肝脏是机体物质代谢的主要场所，请回答：(1)肝脏对大部分激素具有灭活和降解作用，此作用有助于机体维持____，从而保证机体正常的生命活动。(2)慢性肝病患者的肝细胞膜上的胰岛素受体数目减少，导致患者血糖浓度升高，血糖浓度升高的主要原因是____。(3)肝 脏内多种免疫细胞受神经支配，神经末梢释放的____能调节这些细胞的免疫效应。(4)下图表示利用细胞工程技术治疗肝病患者的流程图。据图回答：①图中的甲细胞应是取自____(患者父母／ 患者／患者的兄弟姐妹)的正常体细胞；早期胚胎细胞的分裂方式是____。胚胎干细胞可以分化为肝细胞的根本原因是____。②图中a、b所涉及的生物工程技术分别是____。-乐乐题库
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肝脏是机体物质代谢的主要场所，请回答：(1)肝脏对大部分激素具有灭活和降解作用，此作用有助于机体维持&&&&，从而保证机体正常的生命活动。(2)慢性肝病患者的肝细胞膜上的胰岛素受体数目减少，导致患者血糖浓度升高，血糖浓度升高的主要原因是&&&&。(3)肝 脏内多种免疫细胞受神经支配，神经末梢释放的&&&&能调节这些细胞的免疫效应。(4)下图表示利用细胞工程技术治疗肝病患者的流程图。据图回答：①图中的甲细胞应是取自&&&&(患者父母／ 患者／患者的兄弟姐妹)的正常体细胞；早期胚胎细胞的分裂方式是&&&&。胚胎干细胞可以分化为肝细胞的根本原因是&&&&。②图中a、b所涉及的生物工程技术分别是&&&&。内环境稳态&&& (2)肝细胞摄取葡萄糖减慢，肝糖原合成减少&&&&(3)神经递质
本题难度：一般
题型：解答题&|&来源：2013-天津市红桥区高三第一次模拟考试生物试卷
分析与解答
习题“肝脏是机体物质代谢的主要场所，请回答：(1)肝脏对大部分激素具有灭活和降解作用，此作用有助于机体维持____，从而保证机体正常的生命活动。(2)慢性肝病患者的肝细胞膜上的胰岛素受体数目减少，导致患者血糖浓度升高...”的分析与解答如下所示：
（1）肝脏对大部分激素具有灭活和降解作用，此作用有助于机体维持内环境稳态从而保证机体正常生命活动。（2）慢性肝病患者由于肝细胞摄取葡萄糖减慢，肝糖原合成减少，从而使得患者的肝细胞膜上的胰岛素受体数目减少，导致患者血糖浓度升高。由于血糖浓度升高使机体的细胞外液渗透压升高，从而刺激垂体释放抗利尿激素。（3）肝脏神经末梢释放神经递质能调节免疫细胞的免疫效应。（4）①图中的甲细胞应是取自患者的正常体细胞，这样可降低免疫排斥反应；早期胚胎细胞的分裂方式是有丝分裂。因为胚胎干细胞具有发育的全能性，因此胚胎干细胞可以分化为成年个体的任何一种组织细胞。②图中a、b所涉及的生物工程技术分别是核移植（细胞核移植）、早期胚胎培养。
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人体内环境的稳态与调节
与“肝脏是机体物质代谢的主要场所，请回答：(1)肝脏对大部分激素具有灭活和降解作用，此作用有助于机体维持____，从而保证机体正常的生命活动。(2)慢性肝病患者的肝细胞膜上的胰岛素受体数目减少，导致患者血糖浓度升高...”相似的题目：
下列过程发生在人体内环境中的是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& &&&& 神经递质与受体结合葡萄糖氧化分解产生丙酮酸食物中的蛋白质经消化被分解成氨基酸胰岛细胞合成胰岛素
汶川大地震中被埋在废墟下的伤员，保持内环境的稳态能加大生存机会。对内环境稳态起调节作用的机制是& &&&&消化系统和呼吸系统循环系统和泌尿系统泌尿系统和神经系统神经——体液——免疫调节
如图表示三种海蟹在其他环境条件一定时，不断改变海水盐度，它们血液浓度的变化情况(已知海水的浓度约为0.5 mol/L)，下列描述正确的是&&&&①在较低浓度的海水中才能维持内环境相对稳定的是甲②无法判断甲、乙、丙调节内环境相对稳定能力的强弱③调节内环境相对稳定能力最弱的是乙④维持内环境相对稳定能力最强的是丙① ③ ④ ① ③③ ④ ②
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3秒自动关闭窗口人胚胎干细胞定向诱导分化为肝细胞的实验研究--《中国人民解放军军事医学科学院》2008年博士论文
人胚胎干细胞定向诱导分化为肝细胞的实验研究
【摘要】：
终末期肝衰竭仍然是困扰人类健康的一类顽疾,目前,它的治疗主要依赖于原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT),但是供体的极度短缺、移植及手术本身相关的死亡、终生服用免疫抑制剂及其所致的致死性并发症等一系列问题极大地限制了这一治疗手段的广泛开展。细胞移植与生物人工肝(bioartificial liver,BAL)作为终末期肝病的替代、补充治疗方法,不仅为患者寻求合适的供肝来源争取到宝贵的时机,甚至可以帮助患者平安渡过危险期,通过肝再生而自然恢复。令人遗憾的是,细胞来源受限、数量不足以及功能欠缺等仍是制约其进一步发展的瓶颈问题。具有高度自我更新和发育全能性的人胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)在适宜的环境中可以向各种组织细胞分化,有望为生物人工肝、肝细胞移植、甚至肝组织工程等提供理想的种子细胞。然而,影响人ES细胞向肝细胞有效分化的因素及其调控机制、诱导分化效率及分化细胞的功能状态等均存在许多不确定性,ES细胞应用于临床尚有许多难以逾越的障碍。本研究探讨了诱导人ES细胞分化为具有合成、代谢、分泌及贮存等功能的肝细胞的方法,并通过遗传修饰建立稳定转染pAlb-EGFP的人ES细胞株,提供了纯化目的细胞的手段,为人ES细胞在以细胞治疗和基因治疗为基础的肝脏再生医学中的应用奠定了基础。
本研究主要包括三部分内容。
一、细胞因子联合胞外基质诱导人ES细胞向肝系细胞分化我们采用以小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)作为饲养层,并摸索了两种传代方法(机械法和胶原酶法),建立了标准的人ES细胞体外培养体系。
为进一步探讨人ES细胞肝向分化的潜能,我们在培养初期先将人ES细胞悬浮培养形成包含三胚层结构的拟胚体(embryoid body,EB),然后将其接种到预先包被有Ⅰ型胶原的培养板上,以含有地塞米松、胰岛素等的条件培养液进行肝系诱导。形态学、细胞表型变化及功能检测等多方面结果表明,诱导后的部分细胞基本符合肝细胞的特征,证明人ES细胞具有向肝细胞样细胞分化的潜能。
二、分阶段富集联合转基因基质细胞共培养诱导人ES细胞向肝脏细胞分化
在前述试验研究中,我们证实了人ES细胞能够在特定环境中向肝细胞样细胞分化,但事实上分化的结果仍存在一定争议。因为与成体干细胞有所不同,ES细胞具有更为特异的全能分化潜能,可以向内、中、外三个胚层乃至胚外组织进行分化,而脏壁内胚层(visceral endoderm)可以表达许多与肝细胞相似的基因,但它只能够参与形成胚外卵黄囊结构,并不能分化发育成肝脏或胰脏等实质性器官,这为获得真正意义上的肝细胞造成障碍。为此,本研究根据人ES细胞全能分化的特点及肝发育机制,设计了阶段性富集联合转基因基质细胞共培养的新策略。首先形成包含了外层的原始内胚层和内层的原始外胚层的早期发育的简单EB,在低血清的条件下,以高浓度的activin A诱导其向定型内胚层的分化。RT-PCR和免疫荧光结果显示,activin A作用3d的细胞高表达(80%)内胚层标志SOX17,而同时脏壁内胚层的标志α-甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)表达缺失,证明所获细胞为定型内胚层细胞。为进一步探讨定型内胚层细胞向肝细胞分化的潜能与机制,我们利用转基因基质细胞共培养系统模拟肝发育时的微环境。共培养11d后,形态学、细胞表型变化及功能检测等多方面结果表明,定型内胚层细胞可以在bFGF和胎肝基质细胞共同创造的环境中向肝系分化,并在HGF、OSM和Dex的作用下进一步分化成熟,这一研究为获得大量真正意义上的肝细胞开创了新的出路。
三、建立pAlb-EGFP遗传修饰的人ES细胞株
如前所述,新的诱导策略排除了相似细胞的干扰,但所得细胞仍为一混合体,其致瘤、致癌等不可预知的风险不容忽视。在本部分研究中,我们拟通过基因修饰人ES细胞,从而为今后的应用研究提供纯化目的细胞的手段。白蛋白(albumin,Alb)在肝脏发育早期及成体肝脏中均有所表达,是识别肝细胞的一个较为特异的标志。我们设计将含Alb启动子调控增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的质粒pAlb-EGFP转入人ES细胞,由于该载体中含有一段neo抗性基因,所以可以通过G418条件培养进行抗性筛选。通过条件培养基杀灭试验我们首先确定了G418筛选的最佳浓度(200μg/ml)。在此基础上,我们利用EXGen 500转染试剂进行转染并实施抗性筛选,PCR结果证实筛选到的阳性克隆内确实含有Alb-EGFP这段序列,证实为稳定转染,这一研究可能为日后的应用增添新的纯化肝细胞的工具。
人ES细胞向成熟的、有生理功能的肝细胞分化,为肝脏疾病的细胞治疗提供了新的选择。对于我们这样一个病毒性肝炎及各种原因导致的终末期肝病高发的国家更具有特殊的意义。具有发育全能性的人ES细胞将为生物人工肝、肝(干/祖)细胞移植和以肝(干/祖)细胞为载体的基因转移治疗等提供优良的种子细胞,借助核移植技术和现有的ES细胞库等资源有望在肝脏疾病的治疗中发挥更大的作用,而现代生物科学及其相关技术在该领域中的应用势必将加快其在临床移植修复治疗中的应用进程。
【关键词】：
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院【学位级别】：博士【学位授予年份】：2008【分类号】：R329【目录】：
缩略词表(Abbreviations)4-5
Abstract7-10
第一部分 人胚胎干细胞培养及其肝向分化潜能的初步探究13-32
第一节 人胚胎干细胞体外培养体系的建立14-22
材料与方法15-20
第二节 细胞因子联合胞外基质诱导人胚胎干细胞向肝系细胞分化22-30
材料与方法22-26
第二部分 分阶段富集联合转基因基质细胞共培养诱导人胚胎干细胞向肝脏细胞分化32-59
第一节 定型内胚层细胞的定向分化33-36
材料与方法33-34
第二节 hFLSCs/bFGF 饲养层的制备及其鉴定36-50
材料与方法36-44
第三节 hFLSCs/bFGF 饲养层诱导定型内胚层细胞向肝系分化50-56
材料与方法50-52
第三部分 建立pAlb-EGFP 遗传修饰的人胚胎干细胞株59-71
材料与方法59-65
参考文献72-76
主要试剂76-78
主要仪器78-79
个人简历79-81
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【参考文献】
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干细胞移植能治疗肝硬化吗
干细胞移植能治疗肝硬化吗?一般来说肝硬化病人，抵抗力差，会容易发生细菌感染，导致高烧。自身肝细胞移植术，简单说就是用自体的骨髓干细胞定向培养成肝干细胞，回输到人体内，以此来使肝细胞的数量增多，改善肝脏功能，提高病人的生存质量，延长生命。但是对于干细胞治疗肝硬化，肝功能失代偿，仍处于实验阶段，其疗效尚无明确,因此对于患者来说是具有一定风险的。
1.病因治疗：
肝硬化(liver患者在治疗时，应该依据疾病诱发的原因来采取针对性的治疗。病毒性肝炎所致的肝硬化(liver患者应该积极采取抗病毒治疗，可有效的改善肝功能，有利于病情好转。酒精性肝病及药物性肝病引起的肝硬化(liver，应中止饮酒及停用中毒药物。
2.积极防治并发症：
防止病情进一步加重;失代偿期除了保肝、恢复肝功能外，还要积极防治并发症。肝硬化(liver失代偿期并发症较多，可导致严重后果。对于食管胃底静脉曲张、腹水、肝性脑病、并发感染等并发症，根据病人的具体情况，选择行之有效的方法。
3.肝硬化(liver早期积极治疗是非常关键的，当肝脏病变尚处于纤维化阶段，通过积极治疗，病情可以肝病或不再进展。尤其是在治疗上要根据不同年龄、不同性别、不同体质、不同症状和病情发展的不同阶段，辨证论治，灵活用药。切忌所有病人都用一种药，一种药不能治百病。
对于肝硬化晚期患者最应该注意的不仅需要配合积极有效的治疗，还需要拥有一颗乐观的心态，这样才能对病情的恢复更有帮助，如果您还有其他的疑问请及时的联系本院的专家，祝早日康复。
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白　洁 肝病专家　中华医学会疑难与重症肝病专家委员会委员，专注肝病治疗30多年，擅长治疗乙肝、肝硬化、肝腹水、丙肝等各种肝部疾病！
陈昌伟 肝病专家中国人体原位肝移植第一人，近年来致力于肝脏疾病的生物免疫治疗研究，特别擅长治疗肝硬化、肝部肿瘤的严重性肝部疾病！
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