一段脲解支原体dna序列(2)特异性的确定及其应用的制作方法
专利名称一段脲解支原体dna序列(2)特异性的确定及其应用的制作方法
技术领域本发明涉及一段脲解支原体(Ureaplasma urealyticum)DNA序列(2)特异性的确定及其应用，属于生物医学技术领域。
背景技术脲解支原体是一种人类生殖器经常感染的病原物，可引发许多泌尿生殖道疾病，准确的诊断是进行即时而可靠的治疗的依据，目前只能根据临床指征进行诊断。PCR和基因芯片诊断是一种快速而准确的检测方法。而这一类的诊断方法依赖于获得特异的核酸序列。
本发明在于通过生物信息学和分子生物学技术，确定了一段脲解支原体特异核苷酸序列及其PCR引物。该序列和相应的PCR引物可用于建立基因芯片和PCR方法进行脲解支原体的诊断。
本发明的技术方案为本发明利用现有的方法确定了长度为288bp的一段脲解支原体特异DNA序列(2)及其PCR引物，用引物进行PCR扩增，其序列如下taatccagct gttgcgtttg ctttattagc tatgcattta aaaatagatt taaaaactgc
60tttatatacg catctttact ctacagttgc cgcattaacg caaaactgtg tacgtgcaat 120tccattagga caagttaagg gacaaaaaat aatttatcaa cttaaacatg tttattttga 180tgatattgtt aataaagtct ttacattgga ttttaaaaca gatttttgca aaaatatacc 240aggccttgaa attgcacaaa tggaacacga ggacacacct gttcgctt
288引物序列为1.5’-taatccagctgttgcgtttg-3’2.5’-aagcgaacaggtgtgtcctc-3’上述脲解支原体的特异DNA序列(2)用于诊断脲解支原体的基因芯片的探针序列，并通过上述的引物序列进行PCR扩增，标记后进行杂交检测或直接用于PCR诊断。
用本发明建立的临床检测技术所使用的方法具有快速、准确、操作简便、成本低等优点。
图1为临床标本的PCR扩增图谱。
图2、图2续是测序图。其中图2是测定的序列、图2续是原始测序图谱。
图3是用Blast软件对PCR扩增产物的测序结果与预计序列的比较分析。
图4、图4续(1)、图4续(2)、图4续(3)是基因数据库中Blast搜索结果。
图5为基因芯片杂交结果。
具体实施例方式首先以脲解支原体为关键词，在基因数据库中搜索脲解支原体的核苷酸序列。共获得数条关系较密切的核苷酸序列，将这些核苷酸序列用NCBI网上的Blast在线使用软件比对基因数据库中的核苷酸序列(nr)，排出非特异性的核苷酸序列，获得了1Kb特异性的核苷酸序列。以这段序列设计了20余对PCR引物，以临床标本提取DNA，进行PCR扩增，筛选到一对适合进行PCR扩增的序列及引物，PCR扩增获得的产物与预计大小一致(见图1，图中序号为1.标准分子量DNA，分子量大小从上至下分别为622，527，404，309，242/238，217，201，190，180，160+160，147+147，123；2.4.5临床阴性标本，没有扩增产物；3.临床阳性标本，扩增产物很纯，大小290左右，与预计大小一致。图谱结果显示用本发明中的引物能特异的扩增临床样品)，然后用T-vector进行克隆，并测序(测序报告见图2、图2续，图中从55位开始，到342位，共288bp为克隆序列，其余序列为克隆载体序列)，序列为288bp，通过Blast软件比对预计序列，显示与预计的序列一致(见图3，图中除第48位、119位、143位、154位由c改变为t，第61位、68位由g改变为t，第62、70、121、140位由t改变为c，第65位由c改变为g，第67、88位由a改变为g外，其余均与预计序列一致)，表明该序列可以被特异性的扩增，可用于脲解支原体PCR检测。序列用NCBI网站的Blast搜索基因数据库的DNA(包含cDNA)序列，该序列只与脲解支原体的序列一致，而与其它的物种序列没有同源性见图4、图4续(1)、图4续(2)图4续(3)，图中搜寻结果表明，只有脲解支原体的质粒DNA序列与本序列同源，并且是完全配对。而其它的序列，由于没有引物与之配对，故在检测中不会被检测到。用这一序列标记后作为探针与含有9种泌尿生殖道感染病原物的45个基因位点的基因芯片杂交，只有本发明序列与此有杂交信号，而其它所有序列与此无杂交信号(见图5，图中是四个重复，每个重复含9种泌尿生殖道感染性疾病病原物共45个不同的位点和4个对照位点。杂交结果表明只有本序列有特异信号，而其它均无杂交信号)，表明该序列为脲解支原体的特异序列。
本发明可用于PCR方法或基因芯片方法进行脲解支原体的临床检测。用本发明提供的序列进行PCR扩增，根据PCR方法获得产物是否出现和大小判断是否为脲解支原体感染。也可用本序列为探针，作为基因芯片中的一个检测位点，然后用本发明中的PCR引物序列扩增临床标本，并标记后进行杂交检测。
说明书序列表SEQUENCE LISTING&110&昆明寰基生物芯片开发有限公司&120&一段脲解支原体DNA序列(2)特异性的确定及其应用&130&
&140&&141&&160&1&170&PatentIn version 3.1&210&1&211&288&212&DNA&213&脲解支原体(Ureaplasma urealyticum)&220&
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1.一段脲解支原体DNA序列(2)特异性的确定，其特征在于该序列的长度为288bp，序列及PCR引物如下taatccagct gttgcgtttg ctttattagc tatgcattta aaaatagatt taaaaactgc
60tttatatacg catctttact ctacagttgc cgcattaacg caaaactgtg tacgtgcaat 120tccattagga caagttaagg gacaaaaaat aatttatcaa cttaaacatg tttattttga 180tgatattgtt aataaagtct ttacattgga ttttaaaaca gatttttgca aaaatatacc 240aggccttgaa attgcacaaa tggaacacga ggacacacct gttcgctt
288引物序列为1.5’-taatccagctgttgcgtttg-3’2.5’-aagcgaacaggtgtgtcctc-3’
2.一段脲解支原体DNA序列(2)特异性的应用，其特征在于该序列用于诊断脲解支原体的基因芯片的探针序列，并通过上述的引物序列进行PCR扩增，标记后进行杂交检测或直接用于PCR诊断。
本发明涉及一段脲解支原体DNA序列(2)特异性的确定及其应用，属于生物医学技术领域。本发明通过基因数据库资料的搜寻和分析，确定了一段脲解支原体DNA序列(2)的特异性及PCR扩增引物，该序列长度为288bp。通过对人类生殖道脲解支原体感染标本的PCR扩增，克隆，获得该序列，测序证明与预计序列一致。再经生物信息学方法分析，基因芯片杂交分析，结果证实了该序列对于脲解支原体的特异性。本发明作为基因芯片诊断的探针及PCR扩增检测序列，用于脲解支原体的诊断。用本发明建立的临床检测技术所使用的方法具有快速、准确、操作简便、成本低等优点。
文档编号C07H21/04GK13334
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者谭德勇, 朱宝生 申请人:昆明寰基生物芯片开发有限公司病情分析： 您好，根据您的以上这些内容的描述，您的情况考虑是支原体感染的情况意见建议：你好，支原体是居于细菌和病毒之间无细胞壁，能独立生存的最小为生物，感染人体的支原体主要是人型支原体和解脲支原体最为常见，人型支原体感染引起阴道炎，宫颈炎，输卵管炎，解脲支原体引起非淋菌性尿道炎，传播途径主要是性接触传播，孕妇感染易导致流产，早产或死胎。支原体与其他病原体合并感染时，主要表现为非淋菌性尿道炎及生殖道其他炎症，诊断依据：支原体培养，血清学监测，PCR监测。治疗孕妇首选红霉素，非孕妇可选用四环素或克林霉素。新生儿感染可应用红霉素
回复于： 06:26:49
指导意见：你好,解脲支原体和人型支原体感染,可以使用阿奇霉素,必要时应该做个支原体药敏,并在医生的指导下用药进行治疗,平时注意卫生和清洁,多喝水,还有衣原体感染是可以通过性接触传播的,所以未治愈之前禁止性生活,防止交叉感染,
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脲解支原体阳性怎么办？
注重健康的人可能会经常体检，也就可能听说过脲解支原体阳性，第一次听说脲解支原体阳性的人，总是会很害怕，想知道脲解支原体阳性怎么办？会不会很严重？这都是由于对于脲解支原体阳性不了解造成的，我们就来介绍一下脲解支原体阳性怎么办。
脲解支原体阳性一般情况下没有症状，当人体下降时，就会有症状表现出来，如痒，白带增多，小便刺痛等。
脲解支原体阳性治疗必须权衡利弊，慎重进行，不可过于积极。对脲解支原体感染者配偶或性伴的治疗也同样要慎重，关键是要针对可能合并存在的其它性病病原体感染。有许多脲解支原体感染者，长期使用抗生素治疗，但脲解支原体检查依然阳性，而且还出现了许多新的不适。究其原因，极为复杂，脲解支原体耐药、检测错误或试剂不过关、二重感染、心理因素等均可能存在其中。
脲解支原体生长最适宜的pH值为pH6.0～6.5，生殖道的弱酸性环境能保持阴道的自洁功能，正常人为3.7-4.5，因此用Ph4弱酸配方的女性护理液除了适合日常的清洁保养外，治病期间使用弱酸配方的女性护理液对脲解支原体的生长繁殖会有抑制作用。外出如厕时要用女性卫生湿巾拭干外阴，保持外阴干燥，以抑制脲解支原体的生长。
必要时，可采用四环素类药物、大环内酯类药物和喹诺酮类药物及大观霉素、克林霉素、克拉霉素等治疗生殖道脲解支原体感染，疗程为1～2周。
综上所述，脲解支原体阳性并不一定需要特别去治疗，因此对健康十分关注的人，建议也要放松心情，不要过于焦虑，古语有云“水至清则无鱼”，健康也是如此，过度治疗并不见得就是好事，只要不影响正常的生活和身体健康，则不必过于着急和担心。
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微信扫一扫病情分析：
你好！解脲脲原体阳性，如果没有症状，可以不用治疗
指导意见：
除非要怀小孩，就需要治疗到阴性。如果没有怀小孩的打算，又没有症状，就不必治疗
患者追问你好，解脲脲原体阳性一般会有什么样的症状呢？医生回复：解脲脲原体阳性一般情况下没有症状，当人体抵抗力下降时，就会有症状表现出来如痒，白带增多，小便刺痛等。你有霉菌阴道炎需要及时用抗霉菌的药物治疗，强力霉素、美满霉素、阿齐、克拉、交沙对霉菌是没有效果的
病情分析：
你好应先治疗霉菌性阴道炎，现在不能使用抗生素，可以口服制霉菌素片，同时阴道塞一片每天，2个疗程后复查。
指导意见：
治疗好了霉菌再来针对支原体治疗，这样两种才能痊愈。
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