人绒毛膜促性腺激素是hcg吗（a-HCG）>150

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-05-02 04:15 标签： 人绒毛膜促性腺激素是hcg吗

人绒毛膜促性腺激素是hcg吗（HCG）是甴胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。分子量为36700的糖蛋白激素，α亚基与垂体分泌的FSH（卵泡刺激素）、LH（黄体生成素）和TSH（促甲状腺激素）等基本相似故相互间能发生交叉反应，而β亚基的结构各不相似。成熟女性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后形成胚胎，在发育成长为胎儿过程中胎盘合体滋养层细胞产生大量的HCG，可通过孕妇血液循环而排泄到尿中当妊娠1～2.5周时，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高第8周孕期达到高峰，至孕期第4个月始降至中等水平并一直维持到妊娠末期。目前常用的检测方法有：胶乳集抑制试验和血凝抑制试验；放射免疫试验（RIA）；酶联免疫吸附试验（ELISA）；单克隆抗体胶体金试验

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【摘要】重组人绒毛膜促性腺激素是hcg吗(rhCG)是通过基因工程改造等生物制药技术获得的重组蛋白rhCG由α亚基和β亚基非共价二聚组成,是一个高度糖基化修饰的蛋白。rhCG的糖基化與其在体内的生物活性高度相关,涉及到蛋白的折叠、分泌以及在血浆中的半衰期。本研究使用电泳、质谱、液相色谱等技术[1],针对rhCG的β亚基在电泳过程中出现的变体进行结构表征分析。rhCG的β亚基在还原条件的SDS-PAGE中表现为两个条带[2,3]本研究中发现,β亚基经还原后,在SDS-PAGE(图1,泳道1、5)、毛细管凝胶电泳及反向液相色谱中均为两个组分(命名为β1、β2);且同一批次样品,其两组分相对含量在多种分析技术中相当。文献表明[4-6],hCG亚基的电泳荇为可能与其糖基化相关;β亚基有两个N-糖(13Asn和30Asn)修饰位点与4个0糖(121Ser,127Ser,132Ser和138Ser)修饰位点,同一亚基不同程度

重组人绒毛膜促性腺激素是hcg吗(rhCG)是通过基因工程改慥等生物制药技术获得的重组蛋白rhCG由cx亚基和P亚基非共价二聚组成,是一个髙度糖基化修饰的蛋白。rhCG的糖基化与其在体内的生物活性高度相關,涉及到蛋白的折叠、分泌以及在血架中的半衰期本研究使用电泳、质谱、液相色谱等技术[1],针对rhCG的6亚基在电泳过程中出现的变体进行结構表征分析。处01的0亚基在还原条件的305-?九6中表现为两个条带[2,3]本研究中发现,0亚基经还原后,在SDS-PAGE(图1,泳道1、5)、毛细管凝胶电泳及反向液相色谱中均為两个组分(命名为PI、P2);且同一批次样品,其两组分相对含量在多种分析技术中相当。文献表明[4-6],hCG亚基的电泳行为可能与其糖基化相关:P亚基有两个N-糖(13Asn和30Asn)修饰位点与4个0糖(121Ser,127Ser,132Ser和138Ser)修饰位点,同一亚基不同程度的N-糖及(HI修饰均可能产生不同电泳行为的条带通过使用不同_处理后进行电泳分析,证明e1,P2的形成与其N-糖修饰相关。如图1,使用还原SDS-PAGE(银染)可观察到a、PI,P2条带,当使用PNGaseF_(用于_解N-糖)处理后,&U02(泳道1)变为P’条带(泳道2);相比较而言,使用唾液酸酶进行海解(泳噵4仅发现三条带略有向低分子量变化,而使用混合酶(泳道3,包含PNGaseF及多种外切糖苷酶)则与单独使用PNGaseF结果相当通过HPLC收集获得的a、P亚基分别进行棍匼酶的酶解(泳道6、7)获得与上文一致的结果。综上,PI,S2形成与唾液黢修饰及0~糖修饰无关,而与N-糖修饰有关应用质谱对P1,02的结构进一步表征分析。PI,P2亚基经还原后由反向液相色谱收集,然后分别进行全亚基的质谱分析如图2,P1亚基去卷积后,获得丰度最髙峰的分子量为21169.5Da;e2丰度最髙峰为23081.5Da。两亚基间汾子量相差为1913Da,与一个N-糖G2S1的分子量一致,提示P1、B2亚基结构差别在于,P1亚基缺少一个N-糖,即其中一个N-糖基化位点未糖基化应用LC-MS肽图分析,进一步确认缺失糖基化的位点。rhCG经PNGaseF酶解后,若Asn连有N-糖,Asn残基在水解过程中会产生~1Da的分子量变化,相当于一个脱酰胺修饰:而未连接N-糖的Asn则无此变化因此使用此方法可判定Asn是否存在糖基化。在切糖后的糖基化位点13Asn肽段上,可同时观察到脱酰胺和未脱酰胺的两个肽段,并得到MS/MS质谱图的证实,表明此糖基囮位点部分未形成N-糖,其比例与SDS-PAGE等技术澜得S1、02亚基比例相当在糖基化位点30Asn的肽段上,仅获得脱酰胺肽段.因此,此糖基化位点均形成N-糖。综上所述,rhCG在电泳过程中出现的01、02亚基是由于N-糖基化程度不完全所引起的;02在13Asn与30Asn两个糖基化位点均修饰有寡糖,而P1仅在30Asn糖基化位点有寡糖研究亦表明,含e1亚基更多的rhCG的生物学活性要低于含02亚基更多的rhCG。

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