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下列技术依据DNA分子杂交原理的是①用DNA分子探针诊断疾病 ②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的杂交 ③快速灵敏的检测饮用水中病毒的含量 ④目的基因与运载体结合形成重组DNA分子
A．②③B．①③C．③④D．①④
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据魔方格专家权威分析，试题“下列技术依据DNA分子杂交原理的是①用DNA分子探针诊断疾病②B淋巴细..”主要考查你对&&基因工程的基本操作程序&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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基因工程的基本操作程序
基因工程的基本操作程序：1、目的基因的获取（1）目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因。（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。2、基因表达载体的构建（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。如图：①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。（3）基因表达载体的构建过程：3、将目的基因导入受体细胞（1）转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。（2）常用的转化方法：
（3）重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。4、目的基因的检测和表达（1）首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。（2）其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。（3）最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原--抗体杂交。 （4）有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。知识点拨：1、构建基因文库的目的为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。 2、PCR技术：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基冈的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。目的：通过指数式扩增获取大量的目的基因。 3、基因文库中不是直接保管相应基因，基因文库中的基因保存在受体菌中。 4、在基因工程的四个操作步骤中，只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对。5、原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，有利于目的基因的复制与表达，因此常用大肠杆菌等原核生物作为受俸细胞。 6、植物细胞的全能性较高，可经植物组织培养过程成为完整植物体，因此受体细胞可以是受精卵也可以是体细胞；动物基因工程中的受体细胞一般是受精卵。7、转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中，从而使受体生物获得了新的遗传特性的现象，从其变化的实质看，这种变异属于可遗传变异中的基因重组。 知识拓展：1、基因文库的构建：（1）概念①基因组文库：含有一种生物的全部基因。将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因组文库。 ②cDNA文库：只包含了一种生物的部分基因。 （2）构建过程
2、人工合成目的基因（1）反转录法：（2）人工合成目的基因3、PCR技术扩增目的基因①原理：DNA双链复制②过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
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815208776583861931938876284020流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞表面标记的研究--《广西医科大学》2007年硕士论文
流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞表面标记的研究
【摘要】：
多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是以骨髓内浆细胞恶性增生,分泌单克隆免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)或轻链(Light chain,L),并伴有正常免疫球蛋白减少以及广泛溶骨病变和(或)骨质疏松为特征的肿瘤。它常见于中、老年人,随着年龄增长,其发病率也明显升高。既往曾误认为MM是一种少见病,近年来,随着人口的老龄化和人们对此病认识及诊断水平的提高,MM病例数显著增加。目前在我国无MM的流行病学资料,但随着我国人口老龄化的发展,MM的发病率也有逐年增高的趋势,它必将对我国人口的健康构成越来越严重的威胁。骨髓细胞形态学检查是确诊MM的重要依据之一,但是MM细胞有灶性分布的特征,部分疑似病例的骨髓标本中,浆细胞比例难以达到形态学诊断标准,且部分骨髓瘤细胞与正常浆细胞形态相似,很难区别。近年来随着单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb)的应用及流式细胞术(Flow cytometry,FCM)的快速发展,流式细胞术-免疫学方法已经成为白血病诊断和分型的重要依据,它能快速、准确、客观的反映白血病细胞的生物学特性,提高了白血病的诊断水平,并能指导治疗和提示预后。但是,利用流式细胞术对MM进行免疫学分型还处于研究、探索阶段。国内对MM免疫表型研究的报道较少,且多以白血病免疫分型经典方法CD45/SSC(Side scatter,侧向角散射)设门,该设门方法易受浆细胞(Plasma cells,PCs)CD45表达变异度大和有核红细胞的影响。因此,有必要研究一种更为可靠的流式细胞学的设门方法。
本试验通过CD38/SSC设门的FCM方法,检测MM胞膜上的相关抗原分子,探讨改善MM检测的方法,为临床提供更加准确的早期诊断、治疗指导及预后判断的依据。
研究经骨髓细胞学、临床表现、影像学、血清学等指标确诊的MM患者37例,另取20例浆细胞反应性增多症(Reactive plasmacytosis,RP)患者为对照组,分别抽取骨髓液,用三色荧光流式细胞术检测骨髓瘤细胞和正常浆细胞表面的免疫表型。主要单克隆抗体有:CD19、CD56、CD13、CD138、HLA-DR、CD33、CD64、CD34、CD8、CD3、CD5、CD10、CD1a、CD14、CD40、CD4、CD25、CD20、CD7、CD45、CD49e。所得数据经SPSS13.0统计软件处理。
1、所有标本经流式细胞术CD38/SSC设门后可见到一群CD38阳性细胞,比例为0.5%～80.0%。
2、多数MM表型为CD38~+CD19~-CD56~+(89.2%),CD56的表达在初治或未缓解组明显比缓解组高,但发生髓外侵犯时反而明显降低。
3、骨髓瘤细胞CD40、CD138的表达明显高于对照组正常浆细胞的表达。
4、幼稚浆细胞/浆细胞比值与CD45~+CD49e~+细胞比例呈负相关,根据CD45~+CD49e~+细胞的比例可大致判断骨髓内浆细胞的分化程度。
1、利用CD38/SSC设门方法的流式细胞术对MM进行免疫分型,根据细胞表面抗原的异质性,可鉴别良、恶性浆细胞,为判断预后及靶向治疗提供依据。
2、以细胞表型为CD38~+CD19~-CD56~+者作为FCM法检出MM阳性,有很高的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,而且检测所需时间短,临床实用性强,有望作为MM的诊断方法和早期筛选方法,在具备流式细胞仪的大医院推广使用。
【关键词】：
【学位授予单位】：广西医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2007【分类号】：R733.3【目录】：
一、流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞表面标记的研究4-36
1、英文缩写一览表4-5
2、中文摘要5-7
3、英文摘要7-10
4、前言10-11
5、材料与方法11-15
6、结果15-23
7、讨论23-31
8、结论31-32
9、参考文献32-36
二、流式细胞术测定多发性骨髓瘤细胞表面标记的发展及意义(综述)36-47
1、MM研究的进展36-37
2、MM细胞表面主要抗原分子的研究37-41
3、流式细胞术测定MM表型的意义41-43
4、参考文献43-47
三、致谢47
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化疗后骨髓粒细胞释放过程与影响因素的研究
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官方公共微信大鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化检测--《癌变.畸变.突变》2004年03期
大鼠骨髓嗜多染红细胞微核的流式细胞仪自动化检测
【摘要】：背景与目的 :建立一种基于单激光流式细胞仪的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率自动化检测方法。材料与方法 :以环磷酰胺诱导雄性Wistar大鼠微核形成 ,采用吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色 ,分别用荧光显微镜及单激光流式细胞仪检测大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及正染红细胞微核率。结果 :以前置角散射光(FSC)和DNA荧光(FL1)作图 ,大鼠骨髓细胞被分成明显的五个细胞群———有核细胞、嗜多染红细胞、正染红细胞、含微核的嗜多染红细胞及含微核的正染红细胞 ;经环磷酰胺处理的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及正染红细胞微核率均呈现良好的剂量_反应关系及时效关系 ;人工显微镜计数结果与流式细胞仪检测结果具有良好的相关性(R=0.949 ,P0.01) ,二者的曲线拟合方程为 ^Y=1.9X(R=0.949 ,P0.01)。结论 :本研究建立了AO染色结合单激光流式细胞仪的大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率自动化检测方法
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R114【正文快照】：
基于流式细胞仪的自动化微核试验因其具有简单,客观及准确的特点而被广泛用于评价各种物理的、化学的以及生物因子的潜在的致突变效应[1]。过去已建立的微核流式细胞仪的自动化检测方法,多是双染色、双激光流式仪检测,技术要求高,仪器复杂,从而限制了这一方法的应用。本研究
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检测参与免疫应答的各种细胞（即免疫细胞）的数量和功能的方法。由于免疫系统或其他系统的疾病，或由于免疫接种或某些临床治疗措施及某些外界环境因素的影响，免疫细胞的数量或功能均可发生变化。因此，进行细胞免疫检测，对于某些疾病的诊断和发病机理研究、免疫治疗或预防接种的效果评估及环境因素对机体免疫功能的影响，都具有重要的意义。细胞免疫检测的方法很多，可根据要达到的目的和条件适当选用。 ①免疫细胞的数量检测。正常情况下，身体各部分各类免疫细胞的含量与分布保持相对稳定。任何疾病或异常原因打乱免疫细胞的新生与破损死亡两过程的平衡，即可造成这些细胞数量与分布的变化。各种原因引起的免疫细胞数量变化多数都在血液中有所反映。血液是细胞免疫检测法最常选用的样品，只有在必要时，才从骨髓或其他免疫器官取材检查。常检查的项目有：血液白细胞计数；血液中白细胞的分类计数；血中T细胞与B细胞的分类计数。
②免疫细胞的功能检测。在自然条件下，免疫细胞的功能都是在体内完成的。但在进行免疫细胞功能检查时，主要采用体外试验的方法。根据所用刺激物的性质不同，可将试验分为特异性反应功能和非特异性反应功能检测两类。淋巴细胞转化试验是淋巴细胞功能检测最基本的方法。此外还有淋巴因子产生试验；细胞介导的细胞毒试验；抗体分泌细胞的检测；嗜中性粒细胞吞噬功能的检测；嗜中性粒细胞NBT还原试验；巨噬细胞吞噬功能的测定。
③细胞免疫功能体内测定技术。如延缓型皮肤变态反应，又称迟发型超过敏反应，包括结核菌素试验、二硝基氯苯或二硝基氟苯皮肤试验。
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