关注今日：14 | 主题：238546
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】求高手看看tunel染色的结果，给点建议
页码直达：
这个帖子发布于4年零267天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
今天第一次染tunel，结果（见附图）发现：1）阴性对照无任何阳染着色；2）阳性对照可见大量阳染细胞核，但核的形态有些怪；3）实验片亦见大量阳染细胞核（比阳性对照还多），核基本均匀着色；4）标本周围残缺不全，标本以外的地方可见散在阳染细胞核。标本为鼠，脑组织，石蜡切片，载玻片为组化所用的防滑玻片。某些步骤如下：1、北京天根蛋白酶K，室温，15min，2、碧云天DNase 1，室温，15min，3、罗氏tunel反应液，37度，1h，4、苏木素15s。请问：1）阳性对照片细胞核呈现这种形态正常吗？2）实验片中着色的细胞核是阳性细胞吗，为什么整张片子上都找不到无着色的细胞核。如果是假阳性，那造成的原因是什么呢？与蛋白酶K有关吗？换成triton X100效果会好吗？3）组织残缺不全，是否是因为蛋白酶k消化时间过长？如过换成普通的非防脱载玻片是否会完全脱片呢？有其他建议也欢迎提出来，先在此谢过大家了。暂定悬赏为2叮当，如果好建议多会追加悬赏阴性对照：试验片：标本残缺不全：
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
个人感觉你的阳性对照的片子有点感觉，染色质边集很明显，但实验片子似乎阳性率太高了吧，几乎100%，而且形态也不典型，我做过蛋白酶K的，triton X100的，微波的，感觉triton X100好一点，但阳性率很高，接近50%，最近打算买DNAse试试阳性对照，我的是石蜡切片，做的很郁闷，不知道你后来做的是否好些呢？多多交流喔，谢谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
在路上110 个人感觉你的阳性对照的片子有点感觉，染色质边集很明显，但实验片子似乎阳性率太高了吧，几乎100%，而且形态也不典型，我做过蛋白酶K的，triton X100的，微波的，感觉triton X100好一点，但阳性率很高，接近50%，最近打算买DNAse试试阳性对照，我的是石蜡切片，做的很郁闷，不知道你后来做的是否好些呢？多多交流喔，谢谢请问蛋白激酶K和triton x-100在tunel实验里的作用和原理是什么呢？谢谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
在路上110 个人感觉你的阳性对照的片子有点感觉，染色质边集很明显，但实验片子似乎阳性率太高了吧，几乎100%，而且形态也不典型，我做过蛋白酶K的，triton X100的，微波的，感觉triton X100好一点，但阳性率很高，接近50%，最近打算买DNAse试试阳性对照，我的是石蜡切片，做的很郁闷，不知道你后来做的是否好些呢？多多交流喔，谢谢后来又做了几次，按照网上建议，蛋白酶k时间短一点，双氧水最后用，效果稍微好一点，但是阳性率仍旧非常高，怀疑是标本处理有问题吧。想重新取标本试试，但到现在还没做
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
wanliheng 请问蛋白激酶K和triton x-100在tunel实验里的作用和原理是什么呢？谢谢经甲醛固定后，可产生广泛的蛋白质交联，K的作用在于能够暴露因组织固定而导致的抗原决定簇的封闭，以增强染色效果。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
owenszw 经甲醛固定后，可产生广泛的蛋白质交联，K的作用在于能够暴露因组织固定而导致的抗原决定簇的封闭，以增强染色效果。这个说法有文献支持那，或者在哪里可以找到依据。但是从你的描述来看，K是起到抗原修复的作用。为什么不用微波或者高压等常规方法进行抗原修复呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
wanliheng 这个说法有文献支持那，或者在哪里可以找到依据。但是从你的描述来看，K是起到抗原修复的作用。为什么不用微波或者高压等常规方法进行抗原修复呢？那个是我以前看到的，不过我个人认为蛋白酶k的作用就是通透细胞膜，有利于细胞核着色，与细胞组化里trionx100的作用应该是一样的吧。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园关注今日：14 | 主题：238544
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【原创】TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结&[精华]
页码直达：
学习学习了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请教个问题，一般来说荧光可以用红色标记或者绿色标记，-我看一遍tunel荧光常常用绿光标记的，-各位有没有试试用红色荧光标记的tunel？我说在激光共聚焦下面看的那种荧光，谢谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
高人我请教一个细节问题：我买的罗氏公司的In Situ Cell Death Detection Kit, POD。在其说明书里，对于细胞爬片的，说明了要用过氧化氢来预处理封闭；但是对于组织切片的，就没有写要用过氧化氢。.我们大家都知道，组织切片做免疫组化的时候，过氧化物酶方法的都需要过氧化氢来封闭的呀？为什么TUNEL里这部分没写啊？是疏忽嘛？还有另有原因？我要做的是肝脏的组织切片，对这个问题比较关注哈。谢谢啦
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 高人我请教一个细节问题：我买的罗氏公司的In Situ Cell Death Detection Kit, POD。在其说明书里，对于细胞爬片的，说明了要用过氧化氢来预处理封闭；但是对于组织切片的，就没有写要用过氧化氢。.我们大家都知道，组织切片做免疫组化的时候，过氧化物酶方法的都需要过氧化氢来封闭的呀？为什么TUNEL里这部分没写啊？是疏忽嘛？还有另有原因？我要做的是肝脏的组织切片，对这个问题比较关注哈。谢谢啦POD 试剂盒需要组织过氧化氢处理以降低内源性背景。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq POD 试剂盒需要组织过氧化氢处理以降低内源性背景。我也是这么认为啊，但是说明书里实在是没有提到啊。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 我也是这么认为啊，但是说明书里实在是没有提到啊。 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。 拜服啊！我都没注意到还有这个说明。同时吐槽下罗氏公司，这么重要的步骤放在最后的补充里面，也是醉了。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。另外这个说明书还有个问题：在3.4信号转换的最后DAB染色之后，只有7.8两步，什么PBS冲洗、玻璃片封固云云。十分笼统简略。.对照一般免疫组化的时候，DAB都是自来水冲洗终止DAB染色、然后蒸馏水浸泡一会儿。不是所谓的PBS洗3次吧？.后面是：苏木素复染（稍微染几秒即可，以免遮盖细胞核的TUNEL阳性染色）、盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。我这样理解是对的吧？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
做的小鼠睾丸免疫组化，在抗原修复时， 将切片与缓冲液同时加热至沸腾约用30分钟，。DAB显色后未观察出明显棕黄色。请问下 抗原修复过程中的加热是否对结果有影响 ，有何影响？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zhenglb1982 要自备中杉公司有DAB试剂盒，很好用。190元。其它的我没用过，我做冰冻切片用不着 我在网上找的中杉的浓缩型DAB试剂盒，包含Solution 1：DAB chromogen（20×）和 Solution 2：DAB substrate，信号转导那一步是不是只要用到 Solution 2：DAB substrate。不太懂，求指点
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
我在网上找的中杉的浓缩型DAB试剂盒，包含Solution 1：DAB chromogen（20×）和 Solution 2：DAB substrate，信号转导那一步是不是只要用到 Solution 2：DAB substrate。不太懂，求指点这个你要仔细看一下说明书，一般来说应该是用S2来稀释S1得到working solution进行显色。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 另外这个说明书还有个问题：在3.4信号转换的最后DAB染色之后，只有7.8两步，什么PBS冲洗、玻璃片封固云云。十分笼统简略。.对照一般免疫组化的时候，DAB都是自来水冲洗终止DAB染色、然后蒸馏水浸泡一会儿。不是所谓的PBS洗3次吧？.后面是：苏木素复染（稍微染几秒即可，以免遮盖细胞核的TUNEL阳性染色）、盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。我这样理解是对的吧？对的，基本上DAB显色完成跟PBS就没什么关系了，直接用水冲洗复染or进行脱水封片即可。此类试剂盒对于这些与检测关系不太大的操作写的一般都很简单，自己补充一下即可。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。另外请教下，石蜡切片的TUNEL血清一般加不加啊？SP三步法免疫组化做组织的石蜡切片一般是加血清的哈~不知道TUNEL是什么情况？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 另外请教下，石蜡切片的TUNEL血清一般加不加啊？SP三步法免疫组化做组织的石蜡切片一般是加血清的哈~不知道TUNEL是什么情况？单纯检测TUNEL可以不加，免疫组化和TUNEL检测是两码事。具体不详述，自己看资料。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 单纯检测TUNEL可以不加，免疫组化和TUNEL检测是两码事。具体不详述，自己看资料。三克油~~
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。 还有个细节问题请教您哈~这个说明书补充说明里，这个过氧化氢的阻断是放在prior to cell permeabilisation细胞通透之前，但是石蜡切片是没有细胞通透这一步的。在石蜡切片的样本处理环节，脱蜡水化之后为”protease treatment“，默认为蛋白酶K孵育（或替代的3个方法：Triton X-100渗透液；胃蛋白酶/胰蛋白酶；柠檬酸盐缓冲液350w微波）。那么，是否可以认为，过氧化氢的阻断就是放在protease treatment这一步之前呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
而且之后PBS洗三次哈。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 单纯检测TUNEL可以不加，免疫组化和TUNEL检测是两码事。具体不详述，自己看资料。 老师您能否有空指点一下TUNEL的结果IPP如何计数啊？是用吸管点选DAB阳性染色的细胞核颜色，然后计数嘛？还是划选区域内的阳性染色算平均OD值嘛？跟免疫组化——我过去用光密度值来比较细胞质的DAB染色完全不一样啊。拜托
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
老师您能否有空指点一下TUNEL的结果IPP如何计数啊？是用吸管点选DAB阳性染色的细胞核颜色，然后计数嘛？还是划选区域内的阳性染色算平均OD值嘛？跟免疫组化——我过去用光密度值来比较细胞质的DAB染色完全不一样啊。拜托这个数量一般不会太多了，直接数阳性细胞即可，没必要这么麻烦。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 这个数量一般不会太多了，直接数阳性细胞即可，没必要这么麻烦。 老师，每张片子视野可能不多，但是我这几次一共做了好几十张，每张再取10个视野，实在是总量太多了。请问我这种情况能否用组化那种光密度方法哈？IPP的话如何操作呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
老师，每张片子视野可能不多，但是我这几次一共做了好几十张，每张再取10个视野，实在是总量太多了。请问我这种情况能否用组化那种光密度方法哈？IPP的话如何操作呢？没见过这样做的，你可以试试。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请教下楼主，关于用过氧化氢消耗内源性过氧化物酶的问题。过氧化氢对dna有破坏作用，如何把握它的浓度和时间，既能消耗完全，又不产生明显假阳性呢？我做的肾脏组织，含血丰富，不知道你有什么经验，谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我做TUNEL用的是Roche的试剂盒，结果全阴性，我怀疑是通透的问题，我按照说明书上用的0.1%tritonX100-0.1%柠檬酸钠冰上促渗3min，然后PBS清洗。实验室其他人用的是0.25%tritonX100-PBS室温，通透30分钟。楼主有没得建议，请指导一二
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
学习中啊，菜鸟入门级别。非常感谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最近买了博士德的Tunel试剂盒，有的样本阳性表达很好，有的比较弱，进来学习的，坛子里好多牛人啊，拜服
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
用了MERCK的凋亡试剂盒，但是染不上颜色，一片漆黑，求高手帮忙是什么原因
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zhenglb1982
我做大鼠前列腺冰冻切片的TUNEL，我用的是凯基的（FITC，冰冻切片专用），阳性对照都没做出来，想换试剂盒。DNase I我买的primega的，1000u/mL一共300多元，很贵哈！粉末买不到，而且自己配是不是太麻烦？我的试剂盒可以荧光显微镜看FITC，也可以加抗FITC后用DAB显色。请问你用的是那种？楼主做的多，希望多多指点哦
1. 试剂盒选择我推荐roche或promega公司的，且有罗氏公司进口分装，10T需要1300元；2.
DNase I我买的国产的，180多元，效果还可以。后面用的少，只要第一次做出来了，后面就不需每次都做，很费钱呀。 楼主您好！请问您买的是DNase I 是哪个牌子的？型号呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
帮我看看为什么我的肺癌组织的Tunel做出来是这样？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
针对问题3（TUNEL实验中几个关键步骤是什么？）：
充分脱蜡和水化。脱蜡可以先60度20min，再用二甲苯两次5~10min；而水化用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，这些以便后面的结合反应充分、均匀；
把握好细胞通透的时间。一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用10~30min，几um切片用短时间；几十um切片用长时间，通过摸索达到既不脱片，有能够使后面的酶和抗体进入胞内。
适当延长TUNEL反应液的时间。一般是37度1h，你也可以根据你的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至2h，但要结合你最终的背景着色。
DAB显色条件的选择。一般DAB反应10分钟左右，结合镜下控制背景颜色，最长不超过30min；我不喜欢用promega公司提供的DAB液（桃红色），不利于辨认棕褐色。
5.PBS的充分清洗。我个人认为，在TUNEL反应后和酶标反应后的清洗应十分严格，可增加次数达5次，因为这些清洗直接决定最后切片的非特异性着色。
6. 此外，内源性POD的封闭也十分关键。对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，我的经验是适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染色。
楼主您好。请问实验中洗片子用的pbs需要高压灭酶吗。我用的普通的pbs。全都是假阳性。 谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼主，您好！看了大家的帖子之后真是获益匪浅。感谢了大家！我顺便问个小问题：我打算做石蜡切片（肠组织）的Tunel法检测细胞凋亡，请问脱蜡之前需不需要先60度恒温烤箱烤1至2小时呢（我之前做免疫组化都是脱蜡前60度恒温烤2小时，不知Tunel法检测有木有这一步。）？麻烦啦！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香的冬虫夏草 楼主，您好！看了大家的帖子之后真是获益匪浅。感谢了大家！我顺便问个小问题：我打算做石蜡切片（肠组织）的Tunel法检测细胞凋亡，请问脱蜡之前需不需要先60度恒温烤箱烤1至2小时呢（我之前做免疫组化都是脱蜡前60度恒温烤2小时，不知Tunel法检测有木有这一步。）？麻烦啦！烤片这一步应该是可以做可不做的，这一步的目的主要是增强标本和玻片的附着，防止脱蜡或后续实验过程中标本脱片，保证标本的完整性是所有实验的基础。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请大侠给看一下，模型组（老年痴呆模型）和空白组的皮层，200倍，没有用苏木素复染（怕两种颜色重叠，影响光密度分析），现在的问题是，空白组的阳性表达貌似有点多了，不知道是不是非特异性染色的问题？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
jehoiada 请教各位大神，石蜡切片放了大半年了（常温下），还能做TUNEL么我做了几次效果不好，结果发现直接拿石蜡切片在激光共聚焦下都有荧光，这是怎么了请问，你最后是怎么处理的啊？我也有石蜡切片（白片），放置了5个月了，想做tunel，不知道能不能做？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园关注今日：14 | 主题：238546
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【原创】TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结&[精华]
页码直达：
学习学习了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请教个问题，一般来说荧光可以用红色标记或者绿色标记，-我看一遍tunel荧光常常用绿光标记的，-各位有没有试试用红色荧光标记的tunel？我说在激光共聚焦下面看的那种荧光，谢谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
高人我请教一个细节问题：我买的罗氏公司的In Situ Cell Death Detection Kit, POD。在其说明书里，对于细胞爬片的，说明了要用过氧化氢来预处理封闭；但是对于组织切片的，就没有写要用过氧化氢。.我们大家都知道，组织切片做免疫组化的时候，过氧化物酶方法的都需要过氧化氢来封闭的呀？为什么TUNEL里这部分没写啊？是疏忽嘛？还有另有原因？我要做的是肝脏的组织切片，对这个问题比较关注哈。谢谢啦
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 高人我请教一个细节问题：我买的罗氏公司的In Situ Cell Death Detection Kit, POD。在其说明书里，对于细胞爬片的，说明了要用过氧化氢来预处理封闭；但是对于组织切片的，就没有写要用过氧化氢。.我们大家都知道，组织切片做免疫组化的时候，过氧化物酶方法的都需要过氧化氢来封闭的呀？为什么TUNEL里这部分没写啊？是疏忽嘛？还有另有原因？我要做的是肝脏的组织切片，对这个问题比较关注哈。谢谢啦POD 试剂盒需要组织过氧化氢处理以降低内源性背景。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq POD 试剂盒需要组织过氧化氢处理以降低内源性背景。我也是这么认为啊，但是说明书里实在是没有提到啊。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 我也是这么认为啊，但是说明书里实在是没有提到啊。 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。 拜服啊！我都没注意到还有这个说明。同时吐槽下罗氏公司，这么重要的步骤放在最后的补充里面，也是醉了。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。另外这个说明书还有个问题：在3.4信号转换的最后DAB染色之后，只有7.8两步，什么PBS冲洗、玻璃片封固云云。十分笼统简略。.对照一般免疫组化的时候，DAB都是自来水冲洗终止DAB染色、然后蒸馏水浸泡一会儿。不是所谓的PBS洗3次吧？.后面是：苏木素复染（稍微染几秒即可，以免遮盖细胞核的TUNEL阳性染色）、盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。我这样理解是对的吧？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
做的小鼠睾丸免疫组化，在抗原修复时， 将切片与缓冲液同时加热至沸腾约用30分钟，。DAB显色后未观察出明显棕黄色。请问下 抗原修复过程中的加热是否对结果有影响 ，有何影响？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zhenglb1982 要自备中杉公司有DAB试剂盒，很好用。190元。其它的我没用过，我做冰冻切片用不着 我在网上找的中杉的浓缩型DAB试剂盒，包含Solution 1：DAB chromogen（20×）和 Solution 2：DAB substrate，信号转导那一步是不是只要用到 Solution 2：DAB substrate。不太懂，求指点
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
我在网上找的中杉的浓缩型DAB试剂盒，包含Solution 1：DAB chromogen（20×）和 Solution 2：DAB substrate，信号转导那一步是不是只要用到 Solution 2：DAB substrate。不太懂，求指点这个你要仔细看一下说明书，一般来说应该是用S2来稀释S1得到working solution进行显色。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 另外这个说明书还有个问题：在3.4信号转换的最后DAB染色之后，只有7.8两步，什么PBS冲洗、玻璃片封固云云。十分笼统简略。.对照一般免疫组化的时候，DAB都是自来水冲洗终止DAB染色、然后蒸馏水浸泡一会儿。不是所谓的PBS洗3次吧？.后面是：苏木素复染（稍微染几秒即可，以免遮盖细胞核的TUNEL阳性染色）、盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。我这样理解是对的吧？对的，基本上DAB显色完成跟PBS就没什么关系了，直接用水冲洗复染or进行脱水封片即可。此类试剂盒对于这些与检测关系不太大的操作写的一般都很简单，自己补充一下即可。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。另外请教下，石蜡切片的TUNEL血清一般加不加啊？SP三步法免疫组化做组织的石蜡切片一般是加血清的哈~不知道TUNEL是什么情况？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
boborsky 另外请教下，石蜡切片的TUNEL血清一般加不加啊？SP三步法免疫组化做组织的石蜡切片一般是加血清的哈~不知道TUNEL是什么情况？单纯检测TUNEL可以不加，免疫组化和TUNEL检测是两码事。具体不详述，自己看资料。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 单纯检测TUNEL可以不加，免疫组化和TUNEL检测是两码事。具体不详述，自己看资料。三克油~~
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 说明书只是建议你这样操作，如果出现非特异性还是需要进行block处理的。 还有个细节问题请教您哈~这个说明书补充说明里，这个过氧化氢的阻断是放在prior to cell permeabilisation细胞通透之前，但是石蜡切片是没有细胞通透这一步的。在石蜡切片的样本处理环节，脱蜡水化之后为”protease treatment“，默认为蛋白酶K孵育（或替代的3个方法：Triton X-100渗透液；胃蛋白酶/胰蛋白酶；柠檬酸盐缓冲液350w微波）。那么，是否可以认为，过氧化氢的阻断就是放在protease treatment这一步之前呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
而且之后PBS洗三次哈。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 单纯检测TUNEL可以不加，免疫组化和TUNEL检测是两码事。具体不详述，自己看资料。 老师您能否有空指点一下TUNEL的结果IPP如何计数啊？是用吸管点选DAB阳性染色的细胞核颜色，然后计数嘛？还是划选区域内的阳性染色算平均OD值嘛？跟免疫组化——我过去用光密度值来比较细胞质的DAB染色完全不一样啊。拜托
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
老师您能否有空指点一下TUNEL的结果IPP如何计数啊？是用吸管点选DAB阳性染色的细胞核颜色，然后计数嘛？还是划选区域内的阳性染色算平均OD值嘛？跟免疫组化——我过去用光密度值来比较细胞质的DAB染色完全不一样啊。拜托这个数量一般不会太多了，直接数阳性细胞即可，没必要这么麻烦。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
qq 这个数量一般不会太多了，直接数阳性细胞即可，没必要这么麻烦。 老师，每张片子视野可能不多，但是我这几次一共做了好几十张，每张再取10个视野，实在是总量太多了。请问我这种情况能否用组化那种光密度方法哈？IPP的话如何操作呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园助理版主
老师，每张片子视野可能不多，但是我这几次一共做了好几十张，每张再取10个视野，实在是总量太多了。请问我这种情况能否用组化那种光密度方法哈？IPP的话如何操作呢？没见过这样做的，你可以试试。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请教下楼主，关于用过氧化氢消耗内源性过氧化物酶的问题。过氧化氢对dna有破坏作用，如何把握它的浓度和时间，既能消耗完全，又不产生明显假阳性呢？我做的肾脏组织，含血丰富，不知道你有什么经验，谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我做TUNEL用的是Roche的试剂盒，结果全阴性，我怀疑是通透的问题，我按照说明书上用的0.1%tritonX100-0.1%柠檬酸钠冰上促渗3min，然后PBS清洗。实验室其他人用的是0.25%tritonX100-PBS室温，通透30分钟。楼主有没得建议，请指导一二
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
学习中啊，菜鸟入门级别。非常感谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
最近买了博士德的Tunel试剂盒，有的样本阳性表达很好，有的比较弱，进来学习的，坛子里好多牛人啊，拜服
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
用了MERCK的凋亡试剂盒，但是染不上颜色，一片漆黑，求高手帮忙是什么原因
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zhenglb1982
我做大鼠前列腺冰冻切片的TUNEL，我用的是凯基的（FITC，冰冻切片专用），阳性对照都没做出来，想换试剂盒。DNase I我买的primega的，1000u/mL一共300多元，很贵哈！粉末买不到，而且自己配是不是太麻烦？我的试剂盒可以荧光显微镜看FITC，也可以加抗FITC后用DAB显色。请问你用的是那种？楼主做的多，希望多多指点哦
1. 试剂盒选择我推荐roche或promega公司的，且有罗氏公司进口分装，10T需要1300元；2.
DNase I我买的国产的，180多元，效果还可以。后面用的少，只要第一次做出来了，后面就不需每次都做，很费钱呀。 楼主您好！请问您买的是DNase I 是哪个牌子的？型号呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
帮我看看为什么我的肺癌组织的Tunel做出来是这样？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
针对问题3（TUNEL实验中几个关键步骤是什么？）：
充分脱蜡和水化。脱蜡可以先60度20min，再用二甲苯两次5~10min；而水化用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，这些以便后面的结合反应充分、均匀；
把握好细胞通透的时间。一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用10~30min，几um切片用短时间；几十um切片用长时间，通过摸索达到既不脱片，有能够使后面的酶和抗体进入胞内。
适当延长TUNEL反应液的时间。一般是37度1h，你也可以根据你的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至2h，但要结合你最终的背景着色。
DAB显色条件的选择。一般DAB反应10分钟左右，结合镜下控制背景颜色，最长不超过30min；我不喜欢用promega公司提供的DAB液（桃红色），不利于辨认棕褐色。
5.PBS的充分清洗。我个人认为，在TUNEL反应后和酶标反应后的清洗应十分严格，可增加次数达5次，因为这些清洗直接决定最后切片的非特异性着色。
6. 此外，内源性POD的封闭也十分关键。对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，我的经验是适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染色。
楼主您好。请问实验中洗片子用的pbs需要高压灭酶吗。我用的普通的pbs。全都是假阳性。 谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼主，您好！看了大家的帖子之后真是获益匪浅。感谢了大家！我顺便问个小问题：我打算做石蜡切片（肠组织）的Tunel法检测细胞凋亡，请问脱蜡之前需不需要先60度恒温烤箱烤1至2小时呢（我之前做免疫组化都是脱蜡前60度恒温烤2小时，不知Tunel法检测有木有这一步。）？麻烦啦！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香的冬虫夏草 楼主，您好！看了大家的帖子之后真是获益匪浅。感谢了大家！我顺便问个小问题：我打算做石蜡切片（肠组织）的Tunel法检测细胞凋亡，请问脱蜡之前需不需要先60度恒温烤箱烤1至2小时呢（我之前做免疫组化都是脱蜡前60度恒温烤2小时，不知Tunel法检测有木有这一步。）？麻烦啦！烤片这一步应该是可以做可不做的，这一步的目的主要是增强标本和玻片的附着，防止脱蜡或后续实验过程中标本脱片，保证标本的完整性是所有实验的基础。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请大侠给看一下，模型组（老年痴呆模型）和空白组的皮层，200倍，没有用苏木素复染（怕两种颜色重叠，影响光密度分析），现在的问题是，空白组的阳性表达貌似有点多了，不知道是不是非特异性染色的问题？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
jehoiada 请教各位大神，石蜡切片放了大半年了（常温下），还能做TUNEL么我做了几次效果不好，结果发现直接拿石蜡切片在激光共聚焦下都有荧光，这是怎么了请问，你最后是怎么处理的啊？我也有石蜡切片（白片），放置了5个月了，想做tunel，不知道能不能做？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园