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作者：;罗奋华;外文作者：Zhang YLuo FWu Yingji作者机构：通讯作者地址：来源：,2007,Vol.21,Issue.12基金：本课题受内蒙古自治区自然科学基金（批准号：）项目资助CSCD被引频次：6综合影响因子：0.426复合影响因子：0.457关键词：大鼠;生殖细胞;共同培养技术;精子发生摘要：建立体外长期共培养体系和观察方法，为精子发生过程的研究提供细胞模型。方法采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法，对睾丸生精细胞作显微镜观察。结建立体外长期共培养体系和观察方法，为精子发生过程的研究提供细胞模型。方法采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法，对睾丸生精细胞作显微镜观察。结果共培养的支持细胞和生精细胞在体外存活超过6个月。在共培养期间，观察到精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞。结论在不添加任何细胞因子和生长因子的情况下，大鼠曲细精管生殖细胞长期增生分化，不断产生精子细胞。这一结果暗示组织块和共生的支持细胞可为生殖细胞的增生和分化提供必需的细胞因子。该方法为体外研究精子发生过程提供了实验依据。;目的 建立体外长期共培养体系和观察方法,为精子发生过程的研究提供细胞模型.方法 采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法,对睾丸生精细胞作显微镜观察.结果 共培养的支持细胞和生精细胞在体外存活超过6个月.在共培养期间,观察到精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞.结论 在不添加任何细胞因子和生长因子的情况下,大鼠曲细精管生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞.这一结果暗示组织块和共生的支持细胞可为生殖细胞的增生和分化提供必需的细胞因子.该方法为体外研究精子发生过程提供了实验依据.
作者：夏雅娟;孟萌;张峰;李建云;;外文作者：XIA Ya-MENG MZHANG FLI Jian-LIU Dong-XU Ri-XIA Ya-juan[1];MENG Meng[2];ZHANG Feng[2];LI Jian-yun[3];LIU Dong-jun[4];XU Ri-gan[4]作者机构：通讯作者地址：来源：,2009,Vol.28,Issue.1CSCD被引频次：11教育部学科：特种医学关键词：砷;雌激素样效应;HeLa细胞;细胞生长摘要：观察砷雌激素样效应及对HeLa细胞体外生长的影响作用。方法实验分为8组，RPMI1640培养液分别含雌二醇（E2，1nmol／L）、三氧化二砷（As2O3，0．5、1．0、5．0μmol观察砷雌激素样效应及对HeLa细胞体外生长的影响作用。方法实验分为8组，RPMI1640培养液分别含雌二醇（E2，1nmol／L）、三氧化二砷（As2O3，0．5、1．0、5．0μmol／L）、雌二醇拮抗剂（ICI，500nmol／L）、E2（1nmol／L）＋ICI（500nmol／L）、As203（1．0μmol／L）＋ICI（500nmol／L）以及对照组，以含有不同处理因素的RPMI1640培养液培养HeLa细胞24、48、72h。光镜下观察72h时HeLa细胞生长状况，四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测各时间点HeLa细胞存活率，流式细胞计量术检测48h时HeLa细胞周期。结果形态学观察E2组和0．5μmol／LAs203组细胞数量明显多于对照组，长势旺盛。24、48、72hE2组和0．5μmol／LAs203组对HeLa细胞的增殖促进率分别为6．35％、11．56％、38．33％及6.35％、8．50％、20．26％，两组作用效果相似，对细胞生长起到增殖促进作用。与对照组[（41．68±1．05）％]比较，E2组[（55．72±2．31）％]和0．5μmol／LAs203组[（47．82±1．41）％]S期细胞有增多趋势，其他各组则减少，其中5．0μmol／LAs203组[（21．11±4．99）％]、ICI组[（20．16±4．76）％]明显减少，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论小剂量As2O3具有雌激素样效应，可促进HeLa细胞的生长。;目的 观察砷雌激素样效应及对HeLa细胞体外生长的影响作用.方法 实验分为8组,RPMI1640培养液分别含雌二醇(E2,1 nmol/L)、三氧化二砷(A82O3,0.5、1.0、5.0 μmol/L)、雌二醇拮抗剂(ICI,500nmol/L)、E2(1 nmoL/L)+ICI(500 nmol/L)、As2O3(1.0μmol/L)+[CI(500 nmol/L)以及对照组,以含有不同处理因素的RPMI 1640培养液培养HeLa细胞24、48、72 h.光镜下观察72 h时HeLa细胞生长状况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各时间点HeLa细胞存活率,流式细胞计量术检测48 h时HeLa细胞周期.结果 形态学观察E2组和0.5μmol/L As2O3组细胞数量明显多于对照组,长势旺盛.24、48、72 h E2组和0.5μmoL/L As2O3组对HeLa细胞的增殖促进率分别为6.35%、11.56%、38.33%及6.35%、8.50%、20.26%.两组作用效果相似,对细胞生长起到增殖促进作用.与对照组[(41.68±1.05)%]比较,E2组[(55.72±2.31)%]和0.5μmol/L As2O3组[(47.82±1.41)%]S期细胞有增多趋势,其他各组则减少,其中5.0 μmol/L As2O3组[(21.1l±4.99)%]、ICI组[(20.16±4.76)%]明显减少,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小剂量As2O3具有雌激素样效应,可促进HeLa细胞的生长.
作者：关泽红;外文作者：GUAN Ze-SGUAN Ze-hong[1];Shorgen[2]作者机构：通讯作者地址：Guan, Z.-H.; The Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology, Inner Mongolia University, Hohhot 010021, C 电子邮件: .cn来源：,2008,Vol.28,Issue.8基金：国家自然基金面上项目（）;国家自然科学基金教育部学科：临床医学,基础医学综合影响因子：0.593复合影响因子：0.681关键词：单纯疱疹病毒;细胞周期蛋白依赖性激酶2;病毒复制摘要：探讨细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）2在单纯疱疹病毒（HSV）复制中的作用。方法以能够诱导表达CDK2显性负突变体致使CDK2功能缺陷的人结肠癌细胞株HT29Tet-Ondn-CD探讨细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）2在单纯疱疹病毒（HSV）复制中的作用。方法以能够诱导表达CDK2显性负突变体致使CDK2功能缺陷的人结肠癌细胞株HT29Tet-Ondn-CDK2为材料，用免疫共沉淀及放射自显影法测定HSV感染后不同时间CDK2活性，并进行HSV的增殖动力学分析。结果HSV感染6h后CDK2活性被诱导，9h达到最大；一步生长曲线结果表明在CDK2活性被诱导前HSV处于静止状态，CDK2活性被诱导后HSV即进入快速的生长复制阶段。结论CDK2是HSV复制所必需的，HSV通过诱导宿主细胞CDK2活性而促进本身的复制。;目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2在单纯疱疹病毒(HSV)复制中的作用. 方法 以能够诱导表达CDK2显性负突变体致使CDK2功能缺陷的人结肠癌细胞株HT29Tet-Ondn-CDK2为材料,用免疫共沉淀及放射自显影法测定HSV感染后不同时间CDK2活性,并进行HSV的增殖动力学分析. 结果 HSV感染6h后CDK2活性被诱导,9h达到最大;一步生长曲线结果表明在CDK2活性被诱导前HSV处于静止状态,CDK2活性被诱导后HSV即进入快速的生长复制阶段. 结论 CDK2是HSV复制所必需的,HSV通过诱导宿主细胞CDK2活性而促进本身的复制.
作者：;毛舒燕;侯冬霞;外文作者：GUO XuDMAO ShuYHOU DongXBOU Shorgan作者机构：通讯作者地址：BOU, S.; Key Laboratory for Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology, Ministry of Education, Inner Mongolia University, Hohhot, 010021, C 电子邮件: xrg@xzwlzx.imu.edu.cn来源：,2007,Vol.23,Issue.1基金：国家高技术研究与发展计划项目; 内蒙古自然科学基金资助项目;国家高技术研究发展计划(863计划)，内蒙古自然科学基金CSCD被引频次：1综合影响因子：0.587复合影响因子：0.977关键词：质粒DNA; 酚/氯仿/异戊醇; 重组克隆摘要：介绍了一种利用过夜培养的菌液瞬时提取质粒DNA，并用于电泳鉴别含有插入子克隆的方法。事先无需准备许多繁琐的相关试剂，提取质粒的全过程只需3～5m;
in就可完介绍了一种利用过夜培养的菌液瞬时提取质粒DNA，并用于电泳鉴别含有插入子克隆的方法。事先无需准备许多繁琐的相关试剂，提取质粒的全过程只需3～5m;
in就可完成，非常适合于做重组克隆的快速鉴别。
北大核心刊
作者：罗荣松;
梁伟外文作者：Luo R
Liang Wei作者机构：通讯作者地址：Liang, W.; Ministry of Education Key Laboratory for Tropical Animal and Plant Ecology, College of Life Sciences, Hainan Normal UniversityC 电子邮件: 来源：,2016,Vol.35,Issue.8基金：国家自然科学基金项目CSCD被引频次：1教育部学科：风景园林学,建筑学,城乡规划学,生态学,系统科学综合影响因子：1.344复合影响因子：2.019关键词：温度; 气候变化; 繁殖时间; 家燕摘要：温度对鸟类的繁殖具有重要影响,气候变化可导致鸟类生活史特征的改变。为了解气候变化对家燕(H
rustica)巢利用率和窝卵数的影响,于年4月,对海南温度对鸟类的繁殖具有重要影响,气候变化可导致鸟类生活史特征的改变。为了解气候变化对家燕(H
rustica)巢利用率和窝卵数的影响,于年4月,对海南临高4个村庄的家燕繁殖情况进行了调查。结果表明,2015年家燕种群开始;
繁殖的日期较2014年显著推迟,同时巢的利用率也低于2014年(X~2 = 70.37,P<0.001);
。通过对两年繁殖季的气候状况进行分析,发现4月份的气温变化对家燕开始繁殖的时间具有重要影响。 2015年4月份的平均最低气温比2014年低约2;
℃(t = 3.155,df = 58,P =;
0.003),且平均温差较大,表明2015年4月份偏低的春季温度及其较大的温度波动推迟了当地家燕种群的开始繁殖时间;但温度对家燕的窝卵数(t =;
0.670,df = 87,P = 0.505)和孵化成功率(t = 0.794,df = 71,P =;
0.442)没有显著影响。研究表明,即便在热带地区,春季低温对海南家燕种群开始繁殖的时间和巢利用率仍具有重要影响。
北大核心刊
作者：刘坤;;;;苏广华;外文作者：Liu KWu XWei ZBai CSu GLi Guangpeng作者机构：通讯作者地址：Li, G.; The Key Laboratory for Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology, Key Laboratory of Herbivore Reproductive Biotechnology and Breeding Ministry of Agriculture, Inner Mongolia University, Huhhot 010070, C 电子邮件: gpengli@imu.edu.cn来源：,2014,Vol.34,Issue.1基金：“973”课题“克隆与转基因克隆动物机理研究”（）;内蒙古自治区重大科技项目;“973”课题“克隆与转基因克隆动物机理研究”，内蒙古自治区重大科技项目教育部学科：生物学,畜牧学综合影响因子：0.464复合影响因子：0.909关键词：生长曲线绘制;凋亡检测;核型分析;流式细胞检测摘要：为研究高原低氧环境对哺乳动物细胞生长特性的影响，本文以高原低氧动物藏羚和同科的阿尔巴斯白绒山羊、蒙古绵羊及鲁西黄牛的耳源组织细胞为材料，利用DMEM／F12培为研究高原低氧环境对哺乳动物细胞生长特性的影响，本文以高原低氧动物藏羚和同科的阿尔巴斯白绒山羊、蒙古绵羊及鲁西黄牛的耳源组织细胞为材料，利用DMEM／F12培养液进行培养，建立了4种动物的体外培养成纤维细胞系，并对其进行形态学观察、生长曲线绘制、凋亡检测、核型分析等生物学特性检测。结果表明：4种动物的细胞经差异贴壁法联合消化排除法，可获得纯化的成纤维细胞，细胞形态一致且活力稳定，4种动物细胞的形态与生长曲线无明显差异；藏羚、绒山羊、绵羊、牛同代次细胞生长倍增时间分别为26h、22h、23h和22h；经流式细胞仪检测，细胞凋亡率分别为5．5％、2．7％、8．6％和1．5％；藏羚、绒山羊、绵羊与牛的染色体数目分别为60、60、54和60。藏羚与绒山羊、牛染色体数目相同，且除性染色体外，其余均为端部着丝粒类型，而绵羊存在6条中着丝粒类型染色体。该结果表明，在体外培养条件下，藏羚的体细胞生长特性与同科的其他物种的细胞生长特性存在明显差异。这为从细胞水平上研究藏羚对环境低氧适应的分子机理提供了基础。
北大核心刊
作者：孟蝶;;银凤霞;苏广华;;程磊;;外文作者：Meng DBai CYin FSu GWei ZCheng LLi JLi GMENG Die1,BAI Chun-ling1,YIN Feng-xia1,SU Guang-hua1, WEI Zhu-ying1,CHENG Lei1,LI Jun-long2,LI Guang-peng1(1.The Key Laboratory for Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology,Ministry of Education,Key Laboratory of Herbivore Reproductive Biotechnology and Breeding Ministry of Agriculture,Inner作者机构：来源：,2013,Vol.44,Issue.4基金：＂973＂课题＂克隆与转基因克隆动物机理研究＂（）;内蒙古自治区科技重大项目＂优秀家畜转基因技术研发＂资助综合影响因子：0.302复合影响因子：0.478关键词：动物克隆;家畜;规模化生产;杜泊羊摘要：虽然体细胞克隆技术（somatic cell nuclear transfer,SCNT）的总体效率不高,但其潜在的开发价值仍值得尝试.本试验与企业密切合作,并以企业为开发主体,开展优秀杜虽然体细胞克隆技术（somatic cell nuclear transfer,SCNT）的总体效率不高,但其潜在的开发价值仍值得尝试.本试验与企业密切合作,并以企业为开发主体,开展优秀杜泊种公羊的克隆生产与应用研究.结果表明,舍饲条件下的受体母羊比草原放养母羊更适合于作克隆胚胎移植受体,同期发情处理方式与胚胎运输影响克隆胚胎的妊娠效率.在过去3年间,共有100只受体羊妊娠至3个月以上,妊娠率为13.6%.目前有61只健康存活.其中一部分克隆公羊作为种羊与本地蒙古羊配种,参与企业的肉羊繁殖生产.由此可以看出,以企业为主体的利用克隆技术进行优秀种羊规模化生产是可行的.
北大核心刊
作者：高海霞;王振飞;韩鹏勇;王会敏;王杰;外文作者：Gao HWang ZHan PWang HWang JYu Haiquan作者机构：来源：,2013,Vol.21,Issue.2基金：转基因生物新品种培育重大专项（No..002）综合影响因子：0.839复合影响因子：1.288关键词：VPA;细胞周期;成纤维细胞;转录因子摘要：丙戊酸（valproic acid，VPA）作为一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，能提高细胞内组蛋白乙酰化水平，影响基因的表达。为探讨VPA对体细胞生长的影响，本实验以牛（Bos taurus）胎儿成纤维细胞为研究对象，利用流式细胞技术探讨VPA处理牛体细胞对其细胞周期的影响，并利用Real—timePCR检测VPA处理后细胞转录因子Oct4、Nanog和Cdx2基因表达变化的影响。结果显示，体细胞经0．8、1．0和2．0mmol／L的VPA分别处理24、48和72h后，随VPA浓度的增加，体细胞增殖减缓，细胞周期抑制在间期0／间期1（G0／G1）期。对转录因子Oct4、Nanog和Cdx2基因表达量的检测表明，与未处理组相比VPA处理后细胞Oct4和Ncuwg的表达量提高，而Cdx2基因的表达量降低。研究结果表明，VPA处理能够改变成纤维细胞的生长特性和基因表达状态，本研究牛体细胞核移植胚胎表观重编程及发育研究提供了参考资料。;丙戊酸(valproic acid,VPA)作为一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,能提高细胞内组蛋白乙酰化水平,影响基因的表达.为探讨VPA对体细胞生长的影响,本实验以牛(Bos taurus)胎儿成纤维细胞为研究对象,利用流式细胞技术探讨VPA处理牛体细胞对其细胞周期的影响,并利用Real-time PCR检测VPA处理后细胞转录因子Oct4、Nanog和Cdx2基因表达变化的影响.结果显示,体细胞经0.8、1.0和2.0mmol/L的VPA分别处理24、48和72 h后,随VPA浓度的增加,体细胞增殖减缓,细胞周期抑制在间期0/间期1 (G0/G1)期.对转录因子Oct4、Nanog和Cdx2基因表达量的检测表明,与未处理组相比VPA处理后细胞Oct4和Nanog的表达量提高,而Cdx2基因的表达量降低.研究结果表明,VPA处理能够改变成纤维细胞的生长特性和基因表达状态,本研究牛体细胞核移植胚胎表观重编程及发育研究提供了参考资料.
北大核心刊
作者：孙伟;巴特尔;郭继彤;李荣凤;;李明;胡树香;王春生;外文作者：Sun WBa TGuo JLi RWang JLi MHu SWang CLi Xihe作者机构：来源：,2013,Issue.2基金：内蒙古自治区“呼和浩特市科技计划项目”（2010-农-6）;内蒙古自治区"呼和浩特市科技计划项目"综合影响因子：0.529复合影响因子：0.901关键词：奶牛;体细胞;去核;核移植;重构胚胎摘要：通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎体外生产技术条件，制备高质量的奶牛克隆胚胎，旨在提高奶牛体细胞核移植产业化应用效率。就受体卵母细胞去核方法、不同年龄供体通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎体外生产技术条件，制备高质量的奶牛克隆胚胎，旨在提高奶牛体细胞核移植产业化应用效率。就受体卵母细胞去核方法、不同年龄供体牛细胞来源、血清饥饿与否以及不同气相组成培养等备件对奶牛体细胞克隆胚胎生产效率的影响进行了研究和探讨。结果表明，虽然荧光染色辅助去核和盲吸法的去核率、囊胚发育率分别为100％、24．83％和92．4\_4％、28．26％，两者之间无显著差异（P〉0．05），但盲吸法操作简单、效率高；不同年龄来源供体牛的细胞系构建的克隆胚胎的囊胚发育率分别为31．43％、25．68％，两者之间没有显著差异（P〉0．05）；经血清饥饿和未饥饿供体细胞重构的克隆胚胎囊胚发育率分别为24％、29．9％，两者之间没有显著差（P〉0．05）；富氧和低氧气相培养的克隆胚胎的囊胚发育率分别为28．26％、31．55％，两者之间差异不显著（P〉0．05），低氧气相组成更有利于囊胚的发育。根据上述结果，奶牛体细胞核移植胚胎（克隆胚胎）的产业化生产条件为：供体细胞无需进行同期饥饿处理，直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎，融合后的克隆胚胎在密封的混合三气（5％CO2-5％O2-90％N2）的气相组成下进行体外培养，能保持稳定的囊胚发育率。;通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎体外生产技术条件,制备高质量的奶牛克隆胚胎,旨在提高奶牛体细胞核移植产业化应用效率.就受体卵母细胞去核方法、不同年龄供体牛细胞来源、血清饥饿与否以及不同气相组成培养等条件对奶牛体细胞克隆胚胎生产效率的影响进行了研究和探讨.结果表明,虽然荧光染色辅助去核和盲吸法的去核率、囊胚发育率分别为100％、24.83％和92.44％、28.26％,两者之间无显著差异(P＞0.05),但盲吸法操作简单、效率高；不同年龄来源供体牛的细胞系构建的克隆胚胎的囊胚发育率分别为31.43％、25.68％,两者之间没有显著差异(P＞0.05)；经血清饥饿和未饥饿供体细胞重构的克隆胚胎囊胚发育率分别为24％、29.9％,两者之间没有显著差(P＞0.05)；富氧和低氧气相培养的克隆胚胎的囊胚发育率分别为28.26％、31.55％,两者之间差异不显著(P＞0.05),低氧气相组成更有利于囊胚的发育.根据上述结果,奶牛体细胞核移植胚胎(克隆胚胎)的产业化生产条件为:供体细胞无需进行同期饥饿处理,直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎,融合后的克隆胚胎在密封的混合三气(5％ CO2-5％ O2-90％ N2)的气相组成下进行体外培养,能保持稳定的囊胚发育率.
北大核心刊
作者：郭惠东;特日格乐;尚爱萍;郑文静;刘刚;;王蓉蓉;;外文作者：Guo HTShang AZheng WLiu GDWang RLi YLi Yu;Guo Huidong,Tergel,Shang Aiping,Zheng Wenjing,Liu Gang,Daorna,Wang Rongrong,Li Yao,Li Yu*(Key Laboratory of Ministry of Education,Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology,Inner Mongolia University,Hohhot 010021,China)作者机构：来源：,2013,Vol.35,Issue.2基金：国家大学生创新性实验计划项目（批准号：）资助的课题综合影响因子：0.398复合影响因子：0.616关键词：Hela细胞;HGPRT缺陷;MNNG;6-TG;细胞融合摘要：建立稳定的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）缺陷的Hela细胞系，为细胞融合相关研究和人源化单克隆抗体制备提供有利于筛选的亲本细胞。通过诱变剂N-甲基-N’建立稳定的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）缺陷的Hela细胞系，为细胞融合相关研究和人源化单克隆抗体制备提供有利于筛选的亲本细胞。通过诱变剂N-甲基-N’-硝基．N-亚硝基胍（MNNG）对Hela细胞进行诱变，逐步提高培养基中6．巯基鸟嘌呤（6-TG）的浓度，筛选出对6-TG．定耐受的细胞，在次黄嘌呤-氨基喋呤、晌腺嘧啶（hypoxanthine．aminopterin．thymidine，HAT）培养基中鉴定其敏感性，最后对筛选得到Hela。HGPRT-进行生物学鉴定。在此基础上，将Hela—HGPRT-细胞系与人淋巴细胞融合，在HAT培养基中筛选杂交细胞。筛选得到了能够长期在含20gg／mL6-TG培养基中生长的Hela．HGPRr细胞，并且在HAT培养基中不能存活。Hela-HGPRT细胞与人淋巴细胞成功融合，获得能够连续传代培养的杂交瘤细胞。经MNNG诱导和6-TG筛选，得到了稳定传代的Hela—HGPRT-细胞系，该细胞系可用于细胞融合相关研究。;建立稳定的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷的Hela细胞系,为细胞融合相关研究和人源化单克隆抗体制备提供有利于筛选的亲本细胞。通过诱变剂N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对Hela细胞进行诱变,逐步提高培养基中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG稳定耐受的细胞,在次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(hypoxanthine-aminopterin-thymidine,HAT)培养基中鉴定其敏感性,最后对筛选得到的Hela-HGPRT-进行生物学鉴定。在此基础上,将Hela-HGPRT-细胞系与人淋巴细胞融合,在HAT培养基中筛选杂交细胞。筛选得到了能够长期在含20μg/mL 6-TG培养基中生长的Hela-HGPRT-细胞,并且在HAT培养基中不能存活。Hela-HGPRT-细胞与人淋巴细胞成功融合,获得能够连续传代培养的杂交瘤细胞。经MNNG诱导和6-TG筛选,得到了稳定传代的Hela-HGPRT-细胞系,该细胞系可用于细胞融合相关研究。
北大核心刊
作者：周鑫;张曼玲;;李荣凤外文作者：作者机构：来源：,2013,Vol.44,Issue.1基金：国家自然科学基金资助项目（）、国家高技术研究发展计划（863计划）（）;国家自然科学基金资助项目();国家高技术研究发展计划(863计划)()综合影响因子：0.302复合影响因子：0.478关键词：猪精液;冷冻方法;解冻液;效率;囊胚率摘要：采用三种不同的冷冻方法冷冻猪的新鲜精液，再分别用不同的解冻液在相同条件下同时解冻，对比解冻后精子的活力和顶体完整率．以优化猪精液冷冻方法．实验一：随机采用三种不同的冷冻方法冷冻猪的新鲜精液，再分别用不同的解冻液在相同条件下同时解冻，对比解冻后精子的活力和顶体完整率．以优化猪精液冷冻方法．实验一：随机选取三头健康的有稳定受精能力的优良种公猪，采集新鲜精液，分别用于冰颗粒、液氮颗粒和液氮细管三种方法冷冻，用同样的方法解冻，对比解冻后精子的活力和顶体完整率；实验二：用不同的解冻液解冻经干冰颗粒法冷冻的精液，对比不同解冻液对精子活力的影响；实验三：以孤雌激活和鲜精受精为对照，验证经实验一和实验二选择出来的最优冷冻方法和解冻液处理后的精子的体外受精能力．实验一显示，干冰颗粒冷冻法冷冻的猪精液解冻后精子活力（0．23）略高于液氮颗粒法的精子活力（0．20），而二者均显著高于细管冻精法的精子活力（0．08）（P〈0．05），液氮颗粒法的顶体完整率（54．7％）和细管法的顶体完整率（54．2％）无显著差异，但二者均显著低于干冰颗粒法的顶体完整率（58．0％）（P〈0．05）．实验二显示，Glucose—EDTA解冻液解冻后，精子活力（0．22）显著高于DPBS-BSA解冻液解冻后的精子活力（0．13）（P〈O．05）．实验三：经干冰颗粒法冷冻、Glucose—EDTA解冻液解冻的精液，体外受精后的囊胚发育率（17．6％）与鲜精体外受精囊胚率（17．9％）无显著差异，但二者均显著低于孤雌激活对照组的囊胚率（36．6％）（P〈O．05）．由此可知：干冰颗粒法冷冻结合Glucose—EDTA解冻液解冻是较为理想猪精液冷冻保存方法，经该方法冷冻、解冻的猪精液，体外受精后的胚胎发育率与鲜精没有显著差异．;采用三种不同的冷冻方法冷冻猪的新鲜精液,再分别用不同的解冻液在相同条件下同时解冻,对比解冻后精子的活力和顶体完整率,以优化猪精液冷冻方法.实验一:随机选取三头健康的有稳定受精能力的优良种公猪,采集新鲜精液,分别用干冰颗粒、液氮颗粒和液氮细管三种方法冷冻,用同样的方法解冻,对比解冻后精子的活力和顶体完整率;实验二:用不同的解冻液解冻经干冰颗粒法冷冻的精液,对比不同解冻液对精子活力的影响;实验三:以孤雌激活和鲜精受精为对照,验证经实验一和实验二选择出来的最优冷冻方法和解冻液处理后的精子的体外受精能力.实验一显示,干冰颗粒冷冻法冷冻的猪精液解冻后精子活力(0.23)略高于液氮颗粒法的精子活力(0.20),而二者均显著高于细管冻精法的精子活力(0.08)(P<0.05),液氮颗粒法的顶体完整率(54.7%)和细管法的顶体完整率(54.2%)无显著差异,但二者均显著低于干冰颗粒法的顶体完整率(58.0%)(P<0.05).实验二显示,Glucose-EDTA解冻液解冻后,精子活力(0.22)显著高于DPBS-BSA解冻液解冻后的精子活力(0.13)(P<0.05).实验三:经干冰颗粒法冷冻、Glucose-EDTA解冻液解冻的精液,体外受精后的囊胚发育率(17.6%)与鲜精体外受精囊胚率(17.9%)无显著差异,但二者均显著低于孤雌激活对照组的囊胚率(36.6%)(P<0.05).由此可知:干冰颗粒法冷冻结合Glucose-EDTA解冻液解冻是较为理想猪精液冷冻保存方法,经该方法冷冻、解冻的猪精液,体外受精后的胚胎发育率与鲜精没有显著差异.
作者：王珂;外文作者：Wang Ke;Wu YWANG Ke1,WU Ying-ji1,2 1.College of Life Science,2.Key Laboratory of the Chinese Ministry of Education for Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology,Inner Mongolia University,Hohhot,Inner Mongolia 010021,China作者机构：来源：,2013,Vol.19,Issue.2基金：全国大学生创新创业训练计划（）;高等学校博士学科重点专项科研基金（01）CSCD被引频次：2综合影响因子：1.030复合影响因子：1.260关键词：视黄酸;精子发生;减数分裂;信号通路摘要：视黄酸（RA）是维生素A即视黄醇（ROH）的一类氧化代谢产物，在哺乳动物精子发生过程（如引发减数分裂）中起着重要作用。在哺乳动物睾丸内，RA结合视黄酸受体（RA视黄酸（RA）是维生素A即视黄醇（ROH）的一类氧化代谢产物，在哺乳动物精子发生过程（如引发减数分裂）中起着重要作用。在哺乳动物睾丸内，RA结合视黄酸受体（RAR），在不同时期、不同类型细胞中调控相应靶基因的转录表达。在特定的时期，通过上调促进减数分裂的基因表达并下调抑制减数分裂的基因表达，最终引发精子发生过程中的减数分裂。而哺乳动物精子发生的研究对生殖生物学、发育生物学、生殖工程等方面都具有广阔的应用前景，所以研究RA在哺乳动物精子发生过程中引发减数分裂的信号通路十分有意义。本文介绍了RA信号传递系统及其作用机制，并对RA在精子发生过程中引发减数分裂的信号通路进行了综述。
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作者：王杰;奥旭东;李文斌;白海栋;;外文作者：Wang JAo XLi WBai HYue YYu Haiquan作者机构：来源：,2013,Vol.46,Issue.1基金：国家973计划项目; 转基因生物新品种培育重大专项CSCD被引频次：1综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：牛fabp3基因; 牛fabp4基因; 成肌细胞; 肌管摘要：【目的】分别构建牛fabp3和fabp4基因真核表达载体,并观察载体转染小鼠成肌细胞后基因的表达以及对内源fabp3和fabp4基因表达的影响,;
检测肉质性状形成相关基因在转基因细胞中的表达及对内源功能基因的影响。【方法】以pDsRED质粒为骨架载体,分别将人肌红蛋白启动子与目的基因相连、;
CMV启动子与红色荧光蛋白报告基因相连构建肌肉特异性表达fabp3基因的载体pDsHF3和表达fabp4基因的载体pDsHF4;用脂质体瞬时转染;
小鼠成肌细胞,72h后用2%孕马血清诱导成肌细胞向肌管的分化;利用real-
PCR技术检测转染前后成肌细胞中外源牛fabp3和fabp4基因和内源小鼠fabp3和fabp4基因的表达量。【结果】与对照组相比,小鼠成肌细胞;
分别转染pDsHF3和pDsHF4表达载体,24h后外源牛fabp3和fabp4基因均获得高水平的表达,48;
h后有所回落;而内源小鼠fabp3和fabp4基因在成肌细胞和诱导分化的肌管细胞中的表达均受到不同程度的影响。【结论】构建的真核表达载体能在成肌;
细胞中高效表达,外源牛fabp3或fabp4基因的转入能够影响小鼠成肌细胞及肌管中内源fabp3和fabp4基因的表达。
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作者：岳群华;袁建龙;郝斐;靳木子;王景园;杨文亮;;外文作者：Yue QYuan JHao FJin MWang JYang WLiu DCang Ming作者机构：来源：,2013,Vol.46,Issue.2基金：国家转基因生物新品种培育重大专项; 内蒙古自然科学重点项目CSCD被引频次：1综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：人工合成启动子SP; 骨骼肌特异表达启动子alpha- 骨骼肌卫星细胞; 肌管;FST;人工合成启动子SP;骨骼肌特异表达启动子α-骨骼肌卫星细胞;肌管;摘要：【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和;
pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和;
pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和alpha-
tin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到;
绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大;
小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量PCR和
blotting等方法进行检测分析。【结果】①转基因细胞系的生长趋势与非转基因细胞相似,转基因SMSCs细胞增殖的速度高于转基因SFFCs细胞;;
②流式细胞仪分析表明,转基因细胞系转染后70%以上细胞均处于G0/G1期,保持旺盛的分裂能力、具有单一峰值、细胞的整倍性好、细胞电子体积显著增大;③实时定量PCR及
blotting检测结果表明,转基因细胞系中FST的RNA及蛋白水平相比非转基因细胞系均上调;④转基因SMSCs和肌管相比转基因SFFCs细胞的;
FST表达量高,转pSPFCDs-red转基因细胞中FST的表达水平比转pCFCDs-red细胞系高。【结论】骨骼肌特异性启动子SP及
-actin能够在SMSCs及肌管中有效启动FST目的基因的表达,且在肌管中具有较高的表达量,SP启动子的启动效率较高于alpha-actin。;
在肌源性细胞中,FST的上调可以引起MSTN蛋白水平的下调,FST对骨骼肌细胞的生长发育具有一定促进作用。;[目的]构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响.[方法]利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量PCR和western blotting等方法进行检测分析.[结果]①转基因细胞系的生长趋势与非转基因细胞相似,转基因SMSCs细胞增殖的速度高于转基因SFFCs细胞;②流式细胞仪分析表明,转基因细胞系转染后70％以上细胞均处于G0/G1期,保持旺盛的分裂能力、具有单一峰值、细胞的整倍性好、细胞电子体积显著增大;③实时定量PCR及western blotting检测结果表明,转基因细胞系中FST的RNA及蛋白水平相比非转基因细胞系均上调;④转基因SMSCs和肌管相比转基因SFFCs细胞的FST表达量高,转pSPFCDs-red转基因细胞中FST的表达水平比转pCFCDs-red细胞系高.[结论]骨骼肌特异性启动子SP及α-actin能够在SMSCs及肌管中有效启动FST目的基因的表达,且在肌管中具有较高的表达量,SP启动子的启动效率较高于α-actin.肌源性细胞中,FST的上调可以引起MSTN蛋白水平的下调,FST对骨骼肌细胞的生长发育具有一定促进作用.
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作者：刘冬;沙日娜;温建勋;王瑞;;外文作者：Liu DSha RWen JWang RCang MLiu Dongjun作者机构：来源：,2012,Vol.20,Issue.1基金：国家基础科学人才培养基金; 国家自然科学基金; 内蒙古自然科学基金重大项目CSCD被引频次：2综合影响因子：0.839复合影响因子：1.288关键词：卵母细胞成熟; 胚胎发育; 差异基因; mRNA差异显示; 实时定量PCR摘要：卵母细胞成熟和母源型-合子型过渡过程中,存在大量基因的表达差异,使得应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)筛选对胚胎发育起关键作用的基因成为可;
能。为了解牛卵母细胞卵母细胞成熟和母源型-合子型过渡过程中,存在大量基因的表达差异,使得应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)筛选对胚胎发育起关键作用的基因成为可;
能。为了解牛卵母细胞成熟过程及体外受精胚胎不同发育阶段相关基因mRNA表达规律,本研究以牛生发泡(GV)期卵母细胞、体外受精获得的8细胞期胚胎和;
囊胚期胚胎为检测对象,利用mRNA差异显示技术筛选这三个时期mRNA表达差异基因,并用实时定量PCR分析差异基因在这三个时期以及体外成熟卵母细胞;
中的mRNA丰度。结果成功筛选得到5个差异片段,经测序和GenBank数据库比对分析,检索到与这5个片段有高同源性的已知基因,分别为无机焦磷酸1;
基因(PPA1)、ErbB2互作蛋白基因(ERBB2IP)、350kD中心体相互作用蛋白基因(CEP350)、核糖体蛋白L27a基因(RPL27;
A)和Ⅱ类主要组织相容复合物下调因子基因(IK),实时定量PCR检测和SPSS统计分析结果表明,PPA1、ERBB2IP和CEP350mRNA表;
达量随胚胎发育进程呈不同程度的降低趋势,RPL27AmRNA表达量在囊胚期由降低转为升高,IK的转录物含量在囊胚期前呈波动变化,到囊胚期显著降低;
。本研究结果为进一步了解卵母细胞成熟对后续胚胎发育的影响以及合子基因组激活机制提供了实验依据。
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作者：刘陶迪;罗奋华;于泊洋;外文作者：Liu TLuo FYu BWu YLiu Taodi[1];Luo Fenhua[2];Yu Boyang[2];Wu Yingji[2]作者机构：来源：,2012,Vol.31,Issue.1基金：教育部春晖计划合作科研项目; 内蒙古自然科学基金项目资助;教育部"春晖计划"合作科研项目，内蒙古自然科学基金项目综合影响因子：0.741复合影响因子：0.902关键词：大鼠; 睾丸组织; 精原干细胞; 差异表达; 基因芯片摘要：通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12*135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因;
组表达差异分析。结果显示:具有2倍通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12*135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因;
组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因;
中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组;
分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与;
芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。
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作者：;;云亭;李荣凤;;粱浩;云亭;李荣凤外文作者：Zhao LLiang HYun TLi Rongfeng作者机构：来源：,2012,Vol.45,Issue.2基金：国家863计划项目; 农业部转基因生物新品种培育重大专项; 内蒙古自治区自然科学基因资助项目CSCD被引频次：2综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：牛; 生长抑制素基因; 基因敲除打靶载体; 胎儿成纤维细胞摘要：【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物;
,利用聚合酶链式反应【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物;
,利用聚合酶链式反应(
reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出两套打靶载体的同源短臂和长臂,再分别插入到两套打靶专用基础载体pMCS-PL;
P和PⅢ中,构建两套用于牛MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN。【结果】经过PCR、T载体连接和DNA测序,证实载;
体pPLP-MSTN包含2.8 kb同源短臂和4.0 kb同源长臂,载体PⅢ-MSTN包含1.3 kb同源短臂和6.8;
kb同源长臂;经过限制性内切酶酶切鉴定,证实两套载体的同源臂分别正确插入到基础载体内。【结论】两套牛MSTN基因敲除打靶载体pPLP-MSTN和;
PⅢ-MSTN构建成功,载体pPLP-MSTN为不含负筛选标记的传统基因敲除打靶载体,载体PⅢ-MSTN为不含负筛选标记的荧光蛋白启动子捕获打靶;
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作者：王子东;苏建国;段彪;杨春荣;高广琦;康峰;张荣芳;胡晓明;;外文作者：Wang ZSu JDuan BYang CGao GKang FZhang RHu XHu TLi GWang Zidong[1];Su Jianguo[2];Duan Biao[1];Yang Chunrong[2];Gao Guangqi[1];Kang Feng[1];Zhang Rongfang[2];Hu Xiaoming[1];Hu Tingmao[1];Li Guangpeng[1]作者机构：来源：,2012,Issue.11基金：国家重大专项高产转基因肉牛新品种培育项目综合影响因子：0.529复合影响因子：0.901关键词：实时荧光定量RT-PCR; 转基因细胞; 内参基因;实时荧光定量RT-PCR;转基因细胞;内参基因;GeNNormFB摘要：EEF1A2>18S;
rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可;
以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。;采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimum Linn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平.以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性.根据GeNorm、NornFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序.结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11＞EEF1A2＞1 8S rRNA＞RPS15A＞GAPDH＞HMBS＞UXT＞ACTB＞SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因.稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础.">采用RT-PCR扩增亚麻种子(L
usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-;
AcGFP-CAG-FAD3B,通过q采用RT-PCR扩增亚麻种子(L
usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-;
AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选;
内参基因ACTB、GAPDH、18S;
rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性。根据GeNorm、NormFinder和BestKe;
eper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11>EEF1A2>18S;
rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可;
以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。;采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimum Linn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平.以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性.根据GeNorm、NornFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序.结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11＞EEF1A2＞1 8S rRNA＞RPS15A＞GAPDH＞HMBS＞UXT＞ACTB＞SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因.稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础.
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作者：;王瑞;郝斐;温建勋;毕兆伟;诺明途;外文作者：Cong SWang RHao FWen JBi ZNuo MLiu Dongjun作者机构：来源：,2012,Vol.20,Issue.11基金：国家高技术研究发展计划(863)项目CSCD被引频次：1综合影响因子：0.839复合影响因子：1.288关键词：国产丝裂霉素; 饲养层; STO细胞; 胚胎干细胞摘要：寻找一种适合牛胚胎干细胞生长的饲养层对成功培育牛胚胎干细胞有重要意义。本研究采用不同浓度国产丝裂霉素处理的SIM小鼠(M
musculus)成纤维细胞耐硫代鸟嘌寻找一种适合牛胚胎干细胞生长的饲养层对成功培育牛胚胎干细胞有重要意义。本研究采用不同浓度国产丝裂霉素处理的SIM小鼠(M
musculus)成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐鸟苯苷亚系(STO细胞)作为饲养层培养牛胚胎干细胞,为牛胚胎干细胞培养体系的建立提供实验依据。用10;
、15、20、30和40mug/mL国产丝裂霉素分别处理1.5、3.0和4.0h的STO细胞;形态学观察不同代次STO细胞生长状态,并对生长在以;
STO细胞为饲养层的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶染色(AKP)、阶段特异性胚胎细胞表面抗原-4(OCT-4)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1;
)免疫组化检测、体外分化形成拟胚体等实验。结果显示,当丝裂霉素的浓度为15mug/mL处理3.0h可有效的抑制细胞分裂;STO细胞在5~10代作;
为饲养层细胞形态最好且获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT-4和SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体。结果证明使用国产丝;
裂霉素能有效地处理STO细胞且在以STO细胞作为饲养层培养的牛胚胎干细胞能保持未分化状态,可以作为常规饲养层培养牛胚胎干细胞。;寻找一种适合牛胚胎干细胞生长的饲养层对成功培育牛胚胎干细胞有重要意义.本研究采用不同浓度国产丝裂霉素处理的SIM小鼠(Mus musculus)成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐鸟苯苷亚系(STO细胞)作为饲养层培养牛胚胎干细胞,为牛胚胎干细胞培养体系的建立提供实验依据.用10、15、20、30和40 μg/mL国产丝裂霉素分别处理1.5、3.0和4.0 h的STO细胞;形态学观察不同代次STO细胞生长状态,并对生长在以STO细胞为饲养层的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶染色(AKP)、阶段特异性胚胎细胞表面抗原-4(OCT-4)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)免疫组化检测、体外分化形成拟胚体等实验.结果显示,当丝裂霉素的浓度为15 μg/mL处理3.0 h可有效的抑制细胞分裂;STO细胞在5～10代作为饲养层细胞形态最好且获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT-4和SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体.结果证明使用国产丝裂霉素能有效地处理STO细胞且在以STO细胞作为饲养层培养的牛胚胎干细胞能保持未分化状态,可以作为常规饲养层培养牛胚胎干细胞.
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作者：于泊洋;罗奋华;;外文作者：Yu BLuo FZhang YWu Yingji作者机构：来源：,2012,Issue.9基金：教育部春晖计划资助项目; 内蒙古自治区自然科学基金项目;教育部春晖计划资助项目，内蒙古自治区自然科学基金综合影响因子：0.529复合影响因子：0.901关键词：小鼠; Gsg2启动子; CMV启动子; 精子发生摘要：旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRe;
d载体。重组载体是以本旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRe;
d载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因;
的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。
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作者：刘燕;罗奋华;包佳婧;刘林洪;单飞彪;外文作者：Liu YLuo FBao JLiu LShan FWu Yingji作者机构：来源：,2012,Vol.43,Issue.9基金：教育部创新团队计划子课题; 高等学校博士学科点博导类基金项目综合影响因子：0.593复合影响因子：0.893关键词：绵羊; Gfralpha1基因; 克隆; 序列分析; 原核表达摘要：旨在克隆绵羊Gfralpha1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs)。本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊G
a1基因的编码区大部分片段。结果,旨在克隆绵羊Gfralpha1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs)。本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊G
a1基因的编码区大部分片段。结果,克隆得到的绵羊Gfralpha1基因的大部分cDNA序列长1 312bp,包括1;
311bp的开放阅读框(ORF),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5%、91.3%、91.0%;
、88.9%和88.0%。根据获得的cDNA序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pET-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经;
IPTG诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备GFRalpha1抗原表位多肽。W
blot检测发现,经诱导表达的GFRalpha1抗原表位多肽约为18.2ku,与预测的大小一致。绵羊Gfralpha1基因的克隆和表达研究,为进;
一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊SSCs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件。
北大核心刊
作者：苏立宁;;;外文作者：Su LLi HLiu DXu RSU Li-ning[1];LI Hua[2];LIU Dong-jun[3];XU Ri-gan[3]作者机构：来源：,2012,Vol.43,Issue.9基金：国家转基因项目; 博士后基金资助;国家转基因项目，博士后基金综合影响因子：0.593复合影响因子：0.893关键词：绒山羊; 毛囊; 表达序列标签;绒山羊;毛囊;DDRT-PCR;表达序列标签;摘要：旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制;
初级毛囊和次级毛囊旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制;
初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登录号JK711022-JK711036),其中3;
条ESTs与毛囊发育有关,5条ES-Ts与次级毛囊和皮脂腺的发育有关。生物信息分析显示,JK711036与甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRI;
P12)基因有关,其他ESTs功能未知。结果表明,胎儿期初级毛囊和次级毛囊在多种代谢途径上都存在差异表达的基因,这将为进一步研究山羊毛和绒的形成;
分子机制奠定基础。
北大核心刊
作者：王会敏;奥旭东;;高海霞;外文作者：Wang HAo XYue YGao HYu Haiquan作者机构：来源：,2012,Vol.31,Issue.5综合影响因子：0.414复合影响因子：0.595关键词：组织; DNA甲基化; mRNA表达;MBD1;组织;DNA甲基化;mRNA表达;摘要：DNA甲基化是主要的表观遗传调节方式,在转录水平调节基因的表达,甲基化CpG结合蛋白MBD1能够结合甲基化及非甲基化的DNA,通过抑制域抑制基因;
的转录,在DNA甲基化DNA甲基化是主要的表观遗传调节方式,在转录水平调节基因的表达,甲基化CpG结合蛋白MBD1能够结合甲基化及非甲基化的DNA,通过抑制域抑制基因;
的转录,在DNA甲基化和转录抑制之间起重要作用,但DNA甲基化对MBD1自身的调节作用还不清楚。本研究首先利用RT-PCR检测成年牛心脏、肾脏、;
肝脏、睾丸及卵巢5种组织中MBD1基因mRNA的表达;并根据牛MBD1调节区序列,针对其中的12个CpG位点设计引物,利用甲基化PCR测序分析方;
法,分析该调节区的DNA甲基化状态在牛5种组织中的变化。结果表明,在牛的5种组织中,MBD1基因在心脏和肾脏的表达量低于肝脏、睾丸及卵巢,且差异;
显著(P<0.05);DNA甲基化检测显示,心脏和肾脏MBD1调节区的甲基化比率较肝脏、睾丸及卵巢甲基化低,说明调控区DNA甲基化与MBD1基因;
的组织特异性表达相关。
北大核心刊
作者：刘欣;胡晓明;;程磊;郜宇;刘扬;外文作者：Liu XHu XBai CCheng LGao Yu;Liu YLi Guangpeng作者机构：来源：,2011,Vol.13,Issue.6基金：国家863计划项目; 教育部科技创新团队基金资助;国家863计划项日，教育部科技创新团队基金综合影响因子：0.972复合影响因子：1.571关键词：牛卵母细胞; 细胞松弛素B; 减数分裂; 微丝; 微管; 染色体摘要：细胞松弛素B(C
B,CB)是一种抑制微丝聚合的药物,能抑制微丝的组装从而阻止胞质分裂和极体排放,是研究细胞分裂器形成与变化的重要药物。在牛卵母细胞细胞松弛素B(C
B,CB)是一种抑制微丝聚合的药物,能抑制微丝的组装从而阻止胞质分裂和极体排放,是研究细胞分裂器形成与变化的重要药物。在牛卵母细胞体外成熟培养过;
程中加入7.5mug/mL的CB进行处理,分析CB对减数分裂过程中细胞骨架形态、染色体的排列与分离等方面的影响。结果显示,CB处理后卵母细胞第一;
极体的排放受到了抑制,染色体的排列和分离受到了影响,出现了同源染色体分离不完全或分离不均匀及分离后又聚在一起等异常情况,形成许多二倍体卵母细胞;;
纺锤体微管的形态发生了变化,出现了两个纺锤体、巨大纺锤体和多极纺锤体等异常结构;微丝的正常分布受到了影响,染色体周围没有或少有微丝分布,皮质下的;
微丝分布也变得少而不均匀;这说明微丝与微管在减数分裂过程中是协同作用的,CB通过影响微丝的动态变化,改变了纺锤体微管的形态结构,最终抑制了极体的;
排放。;细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)是一种抑制微丝聚合的药物,能抑制微丝的组装从而阻止胞质分裂和极体排放,是研究细胞分裂器形成与变化的重要药物.在牛卵母细胞体外成熟培养过程中加入7.5μg/mL的CB进行处理,分析CB对减数分裂过程中细胞骨架形态、染色体的排列与分离等方面的影响.结果显示,CB处理后卵母细胞第一极体的排放受到了抑制,染色体的排列和分离受到了影响,出现了同源染色体分离不完全或分离不均匀及分离后又聚在一起等异常情况,形成许多二倍体卵母细胞；纺锤体微管的形态发生了变化,出现了两个纺锤体、巨大纺锤体和多极纺锤体等异常结构；微丝的正常分布受到了影响,染色体周围没有或少有微丝分布,皮质下的微丝分布也变得少而不均匀；这说明微丝与微管在减数分裂过程中是协同作用的,CB通过影响微丝的动态变化,改变了纺锤体微管的形态结构,最终抑制了极体的排放.
北大核心刊
作者：杨斐斐;刘新峰;葛秀国;丁向彬;宋桂敏;;郭宏外文作者：Yang FLiu XGe XDing XSong GLi GGuo HYANG Feifei[1];LIU Xinfeng[1];GE Xiuguo[1];DING Xiangbin[1];SONG Guimin[1];LI Guangpeng[2];GUO Hong[1]作者机构：来源：,2012,Vol.43,Issue.6基金：国家转基因重大专项综合影响因子：0.688复合影响因子：1.077关键词：定点突变; 高GC含量; 牛Dgat1基因; 232位点摘要：将扩增出的1.8;
kb目的片段克隆入pUCm-T载体,以构建好的质粒为模板进行突变反应。DpnⅠ酶切反应产物,去除甲基化及半甲基化DNA模板。酶切产物经纯化后转入;
D将扩增出的1.8;
kb目的片段克隆入pUCm-T载体,以构建好的质粒为模板进行突变反应。DpnⅠ酶切反应产物,去除甲基化及半甲基化DNA模板。酶切产物经纯化后转入;
DH5alpha感受态细胞,提取质粒测序。结果表明,双核苷酸碱基AA突变为GC,成功得到突变载体。将定点突变试剂盒方法加以改进,完成GC含量高达;
69.5%模板定点突变,改进后的方法操作简单、经济实用,有效地解决了高GC含量模板难突变难题。;将扩增出的1.8kb目的片段克隆入pUCm-T载体,以构建好的质粒为模板进行突变反应.Dpn Ⅰ酶切反应产物,去除甲基化及半甲基化DNA模板.酶切产物经纯化后转入DH5α感受态细胞,提取质粒测序.结果表明,双核苷酸碱基AA突变为GC,成功得到突变载体.将定点突变试剂盒方法加以改进,完成GC含量高达69.5％模板定点突变,改进后的方法操作简单、经济实用,有效地解决了高GC含量模板难突变难题.
北大核心刊
作者：;苏立宁;;李雪峰;外文作者：Li HSu LLiu DLi XXu Rigan作者机构：来源：,2012,Vol.45,Issue.13基金：国家转基因项目CSCD被引频次：1综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：绒山羊; CRABPⅠ基因; 克隆; 基因表达; 生物信息学摘要：【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular r
proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular r
proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法;
克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果;
】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp(JN936490),其开放阅读框为414;
bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABPⅠ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位点和O糖基化位点;蛋白二级结构主要;
由alpha螺旋、beta折叠和少量的转角及无规则卷曲构成。胎儿皮肤中CRABPⅠ基因在90 d的表达量明显高于100、120和130;
d(P<0.05)。【结论】绒山羊的CRABPⅠ基因cDNA中的开放阅读框(
frame,ORF)在不同物种间较为保守,但种属特异性集中表现在第33和123氨基酸残基处,该基因在胎儿期的90 d表达量最大。
北大核心刊
作者：;王瑞;温建勋;郝斐;李硕;;外文作者：Cong SWang RWen JHao FLi SLiang HLiu Dongjun作者机构：来源：,2012,Vol.45,Issue.12基金：国家863计划项目综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：牛; 胚胎干细胞; 成纤维细胞; 混合饲养层摘要：【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(
fibroblast,MEF)和牛胎儿【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(
fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(
fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎;
干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG;
mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构;
致密、与滋养层界限明显;②小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞在1﹕1比例混合下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰优于其它比例组合;③获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT4、SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体。【结论】小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以1﹕;
1的比例混合下制成的饲养层可更好地支持牛胚胎干细胞的体外培养,获得的克隆形态最好。
北大核心刊
作者：刘林洪;史小芳;罗奋华;于泊洋;;刘燕;外文作者：作者机构：来源：,2012,Vol.34,Issue.5基金：内蒙古自治区自然科学基金（N0.2009ZD05）和国家基础科学人才培养基金（No.J0730648）资助项目;内蒙古自治区自然科学基金(No.2009ZD05);国家基础科学人才培养基金(No.J0730648)资助项目~~综合影响因子：0.398复合影响因子：0.616关键词：大鼠;睾丸生殖细胞;支持细胞/生殖细胞共培养;体外精子发生摘要：睾丸体外生殖模型的发展为体外研究睾丸的精子发生分子机制和睾丸毒理学提供了实验工具。很多报道的模型都无法真正地模拟体内复杂的生化分子及功能性相互作用从而睾丸体外生殖模型的发展为体外研究睾丸的精子发生分子机制和睾丸毒理学提供了实验工具。很多报道的模型都无法真正地模拟体内复杂的生化分子及功能性相互作用从而导致研究价值有限。该实验拟建立一个体外长期维持睾丸生殖细胞存在,并能持续产生精子细胞的支持细胞/生殖细胞共培养体系。体系中的支持细胞和生殖细胞均由曲细精管组织块迁移到培养皿上,在不添加任何生长因子的情况下维持体外精子发生至圆形精子细胞超过2个月。RT-PCR分析显示,共培养细胞稳定表达cdh1、scp3、tnp2;免疫荧光染色结果显示,CDH1、PLZF、SCP3以及SOX9阳性细胞存在。这些结果例证了体系中同时存在精原干细胞、精母细胞、精子细胞和支持细胞。简单高效的支持细胞/生殖细胞体外共培养体系可用于雄性生殖的分子机制和毒理学研究。
北大核心刊
作者：刘海超;任俊明;外文作者：Liu HRen JWu YLIU Haichao,REN Junming,WU Yingji College of Life Science,Inner Mongolia University,The Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology,Ministry of Education,Hohhot 010021,China作者机构：来源：,2012,Vol.28,Issue.1基金：国家基础科学人才培养基金项目; 教育部春晖计划合作科研项目; 高等学校博士学科点专项科研基金项目;国家基础科学人才培养基金项目(2009USRTP-ZN-05);教育部“春晖计划”合作科研项目(Z36);高等学校博士学科点专项科研基金项目(01)~~CSCD被引频次：1关键词：胶质细胞源性神经营养因子; 精原干细胞; 信号通路; 自我更新摘要：胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-
factor,GDNF)是TGF-beta超家族的一个相关成员。哺乳动物睾丸曲细精管内支持细胞分泌的GDNF,胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-
factor,GDNF)是TGF-beta超家族的一个相关成员。哺乳动物睾丸曲细精管内支持细胞分泌的GDNF,能促进精原干细胞(
cells,SSCs)的自我更新与增殖。SSCs去分化诱导产生的多能干细胞已被广泛应用于再生医学领域,且SSCs在制作转基因动物、男性不育治疗和;
体外实施精子发生过程等方面,具有极大的应用价值。所以,GDNF引发SSCs自我更新的作用机理非常值得探索。通过对GDNF引发SSCs自我更新的信;
号通路进行系统梳理,我们发现了如下的作用过程:GDNF与GFR-alpha1特异性结合,活化Ret蛋白酪氨酸激酶,随后激活Ras/ERK1/2、;
PI3K-Akt和SFK信号通路,促进SSCs的自我更新;同时,在该过程中还存在信号通路间的交联对话现象。;胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是TGF-β超家族的一个相关成员。哺乳动物睾丸曲细精管内支持细胞分泌的GDNF,能促进精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的自我更新与增殖。SSCs去分化诱导产生的多能干细胞已被广泛应用于再生医学领域,且SSCs在制作转基因动物、男性不育治疗和体外实施精子发生过程等方面,具有极大的应用价值。所以,GDNF引发SSCs自我更新的作用机理非常值得探索。通过对GDNF引发SSCs自我更新的信号通路进行系统梳理,我们发现了如下的作用过程:GDNF与GFR-α1特异性结合,活化Ret蛋白酪氨酸激酶,随后激活Ras/ERK1/2、PI3K-Akt和SFK信号通路,促进SSCs的自我更新;同时,在该过程中还存在信号通路间的交联对话现象。
北大核心刊
作者：刘坤;苏广华;段彪;;;外文作者：Liu KSu GDuan BWei ZWu XLi Guangpeng作者机构：来源：,2012,Vol.47,Issue.1基金：国家高新技术发展计划(863)项目; 内蒙古大学生殖生物学及生物技术教育部创新团队项目CSCD被引频次：2综合影响因子：0.608复合影响因子：0.804关键词：藏羚羊; 生长曲线; 染色体; 核型摘要：藏羚羊(P
hodgsonii)是我国特有的国家Ⅰ级重点保护野生动物,生存在高海拔低氧环境下,具有高原生物的细胞遗传特性。实验采用组织块贴壁培养法进行原代藏羚羊(P
hodgsonii)是我国特有的国家Ⅰ级重点保护野生动物,生存在高海拔低氧环境下,具有高原生物的细胞遗传特性。实验采用组织块贴壁培养法进行原代培;
养,后经差异贴壁法联合消化排除法纯化,成功构建了藏羚羊成纤维细胞系,并对培养不同代次细胞的形态、生长动力学、染色体核型等进行了研究。结果表明,培;
养得到的藏羚羊细胞为典型的成纤维细胞,第7、10、15代细胞群体倍增时间分别为26、48、50;
h。细胞的生长均为"S"型。染色体中二倍体染色体(2n=60)占主体,所占比例为65%~91%,包括性染色体X、Y在内均为端着丝粒类型,染色体组;
的总相对长度为193.45,平均相对长度为3.22,未发现随体、次缢痕等特殊标志性特征。
北大核心刊
作者：肖红;高圆;梁伟;高笑宇;汪慧;杜晓媛;;外文作者：Xiao HGao YLiang WGao XWang HDu XGuo XLiu DXIAO Hong[1];GAO Yuan[2];LIANG Wei[1];GAO Xiao-yu[1];WANG Hui[1];DU Xiao-yuan[1];GUO Xu-dong[1];LIU Dong-jun[1]作者机构：来源：,2012,Vol.43,Issue.2基金：转基因生物新品种培育重大专项课题; 内蒙古自然科学基金; 内蒙古自治区高等学校科学研究资助项目综合影响因子：0.302复合影响因子：0.478关键词：绒山羊; 胰岛素样生长因子I; 红色荧光蛋白; 毛囊细胞; 胎儿成纤维细胞;绒山羊;胰岛素样生长因子Ⅰ;红色荧光蛋白;毛囊细胞;胎儿成纤维细胞;摘要：构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1cDNA序列,连接到含有UHS;
启动子序列的克隆载体构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1cDNA序列,连接到含有UHS;
启动子序列的克隆载体p19TU的SalI、SphI位点,获得过渡质粒载体p19TUI;pCDsRed2和过渡质粒载体分别经酶切和连接构成表达载体;
pCDsR-UI.以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以脂质体方法转染所培养的第2代成纤维细胞,DMEM/F12+10%;
FBS、37℃5%CO2中培养,经添加G418筛选,获得了稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆,经特异性PCR鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.;
转基因前后分析细胞生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数正常.
北大核心刊
作者：刘陶迪;罗奋华;于泊洋;萨初拉;外文作者：Liu TLou FYu BSa CWuYLiu Taodi[1];Lou Fenhua[2];Yu Boyang[2];Sa Chula[2];Wu Yingji[2]作者机构：来源：,2011,Vol.25,Issue.11基金：致谢：基因芯片杂交实验由上海康成生物工程有限公司完成综合影响因子：0.426复合影响因子：0.457关键词：精原细胞;寡核苷酸序列分析;大鼠;干细胞摘要：检测大鼠精原干细胞早期发育过程中第6天与第8天睾丸组织的差异表达基因。方法通过基因芯片技术，利用Roche．Nimble Gen公司大鼠12×135K全基因组表达谱芯片分别与检测大鼠精原干细胞早期发育过程中第6天与第8天睾丸组织的差异表达基因。方法通过基因芯片技术，利用Roche．Nimble Gen公司大鼠12×135K全基因组表达谱芯片分别与第6天和第8天睾丸组织的cDNA进行杂交。比较两个样品差异表达的基因。结果差异表达基因700个，表达上调的基因共295个，表达下调的基因共405个。参与了1407个基因功能分析条目；参与了46个生物学通路。结论大鼠精原干细胞早期发育过程中，精原干细胞的发生与增殖是一个多基因参与、多因素作用和多阶段进展的过程。;目的 检测大鼠精原干细胞早期发育过程中第6天与第8天睾丸组织的差异表达基因.方法 通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司大鼠12×135K全基因组表达谱芯片分别与第6天和第8天睾丸组织的cDNA进行杂交.比较两个样品差异表达的基因.结果 差异表达基因700个,表达上调的基因共295个,表达下调的基因共405个.参与了1 407个基因功能分析条目；参与了46个生物学通路.结论 大鼠精原干细胞早期发育过程中,精原干细胞的发生与增殖是一个多基因参与、多因素作用和多阶段进展的过程.
北大核心刊
作者：马玉珍;任宇;周雪原;;外文作者：Ma YRen Yu;Zhou XLiu DXu RMA Yu-Zhen[1];REN Yu[2];ZHOU Xue-Yuan[2];LIU Dong-Jun[2];XU Ri-Gan[2]作者机构：来源：,2011,Vol.32,Issue.6基金：国家自然科学基金项目间隙连接蛋白在绵羊胚胎发育过程中的功能研究资助教育部学科：生物学,临床医学关键词：绵羊; 转基因; 体细胞; 核移植摘要：扩增人肝细胞再生增强因子(huma
regeneration，ALR)基因，利用质粒pIRES2-EGFP构建新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(
fl扩增人肝细胞再生增强因子(huma
regeneration，ALR)基因，利用质粒pIRES2-EGFP构建新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(
protein，EGFP)双标记基因且EGFP和ALR基因为双顺反子的真核表达载体。LipofectAMINE~(TM)介导其转染体外培养的绵羊;
胎儿成纤维细胞(
fibroblastcells，sFFCs)；经G418筛选转基因细胞；激光共聚焦显微镜挑选绿色荧光单克隆细胞。PCR、RT-PCR和免疫组织化;
学方法进一步检测ALR基因及其表达；稳定表达外源基因的sFFCs作供体，移入去核的绵羊卵母细胞中，进行体细胞核移植。通过激光共聚焦显微镜和ALR;
抗体检测EGFP、ALR基因在胚胎水平上的表达，其结果表明：由IRES连接的EGFP和ALR基因可在绵羊胎儿成纤维细胞内同时表达，由此细胞核移植;
产生的转基因胚胎在发育的各阶段均可见绿色荧光；囊胚中所有细胞表达EGFP基因；发绿色荧光的胚胎中ALR基因同时存在。因此，由IRES连接标记基因;
和目的基因，以标记基因指示目的基因的表达，可简化检测目的基因的繁琐手段；用筛选的转基因早期胚胎进行移植，可提高制备转基因动物的效率。
北大核心刊
作者：鲍文蕾;李彬;;;;;外文作者：Bao WLi BHou XLiu JGuo XWang ZLiu Dongjun作者机构：来源：,2011,Vol.44,Issue.22基金：转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划;转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划项目CSCD被引频次：3综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：内蒙古白绒山羊; 毛囊特异性表达载体; 稳定转染;内蒙古白绒山羊;VEGF;毛囊特异性表达载体;稳定转染;摘要：【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endot
164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endot
164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的;
转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建V;
EGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV(6.3;
kb)。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞;
基因组中的整合。【结果】在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序;
连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因;外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中。【结论】成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异;
表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件。
作者：李树裕;外文作者：Li SWang Zhigang作者机构：来源：,2009,Issue.12基金：国家自然科学基金; 国家基础科学人才培养基金CSCD被引频次：2综合影响因子：0.529复合影响因子：0.901关键词：粘附斑激酶; 发育; 肿瘤; 信号通路摘要：粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一类胞质非受体蛋白酪氨酸激酶,属于蛋白酪氨酸激酶(
kinase)超家族,因而也称为PTKⅡ.FAK在细胞信粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一类胞质非受体蛋白酪氨酸激酶,属于蛋白酪氨酸激酶(
kinase)超家族,因而也称为PTKⅡ.FAK在细胞信号转导中处于十分重要的位置,它是胞内外信号出入的中枢,介导多条信号通路.FAK可以整合来;
自整合素、生长因子以及机械刺激等的信号,激活胞内PI3K/Akt、Ras/MAPK等信号通路,调节细胞生长.FAK还与胚胎发育、肿瘤发生与迁移有;
北大核心刊
作者：金永;袁建龙;朱兵;;外文作者：Jin YYuan JZhu BGuo XLiu Dongjun作者机构：来源：,2011,Vol.19,Issue.3基金：国家转基因生物新品种培育重大专项;国家转基因生物新品种培育重大专项项目CSCD被引频次：1综合影响因子：0.839复合影响因子：1.288关键词：绒山羊; 卵母细胞; 孤雌激活; 胚胎发育摘要：为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集;
卵母细为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集;
卵母细胞,并进行体外成熟。将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMA;
P)、7\%乙醇+6-DMAP、IA23187+放线菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7\%乙醇+CHX处理,体外发育48h后统计卵裂率、;
8-cell率,7～9d后统计囊胚率和囊胚细胞数。结果表明,IA23187+6-DMAP处理组的卵裂率(89.64.9\%)显著低于I
in+6-DMAP(99.10.8\%)、IA23187+CHX(97.61.2\%)、Ionomycin+CHX(99.30.6\%)及7\%乙醇+C;
HX(97.51.4\%)处理组(P<0.05),而与7\%乙醇+6-DMAP(96.30.5\%)处理组没有显著差异;IA23187+CHX(;
81.35.8\%)和Ionomycin+CHX(82.56.6\%)处理组的8-细胞率显著高于IA23187+6-DMAP(48.44.3\%)、I;
onomycin+6-DMAP(42.51.8\%)、7\%乙醇+6-DMAP(38.22.1\%)及7\%乙醇+CHX(62.52.2\%)处理组(P&;0.05);IA23187+6-DMAP(22.82.4\%)和Ionomycin+6-DMAP(20.64.8\%)处理组的囊胚率显著高于7;
\%乙醇+6-DMAP(10.51.8\%)、IA23187+CHX(8.41.2\%)、Ionomycin+CHX(11.82.0\%)及7\%乙醇+C;
HX(8.82.5\%)处理组(P0.05)。利用IA23187、Ionomycin及乙醇联合6-DMAP和C;
HX,对山羊卵母细胞进行激活均能获得较高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇与CHX联合激活处理组可获得较高的8-cell率,IA;
23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP处理组获得较高的囊胚率,不同处理组的囊胚均具有较高的细胞数量。IA23187或I
mycin联合6-DMAP是激活山羊卵母细胞最适方法,是体细胞核移植技术过程中的较为高效的体外激活方法,该研究结果为山羊卵母细胞孤雌发育及体外激;
活等相关研究提供了借鉴。;为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集卵母细胞,并进行体外成熟.将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、7\%乙醇+6-DMAP、IA23187+放线菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7\%乙醇+CHX处理,体外发育48 h后统计卵裂率、8-cell率,7～9 d后统计囊胚率和囊胚细胞数.结果表明,IA23187+6-DMAP处理组的卵裂率(89.6±4.9\%)显著低于Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8\%)、IA23187+CHX(97.6±1.2\%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6\%)及7\%乙醇+CHX(97.5±1.4\%)处理组(P＜0.05),而与7\%乙醇+6-DMAP(96.3±0.5\%)处理组没有显著差异;IA23187+CHX(81.3±5.8\%)和Ionomycin+CHX(82.5±6.6\%)处理组的8-细胞率显著高于IA23187+6-DMAP(48.4±4.3\%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5+1.8\%)、7\%乙醇+6-DMAP(38.2±2.1\%)及7\%乙醇+CHX(62.5±2.2\%)处理组(P＜0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4\%)和Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8\%)处理组的囊胚率显著高于7\%乙醇+6-DMAP(10.5±1.8\%)、IA23187+CHX(8.4±1.2\%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0\%)及7\%乙醇+CHX(8.8±2.5\%)处理组(P＜0.05);囊胚细胞数(200.0±14.0、169.6+11.4、187.0+8.8、201.3±16.5、179.6±5.2和177.6±20.8个)各组间没有明显差异)(P＞0.05).利用IA23187、Ionomycin及乙醇联合6-DMAP和CHX,对山羊卵母细胞进行激活均能获得较高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇与CHX联合激活处理组可获得较高的8-cell率,IA23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP处理组获得较高的囊胚率,不同处理组的囊胚均具有较高的细胞数量.IA23187或Ionomycin联合6-DMAP是激活山羊卵母细胞最适方法,是体细胞核移植技术过程中的较为高效的体外激活方法,该研究结果为山羊卵母细胞孤雌发育及体外激活等相关研究提供了借鉴.;为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集卵母细胞,并进行体外成熟.将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、7%乙醇+6-DMAP、IA23187+放线菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7%乙醇+CHX处理,体外发育48 h后统计卵裂率、8-cell率,7～9 d后统计囊胚率和囊胚细胞数.结果表明,IA23187+6-DMAP处理组的卵裂率(89.6±4.9%)显著低于Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8%)、IA23187+CHX(97.6±1.2%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6%)及7%乙醇+CHX(97.5±1.4%)处理组(P＜0.05),而与7%乙醇+6-DMAP(96.3±0.5%)处理组没有显著差异;IA23187+CHX(81.3±5.8%)和Ionomycin+CHX(82.5±6.6%)处理组的8-细胞率显著高于IA23187+6-DMAP(48.4±4.3%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5+1.8%)、7%乙醇+6-DMAP(38.2±2.1%)及7%乙醇+CHX(62.5±2.2%)处理组(P＜0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4%)和Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8%)处理组的囊胚率显著高于7%乙醇+6-DMAP(10.5±1.8%)、IA23187+CHX(8.4±1.2%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0%)及7%乙醇+CHX(8.8±2.5%)处理组(P＜0.05);囊胚细胞数(200.0±14.0、169.6+11.4、187.0+8.8、201.3±16.5、179.6±5.2和177.6±20.8个)各组间没有明显差异)(P＞0.05).利用IA23187、Ionomycin及乙醇联合6-DMAP和CHX,对山羊卵母细胞进行激活均能获得较高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇与CHX联合激活处理组可获得较高的8-cell率,IA23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP处理组获得较高的囊胚率,不同处理组的囊胚均具有较高的细胞数量.IA23187或Ionomycin联合6-DMAP是激活山羊卵母细胞最适方法,是体细胞核移植技术过程中的较为高效的体外激活方法,该研究结果为山羊卵母细胞孤雌发育及体外激活等相关研究提供了借鉴.
北大核心刊
作者：杨娇馥;史偈君;梁燕;郑旭;张涛;秦毅;;外文作者：YANG JSHI JLIANG YZHENG Xu;ZHANG TQIN Yi;WANG ZLIU Dongjun作者机构：来源：,2011,Vol.44,Issue.13基金：国家自然科学基金; 转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划; 国家基础科学人才培养基金综合影响因子：2.027复合影响因子：3.043关键词：内蒙古白绒山羊; 基因克隆; 表达模式分析;内蒙古白绒山羊;AKT;基因克隆;表达模式分析;摘要：【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列;
分析,用SMART与Psite进行氨基【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列;
分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。W
blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443;
bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊（NM）同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋;
白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的STKc结构域。Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖;
性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。;
PSORT程序预测其定位于细胞质中。AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTO;
R活性,AKT表达量降低。【结论】内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸;
、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控。
北大核心刊
作者：程磊;康峰;张立;董树华;焦泽华;苏广华;刘扬;薛利强;外文作者：CHENG LKANG FZHANG Li;DONG SJIAO ZSU GLIU YXUE LLI GCHENG Lei[1];KANG Feng[1];ZHANG Li[1];DONG Shu-hua[1];JIAO Ze-hua[1];SU Guang-hua[1];LIU Yang[1];XUE Li-qiang[2];LI Guang-peng[1]作者机构：来源：,2011,Vol.42,Issue.4基金：国家高科技发展计划; 教育部长江学者特聘教授基金;国家高科技发展计划(863)项目，教育部长江学者特聘教授基金综合影响因子：0.302复合影响因子：0.478关键词：克隆牛; 出生; 护理; 管理; 存活率摘要：对犊牛生产过程与产后护理方面做了大量细致的观察、管理、护理,使体细胞克隆牛出生率以及犊牛出生后存活率大大提高,新生克隆犊牛存活率高达83%.对犊牛生产过程与产后护理方面做了大量细致的观察、管理、护理,使体细胞克隆牛出生率以及犊牛出生后存活率大大提高,新生克隆犊牛存活率高达83%.
作者：苏立宁;;;;李雪峰外文作者：SU LLI HXU RLIU DLI XSU Lining1,2,LI Hua1,3,XU Rigan3,LIU Dongjun3,LI Xuefeng21College of Life Science,Foshan University,Foshan College of Life Science,South China Normal University,Guangzhou The Key Laboratory for Mammalian Reproductive Biology and Biotechnology of Ministry of Education,Inne作者机构：来源：,2011,Vol.31,Issue.3基金：国家转基因项目; 博士后基金资助;国家转基因项目(-002);博士后基金资助CSCD被引频次：2综合影响因子：0.279复合影响因子：0.464关键词：毛囊; 周期性; 皮脂腺; 山羊绒摘要：毛囊是产生毛被的组织,具有周期性,经历生长期、衰退期和休止期三个时期,毛囊与皮脂腺组成毛囊皮脂腺单位。本文从分子层面分别对调控毛囊周期性变化、毛;
囊皮脂毛囊是产生毛被的组织,具有周期性,经历生长期、衰退期和休止期三个时期,毛囊与皮脂腺组成毛囊皮脂腺单位。本文从分子层面分别对调控毛囊周期性变化、毛;
囊皮脂腺发育以及毛囊中影响毛被光泽度及毡结度的因子等给予了详细阐述,这些均为提高山羊绒产量和质量提供了重要思路。
作者：白音巴图;罗奋华;胡甜园;侯越;外文作者：BAI YLUO Fen-HU Tian-HOU YWU Ying-ji作者机构：来源：,2009,Vol.30,Issue.3基金：内蒙古自治区自然科学基金重大项目CSCD被引频次：1教育部学科：生物学,临床医学关键词：绵羊; tnp2基因; 克隆; 序列分析; 圆形精子细胞摘要：过渡蛋白2基因(tnp2)是圆形精子细胞特异表达的基因.为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据GenBank上已公布的牛的cDNA序列设计;
引物,采用RT-PCR和分子克过渡蛋白2基因(tnp2)是圆形精子细胞特异表达的基因.为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据GenBank上已公布的牛的cDNA序列设计;
引物,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆了蒙古绵羊tnp2基因cDNA部分编码区序列.DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为95.3;
%.根据绵羊tnp2基因的cDNA序列设计引物,对共培养的四月龄绵羊睾丸生殖细胞进行RT-PCR鉴定.结果显示体外共培养的绵羊睾丸生殖细胞一直到;
第十周后仍有圆形精子细胞产生.绵羊tnp2基冈的cDNA克隆和序列测定为进一步研究绵羊精子发生过程奠定了基础.
作者：侯越;;罗奋华;;张学明;;白音巴图;刘陶迪外文作者：HOU YWU Ying-LUO Fen-SU Hui-ZHANG Xue-ZHANG YBAI YLIU Tao-di作者机构：来源：,2009,Vol.30,Issue.3基金：国家高科技项目(863项目); 内蒙古自治区自然科学基金;国家高技术研究发展计划(863计划)，内蒙古自治区自然科学基金CSCD被引频次：2教育部学科：生物学,临床医学关键词：绒山羊; 联会复合体蛋白3; 克隆; 睾丸发育; 减数分裂摘要：联会复合体蛋白3(synapton
3,Scp3)是雄性生殖细胞减数分裂中联会复合体形成必需的组成部分,在哺乳动物生殖细胞减数分裂中具有重要功能.通联会复合体蛋白3(synapton
3,Scp3)是雄性生殖细胞减数分裂中联会复合体形成必需的组成部分,在哺乳动物生殖细胞减数分裂中具有重要功能.通过RT-PCR扩增和分子克隆的方;
法首次克隆到了绒山羊Scp3基因的编码区片段.测序结果表明,绒山羊与牛的Scp3基因编码序列同源率达到98%.根据测得的DNA序列,设计引物,用;
RT-PCR方法分析测定了青春前期绒山羊不同个体中睾丸组织的Scp3的转录表达.结果显示,雄性绒山羊青春前期睾丸发育存在个体差异,已分析的样品第;
一轮减数分裂发生的时间普遍为73天之后.这一结果为绒山羊的睾丸发育和精子发生过程的相关研究打下了基础.
作者：;牛栋;李燕;;;外文作者：WU XNIU DLI YYUE Yong-BOU SYU Hai-quan作者机构：来源：,2009,Vol.30,Issue.4基金：教育部博士点基金; 内蒙古自然科学基金重点项目CSCD被引频次：1教育部学科：生物学,临床医学关键词：曲古抑菌素A; 组蛋白乙酰化; 组蛋白甲基化; 成纤维细胞摘要：T
A(TSA)是一种特异的组蛋白去乙酰化酶抑制剂.研究显示,TSA可以特异地抑制组蛋白去乙酰化酶活性,提高细胞的组蛋白乙酰化水平,激活基因的表达.;
A(TSA)是一种特异的组蛋白去乙酰化酶抑制剂.研究显示,TSA可以特异地抑制组蛋白去乙酰化酶活性,提高细胞的组蛋白乙酰化水平,激活基因的表达.;
但是,目前还不是很清楚TSA处理是否对组蛋白甲基化产生影响.本研究以成纤维细胞为研究对象,利用免疫细胞化学技术及激光共聚焦显微镜,探讨了TSA处;
理体细胞对其组蛋白乙酰化及甲基化修饰的影响.结果显示,随TSA浓度增加,体细胞形态发生明显的改变,细胞变得扁平且核区较大,处理后组蛋白H4K8位;
点的乙酰化水平随着TSA浓度的增加明显提高.检测组蛋白H3上两个甲基化位点发现,随组蛋白乙酰化水平的增加,H3K4位点的三甲基化(H3K4me3;
)水平也显著提高.但是,对于H3K9的二甲基化水平(H3K9me2)则没有明显变化.以上结果显示,TSA的处理不仅可以提高体细胞的组蛋白乙酰化水;
平,同时也增加了与基因表达激活相关组蛋白修饰位点的甲基化水平,但是对于与沉默基顺相关的组蛋白修饰位点则没有明显的影响.
作者：;张学明;杨东山;罗奋华;外文作者：Wu YingJi;Zhang XYang DLuo FXu Rigan作者机构：来源：,2009,Issue.z1综合影响因子：0.529复合影响因子：0.901关键词：乳腺; 生物反应器; 载体构建; 转基因技术摘要：用乳腺生物反应器生产