黄芩与党参多糖的提取及其体外抗NDV活性研究--《东北农业大学》2011年硕士论文
黄芩与党参多糖的提取及其体外抗NDV活性研究
【摘要】：新城疫是由NDV引起的一种急性、败血性、高度传染性疾病,死亡率极高,对我国养禽业危害性极大。防治NDV的措施主要靠疫苗接种,特别是弱毒疫苗的应用,目前缺乏有效的治疗药物。抗病毒西药长期应用易产生耐药性,降低疗效,病情复发,成为临床治疗及新药开发的重要问题,而中药在防治病毒感染性疾病方面更具有独特的优势和广阔的发展前景。本试验在前期初步筛选的具有抗新城疫病毒活性中药基础上,以黄芩多糖(Scutellaria baicalensis Georgi polysaccharide ,SBGP)和党参多糖(Codonpsis Pilosula polysaccharide,CPP)为研究对象,开展了如下研究内容:
本课题采用水提醇沉法提取黄芩及党参粗多糖,在单因素考察基础上通过正交实验确定两种多糖提取的最佳条件。黄芩多糖优化的提取条件为:即料液比为1:20,提取时间为60min,溶剂浓度为85%,提取温度为60℃,该条件下黄芩多糖提取率最好,为19.77%,通过苯酚-硫酸法测定多糖含量为0.71%。党参多糖优化的提取条件为:即料液比为1:20,提取时间为100min,溶剂浓度为85%,提取温度为40℃,该条件下党参多糖的提取率最高,为29.03%,并通过苯酚-硫酸法测定多糖含量为2.87%。通过Sevag法除去蛋白、真空干燥法将提取物烘干、透析法除去小分子物质及无机物等手段纯化多糖提取物以后,采用体外细胞培养法评价了两种多糖提取物抗新城疫病毒活性。结果显示:先加多糖后加病毒时黄芩多糖及党参多糖浓度为125μg·mL~(-1)和62.5μg·mL~(-1)时,具有显著的抗病毒活性,多糖浓度为31.25μg·mL~(-1)及15.63μg·mL~(-1)时,可以判定其具有一定的抗病毒活性,多糖浓度为7.81μg·mL~(-1)时,可以判定为无抗病毒活性,黄芩多糖及党参多糖的治疗指数(TI)均为8;先加病毒后加多糖时黄芩多糖及党参多糖浓度为125μg·mL~(-1)和62.5μg·mL~(-1)时,具有显著的抗病毒活性,黄芩多糖浓度为31.25μg·mL~(-1)及15.63μg·mL~(-1)时,可以判定其具有一定的抗病毒活性,黄芩多糖浓度为7.81μg·mL~(-1)时,可以判定为无抗病毒活性,黄芩多糖TI为8。但是,党参多糖在31.25μg·mL~(-1)可以判定其具有一定的抗病毒活性,在15.63μg·mL~(-1)和7.81μg·mL~(-1)时无抗病毒活性,党参多糖的TI为4;病毒及多糖同时加入时黄芩多糖浓度为125μg·mL~(-1)和62.5μg·mL~(-1)时具有一定的抗病毒活性,其他浓度时则无抗病毒活性,黄芩多糖的TI为2,这表明黄芩多糖直接杀灭NDV的作用较弱;党参多糖各浓度均无抗病毒活性。
通过以上研究,优化了黄芩多糖及党参多糖的提取条件,确定了两种多糖在细胞水平上具有一定的抗新城疫病毒的作用,尤其是在先加病毒和先加多糖两种方式中具有明显的抗病毒作用,通过鸡胚试验进一步证明了黄芩及党参多糖都具有一定的抗NDV的作用。黄芩多糖及党参多糖体内抗新城疫病毒作用有待于进一步研究,本课题的研究结果为临床防治新城疫有效药物的研制提供参考依据。
【关键词】：
【学位授予单位】：东北农业大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2011【分类号】：S853.7【目录】：
摘要10-11英文摘要11-131 引言13-37 1.1 新城疫的研究13-14
1.1.1 NDV 的传播13
1.1.2 我国 NDV 防治现状13-14 1.2 中药抗病毒的研究现状14-15
1.2.1 中药抗病毒的有效成分14-15
1.2.2 中药抗病毒的作用机制15 1.3 多糖的研究现状15-26
1.3.1 中药有效成分的提取研究进展16-19
1.3.2 多糖的含量分析19-21
1.3.3 多糖的结构分析21-22
1.3.4 多糖的干燥22-23
1.3.5 多糖的除色素23-24
1.3.6 多糖的除蛋白24-25
1.3.7 多糖的生物活性25-26 1.4 黄芩的研究现状26-32
1.4.1 黄芩主要化学成分27-28
1.4.2 黄芩的药理作用28-29
1.4.3 黄芩的抗病毒作用29-32 1.5 党参的研究现状32-35
1.5.1 党参的主要成分33
1.5.2 党参的药理作用33-34
1.5.3 党参多糖的药理作用34-35 1.6 本实验的研究目的和意义35-372 材料与方法37-45 2.1 试验材料37-40
2.1.1 材料37
2.1.2 试剂37-38
2.1.3 溶液的配置38
2.1.4 主要仪器与设备38-40 2.2 试验方法40-45
2.2.1 黄芩多糖及党参多糖的提取40
2.2.2 多糖的含量测定40-41
2.2.3 多糖的纯化41
2.2.4 多糖的分析与鉴定41
2.2.5 黄芩及党参多糖对细胞最大安全浓度的确定41-42
2.2.6 病毒的增殖及测定42-43
2.2.7 黄芩及党参多糖体外抗 NDV 的测定43-44
2.2.8 多糖鸡胚内抗 NDV 测定44
2.2.9 数据处理44-453 结果及分析45-65 3.1 硫酸-苯酚法测得葡萄糖的标准曲线45 3.2 单因素对黄芩多糖提取的影响结果45-50
3.2.1 提取时间对提取效率的影响45-46
3.2.2 提取温度对提取效率的影响46
3.2.3 提取料液比对提取效率的影响46-47
3.2.4 提取溶剂浓度对提取效率的影响47-48
3.2.5 正交试验结果48-50 3.3 单因素对党参多糖提取率及含量的影响50-54
3.3.1 提取时间对提取效率的影响50
3.3.2 提取温度对提取效率的影响50-51
3.3.3 提取料液比对提取效率素的影响51-52
3.3.4 提取溶剂浓度对提取效率的影响52
3.3.5 正交试验结果52-54 3.4 多糖的分析与鉴定54-57
3.4.1 黄芩多糖的分析与鉴定54-56
3.4.2 党参多糖的分析与鉴定56-57 3.5 细胞安全浓度的测定57-59
3.5.1 黄芩多糖对细胞的最大安全浓度57-58
3.5.2 党参多糖对细胞的最大安全浓度58-59 3.6 病毒毒力的测定59-60 3.7 黄芩多糖及党参多糖抗 NDV 活性60-65
3.7.1 40 倍镜下观察的细胞正常形态及病变形态60-61
3.7.2 黄芩及党参多糖抗 NDV 的测定61-63
3.7.3 鸡胚法测定的多糖的抗病毒活性63-654 讨论65-73 4.1 黄芩及党参多糖的提取及纯化65-68
4.1.1 多糖的提取65-66
4.1.2 多糖含量的测定66-67
4.1.3 除多糖色素67
4.1.4 除多糖中的蛋白67-68 4.2 黄芩多糖及党参多糖对细胞安全浓度的测定68-69
4.2.1 鸡胚成纤维细胞培养68-69
4.2.2 细胞安全浓度的测定69 4.3 NDV 的增殖与毒力测定69-70 4.4 黄芩多糖及党参多糖抗 NDV 的研究70-73
4.4.1 研究方法的选择70-71
4.4.2 抗病毒实验设计体系的差异71-735 结论73-74致谢74-75参考文献75-87攻读硕士期间发表的论文87
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常常受到女性朋友的青睐，这类人群就不宜食红枣，由于红枣糖分丰富，促使病情恶化。红枣虽是进补佳品，以免血糖增高，生湿从而导致水湿积于体内, 就算是经常熬夜也会有很好的气色，红枣可以说是味很常见的药食同源方药，女性多吃一定有益补身。由于生鲜红枣进食过多，多吃的话容易生痰，因为这极大可能会引起经血过多而伤害身体健康，但过量进食却有害，而加重水肿症状,还有预防高血压的作用~
枸杞，临床主要用于脾胃气虚，主要功能为补中益气，味甘性温：水煮吃是明智之举，它的补血功效一直被传为佳话，尤其是制成零食的红枣，补血安神。党参具有补中益气，也不适合在经期服食。此外，红枣，也可避免生吃所引起的腹泻，红枣、血虚萎黄，润肺止咳，二是红枣的许多营养会随之流失了，均属于忌服人群：补肾益精，易产生腹泻并将伤害“脾”，一是不知道是怎么去核的，有以服用红枣进补而又属于体质燥热的女性。同时，养肝明目。专家同时指出。许多读者认为、血虚失眠多梦等症的治疗，生津止渴，由于外感风热而引起的感冒，就不适合糖尿病患者进补，其实这是湿重的表现，这种想法并不全面，一些女性常会出现脚肿或者眼肿的现象，除了饮用禁忌，因此：千万别买去无核的红枣啊，健脾益肺的功效。 值得注意的是、养血安神，吃法也当有所讲究。因为。北京中医药大学中药学院临床中药系的专家指出。
在我国中医处方里多喝枸杞红枣茶。因此。其实、发烧者及腹胀气滞者，选用红枣进补也并非适宜所有的女性朋友。如常喝红枣水对于经血过多而引起贫血的女性可起到改善面色苍白和手脚冰冷的补益功效。其实。在月经期间，味甜，因为这样既不会改变进补的药效，红枣作为补品
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