ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化--《重庆医科大学学报》2014年05期
ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化
【摘要】：目的:研究细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,流式细胞术检测转染效率,Western blot检测磷酸化ERK5(phosphorylation ERK5,p-ERK5)和ERK5的表达水平,免疫荧光检测p-ERK5在细胞内的表达位置;ERK5特异性抑制剂BIX02189预处理细胞再经AdBMP9诱导,Western blot检测pERK5和ERK5表达水平,RT-qPCR检测心肌特异性基因肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor,MEF)2C、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)表达,Western blot检测心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)表达。结果:AdGFP与AdBMP9的转染效率达50%左右,经AdBMP9诱导后的细胞p-ERK5表达明显增高(P0.01),免疫荧光结果显示BMP9组p-ERK5表达明显增强且主要集中于胞核;15μmol/L BIX02189可完全抑制pERK5的表达(P0.01),且明显降低了由AdBMP9诱导的C3H10T1/2细胞GATA4、MEF2C基因与CX43、cTnT蛋白表达(P=0.000)。结论:BMP9可以通过激活ERK5信号通路调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R363【正文快照】：
由于心肌细胞为永久性细胞,受损伤后只能以瘢痕组织修复,临床药物、介入和手术治疗都不能代替坏死的心肌,所以如何修复坏死心肌细胞是心血管研究领域的重要课题,随着细胞分子领域研究的深化及细胞移植技术的推广,干细胞移植治疗心肌疾病越来越备受关注,使人们看到了修复和再生
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京公网安备75号组蛋白去乙酰化酶在间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化过程中的表达及HDAC11的作用--《中国生物化学与分子生物学报》2015年12期
组蛋白去乙酰化酶在间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化过程中的表达及HDAC11的作用
【摘要】：组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)通过调节组蛋白乙酰化修饰参与调控基因表达.研究发现多种HDAC参与成脂分化,但其机制尚不清楚.本研究探讨间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化过程中HDAC的表达变化及其对成脂分化的影响.本研究首先建立了C3H10T1/2体外成脂分化的模型,并以油红O染色鉴定成功诱导成脂分化.PCR检测C3H10T1/2细胞成脂分化过程中11种HDAC的变化趋势,发现成脂分化过程中,HDAC1、2、5、9和10的m RNA表达量下降,而HDAC3、6、8和11的m RNA表达量明显上升,其中HDAC11上升最为显著.进一步通过RNA干扰沉默HDAC11表达,PCR检测成脂分化的关键转录因子PPARγ2和成脂标志物Perilipin、Adipoq的m RNA表达量下降,但Fabp4表达变化不明显.油红O染色结果表明,诱导C3H10T1/2成脂分化过程中,干扰HDAC11表达,胞浆内脂滴形成数量减少,成脂分化受到抑制.实验结果提示,C3H10T1/2细胞成脂分化伴随着多种HDAC表达的变化,其中HDAC11的增加最显著,干扰HDAC11的表达可以抑制C3H10T1/2细胞的成脂分化.
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：Q26【正文快照】：
*联系人Tel:1;E-mail:jijuling@*Corresponding author Tel:1;E-mail:jijuling@成脂分化是一个被精密调控的过程.在此过程中,间充质前体细胞分化为成熟的脂肪细胞并表达一系列参与脂质合成、转运和储存的酶.这一过程受到包括C/EB
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骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1-2细胞成骨分化中长链非编码RNA的作用
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C/EBPα基因对C3H10T1/2细胞成骨与成脂分化平衡的调控
背景：在人类许多疾病中可以见到骨组织与脂肪组织“此消彼长”的现象。例如，在衰老、长期制动和大量使用皮质激素等情况下，骨形成的减少总是与骨髓中脂肪组织的增加相伴发生；患有进行性骨异生(progressive osseousheteroplasia)的病人在其脂肪组织内常发生异位骨化。由于成骨细胞和脂肪细胞共同来源于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)，因此上述情况提示人们MSCs成骨分化与成脂分化不是彼此孤立的过程，而是存在着相互制约的平衡关系。研究平衡的机制可以为积极预防和有效治疗以骨形成减少和脂肪异常增生为症状的疾病提供理论基础。目前该领域已成为干细胞生物学研究的热点。　　
目的：本研究着眼于MSCs成骨与成脂分化平衡，选择C/EBPα为靶基因，研究它在BMP-2诱导的C3H10Tl/2细胞向成骨细胞定向分化和成骨-成脂转分化过程中的基因表达模式、基因表达调控机制和它对C3H10Tl/2细胞成骨分化的调节作用。　　
方法：我们首先建立了BMP-2诱导C3H10T1/2细胞向成骨细胞定向分化和C3H10Tl/2细胞成骨.成脂转分化模型，运用real-time PCR和westernblot检测C/EBPα在此其中的基因表达模式；通过Tet-on基因表达系统过表达C/EBPα探讨它在C3H10T1/2细胞成骨分化和成骨-成脂转分化中的作用；我们构建了C/EBPα启动子区5’缺失突变体，进行荧光素酶报告基因分析，鉴定了C/EBPa启动子区在C3H10T112细胞成骨分化和成骨-成脂转分化过程中的转录调控区域；最后我们采用bisulfite sequencing PCR和CHIP等实验技术阐述了C/EBPa启动子区在BMP-2诱导C3H10Tl/2细胞向成骨细胞定向分化过程中DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰模式的变化，并通过real-time PCR、in vitromethylation和荧光素酶报告基因等技术探讨了上述表观遗传学修饰的生物学意义。　　
结果：BMP-2诱导C3H10T1/2细胞向成骨细胞定向分化过程中C/EBPα表达量先上调后下调；过表达C/EBPα可以抑制BMP-2诱导的C3H10Tl/2细胞的成骨分化；与早期相比，BMP-2诱导C3H10Tl/2细胞向成骨细胞分化的末期细胞成脂分化潜能减弱，它是由于C/EBPα对成脂信号的可诱导性减弱造成的；与早期相比，BMP-2诱导C3H10T1/2细胞向成骨细胞分化的末期C/EBPα基因转录起始位点上游一1286bp/-1065bp区域呈现显著的DNA高甲基化和组蛋白H3、H4的去乙酰化；-1286bp/-l065bp区域的高甲基化不仅导致C/EBPαmRNA表达量下调，而且能使C/EBPα对成脂信号的可诱导性减弱。　　
结论：C/EBPα在BMP-2诱导C3H10T1/2细胞向成骨细胞定向分化过程中具有特异的基因表达模式，此表达模式为C3H10T1/2细胞向成骨细胞定向分化所必需。在BMP-2诱导C3H10T1/2细胞向成骨细胞分化的末期C/EBPα对成脂诱导信号的可诱导性减弱导致细胞成脂分化潜能减弱。C/EBPα基因转录起始位点上游一1286bp/-1065bp区域的DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰参与了C/EBPα在上述过程中的基因表达调控。
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白藜芦醇通过激活sirt1抑制间充质干细胞C3H10T1/2的成脂分化
白藜芦醇通过激活sirt1抑制间充质干细胞C3H10T1/2的成脂分化
Resveratrol inhibits adipogenic differentiation of mesenchymal stem cell C3H10T1/2 by activate sirt1
发布时间：　　浏览量：286　　收藏数：0　　评论数：
王进京1，，
王奎栋2，，
李智耀2，，
龚雨琴2，，
越茂松2，，
季煜华2，*
1、暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心，广州 510632；&&&&&&
2、暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心，广州，５１０６３２；
目的：研究Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶sirt1的激动剂白藜芦醇（resveratrol）对间充质干细胞（MSC）C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响，并探讨可能的作用机制。 方法： 采用sirt1的激动剂白藜芦醇处理C3H10T1/2,研究其对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响，并选择sirt1的选择性抑制剂EX-527处理C3H10T1/2检测其对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响。MTT和流式细胞术分别检测不同浓度的白藜芦醇和EX-527对间充质干细胞C3H10T1/2增殖活性和细胞周期的影响；建立稳定的成脂分化模型，采用白藜芦醇和EX-527联合成脂分化诱导培养基（ADM）分别处理C3H10T1/2细胞14天，油红O染色检测两种药物对其成脂分化的影响。结果与结论： resveratrol对C3H10T1/2细胞周期无明显影响，高浓度的resveratrol抑制细胞增殖明显，抑制细胞的成脂分化；EX-527则抑制细胞周期在G0/G1期，促进细胞成脂分化。
成脂分化；sirt1；resveratrol；EX-527；C3H10T1/2
WANG Jinjing1,，
WANG Kuidong2,，
LI Zhiyao2,，
GONG Yuqin2,，
YUE Maosong2,，
JI Yuhua2,*
1、Institute of Tissue Transplantation and Immunology,College of Life Science and Technology,Jinan University, Guangzhou 510632；&&&&&&
2、Institute of Tissue Transplantation and Immunology,College of Life Science and Technology,Jinan University,Guangzhou,510632；
Abstract：
To investigate the effect of
class Ⅲ histone deacetylase sirt1 inhibitor Resveratrol on adipogenic differentiation of MSC C3H10T1/2 as well as the underlying mechanism .Methods:Resveratrol as activator of sirt1 was used to treat C3H10T1/2,and then effect of
it on adipogenic differentiation of
C3H10T1/2 was explored.EX-527 as specific inhibitor of sirt1 was also used to study effect of
it on adipogenic differentiation of
C3H10T1/2 .MTT assay and flow cytometry-based cell cycle analysis were used to evaluate effects of resveratrol and EX-527 at different concentrations on cell viability and cell cycle of cultured C3H10T1/2 cells.Stable model of adipogenic differentiation was established .Resveratrol and EX-527 combined with ADM were used alternatively to treat C3H10T1/2 14 days.The influences of serial concentrations of resveratrol and EX-527 on adipogenic differentiation of
C3H10T1/2 were determined by oil O staining. Conclusions:There are not any notable effects of resveratrol on C3H10T1/2 cell cycle，but high concentration of resveratrol remarkably restrains proliferation of C3H10T1/2 .Resveratrol exerts negative effect on
adipogenic differentiation of
C3H10T1/2.EX-527 exerts positive effect on adipogenic differentiation of
C3H10T1/2 and cell cycle of C3H10T1/2 is arrested at G0/G1 phase.
Keywords：
adipog sirt1; EX-527; C3H10T1/2
PDF全文下载：
&&&&（166）
作者简介：
王进京，（1989－），男，硕士研究生，主要研究sirt１与间充质干细胞成脂分化。
通信联系人：
季煜华（１９７３－），男，副研究员，主要研究表观遗传修饰与蛋白质组学
【收录情况】
中国科技论文在线：王进京，王奎栋，李智耀等.&白藜芦醇通过激活sirt1抑制间充质干细胞C3H10T1/2的成脂分化[EB/OL].北京：中国科技论文在线&
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