什么是对流免病免疫火箭电泳法法

(1)原理:火箭免疫免疫火箭电泳法是将单向免疫扩散和免疫火箭电泳法相结合的技术抗原在电场作用下,在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动逐渐形成梯度濃度,在抗原抗体比例适当时形成沉淀随着抗原量的减少,沉淀带越来越窄形成火箭峰样沉淀,峰形高低与抗原量呈正相关医`学教育網搜集整理用已知量标准抗原作对照,绘制标准曲线根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。

①抗原蛋白定量如IgA、IgG、IgM和sIgA檢测;

②C3、C4及其裂解产物检测;

可作为定量测定的免疫免疫火箭電泳法技术是 ()

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  火箭免疫免疫火箭电泳法(rocket immunoelectrophoresisRIE)昰将单向免疫扩散与免疫火箭电泳法相结合的一项定量检测技术,实质上是加速的单向扩散试验实验时,将抗体混合于琼脂中样品孔Φ的抗原置于负极端,免疫火箭电泳法时抗体不移动抗原向正极泳动,随着抗原量的逐渐减少抗原泳动的基底区越来越窄,抗原抗体汾子复合物形成的沉淀线逐渐变窄形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰。当琼脂中抗体浓度固定时峰的高度与抗原量呈正相关,因此用已知标准抗原作对照抗原浓度为横坐标,峰的高度为纵坐标绘制标准曲线,待测样品浓度就可根据沉淀峰的高度在标准曲线Φ计算获得如果将琼脂中加入固定浓度的抗原时,便可检测抗体的含量(称为反向火箭免疫火箭电泳法)

  ①②③④为标准抗原;⑤⑥为

  影响火箭免疫火箭电泳法的因素很多,因此在操作时应注意以下几点:

  1.所用琼脂应是无电渗或电渗很小的否则火箭形状不规则。

  2.注意免疫火箭电泳法终点时间的确定如火箭免疫火箭电泳法顶部呈不清晰的云雾状或圆形,则表示未达终点

  3.待测数量多时,免疫火箭电泳法板应先置上搭桥并开启电源(电流要小)后加样否则易形成宽底峰形,使定量不准

  4.作IgG定量时,由于抗原和抗体的性質相同火箭峰因电渗呈纺锤状,为了纠正这种现象可用甲醛与IgG上的氨基结合(甲酰化),使本来带两性电荷的IgG变为只带负电荷加快了免疫火箭电泳法速度,抵消了电渗作用而出现伸向正极的火箭峰。

  火箭免疫火箭电泳法作为抗原定量只能测定鹏/ml以上的含量如低于此水平则难以形成可见的沉淀峰。加入少量125I标记的标准抗原共同免疫火箭电泳法则可在含抗体的琼脂中形成不可见的火箭峰,经洗涤干燥后用X线胶片显影,可出现放射显影这就是目前采用的免疫自显影技术,根据自显影火箭峰降低的程度(竞争法)可计算出抗原的浓度免疫白显影技术可测出ng/ml的抗原浓度。

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