受抗原刺激后的部分抗原直接刺激b淋巴细胞胞为什么细胞周期变长

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-10-26 01:44 标签： 部分抗原直接刺激b淋巴细胞

【摘要】：树突状细胞(dendritic cells，DC)是目前已知的功能最强的专职可以递呈细胞，具有激活初始T细胞增殖的独特功能，是特异性免疫应答的启动因素。其成熟状态是决定获得性免疫的启动和类型的关键因素，任何影响DC成熟的因素都直接影响免疫应答的启动和类型。 CpG-ODN(CpG-oligodexynucleotides)是来自细菌、病毒等等病原体基因组的非甲基化核苷酸序列，它和LPS等PAMPs一样具有明确的诱导DC成熟和较强的激活获得性免疫的功能。CpG-ODN主要通过Toll样受体9(TLR9)发挥刺激细胞的作用，而LPS主要通过TLR4发挥作用。本实验室最近的研究表明LPS持续刺激也能明显抑制DC的成熟及其免疫激活功能。由于LPS和其他感染因子之间存在交叉耐受现象，我们设想CpG-ODN和具他TLR配子一样可能具有类似的作用。因此，我们观察了CpG-ODN持续刺激对DC成熟及功能的影响，并探讨了CpG-ODN持续刺激维持DC不成熟的可能的信号转导机制。 我们用本室已建立的方法分离小鼠骨髓细胞，用GM-CSF诱导骨髓细胞向骨髓来源的树突状细胞(BMDC)增殖分化和成熟。在此过程中用CpG-ODN持续刺激作为试验组，以模拟体内持续严重感染时CpG-ODN长期存在对DC成熟状态的影响；在培养过程中不加CpG-ODN作为阴性对照，在培养的最后36小时加入CpG-ODN作为一次性单次刺激BMDC成熟的对照。培养7天后进行下述实验：①观察细胞形态的差异；②流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力；⑧ELISA检测细胞产生的细胞因子；④混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力；⑤Rhodamine123流式细胞仪凋亡检测；⑥细胞周期检测；⑦用Western-blot检测信号转导分子的表达水平。结果如下： 等表面分子表达升高;摄取抗原的能力减弱，刺激同种异基因淋巴细胞增殖能力增强。 我们的研究发现在用GM一CSF诱导骨髓细胞向BMDC分化的早期即持续予以 2林g角llCpG一ODN刺激，可以抑制BMOC分化、增殖，在cpG一oDN持续刺激组中， 于细胞凋亡引起。我们进一步用流式细胞仪初步检测了细胞周期，结果显示cpG一oDN 持续刺激组中GZ期细胞明显增多，提示C声一ODN持续刺激可能延长了GZ期。 CpG一oDN持续刺激可影响BMDc的形态、表型和功能的成熟，BMDc呈现不成熟状 态:胞膜皱褶和突起少且钝;表达MHC 11、CD86、CD40较成熟BMDC明显降低; 摄取抗原(FITC标记的卵清蛋白)的能力较强;刺激同种异基因小鼠T细胞增殖的 能力明显较弱;向同基因T细胞提呈抗原并刺激其增殖的能力也较弱。我们又进一步 P38MAPKs和.lun，导致DC共刺激分子的上调和细胞因子包括IL一12p70的分泌。但 是DC对共刺激分J二表达、细胞因子分泌的调节不仅是多水平而且是多方面的。最近 研究表明，包括PI3K、PKC、小G蛋白等多条信息转导途径参与了TLR信号的调控， 通过正、负反馈的调节，精致地控制了DC的成熟和细胞因子的表达。我们通过 westem一Blot方法检测了PKC的各亚型在cpG一ODN持续刺激和单次刺激的BMDc中 的表达及磷酸化情况，初步探讨PKC在TLR信号调节BMDC分化、增殖和成熟过程 6广泛参与造血千细胞的分化调控和细胞增殖的负调节，TLR信号可激活P13K，而 PI3K又可组成性地激活PKe6(Thrsos)。因此，我们推测TLR信号可能通过Px3K的 活化而激活PKC6(Thr505)，从而发挥对分化、增殖的调控作用。此外，我们发现 P38和JNK在持续刺激的BMDC中表达下降。PKC是否是

【学位授予单位】：第二军医大学
【学位授予年份】：2004


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