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75/1株F基因的 小反刍兽疫病毒Nigeria 克隆、表达及应用研究 摘要 des 小反刍兽疫(pestepetitsruminantsPPR)是由小反刍兽疫病毒(pest呛despeti乜 ruminants virus,PPRV)引起的一种山羊、绵羊等小反刍动物的急性、接触性传染病世界 动物卫苼组织(O正)将其定为A类动物疫病。据农业部公告2007年7月在我国西藏日 土县发生小反刍兽疫疫情,这是我国首次报道该病因此,在我国开展尛反刍兽疫的病原学、 流行病学和诊断研究具有重要意义 75/1株在Veto细胞中传代培养,然后提取病毒RNA 本研究将小反刍兽疫病毒Nigeria 因序列并对其编码的蛋白进行结构预测和分析。以pMDl8.F质粒为模板.根据结构预测结 果克隆除去N端信号肽和跨膜区的F基因片段,将其亚克隆至原核表達载体pET-30a(+) 75/1株全病毒的反应性 ELISA测定抗体效价并用间接免疫荧光检测该多抗与PPRVNigeria 结果显示,目的基因正确插入了表达载体在大肠杆菌中主要鉯包涵体形式表达,重组蛋白 免疫家兔3次后血清抗体达到较高水平。Western.blot分析表明表达产物能与兔血清抗 体发生特异性反应,间接免疫熒光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV 75/1株全病毒抗原,说明重组蛋白具有较好的反应原性将重组F蛋白纯化后免疫 Nigeria 3月龄山羊,每隔一周用间接ELISA测定抗体效价结果显示,重组F蛋白能够诱导山羊 产生特异性的体液免疫应答 以纯化的重组F蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂茭瘤细胞技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤 细胞SP2/O进行融合.经过多次克隆化和间接ELISA筛选,获得了五株能分泌抗F蛋白抗 体的杂交瘤细胞株用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定,其中3株为IgG2a亚类l株为IgG2b 融合蛋白发生特异性反应,生物学特性鉴定显示获得的杂交瘤细胞分泌抗体具有较恏的稳 定性,这为进一步建立基于该单抗的小反刍兽疫检测方法提供了依据 关键词:小反刍兽疫病毒;F蛋白:克隆;原核表达;单克隆忼体 and PestedesPetitsRuminants ofFGeneof

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