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微柱凝集技术交叉配血主侧相合、次侧不合的处理流程研究
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[摘要] 目的:探讨微柱凝胶试验联合聚凝胺试验在临床输血中的应用。方法：采用微柱凝胶试验对患者进行不规则抗体筛选，不规则抗体阴性患者采用聚凝胺试验进行交叉配血，阳性患者采用微柱凝胶试验进行交叉配血。结果：12例不规则抗体阳性患者用两种方法同时做交叉配血试验。聚凝胺法交叉配血试验不相合7例，相合5例，相合率为41.7%；微柱凝胶法交叉配血试验不相合9例，相合3例，相合率为25%。结论：聚凝胺试验虽然操作简便、快速，价格低廉，但灵敏度不高，易造成假阴性结果；微柱凝胶试验灵敏度高、特异性强，但价格较高。因此，应根据患者不同病情选用聚凝胺试验或微柱凝胶试验进行交叉配血试验，在降低患者医疗费用同时确保患者输血安全。
&&&&[关键词] 聚凝胺试验； 微柱凝胶试验； 不规则抗体； 交叉配合试验
&&&&[中图分类号] R446.6 [文献标识码] B [文章编号] 11)01-0093-03
&&&&doi:10.3969/j.issn.11.01.033
&&&&[收稿日期]
[修回日期]
&&&&[作者简介] 张敏(1979-)，女，四川南充人，技师，医学硕士。E-mail:
&&&&传统的盐水介质法只能检出相对分子质量大的IgM类抗体，对相对分子质量小的不规则抗体(主要是IgG类抗体)往往造成漏检。手工聚凝胺试验对Kell系统外的大多数血型系统均适用，且操作简便、快速、经济[1]，作为临床输血配合试验正在被国内许多基层医院所采用。微柱凝胶试验灵敏度高，结果直观，能定量自动化操作，最大限度减少人为误差[2-4]。为确保临床输血安全，有效防止急、慢性溶血性输血反应的发生，我院根据《临床输血技术规范》，对有妊娠史、输血史和短期内需大量输血的患者进行不规则抗体筛选，再根据筛选结果选择微柱凝胶试验或聚凝胺试验进行交叉配血，收到良好效果，现报道如下。
&&&&1 资料与方法
&&&&1.1 标本来源
&&&&受血者系本院2010年1月至2010年6月住院和门诊输血患者共1 367例，其中男743例，女624例，年龄1 d～89岁。供血者血液全部来自江苏省血液中心。
&&&&1.2 试剂
&&&&红细胞血型抗体筛选细胞(瑞士达亚美公司产品)，聚凝胺试剂盒(台湾Baso公司产品)，单克隆抗A、B标准血清(长春博德生物技术有限责任公司)，抗-D试剂(上海血液生物医药有限责任公司)，微柱凝胶卡及配套离心机、孵育箱(瑞士达亚美公司产品)。
&&&&1.3 方法
&&&&对有妊娠史、输血史和短期内需大量输血的患者均进行不规则抗体筛选，不规则抗体阴性患者采用聚凝胺试验进行交叉配血，阳性患者采用微柱凝胶试验进行交叉配血。
&&&&1.3.1 不规则抗体筛查 采用微柱凝胶试验进行不规则抗体筛查，即将3种浓度为0.8%的普细胞悬液各50 μl加入微柱凝胶卡反应室，再各加入血清 25 μl，37 ℃孵育15 min，离心10 min。观察凝集情况，红细胞全部沉积在反应室底部判为阴性，悬浮于凝胶表面或散在分布于凝胶中则为阳性。
&&&&1.3.2 交叉配合试验 (1) 微柱凝胶试验：首先在微柱凝胶卡上注明受血者、供血者姓名及主、次侧,然后制备受血者、供血者0.8%～1.0%红细胞悬液。主侧加入50 μl供者细胞及25 μl受者血清,次侧加入50 μl受者细胞及25 μl供者血清，37 ℃孵育15 min,离心10 min。结果判断同上。(2) 聚凝胺试验：首先在试管上注明受血者、供血者姓名及主、次侧,主侧加入受血者血清2滴及供血者3%红细胞悬液1滴，次侧加入供血者血清2滴及受血者3%红细胞悬液1滴，然后主、次侧管各加低离子溶液0.6 ml，混匀，室温静置1 min后加入聚凝胺溶液2滴，混匀，室温静置15 s，离心15 s，倾去上清液，轻轻摇动试管，若观察到红细胞凝集，则加入2滴复悬液，轻轻混匀。观察结果，红细胞仍有凝集者判为阳性，红细胞均匀悬浮于溶液中则判为阴性。
&&&&2 结 果
&&&&1 367例患者中不规则抗体阳性者12例，采用微柱凝胶试验、聚凝胺试验同时做交叉配血试验。聚凝胺法交叉配血试验不相合7例，相合5例，相合率为41.7%;微柱凝胶法交叉配血试验不相合9例，相合3例，相合率为25%。由此可见，微柱凝胶法交叉配血试验不相合率高于聚凝胺法，即微柱凝胶法敏感性高于聚凝胺法。因此，不规则抗体阳性患者采用微柱凝胶法进行交叉配血提高了输血安全性。12例阳性标本的具体交叉配血结果见表1。
&&&&表1 12例抗体筛选阳性标本两种配血方法进行交叉配血的结果
&&&&3 讨 论
&&&&不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体[5-6]，多为IgG类抗体,主要是经输血或妊娠等免疫刺激而产生，在盐水介质中IgG类抗体不能引起红细胞凝集，只能使相应红细胞致敏。IgG类不规则抗体可引起受血者溶血性输血反应和新生儿溶血病[7]，对患者健康造成严重危害，甚至威胁生命。本研究对1 367例患者进行了不规则抗体筛查，阳性12例，阳性患者采用聚凝胺法交叉配血，相合率为41.7%(5/12)，微柱凝胶法交叉配血相合率25%(3/12)，交叉配合试验聚凝胺法相合率高于微柱凝胶法。对于微柱凝胶法交叉配血不相合的样本，再与其它献血者进行交叉配血，直至找到相合的供者。
&&&&聚凝胺试验对结果的观察是从凝集到无凝集的过程，对试管振摇的力度和解聚的时间需要严格掌握，弱凝集的标本由于用力振摇或放置时间稍长凝集也会消失。因此，聚凝胺法虽能检出IgG类不完全抗体，但其本质仍是介质法，且操作难以标准化、影响因素多、缺乏完善的质控体系，易造成假阴性结果，敏感性低于微柱凝胶试验[8]。微柱凝胶试验在操作程序上更加标准化，加样量精确到微升，孵育时间、离心速度和时间都进行了标准化设置，克服了许多人为因素造成的误差，因而大大提高了实验结果的可重复性，且具有灵敏度高、特异性强等优点[9]。因此，使用微柱凝胶法交叉配血能够减少输血反应的发生，保证临床输血安全。
&&&&在实际工作中建议选用微柱凝胶试验进行受血者不规则抗体筛选，不规则抗体阴性患者采用聚凝胺法进行交叉配合试验，阳性患者采用微柱凝胶法进行交叉配合试验。根据患者情况选择不同方法交叉配血既能更加快速、高效地为临床提供安全的血液制品，减轻患者的经济负担，同时能够确保患者的输血安全。
&&&&[参考文献]
&&&&[1] 田兆嵩,刘赴平.输血前检验应重视的几个问题[J].中华检验医学杂志,):139-140.
&&&&[2] 潘纪春,欧阳锡林,陈民才.微柱凝胶与聚凝胺交叉配血试验比较[J].第四军医大学学报,):606.
&&&&[3] 焦艳红,孙秀凤.凝聚胺法与微柱凝胶法在交叉配血中的联合应用[J] ......
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动物交叉配血试验
（北京康乐佳宠物医院& 许新令
蒋大夫&张玲玲）
交叉配血实验用于检测贫血的受血者和供血者之间的血清型是否相容，用以预防受血动物输血后发生输血反应。
1．主测配血试验是检验受血者血清中是否有抗供血犬的红细胞抗体，如果有则不能输血。
主测配血试验：受血者血浆+供血者红细胞
2．副测配血试验是检验供血者血清中是否有抗受血犬红细胞抗体，即使有也可以忽略，因为供血者血液进入受血者体内后很快被稀释。
副测配血试验：供血者血浆+受血者红细胞
3．多数犬不存在自然产生的抗体，因此从未输过血的犬初次交叉配血试验显示相容性。
4．曾经有受血经历的犬，在第二次输血前，即使用同一供血犬，也一定要做交叉配血试验。
5．猫能产生自然同种抗体，所以在猫输血前必须做交叉配血试验。交叉配血试验还能鉴定猫的血型，若主测配血试验不相合，受血猫可能为B型血，供血猫为A型血。若副测配血试验不相合，受血猫可能为A型血，供血猫为B型血。如果交叉配血试验相合，则供血猫和受血猫血型相同。猫的血液最好在需要输血时，现采血现输血，不要长期贮存。
二、步骤（仅供参考）
1)&&&&&&&分别取0.5毫升受血者和供血者的抗凝血，可用EDTA抗凝，或从供血袋内取血；（见下图）
对抗凝血进行离心，2000转/ｍin，离心5ｍin；（见下图）
离心后，用移液枪吸取上面血浆，放入另外试管，并标记；或直接转移入贴有主测、副测和受血者对照标签的3支1毫升离心管中，每支离心管中加对应血浆100微升。（见下图）
用磷酸盐缓冲盐水或生理盐水洗涤红细胞3遍，并制成5%的红细胞悬液。操作方法为：加入洗涤液后，用手指轻弹试管底，使红细胞和洗涤液混合，再2000转/ｍin离心5ｍin，取上清液仍掉，如此重复3次；（见下图）
向装有100微升血浆的离心管中各加入100微升对应的5%红细胞悬液，并在室温下静置15分钟；（见下图）
主测配血试验：100微升受血者血浆+100微升5%供血者红细胞悬液，轻轻混合
副测配血试验：100微升供血者血浆+100微升5%受血者红细胞悬液，轻轻混合
对照试验：&&&
100微升受血者血浆+100微升5%受血者红细胞悬液，轻轻混合
6)&&&&&&&离心后，检查上清液有无溶血；（见下图）
7)&&&&&&&轻轻晃动离心管，肉眼或借助显微镜观察有无凝集；（见下图）
8)&&&&&&&主测配血试验出现任何程度的溶血或凝集都表示血型不合，副测配血试验出现轻微溶血或凝集可用于紧急情况下的输血，但是必须仔细监护；
当受血者对照试验出现凝集或溶血后，不应进行交叉配血。
三、结果判读
相容现象（400倍镜）
凝集现象：可见红细胞凝集，凝块大小可能会有差异。（见下图，100倍镜、400倍镜）
交叉配血试验无凝集时才可以输血。
要使用磷酸盐缓冲盐水或生理盐水洗涤红细胞，输血时最好使用生理盐水稀释。
5%葡萄糖对红细胞的伤害(见下图)
蒸馏水对红细胞的伤害（见下图）
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不规则抗体筛查和交叉配血实验的一般资料分析
优质期刊推荐& 凝聚胺法和微柱凝胶法在交叉配血试验中的应用
凝聚胺法和微柱凝胶法在交叉配血试验中的应用
摘 要：目的对凝聚胺法和微柱凝胶法在交叉配血试验中结果不符的情况进行分析，总结原因，以求更有效、安全的输血实验方法。方法收集16例不规则抗体结果阳性的病例，选择红细胞有相应抗原者用聚凝胺法和微柱凝胶法平行进行
【题　名】凝聚胺法和微柱凝胶法在交叉配血试验中的应用
【作　者】朱伟彦 粱玉
【机　构】河南省人民医院输血科 河南省郑州450003
【刊　名】《中国实用医刊》2013年 第7期 61-62页　共2页
【关键词】交叉配血实验 不规则抗体 凝聚胺试验 抗人球蛋白试验 微柱凝胶实验
【文　摘】目的对凝聚胺法和微柱凝胶法在交叉配血试验中结果不符的情况进行分析，总结原因，以求更有效、安全的输血实验方法。方法收集16例不规则抗体结果阳性的病例，选择红细胞有相应抗原者用聚凝胺法和微柱凝胶法平行进行交叉配血试验。结果16例不规则抗体阳性的患者交叉配血中，微柱凝胶法的主侧均出现凝集，而3例聚凝胺法的主侧无凝集。结论凝聚胺法在筛查IgG类抗体的灵敏度不如微柱凝胶法，对于不规则抗体筛查为±～＋及抗体类型为抗-Jka和抗．k抗体的患者交叉配血最好使用微柱凝胶方法。
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交叉配血实验,不规则抗体,凝聚胺试验,抗人球蛋白试验,微柱凝胶实验
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