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薄层色谱法在中药复方制剂中的应用
　　薄层色谱法，又简写为TLC，常用于中药成方制剂中有效成分的定性鉴别。由于该方法鉴别专属性强，使用设备简单，易于操作，故应用广泛，在目前的药品质量标准定性鉴别中(如中国药典和国家食品药品监督管理局标准)，已大大地超过了显微鉴别、理化鉴别和光谱鉴别。
　　笔者在最近的医院制剂申报过程中，对质量标准的制定，使用了大量的薄层色谱法，积累了一定的工作经验。下面，对薄层色谱法在中药复方制剂中的应用，提出自己的一些思路。
　　一、医院制剂由于其自身的特殊性，如只能在本院销售，生产和检验设备简陋，生产量小，剂型和品种相对较多，生产中常以水煎煮为主。故在选择处方中的薄层定性药材时，应以选择水溶性成分为先。如芍药苷、栀子苷、黄芪甲苷、龙胆苦苷、皂苷等苷类或绿原酸、阿魏酸等易溶于水的有机酸类成分。
　　二、仔细分析处方。选择方中薄层定性的药材，应先选取以粉碎入药的药材。因为这部分药材中的有效成分一般没被破坏，特别是一些含有挥发性成分的药材，如薄荷、香附、荆芥等，在薄层层析中以药材作为对照品，很容易鉴别出来。
　　三、对处方中含有多糖类或淀粉质较多的药材，如麦冬、北沙参、党参等，可采取先酸解后用有机溶剂提取的方法。经这样处理后，薄层层析斑点一般都比较清晰，药检所复核时往往容易通过。
　　四、在使用展开剂时，在同等条件下，应选择无毒或毒性较小的有机溶剂。如选用环己烷而不选用正己烷，选用甲苯而不选用苯。以减少有机溶剂毒性对人体的侵害。
　　五、对样品的取样量不宜太大。如果取样量太大，点样时往往因样品的浓度太高而造成点样困难，展开时斑点又不易分离而使薄层图谱不清晰。
　　六、对中药复方制剂的液体剂型，提取分离方法应首选溶剂法，用适宜的有机溶剂提取。如是提取水溶性成分，应考虑对样品进行脱脂处理。对酒剂、酊剂或搽剂中含有乙醇的样品，应先在水浴上蒸去乙醇后再作下一步的处理。如液体剂型不宜用有机溶剂提取，也可采用先将药液置水浴上蒸干(或加入适量硅藻土分散)，再用有机溶剂提取的方法。
　　七、对中药复方制剂的固体剂型，提取分离方法可选用超声提取法、回流提取法或溶剂提取法(应先将样品加定量水溶解)等。超声提取方法简单，所需时间短，目前使用较多，应首选，但在使用过程中应注意一个问题，如提取时使用的有机溶剂是乙醚，超声处理时间应控制在10～20min以内，超声时容器不能密闭太紧，以免瓶塞冲出或乙醚全部挥发，特别是在气温较高的夏天，尤其要注意。
　　八、对中药复方制剂的外用剂型，如软膏剂、黑膏药、贴膏一类，在样品处理时，应首先考虑去掉赋形剂后再对样品进行处理。如用凡士林制成的软膏，可用有机溶剂(如乙醚、乙醇或三氯甲烷)除去凡士林。
　　九、样品经薄层展开后，观察层析情况，笔者认为应多选择在日光下观察为主。原因为大多数医院制剂室未建立暗室，在紫外光灯下拍照有困难。
　　十、对样品中某些成分的提取分离，可先采取相类似的方法，然后再选用不同的定容溶液和展开剂，即可达到目的。如同时提取某些皂苷类、苷类、有机酸类等。
　　十一、在中药复方制剂中，往往药味较多，化学成分较为复杂，给单一成分的分离造成一定困难。为了达到分离的目的，在具体操作中，可以考虑使用高速离心，柱层析、氧化镁净化、水或氨试液洗涤等多种操作方法。但在使用这些方法时，必须注意不能把应提取的有效成分弃掉了。
　　十二、在用碘蒸气或氨蒸气对薄层板显色时，所加的量不宜过多，使用的容器必须密闭，操作人不得离开，必须等到薄层斑点显色色度适宜时，才可取出。
　　上述系笔者在今年的医院制剂申报过程中开展薄层色谱鉴别法中所积累的点滴经验，今提出与同行们探讨，以期在今后的工作中少走弯路。
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羌活,毛细管气相色谱,指纹图谱,聚类分析
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摘要: 目的建立羌活挥发油指纹图谱测定方法,为含羌活中药制剂制定指纹图谱奠定基础。方法采用水蒸气蒸馏法提取不同产地羌活的挥发油;用毛细管气相色谱技术测定指纹图谱( GC-FPS) ;选用聚类法分析比较。结果该方法灵敏度高,稳定性、重现性的RSD & 3 %。结论气相色谱指纹图谱分析法与聚类分析可作为羌活药材的质量控制方法。
&&& 中药羌活来源于伞形科植物羌活( Notopterygi um i ncisum Ting ex H1T1Chang 或宽叶羌活N1 f orbesii Boiss1) 的干燥茎及根, 具有散寒、祛风、除湿、止痛的功效。其主要生理活性成分多属挥发性,2000 年版《中华人民共和国药典》规定其挥发油作为含量测定的指标,并规定其挥发油含量不得少于218 %[1 ] 。但对于中医理论指导下的中药,尤其是复方制剂,任何单一活性成分都不能确切反映中医用药所体现的整体疗效。某疾病的发生是多个病理过程的反映,对于特定的疾病的某几个病理环节,中药复方制剂的化学成分可能都有作用,或通过代谢以后的产物才发挥作用的。因此,一个或几个成分为指标判断中药提取工艺的优劣缺少中医用药理论基础,而宏观的综合分析成为必然。色谱技术测定指纹图谱具有综合、宏观、“模糊”的非线性特点[2 ] 。在药效、毒理临床实验已经确认品种安全有效的前提下,可用指纹图谱技术确定产品的真伪[3 ] 。
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摘　要:依托时间匹配、光谱信息辅助,利用自编的VB 程序,建立并比较了时间匹配和时间匹配参考光谱信息两种识别中药指纹图谱共有峰的方法,并成功地应用于肉苁蓉的高效液相色谱2二极管阵列检测器( HPLC2DAD) 法指纹图谱的建立。结果表明,只需要人为设置色谱峰大小下限、保留值相对误差上限和最大吸收波长差值上限三个参数,VB 程序编制的指纹分析系统就能快速对所有样本进行共有峰识别和模糊数学处理,实现了无人工干预下的中药指纹图谱共有峰的自动识别,指纹图谱的建立过程客观,并且节省大量时间,其中参考光谱法识别结果更准确。
&&& 中药是中华民族的瑰宝,现代化是中药走向世界、实现国际化的前提,其制剂的质量水平控制是现代化的中心环节[1 ] 。以指纹图谱[2 ,3 ] 规范中药制剂的质量,被评价为中药质量控制的里程碑[4 - 6 ] 。国家食品药品监督管理局2002 年发布了《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南(试行) 》[7 ] 。色谱法是研究指纹图谱的首选方法,高效液相色谱( HPLC) 因具有灵敏、重现、适用对象广泛、分离效率高等特点而被广泛应用[8 ] 。&&& 峰匹配是指纹分析的关键,保留时间或相对保留值常常作为色谱指纹图谱的共有峰识别标准[9 ] 。但是,由于中药体系的复杂性和HPLC 仪器系统的微小波动,同一组分在各色谱图中的保留时间不尽相同。通常采用添加内标物或者人工选定标定峰来校正保留时间[10 ] 。根据选定标定峰的数目有一点、两点或者多点校正方法。一点法对非线性推移校正结果较差,两点法可以部分校正非线性推移,多点法效果最好,但是加大了操作者的难度[11 ] 。陈闽军等[10 ] 用遗传算法进行色谱图匹配,实现了自动优化标定,但需要在色谱图中分区间定义局部特征,有可能导致区间邻接位置的同一色谱峰被划分入不同的区间,使自动匹配结果有时与观察特征不一致,须通过手动校正进行调整。朱臻宇等[12 ] 提出一种全排序模板匹配算法,克服了原算法中的某些错配、漏配等缺陷。但是,全排序模板是所有样本的总和,数据量大,不利于大批量样本和峰数目很多的样本的处理。当样本之间差异较大时,其同一物质的色谱峰应当彼此靠近的分析前提也难以保证。倪力军等[ 13 ] 选取前后两个参数点,采用图论中的最短路径算法寻找最佳匹配峰组,最大程度地匹配可能的色谱峰并极少出现错配、漏配峰组,无需手动校正。因此以保留时间为基础,结合其它色谱信息综合进行峰匹配成为必然。王龙星等[14 ] 提出了在保留时间的一定范围内参考峰高的算法,能较好地定量评价指纹图谱间的相似性。但是峰高的定性作用很不可靠,当样品间的组分差异比较大或者大小相似的峰密集出现时,峰高的参考意义不大。二极管阵列检测器(DAD) 灵敏度高、重现性好,能得到光谱信息[ 15 ] ,可以反映检测对象的部分结构信息,有利于复杂体系的峰识别[16 - 19 ] 。李博岩等[16 ] 提出了光谱相关色谱的概念,并且分析处理了一些中药色谱指纹图谱,结果表明该方法实用、可靠,仍有待进一步发展和完善。但在具体应用中还要借助人工干预,而非自动地全图谱处理。
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