西安看吗,那家医院能看高危亚型hpv68 问专家?

我科开展人乳头瘤病毒核酸检测项目已经一年多了,由于初次开展此项目,技术与诊断方面不太成熟,未能及时做相关方面的介绍,现在经过一年多的沉淀,科室内技术人员检测了近五千人的样本,技术与诊断方面已相当成熟,总结各项经验,在此做一个较为细致的介绍。

人乳头瘤病毒,简称HPV,是一种DNA病毒,由病毒蛋白衣壳和核心单拷贝的病毒基因组DNA构成。可引起人类皮肤及粘膜的增生性病变,主要通过性生活或密切接触传播。HPV目前约有200种型别,根据致癌潜力,可分为高危型与低危型。高危型HPV持续感染可引发宫颈、外阴、阴茎等部位的癌前病变,低危型HPV持续感染可引起皮肤疣、生殖器疣、乳头状瘤等疾病。临床上,通过HPV核酸检测结合宫颈细胞检测可筛查高风险的宫颈细胞病变及宫颈癌。

目前我科制定标准化的人乳头瘤病毒核酸检测操作流程,规范从样本采集、运输、接收保存、检测到发布报告的全过程、确保检测结果的准确、可靠。现可检测24种基因型(6,11,16,18,31,33,35,39,42,43,44,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,81,82,83)人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)的核酸。

1.用于体外定性检测女性宫颈脱落上皮细胞样本中24种基因型,可鉴别病毒基因亚型。

2.采用PCR体外扩增和DNA反向斑点杂交法相结合的DNA芯片技术,主要用于对人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况进行定性检测并对核酸进行基因分型,用于临床HPV感染的辅助诊断。

3.可检测24种HPV基因型,并直接提示感染HPV的基因型,包括:

采用PCR体外扩增和DNA反向斑点杂交法相结合的DNA芯片技术,检测24种人乳头瘤病毒核酸亚型。当待测样本加入到HPV检测芯片加样孔后,在微泵的驱动下,分别进行目的DNA的提取、针对目的DNA进行的PCR扩增和反向斑点杂交。根据HPV特定基因设计的特异性引物,可以扩增出24种HPV基因型的目的片段,仪器将扩增产物转移到芯片的检测区,在检测区杂交膜上包被有HPV24种亚型的检测探针,如果扩增产物中含有目的基因则能够被芯片上的探针捕获,再加入酶液和显色液后在杂交膜的特定位置出现蓝色的斑点,可判断出感染人乳头瘤病毒核酸及感染的亚型,如果不含目的基因,则在特定的位置不会出现蓝色斑点。(基因芯片法:指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者大量DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面,然后与标记的样本杂交,每一个探针对应一个点,通过对杂交信号的检测分析,得出样本的遗传信息。)

1.样本类型:直接采集的人体子宫颈口脱落细胞。

2.样本采集:以专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈,用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去,取出宫颈刷置于宫颈口,单方向旋转4~5周以获得足量的上皮细胞样本,然后将宫颈刷头部放入洗脱管中,沿刷柄折痕处将宫颈柄刷折断,旋紧洗脱管盖,做好样本标识,并保持洗脱管直立放置。

(1)、样本保存:样本一经采集,应尽快送检;样本室温保存不超过2小时,2~8℃保存不超过 1天,-20℃保存不超过3个月,避免反复冻融。

(2)、样本运输:冰壶或泡沫箱加冰袋密封运输,在途时限不超过48小时。

采用微量点样技术,将各位点检测探针与各种质控探针固定在杂交膜上,其中24种亚型HPV检测探针、空白对照、阴性对照各1个点,内参质控探针有3个不同浓度,每个浓度各1个点,显色质控探针重复3个点。探针排布图如图所示,排布说明见下表。

HPV 6亚型检测探针

1)、阳性结果判定:杂交膜的SP点(3个)均有阳性斑点,内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点,且有HPV探针阳性斑点出现,提示样本为该探针对应亚型阳性;

2)、阴性结果判定:杂交膜的SP点(3个)均有阳性斑点,内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点,且无HPV探针阳性斑点出现,提示该样本HPV为阴性。

3)、其他可能结果说明:若内参质控点(3个)的GB-50点有阳性斑点,无论GB-20和GB-2点有或没有阳性斑点,均提示内参扩增成功,不影响结果判定;若杂交膜的空白对照点或阴性对照点阳性,提示实验过程可能发生污染,实验不成功,建议重复试验;若杂交膜的SP点(3个)无阳性斑点,提示显色失败,实验不成功,建议重复试验;若杂交膜的SP点(3个)有阳性斑点,但内参质控点的GB-50点无阳性斑点,提示样本内参杂交失败,需对该样本做重复试验,若重复试验GB-50点仍无阳性,则判定样本采集不符合要求。

  1. 检测结果仅供临床参考,对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
  2. 不合理的样本采集、转运及处理、样本中病毒滴度过低均有可能导致假阴性结果。
  3. 未经验证的其他干扰可能会导致错误的结果。

本检测结果为阳性时,仅提示感染HPV,可进一步进行宫颈细胞学检查和阴道镜检查。本检测结果为阴性时,宫颈癌的患病率较低。

最后,非常感谢各科室老师给予的支持,此项目的开展加强了科室之间的交流,促进我科室积极探索,不断提升医疗质量和技术水平,更好的为患者提供优质、安全、高效的医疗服务,推进医院高质量发展。

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