蛋白质芯片技术定量检测血清铁蛋白和可溶性转铁蛋白受体方法的研究--《中国疾病预防控制中心》2011年博士论文
蛋白质芯片技术定量检测血清铁蛋白和可溶性转铁蛋白受体方法的研究
【摘要】：目的建立一个利用蛋白质芯片技术同时检测血样铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体的检测方法,并对此检测方法的应用进行评价。
方法以Western Blot印迹技术对所选抗原SF、sTfR的抗原性、抗原与抗体特异性结合能力进行验证。以酶联免疫技术对所选抗体定量检测目标蛋白进行抗体浓度确定、灵敏度确定、线性范围评价、标准曲线建立、及精密度准确度评价。利用所选抗体,进行蛋白质芯片夹心技术定量检测目标蛋白的固定探针选择、点样方式选择、点样一致性比较、抗体特异性交叉反应、固定探针与检测抗体浓度优化、封闭时间比较、封闭剂与二抗优化、灵敏度分析、线性范围评价与标准曲线建立、可报告范围确定、精密度与准确度确定及干扰性评价、方法稳定性评价、检测时效评价等研究。
结果Western Blot实验结果证明所选抗原具有稳定的抗原性,所选抗体具有与目标抗原特异性结合的能力,能够用于进一步的方法建立。酶联免疫实验初步建立了对两种目标蛋白进行定量检测的技术方法,为完成蛋白芯片检测方法奠定了基础。蛋白质芯片检测SF、sTfR的检测方法最终选用鼠抗做为固定探针、以接触式点样为点样方式、选取前40点为预点样区段、40—200点为点样一致性区段、交叉反应实验结果显示不同抗体与不同抗原之间不存在交叉反应；SF固定探针与检测抗体的浓度确定为0.5 mg/ml与5μg/ml, sTfR固定探针与检测抗体的浓度确定为0.5 mg/ml与0.36μg/不同封闭时间对检测结果不产生有统计学差异的影响；选择以3%BSA为封闭剂、以GE公司的Cy3标记的羊抗兔IgG为二抗；SF检测低限为0.788 ng/ml、生物检测下限为2 ng/ml, sTfR的检测低限为0.446ng/ml,生物检测限为1.56 ng/m；分别选择以一项式回归方程为SF检测回归方程、以二项式回归方程为sTfR检测回归方程；方法所确定的二者的可报告范围分别是：SF可报告上限为4100 ng/ml、下限为2 ng/ml, sTfR可报告上限为5000 ng/ml、下限为1.56 ng/SF批内变异系数最大时不超过8.69%,批间变异系数最大时不超过18.38%,sTfR批内变异系数最大时不超过8.88%,批间变异系数最大时不超过12.8%；SF稀释回收率最小时为104%,加标回收率的系统比例误差最小时不超过5%,sTfR稀释回收率最小时为107.5%,加标回收率最小时不超过5%；方法学比较的配对t检验结果显示,蛋白芯片检测SF与sTfR的结果与比浊法间的差异无统计学意义,蛋白芯片法检出铁缺乏者的能力与比浊法间的差异经X2检验无统计学意义；人血清白蛋白与甘油三油酸酯对蛋白芯片检测方法不存在干扰；蛋白芯片在点样后38天之内检测浓度结果间的差异无统计学意义；在完成二抗杂交后22天之内,蛋白芯片的浓度结果间的差异无统计学意义。
结论建立了利用蛋白质芯片技术同时检测SF与sTfR的检测方法,此方法具有较好的精准度与实用性,能够满足实验室检测需要。
【关键词】：
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心【学位级别】：博士【学位授予年份】：2011【分类号】：R446.6【目录】：
英文缩略词6-7摘要7-9Abstract9-11前言11-14实验设计14-16 1、实验设计总体思路14-15 2、实验设计技术路线15 3、实验室基本质量控制15 4、方法学评价指标的选择依据15-16第一部分 血清铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体标准品 #11与其特异性抗体生物学活性鉴定16-20 1.材料与方法16-18 2.实验结果18-19 3.讨论19 4.小结19-20第二部分 血清铁蛋白ELISA检测方法的建立20-33 1.材料与方法20-27
1.1 材料20
1.2 方法20-27
1.2.1 包被抗体与检测抗体浓度选择20-21
1.2.2 灵敏度分析21-22
1.2.3 线性范围评价与标准曲线的建立22-23
1.2.4 精密度分析23-25
1.2.5 准确度分析25-26
1.2.6 统计方法26-27 2.实验结果27-32 3.讨论32 4.小结32-33第三部分 可溶性转铁蛋白受体ELISA检测方法的建立33-44 1.材料与方法33-38
1.1 材料33
1.2 方法33-38
1.2.1 包被抗体与检测抗体浓度选择33-34
1.2.2 灵敏度分析34-35
1.2.3 线性范围评价与标准曲线的建立35-36
1.2.4 精密度分析36
1.2.5 准确度分析36-37
1.2.6 统计方法37-38 2.实验结果38-43 3.讨论43 4.小结43-44第四部分 蛋白芯片技术检测血清铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体 #39方法的建立44-85 1.材料与方法44-60
1.1 材料44-45
1.2 方法45-60
1.2.1 点样探针优化45
1.2.2 点样方式优化45-46
1.2.3 点样一致性比较46
1.2.4 抗体特异性交叉反应46-47
1.2.5 固定探针与检测抗体浓度的优化47-48
1.2.6 封闭时间的比较48-49
1.2.7 封闭剂与二抗的优化49-50
1.2.8 灵敏度分析50
1.2.9 线性范围评价与标准曲线的建立50-51
1.2.10 可报告范围51-52
1.2.11 精密度分析52-53
1.2.12 准确度分析53-55
1.2.13 干扰性评价55-57
1.2.14 方法稳定性评价57
1.2.15 检测时效评价57-58
1.2.16 蛋白质芯片反应过程的质量控制58-59
1.2.17 统计方法59-60 2.实验结果60-79 3.讨论79-84 4.小结84-85结论85研究创新点85-86参考文献86-89综述89-98 参考文献95-98个人简历98-99攻读博士期间发表的学术论文99-100致谢100
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问:我最近去抽血检查的时候，检查梅毒呈阳性，结果拿到皮肤科去检查，出来的结果是疑阳性，化验的血清比例是
我最近去抽血检查的时候，检查梅毒呈阳性，结果拿到皮肤科去检查，出来的结果是疑阳性，化验的血清场沪冠轿攉计圭袭氦陋比例是1:1，到底是怎么回事，可以用什么药物把它给治疗好呢？
权威医生回答
来自辽宁省沈阳第一人民医院
你好，梅毒感染两年内都是一二期梅毒，知道感染梅毒，尽快到正规医院作规范足量的治疗，再按时复查，治愈率还是很高的。不会危及生命。超过两年为晚期梅毒，对心，脑，等全身器官都会造成损害，严重的会危及生命。
你好，7个月孕妇抽血化验梅毒不加热血清试验呈阴性,梅毒螺旋体特异性抗体检测呈阳性。...
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你好，一般手术至少查艾滋病和梅毒属于常规都要检查的。你可能是查的梅毒...
梅毒是一种性传播疾病呢，一般是由于梅毒钩端螺旋体感染导致的，可以使用青霉素之类一...
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梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性全身性传染病，一期梅毒主要表现为硬下疳，发...
这样处理样本是正确的呀，不会影响检查结果的准确性，这个你不用担心，检查的结果是什...
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