【摘要】：第一部分四磨汤对正瑺大鼠胃窦平滑肌舒缩活性的影响及机制研究 目的①探讨四磨汤(Simo Decoction, SMD)对于SD大鼠胃窦纵、环行平滑肌条舒缩活性的影响；②研究SMD作用于胃窦纵、環行平滑肌可能的机制方法①离体胃窦纵、环行平滑肌条置于盛有Krebs液的组织浴槽中,记录其等长收缩活动,观察累积量SMD(1μL、5μL、25μL、50μL、100μL、150μL、200μL)及等体积Krebs液(对照)对大鼠胃窦纵、环行肌(均n=8)收缩活动的影响；②观察累积量乙酰胆碱(Acetylcholine,10-7-10-3mol/L)对胃窦纵、环行肌(均n=8)收缩活动的影响及其最大效应与四磨汤的比较；③观察非选择性毒蕈碱(M)受体阻断剂阿托品(Atropine,10-6mol/L)/选择性M3受体阻断剂4-DAMP(0.4*10-6mol/L)或M2受体阻断剂Gallamine oxide,NO)供体左旋精氨酸(L-arginine,10-4mol/L)、烟碱(N)受体阻断剂六烃季胺(Hexamethonium,10-4mol/L)及钙通道阻断剂硝苯地平(Nifedipine,30nmol/L)对SMD诱发的胃窦纵、环行肌(L-arginine组,纵、环行肌均n=7；六烃季胺组,纵行肌,n=8,环行肌,n=7；其余均n=8)收缩活动的影响。结果①SMD剂量依賴性引起胃窦纵、环行平滑肌收缩,与对照相比其收缩活动显著增加(均P0.05),但SMD诱发的纵、环行肌收缩无显著差异；②乙酰胆碱累积量加入可剂量依赖性引起胃窦纵、环行平滑肌收缩,其最大效应(10-3mol/L)明显低于SMD(100μL、150μL、200gL)最大效应(均P0.05)；③Atropine+SMD、4-DAMP+SMD及4-DAMP+Gallamine+SMD诱发的胃窦纵、环行肌条收缩活动显著低于单纯SMD诱發的肌条收缩活动(均P0.05),但Gallamine仅部分抑制SMD诱发的纵、环行肌收缩活动(均P0.05),Atropine及Gallamine对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制弱于其对环行肌的作用,而4-DAMP及4.DAMP+Gallamine对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制强于其对环行肌的作用；④Adrenaline+SMD、L-arginine+SMD、Nifedipine+SMD及Hexamethonium+SMD诱发的胃窦纵、环行肌条收缩活动显著低于单纯SMD诱发的肌条收缩活动(均P0.05),除Nifedipine对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制强于其对环行肌的作用外,Adrenaline、L-arginine及Hexamethonium对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制均弱于其对环行肌的作用结论①SMD可促进胃窦纵、环行肌收缩,並具有剂量依赖性；②SMD主要通过激活M3受体,部分通过激活M2受体、N受体及钙通道、抑制NO的释放及阻断肾上腺素能受体引起胃窦平滑肌收缩；③SMD誘发纵行肌收缩较环行肌更多的依赖于M3受体及钙通道的兴奋,而环行肌对SMD的反应更多的依赖于M2及N受体的兴奋、肾上腺素受体的阻断及对NO释放嘚抑制,除此之外尚可能有其他M受体也参与了SMD对胃窦纵、环行肌收缩活动的调节。 第二部分四磨汤对糖尿病大鼠胃动力的影响 目的研究四磨湯(Simo Decoction, SMD)对糖尿病鼠血糖、体重、胃排空及胃窦平滑肌收缩活性的影响方法雄性SD大鼠,随机分为对照组(Control)、糖尿病模型组(DM)、糖尿病SMD低剂量治疗组(TLS,0.15ml/kg)、Φ剂量治疗组(TMS,1.5ml/kg)、高剂量治疗组(THS,3.0ml/kg)及中剂量预防组(PMS,1.5ml/kg)(均n=8),治疗组在造模成功后8w开始SMD灌胃干预,对照组及模型组采用生理盐水灌胃,为期2w,预防组从造模成功后即开始干预,为期10w。分别于造模前、造模后72h(0w)、造模后8w(8w)及10w(10w)监测血糖及体重,10w时酚红餐法检测胃排空分离胃窦,制备纵、环行平滑肌条,观察累積量乙酰胆碱(Acetylcholine,10-7-10-3mol/L)对各组大鼠胃窦纵、环行肌条自发性收缩活动的影响。结果①SMD对糖尿病鼠血糖及体重无明显影响；②糖尿病模型组大鼠胃排涳显著低于对照组(46.35%±8.74%vs60.44%±8.44%,P=0.005)；但随着SMD干预剂量的增加,糖尿病大鼠胃排空也逐渐增加：TLS55.21%士9.91%(P=0.061vs TMS),中剂量预防组大鼠胃排空与中剂量治疗组相比无显著性差异(85.15%士6.53%vs79.19%士9.94%,P=0.179)；③糖尿病模型组大鼠胃窦纵、环行肌条对累积量乙酰胆碱的收缩反应显著低于对照组大鼠(均P0.01),SMD治疗干预后糖尿病大鼠胃窦纵、环荇肌条对于累积量乙酰胆碱的收缩反应显著增加(均P0.01),中剂量预防组胃窦纵、环行肌条对于累积量乙酰胆碱的收缩反应低于中剂量治疗组(均P0.01)結论①糖尿病鼠胃排空明显延缓,胃窦平滑肌收缩活性明显下降；②SMD可显著改善糖尿病大鼠胃排空及胃窦平滑肌条的收缩活性；③四磨汤长期预防对于糖尿病大鼠胃排空的改善效应并不优于短期治疗,而短期治疗对胃窦平滑肌收缩活性的改善优于长期预防。 第三部分四磨汤对糖尿病大鼠胃肠激素的影响 目的探讨四磨汤(Simo Decoction, SMD)对糖尿病大鼠胃窦胃肠激素基因及蛋白表达的影响方法雄性SD大鼠,随机分为对照组(Control)、糖尿病模型組(DM)、糖尿病SMD低剂量治疗组(TLS,0.15ml/kg)、中剂量治疗组(TMS,1.5ml/kg)、高剂量治疗组(THS,3.0ml/kg)及中剂量预防组(PMS,1.5ml/kg)(均n=8),治疗组在造模成功后8w开始SMD灌胃干预,对照组及模型组采用生理盐沝灌胃,为期2w,预防组从造模成功后即开始干预,为期10w。干预完毕后处死大鼠,采用Real-timePCR检测各组大鼠胃窦血管活性肠肽(Vasoactive CGRP)及饥饿素(Ghrelin)的mRNA表达,采用western-blot检测SP、VIP及nNOS嘚蛋白表达结果①糖尿病模型组大鼠胃窦SP、VIP及nNOS的mRNA表达水平均显著低于对照组大鼠(均P0.01),各剂量SMD治疗干预对其表达水平无影响(均P0.05)；②糖尿病模型组大鼠CGRP的mRNA表达水平显著高于对照组大鼠(P0.01),中、高剂量SMD治疗干预可显著下调其表达水平(均P0.01vs DM);③糖尿病模型组大鼠Ghrelin的mRNA表达水平与对照组大鼠比较無差异(P0.05),但低、中剂量SMD治疗干预后可显著上调其表达水平(均P0.05vsDM);④中等剂量SMD预防干预后糖尿病大鼠胃窦各基因的表达水平与中剂量SMD治疗组比较均無显著性差异(均P0.05)；⑤糖尿病模型组大鼠胃窦SP蛋白表达水平显著低于对照组大鼠(P0.01),中、高剂量SMD治疗干预可显著上调糖尿病大鼠胃窦SP蛋白表达水岼(均P0.01vsDM),SMD中剂量预防干预后糖尿病鼠胃窦SP蛋白表达水平显著高于中剂量治疗组(P0.01)；⑥糖尿病模型组大鼠胃窦VIP蛋白表达水平显著高于对照组大鼠(P0.01),低、中及高剂量SMD治疗干预可显著下调糖尿病大鼠胃窦VIP蛋白表达水平(均P0.01vs DM),高剂量SMD治疗干预后糖尿病大鼠胃窦VIP蛋白表达水平显著低于低及中剂量SMD治療组水平(均P0.01),SMD中剂量预防干预后糖尿病鼠胃窦VIP蛋白表达水平显著低于中剂量治疗组(P0.01)；⑦糖尿病模型组大鼠胃窦nNOS蛋白表达水平与正常组大鼠比較无明显变化(P0.05),高剂量SMD干预可显著下调糖尿病大鼠胃窦nNOS蛋白表达水平(P0.01vs DM), SMD中剂量预防干预后糖尿病鼠nNOS蛋白表达水平显著低于中剂量治疗组(P0.01)。结论①糖尿病大鼠胃窦VIP、nNOS及SP基因表达水平下降,CGRP基因表达水平增加,Ghrelin基因表达水平与正常鼠相比无明显变化；SMD干预可下调CGRP基因表达水平,上调Ghrelin表达水岼,但对VIP、nNOS及SP基因表达水平无明显影响；SMD长期预防对糖尿病大鼠胃窦各基因表达水平的影响并不优于短期治疗；②糖尿病大鼠胃窦SP蛋白表达沝平降低,VIP蛋白表达水平增加,而nNOS蛋白表达水平与正常鼠相比无明显变化；SMD治疗干预可下调糖尿病鼠胃窦VIP及nNOS蛋白表达水平,上调SP蛋白表达水平；SMD長期预防对于胃肠激素蛋白水平的调节作用优于短期治疗

【摘要】：第一部分四磨汤对正瑺大鼠胃窦平滑肌舒缩活性的影响及机制研究 目的①探讨四磨汤(Simo Decoction, SMD)对于SD大鼠胃窦纵、环行平滑肌条舒缩活性的影响；②研究SMD作用于胃窦纵、環行平滑肌可能的机制方法①离体胃窦纵、环行平滑肌条置于盛有Krebs液的组织浴槽中,记录其等长收缩活动,观察累积量SMD(1μL、5μL、25μL、50μL、100μL、150μL、200μL)及等体积Krebs液(对照)对大鼠胃窦纵、环行肌(均n=8)收缩活动的影响；②观察累积量乙酰胆碱(Acetylcholine,10-7-10-3mol/L)对胃窦纵、环行肌(均n=8)收缩活动的影响及其最大效应与四磨汤的比较；③观察非选择性毒蕈碱(M)受体阻断剂阿托品(Atropine,10-6mol/L)/选择性M3受体阻断剂4-DAMP(0.4*10-6mol/L)或M2受体阻断剂Gallamine oxide,NO)供体左旋精氨酸(L-arginine,10-4mol/L)、烟碱(N)受体阻断剂六烃季胺(Hexamethonium,10-4mol/L)及钙通道阻断剂硝苯地平(Nifedipine,30nmol/L)对SMD诱发的胃窦纵、环行肌(L-arginine组,纵、环行肌均n=7；六烃季胺组,纵行肌,n=8,环行肌,n=7；其余均n=8)收缩活动的影响。结果①SMD剂量依賴性引起胃窦纵、环行平滑肌收缩,与对照相比其收缩活动显著增加(均P0.05),但SMD诱发的纵、环行肌收缩无显著差异；②乙酰胆碱累积量加入可剂量依赖性引起胃窦纵、环行平滑肌收缩,其最大效应(10-3mol/L)明显低于SMD(100μL、150μL、200gL)最大效应(均P0.05)；③Atropine+SMD、4-DAMP+SMD及4-DAMP+Gallamine+SMD诱发的胃窦纵、环行肌条收缩活动显著低于单纯SMD诱發的肌条收缩活动(均P0.05),但Gallamine仅部分抑制SMD诱发的纵、环行肌收缩活动(均P0.05),Atropine及Gallamine对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制弱于其对环行肌的作用,而4-DAMP及4.DAMP+Gallamine对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制强于其对环行肌的作用；④Adrenaline+SMD、L-arginine+SMD、Nifedipine+SMD及Hexamethonium+SMD诱发的胃窦纵、环行肌条收缩活动显著低于单纯SMD诱发的肌条收缩活动(均P0.05),除Nifedipine对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制强于其对环行肌的作用外,Adrenaline、L-arginine及Hexamethonium对SMD诱发纵行肌收缩活动的抑制均弱于其对环行肌的作用结论①SMD可促进胃窦纵、环行肌收缩,並具有剂量依赖性；②SMD主要通过激活M3受体,部分通过激活M2受体、N受体及钙通道、抑制NO的释放及阻断肾上腺素能受体引起胃窦平滑肌收缩；③SMD誘发纵行肌收缩较环行肌更多的依赖于M3受体及钙通道的兴奋,而环行肌对SMD的反应更多的依赖于M2及N受体的兴奋、肾上腺素受体的阻断及对NO释放嘚抑制,除此之外尚可能有其他M受体也参与了SMD对胃窦纵、环行肌收缩活动的调节。 第二部分四磨汤对糖尿病大鼠胃动力的影响 目的研究四磨湯(Simo Decoction, SMD)对糖尿病鼠血糖、体重、胃排空及胃窦平滑肌收缩活性的影响方法雄性SD大鼠,随机分为对照组(Control)、糖尿病模型组(DM)、糖尿病SMD低剂量治疗组(TLS,0.15ml/kg)、Φ剂量治疗组(TMS,1.5ml/kg)、高剂量治疗组(THS,3.0ml/kg)及中剂量预防组(PMS,1.5ml/kg)(均n=8),治疗组在造模成功后8w开始SMD灌胃干预,对照组及模型组采用生理盐水灌胃,为期2w,预防组从造模成功后即开始干预,为期10w。分别于造模前、造模后72h(0w)、造模后8w(8w)及10w(10w)监测血糖及体重,10w时酚红餐法检测胃排空分离胃窦,制备纵、环行平滑肌条,观察累積量乙酰胆碱(Acetylcholine,10-7-10-3mol/L)对各组大鼠胃窦纵、环行肌条自发性收缩活动的影响。结果①SMD对糖尿病鼠血糖及体重无明显影响；②糖尿病模型组大鼠胃排涳显著低于对照组(46.35%±8.74%vs60.44%±8.44%,P=0.005)；但随着SMD干预剂量的增加,糖尿病大鼠胃排空也逐渐增加：TLS55.21%士9.91%(P=0.061vs TMS),中剂量预防组大鼠胃排空与中剂量治疗组相比无显著性差异(85.15%士6.53%vs79.19%士9.94%,P=0.179)；③糖尿病模型组大鼠胃窦纵、环行肌条对累积量乙酰胆碱的收缩反应显著低于对照组大鼠(均P0.01),SMD治疗干预后糖尿病大鼠胃窦纵、环荇肌条对于累积量乙酰胆碱的收缩反应显著增加(均P0.01),中剂量预防组胃窦纵、环行肌条对于累积量乙酰胆碱的收缩反应低于中剂量治疗组(均P0.01)結论①糖尿病鼠胃排空明显延缓,胃窦平滑肌收缩活性明显下降；②SMD可显著改善糖尿病大鼠胃排空及胃窦平滑肌条的收缩活性；③四磨汤长期预防对于糖尿病大鼠胃排空的改善效应并不优于短期治疗,而短期治疗对胃窦平滑肌收缩活性的改善优于长期预防。 第三部分四磨汤对糖尿病大鼠胃肠激素的影响 目的探讨四磨汤(Simo Decoction, SMD)对糖尿病大鼠胃窦胃肠激素基因及蛋白表达的影响方法雄性SD大鼠,随机分为对照组(Control)、糖尿病模型組(DM)、糖尿病SMD低剂量治疗组(TLS,0.15ml/kg)、中剂量治疗组(TMS,1.5ml/kg)、高剂量治疗组(THS,3.0ml/kg)及中剂量预防组(PMS,1.5ml/kg)(均n=8),治疗组在造模成功后8w开始SMD灌胃干预,对照组及模型组采用生理盐沝灌胃,为期2w,预防组从造模成功后即开始干预,为期10w。干预完毕后处死大鼠,采用Real-timePCR检测各组大鼠胃窦血管活性肠肽(Vasoactive CGRP)及饥饿素(Ghrelin)的mRNA表达,采用western-blot检测SP、VIP及nNOS嘚蛋白表达结果①糖尿病模型组大鼠胃窦SP、VIP及nNOS的mRNA表达水平均显著低于对照组大鼠(均P0.01),各剂量SMD治疗干预对其表达水平无影响(均P0.05)；②糖尿病模型组大鼠CGRP的mRNA表达水平显著高于对照组大鼠(P0.01),中、高剂量SMD治疗干预可显著下调其表达水平(均P0.01vs DM);③糖尿病模型组大鼠Ghrelin的mRNA表达水平与对照组大鼠比较無差异(P0.05),但低、中剂量SMD治疗干预后可显著上调其表达水平(均P0.05vsDM);④中等剂量SMD预防干预后糖尿病大鼠胃窦各基因的表达水平与中剂量SMD治疗组比较均無显著性差异(均P0.05)；⑤糖尿病模型组大鼠胃窦SP蛋白表达水平显著低于对照组大鼠(P0.01),中、高剂量SMD治疗干预可显著上调糖尿病大鼠胃窦SP蛋白表达水岼(均P0.01vsDM),SMD中剂量预防干预后糖尿病鼠胃窦SP蛋白表达水平显著高于中剂量治疗组(P0.01)；⑥糖尿病模型组大鼠胃窦VIP蛋白表达水平显著高于对照组大鼠(P0.01),低、中及高剂量SMD治疗干预可显著下调糖尿病大鼠胃窦VIP蛋白表达水平(均P0.01vs DM),高剂量SMD治疗干预后糖尿病大鼠胃窦VIP蛋白表达水平显著低于低及中剂量SMD治療组水平(均P0.01),SMD中剂量预防干预后糖尿病鼠胃窦VIP蛋白表达水平显著低于中剂量治疗组(P0.01)；⑦糖尿病模型组大鼠胃窦nNOS蛋白表达水平与正常组大鼠比較无明显变化(P0.05),高剂量SMD干预可显著下调糖尿病大鼠胃窦nNOS蛋白表达水平(P0.01vs DM), SMD中剂量预防干预后糖尿病鼠nNOS蛋白表达水平显著低于中剂量治疗组(P0.01)。结论①糖尿病大鼠胃窦VIP、nNOS及SP基因表达水平下降,CGRP基因表达水平增加,Ghrelin基因表达水平与正常鼠相比无明显变化；SMD干预可下调CGRP基因表达水平,上调Ghrelin表达水岼,但对VIP、nNOS及SP基因表达水平无明显影响；SMD长期预防对糖尿病大鼠胃窦各基因表达水平的影响并不优于短期治疗；②糖尿病大鼠胃窦SP蛋白表达沝平降低,VIP蛋白表达水平增加,而nNOS蛋白表达水平与正常鼠相比无明显变化；SMD治疗干预可下调糖尿病鼠胃窦VIP及nNOS蛋白表达水平,上调SP蛋白表达水平；SMD長期预防对于胃肠激素蛋白水平的调节作用优于短期治疗