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腹腔镜手术对荷瘤大鼠切口肿瘤转移的影响_9809
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腹腔镜手术对荷瘤大鼠切口肿瘤转移的影响_9809
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蛇床子素对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用
发布时间： 来源：安徽省医学协会信息中心
&&&&& 沈 秀，周则卫，刘培勋，徐文清
【摘要】& 目的& 本文研究天然香豆素化合物蛇床子素对多种瘤谱的抗肿瘤活性；并通过对胸腺、脾等多项指标综合考察蛇床子素的高抑瘤活性和低毒性特征。方法& 选择小鼠宫颈癌（U14）、肉瘤（S180）、肝癌（H22 ）3种瘤株分别接种于昆明种小鼠，给予灌服蛇床子素。结果& 3种瘤谱使用蛇床子素均有明显的抑瘤效果，最佳抑瘤率分别为U14& 60.0％、 S180& 68.2％，H22& 62.1％，并且蛇床子素对小鼠的肝、脾指数和胸腺指数几乎无影响；而阳性对照药顺铂组对小鼠的肝、脾指数、胸腺指数有着明显的损伤。结论& 蛇床子素有可能研制成为一种低毒、高效的抗肿瘤新药。&&& &&& 【关键词】& 蛇床子素；宫颈癌U14；肉瘤S180；肝癌H22；抗肿瘤&&&&&&&&&&&&&&& 【Abstract】& Objective& This paper carries on anti-tumor activities research of the natural coumarin compound os and overall tested high-activity and low toxicity traits of osthole by the items of thymus gland，spleen，etc.& Methods& The mice cervical cancer （U14），sarcoma （S180） and liver cancer （H22） were selected and implanted in Kun Ming mice，and osthole was administered by P.O. way.& Results& Osthole has obvious anti-tumor activities to the three tumors，inhibitory rates were U14 60.0％，S180 68.2％，H22 62.1％，respectively，and osthole has hardly any influence to the liver，spleen in Nevertheless，the positive control drug cis-platinum has obvious damage to liver，spleen index and thymus index.& Conclusion& Osthole may be made into an anti-tumor new drug with high-activity and lower toxicity.&&& &&& 【Key words】& cervical cancer U14; sarcoma S180; liver cancer H22; anti-tumor&&& &&&&&& 蛇床子素（osthole）是从伞形科植物蛇床子Cnidium monnieri Cuss 的干燥成熟果实［1］中提取精制的一种天然香豆素类成分。化学名为7－甲氧基－8－异戊烯基香豆素。在蛇床子总香豆素（TCCM）中蛇床子素含量最高，约占TCCM的60％［2］。近年来报道表明，蛇床子素能不同程度地抑制肺腺癌和肺鳞癌的生长［3］，蛇床子水提液能较明显地抑制昆明种小鼠S180肉瘤的生长［4］，Gawron等研究了一些香豆素类对癌细胞（Hela-S3）生长的抑制作用［5］等。为进一步考察蛇床子素对多种瘤谱的抑瘤活性，笔者进行了蛇床子素对小鼠体内3种瘤株抑瘤活性的研究和对肝、脾、胸腺等器官损伤情况的考察，观察其给药剂量下对机体带来的影响和可能产生的毒副作用，以揭示其在临床肿瘤治疗中潜在的应用前景。&&& &&& 1& 材料与方法&&& &&& 1．1& 材料&&& &&& 1.1.1& 动物与分组& 所用实验动物为昆明种小鼠，购于中国医学科学院实验动物研究所，动物许可证号为SCXK京；也购于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，动物许可证号为SCXK－（军）。雌雄各半，体重均为20～22 g，随机分组，U14、 S180每组12只，H22每组15只。实验设空白对照组、阳性对照药组（环磷酰胺或顺铂）和蛇床子素0.84～3.30mg/kg 剂量组。&&& &&& 1.1.2& 药物与肿瘤& 蛇床子素由本所药物室从中药蛇床子中提取分离的，经波谱鉴定确证了结构，HPLC检测纯度为99.6％。小鼠宫颈癌U14、肉瘤S180、肝癌H223种瘤株由天津医药科学研究所提供。&&& &&& 1.1.3& 主要仪器& 光学显微镜（OLYMPUS、日本），电子精密天平（梅特勒－托利多集团、上海）。&&& &&& 1. 2& 方法& 见文献［6～8］&&& &&& 1.2.1& 接种方法& 取健康昆明种小鼠195只，体重为20～22g，雌雄各半，在无菌条件下，用生长6～7天的传代腹水癌小鼠数只，脱臼处死后酒精消毒腹部，取出生长较好的腹水癌按1：2的比例稀释，接种在小鼠的右上肢腋下，每只接种0.2 ml［6］。将接种液稀释后按白细胞计数方法计数［7，8］。U14计数为（3.2～5.7）×107个 /ml，S180计数为（3.7～6.0）×107个 /ml，H22计数为（4.1～6.8）×107& 个/ml。&&& &&& 1.2.2& 给药剂量与方法& 空白对照组每只ip给生理盐水0.3ml/d，U14阳性对照组环磷酰胺剂量为30mg/kg，每只ip给药0.3ml/d，连续10天给药，蛇床子素3个剂量组为0.84mg/kg、1.67mg/kg、3.30mg/kg，po 给药每只0.3 ml/d，连续给药10天；S180、H22阳性对照组顺铂剂量为4mg/kg，每间隔1天每只ip给药0.2ml/d，给药3次，蛇床子素3个剂量组为1.10mg/kg、1.67mg/kg、2.50mg/kg，每只po给药0.3ml/d，连续给药10天。&&& &&& 1.2.3& 观察指标& 给药后第11天称体重脱臼处死小鼠，取出肿瘤、肝、脾及胸腺称重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数，统计体重增长和肝重。&&& &&& 抑瘤率％＝（1－实验组平均瘤重/对照组平均瘤重）×100%&&& &&& 1.3& 统计学方法& 数据以“x±s”表示，组间比较采用t检验。&&& &&& 2& 结果&&& &&& 2.1& 宫颈癌U14& 蛇床子素在剂量为0.84～3.30 mg/kg之间对U14荷瘤鼠有抑瘤效果，小剂量组0.84 mg/kg效果最佳，抑瘤率为60.0%与空白对照组差异有显著性（P&0.01），详见表1。
表1& 蛇床子素对U14肿瘤的抑瘤率及对小鼠体重的影响& （x±s）Table 1& Inhibitory rate of osthole on U14 sarcoma & influence on body weight of mice
Notes： Compared with control group，*P&0.01
&2.2& 肉瘤（S180）、肝癌（H22）& 蛇床子素在剂量1.11～2.50mg/kg之间对S180、H22均有明显的抑制作用，与空白对照组差异均有显著性（P&0.01），中剂量组1.67 mg/kg抑瘤率最高分别为 68.2% 、62.1%。阳性对照组使荷瘤鼠的体重、肝重及免疫指标（脾指数和胸腺指数）明显下降，与空白对照组差异均有显著性（P&0.001），而蛇床子素组的这些指标与空白对照组比差异无显著性。详见表2、3、4、5 。
表2& 蛇床子素对肉瘤S180的抑瘤率及小鼠体重影响的比较& （x±s）Table 2& Inhibitory rate of osthole on S180sarcoma & influence on body weight of mice
Notes：Compared with control group，*P&0.01，**P&0.001
表3& 蛇床子素对荷肉瘤S180小鼠各脏器指标影响的比较& （x±s）Table 3& Influence of osthole on viscera weights or indexes of mice loaded S180 sarcoma
Notes：Compared with control group，**P&0.001
表4& 蛇床子素对肝癌H22的抑瘤率及小鼠体重影响的比较& （x±s） Table 4& Inhibitory rate of osthole on H22 sarcoma & influence on body weight of mice
Ｎotes：Compared with control group，*P&0.01，**P&0.001
表5& 蛇床子素对荷肝癌H22小鼠各脏器指标影响的比较& （x±s）Table 5& Influence of osthole on viscera weights or indexes of mice loaded H22 liver cancer
Notes：Compared with control group，**P＜0.001
&&& 3& 讨论&&& &&& 　蛇床子素对荷瘤鼠宫颈癌（U14）、肉瘤（S180）、肝癌（H22）体内肿瘤的抑制作用的实验，结果显示蛇床子素对荷瘤鼠U14、S180、H223种瘤谱的体内肿瘤均有明显的抑制活性，从U14、S180、H223个瘤株来看，蛇床子素对S180、H22肿瘤的抑瘤效果要比对U14的抑瘤效果更明显，表明蛇床子素对不同肿瘤的抑制活性可能存在一定的选择性［4］。从给药剂量来看，U14是小剂量、S180和H22是中剂量的抑瘤效果最好，表明蛇床子素对不同肿瘤的抑制活性不存在药物依赖性，并有一定的剂量选择性。荷瘤鼠的脾指数比正常小鼠的脾指数略大一些（包括空白对照组），可能是接种肿瘤后刺激了免疫系统，使脾脏制造大量的淋巴细胞和免疫球蛋白参与机体的免疫反应，也可能是吞噬作用或病理性增大。蛇床子素对肿瘤抑制的作用机制尚有待继续探讨。&&&& &&& &&& 　荷瘤鼠的体重、肝重、脾指数和胸腺指数的降低可以看出顺铂对荷瘤鼠的损伤很大，经统计学处理与空白对照组比差异有显著性（P&0.001）;而蛇床子素的几个剂量组对荷瘤鼠的体重、肝重、脾指数和胸腺指数均无明显变化，表明蛇床子素对多种实验肿瘤具有低毒、高效的抑瘤活性，这是其区别于化学合成的肿瘤化疗药物的显著特征。&&& &&& 　众所周知，目前临床上常用治疗肿瘤方法为放、化疗。放疗损害人体的造血功能及免疫系统等，哪怕是低剂量照射，如研究表明小鼠在2、3Gy一次全身照射下对造血、免疫系统损伤都较重，28天才能恢复80％左右［9］；化疗药物多为毒性较大的化学合成药物，对人体的损害也很严重，如环磷酰胺、顺铂等主要损伤造血和免疫功能，毒副作用稍小一点的抗肿瘤药物则价格较高，如紫杉醇等。据报道蛇床子素具有一定的抗诱变作用［10］，而且据笔者研究蛇床子素还具有一定的抗放升白活性，配合放化疗应用可以减轻放化疗的毒副反应。
【参考文献】
&&& 1& 国家药典委员会. 中国药典，1995年版一部.& 广州：广东科技出版社，.&&& 2& 沈丽霞，张丹参，张 力. 蛇床子化学成分药理作用与应用的研究.& 医学综述，）：565－567.&&& 3& 周 俊，程维兴，许永华，等.& 蛇床子素对肺腺癌、肺鳞癌生长抑制作用的实验研究.& 癌变?畸变?突变，）：231-233.&&& 4& 周 俊，殷学军，王 瑞，等.& 蛇床子水提取液对小鼠S180肉瘤的抑制作用.& 癌变?畸变?突变，）： 160-163.&& 5& Gawron& A，Glowniak K. Cytostatic activity of coumarins in vitro. Planta Met，）：526－529.&&& 6& 李仪奎，王钦茂，周金黄，等. 中国药理实验方法学.&& 上海： 上海科学技术出版社，－513.&&& 7& 张卓然. 实用细胞培养技术. 北京：人民卫生出版社，2001，30.&&& 8& 徐淑云，卞如濂，陈 修.& 药理实验方法学，第2版. 北京：人民卫生出版社，－1430.&&& 9& 沈 秀，张荷清，吴美羔，等.& 137Csγ射线亚致死剂量照射小鼠生物学效应的研究.& 中国辐射卫生，）：245－247.&&& 10& 殷学军，向仁德，刘德祥，等.& 中药蛇床子水溶液提取物中化学成分的抗诱变性的研究.& 癌变?畸变?突变）：65-71.
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乳腺癌患者荷瘤状态T淋巴细胞亚群检测及其临床意义
目的：检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞总数及T淋巴细胞亚群中的CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、CD45RA＋T细胞、CD45RO＋T细胞的百分率以评价患者的免疫状态。方法试验组选择女性原发性乳腺肿瘤患者40例，其中Ⅰ期乳腺癌23例，Ⅱ＋Ⅲ期乳腺癌17例；以女性健康体检者30例为对照组。应用流式细胞仪，采用三色荧光免疫标记技术分别检测各组外周血T淋巴细胞亚群的数量，统计分析各组检测结果的差异性。结果试验组 CD3＋T 细胞、CD4＋T 细胞百分率明显低于对照组（ P＜0.05），Ⅱ＋Ⅲ期患者明显低于Ⅰ期患者（ P＜0.05）。与对照组比较，试验组CD45RA＋T细胞明显减少，而 CD45RO＋T 细胞明显增多（P＜0.05）；与Ⅰ期乳腺癌患者比较，Ⅱ＋Ⅲ期乳腺癌患者 CD45RA＋T 细胞明显减少，而CD45RO＋T细胞明显增多，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 T细胞亚群检测是评价肿瘤患者细胞免疫功能的重要指标，具有重要的临床应用价值。乳腺癌患者免疫功能与肿瘤恶变的发生、发展及临床分期有一定相关性，随着病情的进展，机体免疫功能呈现下降趋势。
作者单位：
北华大学附属医院乳腺外科,吉林 吉林,132011
北华大学附属医院乳腺外科，吉林 吉林 132011; 吉林省中医药科学院
北华大学附属医院乳腺外科，吉林 吉林 132011; 北华大学附属医院临床免疫研究室; 北华大学生命科学研究中心
年，卷(期)：
在线出版日期：
基金项目：
吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目
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