GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位--《吉林大学学报(医学版)》2011年06期
GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位
【摘要】：目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布。结果:重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,得到大小分别为4 700和312bp的条带,与预期结果一致。测序结果显示,GFP在N端,是阅读框正确的SUMO-3的基因序列。在LNCaP细胞中过表达GFP-SUMO-3融合蛋白,Western blotting得到相对分子质量为39 000的蛋白表达条带,与GFP-SUMO-3大小相符。荧光显微镜观察,转染重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3的细胞中呈绿色荧光,主要在细胞核内表达,与DAPI重合。结论:成功构建重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3,并表达代绿色荧光蛋白的SUMO-3融合蛋白,鉴定出SUMO-3在LNCaP细胞中的核定位性。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：Q78【正文快照】：
蛋白质的翻译后修饰是基因表达调控的重要环节,包括磷酸化、糖基化、甲基化及泛素化等形式。类泛素化修饰是近年来新发现的一种蛋白质的翻译后修饰方式,在细胞中具有广泛的作用。类泛素蛋白的结构与泛素类似,类泛素蛋白同样通过共价键与靶蛋白的赖氨酸残基结合,但与泛素化介
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孟　莉,韩保光,陈　坤,宋晓国,张贺秋,凌世淦,马贤凯;[J];军事医学科学院院刊;1999年03期
梁瑞霞;涂智杰;王健;张惠;姜飞;庞博;郑斌;李素萍;施庆国;黄翠芬;周建光;;[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年11期
智庆文;徐莉;齐秀丽;刘敏;;[J];军事医学科学院院刊;2009年01期
许婉宁!100045,丁宗一!100045,杜丽蓉!100045,唐建国;[J];中华儿科杂志;2000年06期
邱红玉,胡志红,刘岚,吴东,王华林,邓菲,孙永玉;[J];中华传染病杂志;2004年05期
李邦印;孙卫国;程小星;孙昌文;熊志红;王仲元;王金河;苏锐;;[J];中国防痨杂志;2010年11期
佟玉品,詹美云,鲁健,白玉,毕胜利;[J];中华实验和临床病毒学杂志;2002年01期
顾琪,俞吉安,张月丽,施泓,汪家愉;[J];老年医学与保健;2003年03期
姜安丽,王咏梅,张建业,胡晓燕,贺美兰,刘志芳;[J];山东大学学报(医学版);2004年03期
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姜安丽;张建业;Charles Y胡晓燕;王咏梅;刘志芳;贺美兰;;[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
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;[N];金融时报;2000年
高国起;[N];中国医药报;2001年
李大庆;[N];科技日报;2010年
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王辉清;[D];第二军医大学;2009年
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王健;[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
孙传玉;[D];复旦大学;2011年
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张慧娜;[D];山东大学;2005年
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韦华;[D];第四军医大学;2007年
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14-3-3蛋白对其他功能蛋白亚细胞定位的调控作用1――蛋​白​是​所​有​真​核​细​胞​均​表​达​的​一​组​相​对​分​子​质​量​为​(8​～3​)​×0​^的​酸​性​蛋​白​,​该​蛋​白​家​族​成​员​的​氨​基​酸​序​列​及​功​能​等​均​具​有​高​度​保​守​性​。​已​在​哺​乳​动​物​的​细​胞​中​发​现​分​别​由​不​同​基​因​编​码​的种4​――蛋​白​亚​型​(​β​、​γ​、​ε​、​δ​、​ξ​、​τ​、​η​)​,​它​们​主​要​存​在​于​细​胞​质​中​,​可​自​行​组​装​成​纯​合​型​或​杂​合​型​二​聚​体​。4​――蛋​白​能​与0多​种​磷​酸​化​功​能​蛋​白​结​合​,​通​过​影​响​这​些​靶​蛋​白​的​亚
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人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位
【摘要】：目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板,PCR扩增出RACK1序列,分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞),转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达,Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况,免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。Western blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达,考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达,免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达,在COS7细胞的胞质、胞核均有分布,为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R3416【正文快照】：
有活性的蛋白激酶C受体(repector for activatedC kinase,RACK1)是一种分子量为36 ku的G蛋白β亚单位的同源物,是WD-40蛋白家族中的一个成员。编码基因定位于5q35.3,是RACKS家族中第一个被识别的成员[1],并且RACK1蛋白从衣藻到人类都是保守的。后来因为其结构与哺乳动物G蛋白
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亚细胞定位时,目的基因的蛋白和GFP融合？用去除终止密码子吗？怎么去除?融合载体和表达载体有什么不同的？
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亚细胞定位时，GFP蛋白是指示蛋白，你的目的蛋白和GFP蛋白融合到一起，显示荧光的部位便是你目的蛋白定位的部位，所以要保证两个蛋白融合为一条肽链，那么就一定要去掉目的蛋白的终止子，否则使翻译提前终止，不能使它们连接为一条肽链。去掉的方法就是设计PCR引物的时候引物不要包括终止密码子即可。融合载体也是表达载体的一种，只是载体上面有自带的某些报告基因，如GFP，GUS等。如还有疑问，可以继续提问。
谢谢你!在设计PCR引物时，不包括终止密码子，那要是因为引物的设计问题，去掉在终止密码子前的几个氨基酸对应的碱基，会影响定位吗？
不会，因为影响蛋白质定位的为信号肽、导肽、核定位信号等，这些序列一般位于蛋白质N端，即ATG翻译起始的那端。
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