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黄芪注射液和黄芪甲苷对大鼠脑出血后出血灶周围凋亡神经元的作用研究.pdf74页
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单位代码:10752
级:公开学 号:2009068
宁 夏 医 科 大学
硕 士 研 究 生学位 论 文
黄芪注射液和黄芪甲苷对大鼠 脑出血后出
血灶周围凋亡神经元的作用研 究
The effect of the Astragalus injection and the Astragaloside
IV on the neuronal apoptosis around the focal of
intracerebral hemorrhage in rats
指 导 教 师 :秦
申 请 学 位 门 类 级 别:医
专 业 名 称 :
人 体 解 剖 与 组织 胚胎学研 究 方 向 :
神经损伤与修复所 在 学 院 :基 础 医 学 院论
文 完 成 日 期: 二?一 二 年 四月
宁夏医 科大学 研究生 院
Ningxia Medical University
Thesis for Application of Master’s Degree
The effect of the Astragalus injection and the Astragaloside
IV on the neuronal apoptosis around the focal of
intracerebral hemorrhage in ratsStudent’s Name:
Liu HaiyangSupervisor:
ProfessorAssistant supervisor:Subject Category:
Medical Science
Human Anatomy and Histology-Embryology
Specialty:
Nervous Injury and Repair
Basic Medical College
Completion Date:
April 2012
宁夏医科大 学学位论 文独创性 声明
本人郑 重声明 : 所呈 交的学 位论 文, 是 个人在 导师的 指导下 , 独
立进行 研究工 作所取 得的 成果 , 无抄 袭及 编造 行为。 除文 中已经 特别
加以注 明引用 的内容 外 , 本论 文不 含任何 其他 个 人或集 体已经 发表或
撰写过 的作品 成果 。 对本 文的 研究做 出重 要贡 献的个 人和集 体, 均已
在文中 以明确 方式标 明并 致谢 。 本 人完全 意识 到 本声明 的法律 结果由
本人承 担。
论文作 者签名 ___ __论文 导师签 名__ ___
年月日年月日
宁夏医科大 学 关于学 位论文使 用授权 的声明
宁夏医 科大学 有权保 留使 用本人 学 位 论文 , 同 意 学校按 规定向 国
家有关 部门机 构送交
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逐瘀安脑丸对大鼠实验性脑出血后水通道蛋白4、 铁离子表达及脑水肿的作用研究
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 作者：吴林，李文娅，张其瑞，陈炜
【摘要】 & 　　目的研究脑出血后的脑水肿形成与水通道蛋白4(AQP4)表达及Fe2+含量的关系,以及逐瘀安脑丸的干预作用。方法采用自体不凝血注入法制作大鼠脑出血模型, 采用干湿重法、免疫化学染色法, 测定脑含水量、AQP4蛋白的表达。结果与对照组相比,脑出血组、尼莫地平组、逐瘀安脑丸组均从脑出血后6h开始出现脑水肿(P&0.05),3 d时达到高峰(P&0.01),且逐瘀安脑丸组、尼莫地平组脑水肿低于脑出血组(P&0.05);AQP4表达同样在3 d时达到高峰(P&0.05)。在各时间点脑水肿程度与AQP4表达的变化呈显著正相关，6 h时(r=0.920,P&0.05)，1 d时(r=0.952,P&0.05)，3 d时(r=0.993,P&0.01)，7 d时(r=0.947,P&0.05)。对照组铁离子含量从6 h即开始上升,3 d时达到高峰,之后缓慢下降,7 d时仍高于正常(P&0.05); 尼莫地平组各时间点脑铁离子含量均低于对照组(P&0.05)，逐瘀安脑丸大剂量组3 d和7 d时间点上脑铁离子含量均低于尼莫地平组(P&0.05)。结论脑出血后AQP4、Fe2+表达明显增加,提示AQP4、Fe2+参与了脑水肿的发生
过程,而逐瘀安脑丸可能通过降低Fe2+的含量以下调AQP4的表达，减轻脑出血后脑水肿的形成。
【关键词】 & 脑出血　 脑水肿　 水通道蛋白4　铁离子
　　Effect of Zhuyu Annao Pill on AQP4 and Fe2+ Expression and Cerebral Edema after Experimental Cerebral Hemorrhage in Rats
　　Abstract：ObjectiveTo study the relationship between the cerebral edema after cerebral hemorrhage and AQP4,Fe2+ expression, and the interference effect of Zhuyu Annao Pill.MethodsThe ICH model was established by stereotaxic injection of auto-non-anticoagulated artery blood into the caudate nucleus,AQP4 were detected& expression by innumumohistochemistry and cerebral edema(cerebral water contents).ResultsCompared with control group,cerebral edema appeared in ICH group, Zhuyu Annao Pill group and nimodip group 6 h after cerebral hemorrhage(P&0.05),and cerebral edema in Zhuyu Annao Pill group, that in nimodipine group was lower than that of cerebral hemorrhage group(P&0.05).AQP4 expression reached the highest level at 3d(P&0.05). There was significant possitive correlation between the extent of brain edema and changes in AQP4 expression at each time, 6 h (r=0.920, P&0.05), 1 d, when (r=0.952,P&0.05), 3 d& (r=0.993, P& 0.01), 7 d (r=0.947,P&0.05). In control group, iron ion content began to increase& from 6 h, 3d peaked on the 3rd day, followed by a slow decline, it& was still higher than normal on the 7 th day (P&0.05);& brain iron ion content in nimodipine group at different time points were lower than that in control group (P&0.05).Brain iron ion content in high dose group was lower than that of nimodopine group on the 3 rd and 7 th day (P&0.05).ConclusionAQP4 expression increases significantly after cerebral hemorrhage,which suggests that APQ4 and Fe2+ involved in pathogenesis and development of cerebral edema.Zhuyu Annao Pill,can inhibit cerebral edema by reducing Fe2+ content and down-regutating the expression of AQP4.
　　Key words：ICH;& B& A& Fe2+
&&& 脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)是神经科的常见疾病,有较高的致死率和致残率。脑出血后的神经损伤除了血肿直接破坏脑组织和造成占位及压迫效应外,还包括一系列的病理生理过程,引起脑组织继发损伤,其中脑出血后脑水肿的发生机制是目前的研究。本实验通过动态观察脑出血大鼠的脑含水量及水通道蛋白4(aquaporin4, AQP4)的表达和铁离子的表达,以及逐瘀安脑丸的干预作用,研究脑水肿的发生机制,探索有效的防治办法。
　　 1& 材料和方法
　　1.1& 动物分组及脑出血模型制作
　　1.1.1& 分组健康Wistar大鼠SPF级（广西药品检验所实验动物中心提供,许可证号SCXK桂），80只,体质量250～350 g,雌雄不限，随机分成4组,即对照组、逐瘀安脑丸小剂量组、逐瘀安脑丸大剂量组、尼莫地平组,每组按造模后6 h、1 d、3 d和7 d时间点分成4个亚组,每个亚组各5只大鼠(n=5)。
　　1.1.2& 药品逐瘀安脑丸（水蛭、土鳖虫、地龙、桃仁、凌霄花、泽兰、酒大黄、川芎、猪苓、泽泻各10g），由江苏江阴天江药业有限公司提供中药配方颗粒。
　　1.1.3& 动物模型制作参照Rosenberg等的方法进行［1］。大鼠经10%水合氯醛(400 mg/㎏)腹腔注射麻醉后,固定于立体定位仪上,行头部正中纵行切口,剥离骨膜暴露前囟和冠状缝。于前囟前0.2 mm,中线向右旁开3.0 mm处钻一直径1.0 mm小孔。脑出血组大鼠用微量注射器从股动脉抽取适量血,在立体定向仪引导下经钻孔垂直进针,深度约6.0 mm(相当于右侧尾状核),缓慢注血80 μl，留针10 min后退针。对照组口服蒸馏水10ml/kg；逐淤安脑丸大剂量组口服逐瘀安脑丸12.5 g/kg，小剂量组予逐瘀安脑丸6.25 g/kg灌胃，给药于造模后4 h 1次，其后每天给药2次。尼莫地平组在建立模型后即刻给于腹腔注射尼莫地平50 μg/100 g，以后每天注射1次至实验结束。动物麻醉清醒后，参照Zealonga［2］等的5分制评分标准进行评分:0分:无神经缺损症状;1分:不能完全伸展对侧前爪;2分:行走时向对侧转圈;3分:站立不稳，向对侧倾倒;4分:不能自发行走，意识丧失。累积1分以上为成功模型。
　　1.2& 指标检测
　　1.2.1& 标本采集与处理分别在预定时间点将大鼠快速断头处死并取脑,在注血点作冠状切开,前半部分用于铁离子含量的测定,后半部分用于AQP4的测定,左侧脑组织做含水量测定。
　　1.2.2& 脑含水量将各时间点的前半脑组织分别用 电子 分析天平称重(湿重),然后置入95℃恒温箱中,24 h后取出再称重(干重)。以(湿重-干重)/湿重×100﹪来 计算 脑含水量,以此代表脑水肿的水平。
　　1.2.3& 脑组织AQP4的表达SP法检测AQP4表达:切片0.01%PBS漂洗、0.05%H2O2处理、10%正常羊血清封闭,滴加AQP4一抗(浓度为1∶6 000)置湿盒中4℃孵育过夜,滴加生物素标记的二抗,置于湿盒中37℃孵育30 min,滴加生物素过氧化物酶复合物,置于湿盒中37℃孵育20 min,DAB显色,苏木精对比染色,脱水透明后封固。免疫组织化学染色AQP4阳性细胞胞膜和胞腔呈棕黄色。阴性对照用0.1 mol/L PBS代替一抗进行孵育,其余步骤同前。采用采用北航（CM2000B）生物图像分析系统定量分析阳性细胞平均吸光度(A)值。
　　1.2.4& 脑组织铁离子含量的测定 取干脑组织先后加入浓硝酸（16 mol／L）5ml和高氯酸（12 mol／L）0.5 ml，加热消化至清亮，用原子吸收光谱法测定铁含量。
　　1.3& 学处理实验结果以±s表示,用SPSS 14进行统计处理。采用方差分析和q检验进行分析。转贴于论文联盟
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打开&IIS 帮助&（可在 IIS 管理器 (inetmgr) 中访问），然后搜索标题为&网站设置&、&常规管理任务&和&关于自定义错误消息&的主题。消瘀利水在脑出血急性期的治疗体会--《四川中医》2006年10期
消瘀利水在脑出血急性期的治疗体会
【摘要】：本文根据脑出血急性期的病因病机特点,结合现代医学对脑出血急性期病理的认识,紧扣脑出血急性期瘀毒内结和水毒潴留之核心病机,探讨消瘀利水治疗脑出血急性期的作用机理及临床应用体会。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R277.7【正文快照】：
中风病为“风、痨、臌、膈”四大疑难杂症之首,其发病率、致残率、死亡率都均居高位,为人类三大死因之一。脑出血属中医出血性中风病范畴,发病率约占中风病的20%~40%,不仅发病急骤、重笃、而且死亡率更高,预后更差,已成为威胁人类健康的重大疾病。深入研究脑出血急性期的病因
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