怎么才能知道某个抗原可以用乳腺癌免疫组化结果检测出来？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-05-02 01:53 标签：
免疫组化ABC法一直没结果 急急(免疫组化,二甲苯,蒸馏,抗原,无水乙醇)
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[免疫组化ABC法一直没结果 急急(免疫组化,二甲苯,蒸馏,抗原,无水乙醇)] 相关疾病：阑尾炎脱水胃癌组织：阑尾炎组织、胃癌组织；抗体：ABCE1查过资料了，两种组织里抗原表达都比较强。可是一直没有做出结果，用的ABC法，用博士德德即用型试剂盒，步骤如下：1.脱蜡至水 二甲苯（1）10min、二甲苯（2）10min、无水乙醇1min、95%乙醇1min、90%乙醇1min自来水冲洗，蒸馏水洗3min*3次；2.灭火内源性酶 3%双氧水灭火 10min 蒸馏水洗3min*3次 关键词:[二甲苯 抗原 无水乙醇 蒸馏 免疫组化 一抗 抗体]…
组织：阑尾炎组织、胃癌组织；抗体：ABCE1查过资料了，两种组织里抗原表达都比较强。可是一直没有做出结果，用的ABC法，用博士德德即用型盒，步骤如下：1.脱蜡至水 二甲苯（1）10min、二甲苯（2）10min、无水乙醇1min、95%乙醇1min、90%乙醇1min自来水冲洗，蒸馏水洗3min*3次；2.灭火内源性酶 3%双氧水灭火 10min 蒸馏水洗3min*3次； 3.抗原修复 枸橼酸水浴 95°C 10-15分钟 自然降温后 PBS洗3min*3次；4.封闭 5%BSA 室温30min 5.加一抗 ABCE1 37°C1h或4°C过夜，浓度 1：50、1：100、1：200、1：250、1：400、1：500、1：600、1：800、1：00，都做过了；PBS洗5min*3次；6.加二抗 37°C 20min 或30min；PBS洗5min*3次；7.加SABC复合物 37°C20min +吐温0.02%的PBS洗PBS洗5min*3次，再用PBS洗5min*2次；8.DAB显色 （也是博士德德）5min；9.蒸馏水洗3min*3次；10.复染 苏木素液1min、1%盐酸酒精分化3-5s、冷水反蓝2min；11.脱水、透明、封片 80%乙醇1min、85%乙醇1min、95%乙醇1min、无水乙醇（1）2min、无水乙醇（2）2min、二甲苯（1）2min、二甲苯（2）2min，中性树脂封片。做了好多次一直没有结果，很着急。之前做别的抗体，没结果，是对抗原表达位置不了解。同样的步骤，就做出来一个结果apaf-1，只在阑尾炎组织上有阳性。后来查资料发现ABCE1在绝大多数组织里都有很强的表达（包括胃癌和阑尾），就换ABCE1来做，可是还是一直没有结果，实验都快4个月了，崩溃，各位大虾帮帮忙。 哦，补充一下，我是用实验检测一抗的，一抗是多抗，用肽段免疫的，能做WB。
回复你就一直相同的条件做了4个月？更换各种修复方法试试：枸橼酸高压修复3分钟；微波修复15分钟；EDTA修复；胰酶修复等等。但从你描述的情况判断，多半是抗原修复的问题。不同的抗原得采取不同的抗原修复方法，可以查查文献别人是用什么方法修复的。标不上去却做那样的一抗浓度梯度等于浪费！1：50都没有，做下面的浓度还有意义么。回复是不是脱蜡不够彻底，应该先60度烤片2小时的吧，二甲苯的时间是否可以延长，还有水化为什么不多加价格梯度85%，75%呢，抗原修复的时间太短了吧，应该20分钟以上吧，仅个人意见回复你的修复方式有问题，水煮至少要20分钟以上（本人的经验），还有脱蜡可以先用电吹风加热或者放在烤箱中加热切片，再脱蜡。至于步骤，不好说，细节可能出问题。你按说明书，改良脱蜡方法和抗原修复方式（是否修复严格按照说明书），在建议的阳性对照组织上实验，如果还不行，建议换个公司的试剂盒试试，或者找个公司做。回复有可能是脱蜡不彻底；还有就是可以试下修复（沸腾后小火8min,大火15min）,修复很重要，否则后面的都白费；可以先修复再阻断内源性过氧化物酶回复你二甲苯透明那么久？赐教！回复可能是一抗的问题吧，老师说肽段免疫的一般只能做WB，做免疫组化很少，细胞内的抗原是全蛋白，免疫肽段有可能在蛋白的内部。我又换了种，actin（smooth muscle），我们自己生产的，也搞不清具体是actin的哪一种，感觉结果像阳性，图片传上，大家分析分析。 阴性： 回复阳性： 回复个人感觉是不是透明太久了哟？回复??透明时间不怎么影响结果吧，还没听说过啊回复我要看血管（内对照），SMA会染血管内皮，有的话，内对照成立，你的阳性才是真阳性。
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【求助】免疫组化和western blot都可以检测蛋白质，请问两者之间有何不同？
心血管内科
【求助】免疫组化和western blot都可以检测蛋白质，请问两者之间有何不同？
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这个帖子发布于5年零86天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
免疫组化和western blot都可以检测蛋白质，请问两者之间有何不同？小弟是新手，希望大家赐教哈
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WB一般都有蛋白变性这一部，也就是使蛋白呈线状，这样抗体与抗原结合充分多了，用于抗原的半定量也准确一些；而免疫组化是抗体与抗原原位结合，有复杂的立体空间构象，做起来难些，一般能用于IHC的抗体也能用于WB，但反过来就不一定，IHC用于抗原的定位还是挺有优势的。
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补充： 都是蛋白质的抗原抗体反应，所以本质一样。WB的半定量分析比免疫组化的准确，使用发光法的精确度高（10ng）,但是即使这样也不能代替免疫组化，因为免疫组化是原位的呈现，具体这个蛋白质表达在细胞的膜还是质还是核都可以看出来。免疫组化如果是石蜡切片的话组织经过高温抗原会丢失和改变，需要抗原修复，这样一抗的使用浓度就高些，WB时一抗的使用浓度低得多。
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简单的说ICH用于定位，或是看看有没有表达而WB则是可以半定量的。
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原来的帖子，谨供参考：免疫组化和western都是抗原抗体免疫反应，但也有区别。区别：1.免疫组化是定性或半定量实验，而WESTERN是比较经典的定量实验，当然也可以定性；2.免疫组化可以测定抗原的细胞组织分布（即抗原在细胞核还是细胞膜等），而WESTERN不能测定抗原的亚细胞分布；3.免疫组化的抗体一般识别抗原的空间表位，WESTERN的抗体一般识别抗原的线性表位；4.用于免疫组化的抗体不一定能用于WESTERN,用于WESTERN的抗体也不一定适用于免疫组化,具体查看说明书或询问技术支持。5.免疫组化不需要特殊昂贵的设备，而WESTERN需要电泳仪，转膜器等比较特殊的设备。
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Western也是半定量
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结合自身实践，谈谈我的观点：1、免疫组化的最大优势是反映蛋白在细胞内定位和定性，如胞核、胞浆、还是胞膜等。在定量方面有时真的无能为力，DAB孵育时间长一点，棕黄色就深；若抗体浓度不合适，那就更黄了，此时定量就很不准确了。只有在背景很浅而特异性染色较深的前提下才能进行半定量分析。2、Western blotting的最大优势是可以对蛋白进行较为准确的定量，只要方法没问题：上样量合适、抗体浓度最佳等，他在定量上较免疫组化更为准确。它有时根据检测蛋白的分子量大小，以进一步确证。3、因此，结合两种方法反映的试验结果有时是互为补充的，但最终还是根据你的试验目的来做选择的。可以同时选择，也可只选择一种。理由是前者因为两者相互补充和进一步重复验证；而后者理由是都是蛋白水平的检测。4、严格来说，免疫组化和WB都是蛋白检测方法，都能够定性（蛋白表达与否）、定位（免疫组化可以复染，WB通过提取不同亚细胞成分来进行后续抗体孵育）和定量（免疫组化图片分析；WB条带分析）。
心血管内科
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多谢各位前辈
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分析得好。学习了。
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