚群的88.7%）（1例良性疾病）。见。表2表2
表2 恶性皮肤病组与良性皮肤病组异常免疫表型比较组别例数DNT百分比异常CD4/CD8比值异常CD2表达异常CD4表达异常CD5-/dimCD7-/dim良性皮肤病组21240211恶性皮肤病组31574518
表2 恶性皮肤病组与良性皮肤病组异常免疫表型比较三、31例恶性皮肤病患者免疫表型和细胞形态学结果比较恶性皮肤病组中有14例免疫表型异常, 17例未见异常。有15例外周血涂片检查可见异常细胞, 有16例未见异常细胞。其中免疫表型和形态均无异常的有11例, 均有异常的也有11例。形态异常而免疫表型正常的4例分别为3例蕈样肉芽肿和1例皮肤淋巴瘤; 形态正常而免疫表型异常的3例分别为2例蕈样肉芽肿和1例Sé zary综合征。见。表3表3
表3 恶性皮肤病组免疫表型和细胞形态学比较[例（%）]组别免疫表型正常免疫表型异常合计细胞形态正常11（37.9）3（10.3）14细胞形态异常4（13.8）11（37.9）15合计151429* 注： * 恶性皮肤病组有2例无形态学结果, 故合计为29例
表3 恶性皮肤病组免疫表型和细胞形态学比较[例（%）]16例蕈样肉芽肿中有5例出现表型异常（CD2-CD4-CD8-CD7-）, 11例表型未出现明显异常。5例表型异常中4例细胞形态学检查发现异常淋巴细胞, 1例无异常淋巴细胞（亲毛囊型）; 11例表型无异常中9例细胞形态学检查未发现异常淋巴细胞, 2例有异常淋巴细胞（红皮病型和亲毛囊型）。7例皮肤淋巴瘤中有3例出现表型异常（CD4-CD8-）, 4例表型未出现明显异常, 其中皮肤间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤（腿型）这4例细胞形态学检查发现异常淋巴细胞, 其余3例无异常。3例Sé zary综合征均出现表型异常（CD2-CD7-）, 其外周血涂片可见异常淋巴细胞（Sé zary细胞）, 细胞核呈圆形或椭圆形, 可有深浅不等的切迹, 呈佛手样或分叶状, 染色质略粗, 无核仁, 核内结构呈脑回状。3例EB病毒相关性淋巴细胞增生性疾病中有1例免疫表型无明显异常, 另外2例免疫表型分别表现为CD4/CD8双阳性（1.75%）, CD45及CD2强表达和部分细胞同时表达CD4和CD8, CD7弱表达。四、21例良性皮肤病患者免疫表型和细胞形态学结果比较21例良性皮肤病中有15例免疫表型正常, 4例免疫表型异常, 6例外周血涂片检查可见异常细胞, 13例细胞形态学无异常; 其中免疫表型和细胞形态学均无异常的11例, 均有异常的2例, 而细胞形态学异常、免疫表型正常的4例, 包括1例药疹、1例湿疹、1例良性皮肤病和1例嗜酸细胞增多性皮肤病; 细胞形态学正常、免疫表型异常的有2例, 分别为1例良性皮病和1例着色真菌病。见。表4表4
表4 良性皮肤病组免疫表型和细胞形态学比较[例（%）]分组免疫表型正常免疫表型异常合计细胞形态正常11（57.9）2（10.5）13细胞形态异常4（21.1）2（10.5）6合计15419* 注：* 良性皮肤病组有2例无形态学结果, 故合计为19例
表4 良性皮肤病组免疫表型和细胞形态学比较[例（%）]讨 论CTCL属于结外非何杰金淋巴瘤中的1种, 占所有原发性皮肤淋巴瘤的75%~80%。CTCL由一组临床表现、组织学特征及病程预后各不相同的疾病组成。最新的皮肤T细胞淋巴瘤分类包括蕈样肉芽肿、Sé zary综合征、CD30+淋巴细胞增殖性疾病、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤、亲表皮CD8+T细胞淋巴瘤、皮肤γ /δ T细胞淋巴瘤、皮外NK/T细胞淋巴瘤和中小细胞多形性淋巴瘤[]。目前, CTCL的诊断和鉴别诊断以临床表现结合组织形态学改变为金标准[, , , ], 其他辅助检测方法包括免疫组织化学、T细胞受体（T cell receptor, TCR）基因重排检查及流式细胞仪检测免疫表型。免疫组织化学检查灵敏度相对较差, 且受主观影响, 每次仅能检测单个抗原, 不易检测异常免疫表型。TCR基因重排检测浸润细胞的单克隆性可帮助确定诊断, 但有15%~20%的患者TCR基因重排阴性, 而某些反应性疾病TCR基因重排也可阳性, 因此, TCR基因重排检测存在一定的局限性[]。由于流式细胞术具有同时多参数、快速定量等优势, 已越来越广泛地应用于CTCL的诊断、鉴别诊断以及治疗监测中。本研究首先比较了良性皮肤病组和恶性皮肤病组淋巴细胞亚群的变化, 结果发现恶性皮肤病组DNT细胞明显高于良性皮肤病组。健康人外周血中DNT细胞参考区间（P2.5~P97.5）为3.1%~9.3%[], 如按此标准判断, 52例中有4例患者DNT超出范围, 其中2例为蕈样肉芽肿（89.6%和15.6%）, 另2例分别为湿疹和着丝真菌病（10.0%和16.9%）。正常人外周血同样存在DNT波动甚至升高的情况, 主要发生在临床急性感染和创伤等炎症性疾病。另外, 自身免疫性淋巴细胞增生综合征（autoimmune lymphoproliferative syndrome, ALPS）也表现为DNT比例增高。但值得注意的是ALPS是TCRα β 的DNT增加, 而CTCL是TCRγ δ 的DNT增加。最新研究发现DNT是一种具有免疫调节功能的T淋巴细胞亚群, 其与机体的免疫调节和免疫防御功能有关, 在抗移植排斥、肿瘤免疫、自身免疫病等方面发挥重要作用。已发现的DNT功能包括抗原特异性的免疫调节功能, 对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及树突状细胞的免疫抑制功能等[]。正常人群中DNT可能参与这些疾病的细胞免疫调节作用, 其机制尚需进一步研究阐明。恶性皮肤病组中的比较发现Sé zary综合征淋巴细胞亚群变化明显, T淋巴细胞百分比、CD4/CD8比值以及DNT百分比显著升高, 尤其CD4/CD8 比值均> 10（15.2、18.36、478.0）, 符合国际皮肤淋巴瘤协会Sé zary综合征的诊断标准之一[]。CTCL患者皮肤组织内的肿瘤T细胞与正常T淋巴细胞相比, 常有T淋巴细胞表面标志物表达水平的变化。为此, 本研究分析了外周血中T淋巴细胞的表面标志物的变化。结果显示在恶性皮肤病组和良性皮肤病组外周血T淋巴细胞表面标志物均有不同程度的异常, 表现为DNT增多, CD4、CD8和CD7表达缺失; CD5和CD7弱表达, CD2和CD7表达缺失等。恶性皮肤病组中免疫表型异常有14例, 其特点为CD2、CD4、CD7和CD8的表达异常, 尤其表现为CD7的表达减弱或缺失, 疾病包括EB病毒相关性淋巴细胞增生性疾病、蕈样肉芽肿、Sé zary综合征和淋巴瘤。这一特点与李可嘉等[]的研究结论相一致。良性皮肤病组中免疫表型异常有5例, 特点为CD4、CD5、CD7和CD8的表达异常, 其中以DNT百分比增加为主, 疾病包括天疱疮、丘疹病和皮疹。52例病例中有2例淋巴瘤样丘疹病, 依据WHO-EORTC（2005）分类, 淋巴瘤样丘疹病属于原发性皮肤CD30+淋巴细胞增生性疾病, 原发性皮肤渐变性大细胞淋巴瘤是其恶性端。2例中有1例免疫表型和外周血细胞形态均未见明显异常, 而另1例免疫表型和外周血细胞形态均有异常, 免疫表型表现为CD5缺失。由此可见淋巴瘤样丘疹病若及早发现和干预, 可避免演化成原发性皮肤渐变性大细胞淋巴瘤, 提高了生存率。本研究中仅有2例淋巴瘤样丘疹病, 以后将继续积累病例, 并关注这类疾病。蕈样肉芽肿是皮肤T细胞淋巴瘤中最常见的一种[], 为T淋巴细胞（特别是T辅助细胞亚群）起源的一种皮肤原发淋巴瘤, 呈慢性进行性病程。蕈样肉芽肿在疾病的初级阶段对患者的影响较少, 但当继续发展至中期会累及到血液、淋巴结和组织, 死亡率高[]。蕈样肉芽肿分4级, 第1级为皮病性淋巴结炎, 第2级为有脑回样核（早期累及）, 第3级为大量异形脑回样单个核细胞, 淋巴结结构部分破坏, 第4级为完全占据淋巴结。本研究病例中有16例诊断为蕈样肉芽肿, 有6例细胞形态异常, 表现为细胞核的折叠和切记, 并有不规则的突起; 有5例免疫表型检测异常表现为CD2-、CD4-、CD8-和CD7-, 其余11例免疫表型无明显异常（但其中有2例细胞形态异常）。CD7和CD26缺失, CD2、CD3、CD4和CD5表达下调可作为区分外周血蕈样肉芽肿/Sé zary综合征细胞与正常T细胞的参量[]。由此推测这2例细胞形态有异常但免疫表型无明显异常的蕈样肉芽肿患者为初期患者, 还未累及到血液; 一旦血液细胞免疫表型检测有异常结果, 则说明蕈样肉芽肿已达3级或以上。蕈样肉芽肿在临床可出现多种亚型, 如大细胞转化型、丘疹型、亲毛囊型和红皮病型等, 这些亚型的蕈样肉芽肿的细胞形态和免疫分型均有异常, 说明临床皮损程度可以提示疾病的发展, 但因其为表象, 易受人为因素干扰, 所以需要有细胞形态和免疫表型的结果支持。良性皮肤病患者的免疫表型异常主要表现在CD4和CD8双阴性细胞增加（10%~16.9%）, 而诊断为恶性皮肤病的病例其流式异常主要表现为T淋巴细胞表面标志物有不同程度的异常, 如皮肤淋巴瘤主要表现为DNT增多（15.6%~89.6%）, 蕈样肉芽肿主要表现为CD2、CD4、CD7和CD8表达缺失, Sé zary综合征主要表现为 CD2和CD7表达缺失等。另外有16例诊断为恶性皮肤病而其流式结果无明显异常, 分析其原因可能为皮肤淋巴瘤一般先侵犯淋巴结, 肿瘤细胞还未进入血液。故此类病例需要随访, 目前此研究未涉及随访内容, 日后应加以补充, 并准备对其进行TCR重排研究, 揭示其基因表达状况。综上所述, CTCL的免疫表型分析能较快速地为临床提供诊断和鉴别诊断信息。
The authors have declared that no competing interests exist.
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外周血DNT细胞及T细胞亚群变化与乙型肝炎慢性化的相关性研究[J]. , 2015, 30(7): 723-727.
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曾跃平, 王宝玺.
流式细胞仪在蕈样肉芽肿和Sézary综合征中的应用[J]. 国际皮肤性病学杂志, 2010, 36(5): 252-254.
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李可嘉, 沈小雁, 施若非, 等.
皮肤T细胞淋巴瘤外周血免疫表型CD7缺失的临床分析[J]. , 2011, 25(8): 575-578.
[本文引用:1]
SONG SX, WILLEMZE R, SWERDLOW SH, et al.
Mycosis fungoides: report of the 2011 Society for Hematopathology/European Association for Haematopathology workshop[J]. Am J Clin Pathol, 2012, 139(4): 466-490.
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KIM YH, LIU HL, MRAZ-GERNHARD S, et al.
Long-term outcome of 525 patients with mycosis fungoides and
Sezary syndrome: clinical prognostic factors and
risk for disease progression[J]. Arch Dermatol, 2003, 139(7): 857-866.
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OSHTORY S, APISARNTHANARAX N, GILLIAM AC, et a1.
Usefulness of flow cytometry in the diagnosis of mycosis fungoides[J]. , 2007, 57(3): 454-462.
[本文引用:1]
... 原发性皮肤T细胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma,CTCL）属于结外非何杰金淋巴瘤的一种,为原发于皮肤的由T淋巴细胞克隆性增生造成的疾病,由一组临床表现、组织学特征及病程预后各不相同的疾病组成[1] ...
... 目前,CTCL的诊断和鉴别诊断以临床表现结合组织形态学改变为金标准[1,3,5,6],其他辅助检测方法包括免疫组织化学、T细胞受体（T cell receptor,TCR）基因重排检查及流式细胞仪检测免疫表型 ...
杨凡, 周小鸽.
流式细胞分析技术在淋巴瘤诊断中的应用[J]. , 2006, 35(4): 197-202.
流式细胞分析技术(flow cytometry,FCM)是淋巴瘤诊断的一个重要工具.现代医学的迅猛发展使诊断学在整个临床医学中所占的比重逐渐增大,用于诊断的新学科、新技术也日益增多,如何将各种彼此独立的诊断资料加以综合分析从中得到对于临床治疗有用的信息是对现代医学的重大挑战.在淋巴及造血系统疾病的诊治中,常规血液学(包括涂片)、病理学(包括淋巴组织和骨髓的穿刺、活检)、免疫分型[包括FCM和免疫组织化学(IHC)]、细胞遗传学和分子生物学等等构成诊断的基础.如能将其中的各部分有效的加以整合便可以最大限度地互补,最大限度地避免不必要的重叠, 将正确的诊断信息及时提供给临床.病理医生处于整个诊断网络的中心,对于这一领域诊断信息的整合有着义不容辞的责任.笔者根据自己的工作经验,就FCM在淋巴瘤诊断中的应用作如下介绍.
... 目前,CTCL常规诊断是以临床表现和组织病理检查为基础[2] ...
... 但因其疾病具有多样性及复杂性,特别是早期病例及罕见病例,临床表现可多种多样,病理上常需要反复的活组织检查,有时要待病情进一步发展才能确诊,导致CTCL与良性淋巴增殖性疾病或皮肤炎症性疾病难以鉴别[2] ...
... 流式细胞仪具有快速、定量、同时分析多种细胞类别的优势,故运用流式细胞术检测特定细胞可协助皮肤病理学对CTCL进行诊断与鉴别诊断[2] ...
... TCR基因重排检测浸润细胞的单克隆性可帮助确定诊断,但有15%~20%的患者TCR基因重排阴性,而某些反应性疾病TCR基因重排也可阳性,因此,TCR基因重排检测存在一定的局限性[2] ...
... 欧洲癌症研究与治疗组织（World Health Organization-European Organisation for Research on Treatment of Cancer,WHO-EORTC）皮肤淋巴瘤分类标准进行分类[3] ...
... T细胞淋巴瘤、皮外NK/T细胞淋巴瘤和中小细胞多形性淋巴瘤[3] ...
... 目前,CTCL的诊断和鉴别诊断以临床表现结合组织形态学改变为金标准[1,3,5,6],其他辅助检测方法包括免疫组织化学、T细胞受体（T cell receptor,TCR）基因重排检查及流式细胞仪检测免疫表型 ...
... 形态学检查 采集患者乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）抗凝静脉血2mL,制备血涂片并染色,具体步骤参考《全国临床检验操作规程》（第4版）[4] ...
... 目前,CTCL的诊断和鉴别诊断以临床表现结合组织形态学改变为金标准[1,3,5,6],其他辅助检测方法包括免疫组织化学、T细胞受体（T cell receptor,TCR）基因重排检查及流式细胞仪检测免疫表型 ...
... 目前,CTCL的诊断和鉴别诊断以临床表现结合组织形态学改变为金标准[1,3,5,6],其他辅助检测方法包括免疫组织化学、T细胞受体（T cell receptor,TCR）基因重排检查及流式细胞仪检测免疫表型 ...
... 3%[7],如按此标准判断,52例中有4例患者DNT超出范围,其中2例为蕈样肉芽肿（89 ...
杜振华, 鲍布和, 王仁杰, 等.
外周血DNT细胞及T细胞亚群变化与乙型肝炎慢性化的相关性研究[J]. , 2015, 30(7): 723-727.
Objective To investigate the changes of CD3 + CD4 - CD8 - (DNT) cells and T lymphocyte subsets in the chronic progress of hepatitis B virus (HBV) intection. Methods DNT cells and T lymphocyte subsets of peripheral blood were detected by flow cytometry in 136 patients with HBV infection, including 33 cases of asymptomatic carrier(ASC), 28 cases of acute hepatitis B(AHB), 28 cases of mild chronic hepatitis B (CHB), 25 cases of moderate CHB, 22 cases of severe CHB, and 39 healthy controls (HC). Results DNT cell percentages in ASC, AHB and HC groups were 5.43%±3.31%, 4.75%±2.71% and 4.82%±3.43%, and there was no statistical significance among the 3 groups ( P &#x). DNT cell percentages in HC and AHB group were lower than that in CHB group (from mild group to severe group, DNT cell percentages were 7.97%±4.12%, 8.41%±4.93% and 11.36%±5.01%, P &#x). The DNT percentage in ASC group was only lower than that in severe CHB group ( P &#x). The DNT percentage had no statistical significance in severe CHB group with those in mild CHB and moderate CHB groups ( P &#x). There was no statistical significance for DNT cell percentages between mild and moderate CHB groups ( P &#x), and they were significantly lower than that in severe group ( P &#x). There was no statistical significance for T lymphocyte subsets in HC group, AHB group and ASC group ( P &#x). With the development of CHB, the percentages of CD3 + and CD3 + CD4 + CD8 - (CD4 + ) cells decreased, and the percentages of CD3 + CD4 - CD8 + (CD8 + ) cells increased. Conclusions The increasing of peripheral blood DNT cell percentage is associated with the progress of CHB.
目的 探讨外周血中CD3 + CD4 - CD8 - (DNT)细胞及T细胞亚群变化与乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化的关系。 方法 用流式细胞术测定136例HBV感染者[33例无症状携带者(ASC)、28例急性乙型肝炎(AHB)、28例轻度慢性乙型肝炎(CHB)、25例中度CHB、22例重度CHB患者]及39名健康对照(HC)外周血中的DNT细胞及T细胞亚群。 结果 ASC组、AHB组、HC组DNT细胞比例分别为5.43%±3.31%、4.75%±2.71%和4.82%±3.43%,3组间差异无统计学意义( P &#x),其中HC组和AHB组均低于CHB各组(由轻到重分别为7.97%±4.12%、8.41%±4.93%、11.36%±5.01%, P 均&#x),但ASC组仅显著低于重度CHB组( P &#x),与轻度CHB组和中度CHB组间差异均无统计学意义( P &#x);DNT细胞比例在轻度CHB组与中度CHB组间差异无统计学意义( P &#x),但二组均显著低于重度CHB组( P 均&#x)。HC组、AHB组、ASC组间T淋巴细胞亚群分布差异无统计学意义( P 均&#x),但随着CHB患者病情加重CD3 + 、CD3 + CD4 + CD8 - (CD4 + )细胞比例降低,CD3 + CD4 - CD8 + (CD8 + )细胞比例升高。 结论 外周血DNT细胞比例的升高与HBV感染者慢性化关系密切,且与CHB患者的疾病进程有关。
... 已发现的DNT功能包括抗原特异性的免疫调节功能,对CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及树突状细胞的免疫抑制功能等[8] ...
... zary综合征的诊断标准之一[9] ...
李可嘉, 沈小雁, 施若非, 等.
皮肤T细胞淋巴瘤外周血免疫表型CD7缺失的临床分析[J]. , 2011, 25(8): 575-578.
目的比较不同分期的皮肤T细胞 淋巴瘤(cutaneous T cell lymphom a,CTCL)患者外周血淋巴细胞表面抗原CD7的缺失情况。方法回顾性分析2006年1月-2010年7月本科收治的41例CTCL患者及9例炎症性皮 肤病患者外周血淋巴细胞免疫表型的流式细胞检测结果,分析外周血CD7表达。结果 41例CTCL患者中,早期(IA~ⅡA)23例和进展期(ⅡB~ⅣB)18例,CD3+CD7-T细胞比例进展期组与炎症性皮肤病组及早期组比较,均明 显升高(P0.05)。进展期18例患者中6例CD7缺失(33.33%),早期23例患者中仅1例CD7缺失(4.35%),提示CD7缺失在进展期显 著高于早期(P0.05)。无外周血累及的25例蕈样肉芽肿(mycosis fungoides,MF)患者中有2例CD7缺失,均为进展期,提示进展期MF较早期MF更易出现CD7缺失(P0.05);在进展期MF的 CD3+CD7-T细胞比例均高于早期MF和炎症性皮肤病组(P0.05)。结论 进展期CTCL和无外周血累及的进展期MF外周血CD3+CD7-T细胞比例明显高于早期及炎症性皮肤病组,CTCL进展期较早期更容易发生外周血CD7 缺失。
... 这一特点与李可嘉等[10]的研究结论相一致 ...
... 蕈样肉芽肿是皮肤T细胞淋巴瘤中最常见的一种[11],为T淋巴细胞（特别是T辅助细胞亚群）起源的一种皮肤原发淋巴瘤,呈慢性进行性病程 ...
... 蕈样肉芽肿在疾病的初级阶段对患者的影响较少,但当继续发展至中期会累及到血液、淋巴结和组织,死亡率高[12] ...
... zary综合征细胞与正常T细胞的参量[13] ...
皮肤T细胞淋巴瘤外周血淋巴细胞免疫表型的变化及其意义
[由然1, 龚岩1, 屈晨雪1, 汪旸2, 袁家颖1, 陆遥1, 汤晓凌1]
