葡萄球菌药敏试验属药敏试验时为什么在所有β-内酰胺类抗菌药中,只需测试青霉素及苯唑西林的敏感性?

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病原诊断是合理应用抗菌药的基础
14:39 来源:&&   |
  抗菌药物是治疗细菌感染和细菌性疗效确切的药物。其广泛使用使人类的平均寿命明显延长,并促进了相关医学专科的发展。多年来,其使用量位居医院用药首位。然而,目前临床上滥用抗菌药的现象十分普遍。据不完全统计,不合理的治疗性用药约占40%,预防性用药中不合理的比例超过50%。这不仅造成药品的巨额浪费,增加了药物不良反应的发生率,而且影响了疗效,加重细菌耐药性的产生。
  合理应用抗菌药是临床用药的重要课题,主要有两个环节:一是及时正确地明确致病菌,特别对中度以上严重的细菌感染能针对性地用药,以获得良好的疗效,是合理应用抗菌药的基础。二是选择抗菌谱与抗菌作用、药理特性和不良反应等方面最适合病员的抗菌药品种。
  正确地收集临床标本
  及时正确地收集临床标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低。因此,应由医务人员亲自收取标本。尽力争取在投用抗菌药之前收集相应的临床标本,避免正常菌群污染标本。根据可能的诊断,收集不同部位的临床标本作细菌培养,或同时作厌氧培养和其他特殊培养。必要时同时作涂片染色,或作荧光免疫、抗原乳胶试验等特殊检查。
  血培养:宜在病人畏寒、寒战时,或高热前采血;选择不同部位的静脉间隔采血2~3次;每次采血量要足,需10ml以上,宜床边直接接种,培养基中加入中和血液杀菌因子物质和抗菌药裂解、拮抗剂,必要时抽骨髓培养。血培养1~2天后如发现培养液混浊,可先涂片染色,凭初步结果帮助临床选用抗菌药。
  痰培养:痰标本应为清洁漱口后取清晨深部痰,以清洁无菌器皿收痰,痰需经生理盐水冲洗等处理。及时作定量培养与涂片镜检,涂片见炎症细胞为主方可做培养。以上皮细胞为主的痰标本应予丢弃。也可取支气管冲洗液、洗刷液、环甲膜穿刺液作培养。重复培养其结果一致,视为致病菌;反复变化的结果,多为污染菌或寄殖菌,不是真正的致病菌。
  尿培养:应取清洁中段尿,导尿者可穿刺导尿管或行耻骨上穿刺取尿,1小时内接种。必须作菌落计算,以判断其临床意义。标本不应混尿、钡剂或止泻药等。
  脑脊液培养:严格无菌操作,取量充足,宜床边接种。同时作涂片(沉渣或菌膜)镜检和常规、生化检验。前者在1小时可获初步结果。必要时同时送血、尿等培养。
  脓液培养:应避免以棉拭子取标本,宜以注射器吸取脓液。盆腔、腹腔脓肿、口腔有关脓肿需同时作厌氧菌培养。烧伤创面需作定量培养。
  导管培养:皮肤严格消毒,无菌操作取导管头送培养。
  为及时正确地给临床诊断提供依据,医师应不断积累病原诊断的经验。如中段尿以油镜检查,菌数≥2/视野,相当于菌落计数105CFU/ml.粪镜检见大量白细胞提示沙门菌、志贺菌、弯曲菌感染等入侵性肠炎;无白细胞提示非入侵性或产毒素致病菌(霍乱、产毒素大肠杆菌)感染;见G+杆菌,勿忘艰难梭菌。脓液涂片染色:多形G+杆菌常为乳酸杆菌,多形G-杆菌常示类杆菌。G+球菌多为葡萄球菌、链球菌,G+性杆菌加硫磺颗粒则为放线菌。
  选择合适培养基提高培养阳性率
  适当的培养基也是能否获取致病原,确定病原诊断的关键。应根据临床的初步诊断、感染部位常见致病菌种类和正常菌群的种类等选择相应的培养基。如G+球菌宜选血平板;G-杆菌常选用伊红亚甲兰(EMB)、麦康凯平板,以抑制阳性菌生长;嗜血杆菌需添加X因子、V因子,且培养时充CO2;耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的培养基中需增加氯化钠的含量;G-球菌选用MTM培养基。对于来自脑室与黏膜的标本,如口腔、肠腔、女性生殖道、副鼻窦、肺脓疡的脓液与分泌物,需同时作硫乙醇酸钠厌氧培养。原因不明发热者的血、脑脊液、导管头等培养应考虑加沙保氏培养基作真菌培养。这些知识并非所有检验科、细菌室的工作人员所掌握,在送检标本时应考虑。为确保较高的细菌培养阳性率,细菌室医务人员应主动介绍和提供床边接种、转移培养基等基本条件。
  规范药敏试验,引导合理用药
  药敏试验的结果直接影响临床医师制定用药方案,因此,细菌科不轻易发报告,需事先分析结果,确定其准确性及其临床意义后再发报告。
  1.细菌培养阳性,属致病菌,病人又有感染的表现,此时才做药敏。而细菌培养阳性,病人无感染表现,或重复培养,其结果变化,常视为污染菌、正常菌群,一般不需做药敏,以免误导用药。
  2.不同菌种选择相应的抗菌药做药敏。葡萄球菌的药敏常包括青霉素、苯唑西林、红霉素、克林霉素、万古霉素、利福平、阿米卡星、头孢唑啉、SMZ-TMP、环丙沙星等,没有必要加三代头孢、氨苄西林、β内酰胺酶抑制剂复合剂等,即使结果呈“敏感”,也不宜选用,因其疗效不如上述品种。又如铜绿假单胞菌的药敏应包括庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、哌拉西林、环丙沙星、亚胺培南、氨曲南、替卡西林-克拉维酸、头孢他定、头孢哌酮等,但不必选羧苄西林、氧氟沙星、舒巴坦/氨苄西林、头孢噻肟等。
  3.分析药敏结果,必要时重复或纠正。对无法解释的药敏结果,必须重复。如葡萄球菌对青霉素敏感,但对苯唑西林耐药,应怀疑苯唑西林纸片失效。又如肺炎克雷伯菌对头孢他啶和氨曲南均耐药,常提示为产超广谱β内酰胺酶(ESBLS)菌株,即使头孢噻肟、头孢哌酮或头孢曲松等其他第三代头孢菌素具一定的抗菌活性,但报告应定为“耐药”,否则会导致临床滥用药。同样,葡萄球菌耐苯唑西林,属耐甲氧西林菌株(MRS),药敏结果若示某一青霉素、头孢菌素或其他β内酰胺类呈现抗菌作用,报告仍应定为“耐药”。
  为保证药敏结果的稳定性,必须设立质控菌株作对照。对重要病例、特殊病例,临床应及时与细菌科联系,取得共识,决不轻易凭“结果”发报告或决定临床用药。
  4.关注判断细菌敏感、耐药的MIC(最低抑菌浓度)与抑菌圈标准变化。美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)每年新版公布的判断标准应予实施。此外,“耐药”不等于临床选用必定无效,因为“耐药”是指常用剂量下血药浓度低于该菌的MIC,如临床用药剂量大,或联合用药,或感染发生在药物浓度高(>MIC)的部位,仍可奏效。
  5.必要时应加做联合药敏、β内酰胺酶测定、ESBLS检测等。
  逐渐建立特殊病原诊断技术
  随着诊断水平与治疗效果提高的需要,应逐步建立真菌、厌氧菌、军团菌、衣原体、支原体、病毒等病原的鉴定方法。痰液涂片作油镜检查怀疑军团菌时,可作免疫荧光涂片检查,同时作活性炭酵母浸膏平板培养。支原体培养同时作荧光抗体法,补体结合试验。总之,应按临床需要,提供各种病原诊断的方法。
  提高依据感染部位和临床表现特点,正确判断致病菌性质的本领。
  从临床标本中培养出致病原对针对性选用抗菌药固然重要?但需化费数天或更长的时间。而依据感染部位和病人临床表现的特点,正确判断致病菌性质,有助于尽早选用有效的用药方案。临床医师应重视不断提高病原判断的本领,例如严重细菌感染患者出现迁移性脓肿,多考虑由金葡菌、消化链球菌、类杆菌等引起,因为金葡菌产生的透明质酸,消化链球菌与类杆菌产生的肝素酶有助于细菌扩散入血。如感染部位有气体产生,常示由厌氧菌所致。这些判断病原的经验,需在实践中不断积累。
  对于致病菌不明、细菌培养阴性或培养尚未出结果的感染,可按经验疗法确定首选药与替代药。经典抗感染治疗参考书中介绍的经验疗法正是根据患者感染的部位、年龄、病史与临床表现特点,结合本地区病原菌的流行病学特点,针对最可能的致病菌种类,从而选择有效的抗菌药。临床医师在重视送检细菌的同时,参考经验疗法选用抗菌药是合理用药最实用的方法。
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1.试述科赫(Robert Koch)原则。
答:科赫(Robert koch)原则包括:1在同样的特殊疾病中发现同一种病原菌;2病原体能在体外获得纯培养;3将纯培养接种至易感动物能引起相同的疾病;4能从感染动物体内重新分离出这种病原菌的纯培养。2.临床微生物学检验的任务有哪些?
答:临床微生物学检验的任务包括:1研究感染性疾病的病原体特征:2提供快速、准确的病原学诊断;3指导合理应用抗菌药物;4对医院感染进行监控。3.哪些环境因素可影晌细菌的形态?
答:影响细菌形态的环境因素包括:1培养温度、时间、培养基的成分、pH、离子浓度等;2机体内的生态环境;3环境中不利于细菌生长的物质,如药物、抗菌药物、抗体、过高的盐份等。4.试述细菌的结构及其相应的功能。
答:细菌的基本结构包括:细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等。特殊结构包括:鞭毛、菌毛、舰、芽胞等。
细胞壁的主要成分是肽聚糖,肽聚糖是由多聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥三部分组成。外膜是革兰阴性菌细胞壁的主要结构,由磷脂、脂蛋白、脂多糖三部分组成。细胞壁的主要功能是维持细菌的固有外形,起保护菌体的作用。
细胞膜的主要化学成分为脂类、蛋白质及少量多糖,其结构为平行的脂质双层,大多为磷脂,其中镶嵌有多种蛋白质,这些蛋白质可在呈液态的脂质双层中流动变化。细胞膜的主要功能有:1物质转运作用;2分泌作用;3呼吸作用;4生物合成作用。&
细胞质是细菌新陈代谢的重要场所。核质包含有细菌的遗传物质。
鞭毛是细菌的运动器官,还可增强细菌的侵袭力。菌毛存在于菌体表面,可分为普通菌毛和性菌毛,其中前者为一种粘附结构,后者具有致育性,可传递毒力和耐药性。
荚膜的功能包括:1保护作用;2致病作用;3免疫原性;4鉴别与分型。芽胞是细菌的休眠体,可帮助细菌渡过不良的生存状况。
总之,不论是基本结构还是特殊结构,均有其各自的功能,共同维持细菌的存活及其整体功能。5.细菌L型有哪些特点?
答:细菌L型有以下特点:(1)细胞壁肽聚糖结构被破坏,或合成受到抑制,造成细胞壁缺陷。(2)大小不一,形态各异,染色时不易着色,或着色不均匀。(3)在含血清的高渗低琼脂培养基中能缓慢生长,一般2-7d后形成油煎蛋样小菌落(放大100倍左右才能看见)。(4)保持有亲代的遗传特性,在合适的培养基中生长,很少回复到母菌型,但原生质球在去除诱导物培养时,可以返祖而恢复母菌形态。6.芽胞的生物学意义是什么?
答:产生芽胞的细菌都是革兰阳性菌,主要有需氧芽胞杆菌属和厌氧芽胞梭菌属。芽胞的意义:1可在自然界存活多年,成为某些疾病的潜在传染源;故如怀疑病房、手术室等被能形成芽胞的细菌污染,必须封闭房间进行彻底灭菌;2对理化因素抵抗力强,故芽胞是否被杀死可作为判断灭菌效果的指标,或评价某一种消毒灭菌方法效果的根据;3细菌芽胞的形状、大小、位主等随菌种而异,具有重要鉴别价值;4有些芽胞能产生毒素或其他有毒物质。7.试述细菌的化学组成及其摄取营养的方式。
答:细菌的化学组成除与其他细胞相似,包括水、无机盐、蛋白质、糖类、脂类与核酸等主要化合物外,也有与其他生物细胞不同的成分,如:肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、二氨基庚二酸、吡啶二羧酸等。
细菌通过以下方式摄取营养:1被动扩散;2主动吸收;3基团转移。8.细菌有哪些主要物理性状?
答:细菌的物理性状包括:1带电现象:是区别革兰阳性菌及革兰阴性菌两大类细菌染色性不同的基础之一,此外,带电现象对细菌的盐凝集,以及与特异性抗体的凝集反应、沉淀反应、理化因素抑菌和杀菌作用等都有密切关系;2表面积大,有利于同外界进行物质交换;3半透性与渗透压。9.
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