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肾衰状态下肠道细菌对肌酐和尿素清除的影响
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关键词：乳酸肠球菌对断奶仔猪生长性能的影响况世昌&王喜亮&肖云才1.武汉华大瑞尔科技有限公司；2.华中农业大学　　20世纪40年代，美国的饲养者发现用青霉素发酵残渣与饲料一同饲喂猪比用普通饲料饲喂猪生长更快；50年代，美国联邦食品和药物管理局（FDA）批准在饲料中添加抗生素。至今，抗生素在预防动物疾病、降低动物的死淘率、提高饲料利用率和动物生产性能等方面做出了重大贡献。与此同时抗生素也引发了耐药菌频现、畜禽产品抗生素残留、动物胃肠道微生态平衡紊乱和动物机体免疫力下降等一系列负面效应，严重危害着动物和人类的健康。1986年瑞典开始禁用饲用促生长抗生素，1998年丹麦全面禁用，2006年欧盟全面禁用饲用促生长抗生素，2011年韩国也开始全面禁用饲用抗生素，饲用抗生素的禁用已是国际趋势和人类自我保护措施。因此，寻求安全、无污染、无残留的促生长剂迫在眉睫。　　益生菌筛选于自然环境中或动物肠道内，安全、无残留、不产生耐药性。试验研究表明，在饲料中添加0.2%益生菌制剂，断奶仔猪平均日增重达0.35kg，料肉比为1.14∶1，节省日粮7.3%（潘穗华等，1999）。张永勇等（2008）饲喂断奶仔猪芽孢菌、乳酸菌和双歧杆菌组成的复合微生态制剂，结果表明添加0.05%的复合制剂可以显著提高仔猪的日采食量和血清免疫球蛋白水平。在大规模养殖中，益生菌被认为是抗生素的潜在替代品（Shanahan&F&et&al.，2000；Park&et&al.，2002）。2001年，联合国粮农组织/世界卫生组织（FAO/WHO）将益生菌定义为“摄入量足够时对机体产生有益作用的活性微生物”。美国FDA和美国饲料控制官员协会（AAFCO）2009年公布允许46种微生物菌种作为饲料添加剂使用。我国到目前批准使用的微生物饲料添加剂品种有芽孢杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、乳酸肠球菌和乳杆菌等共16种，其中大部分属于乳酸菌类。　　本研究以断奶仔猪为动物模型，在仔猪饲料中添加乳酸肠球菌，研究乳酸肠球菌对断奶仔猪生长性能的影响。试验中通过增重、腹泻次数、血清抗体水平等指标来反映断奶仔猪的生长情况，为微生态制剂的使用提供试验依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　乳酸肠球菌：由武汉华大瑞尔科技有限公司提供，商品名为优力乐，主要成分：乳酸肠球菌（有效活菌数≥30亿/克）、生物多肽、多糖、发酵豆粕等。　　总蛋白试剂盒、白蛋白试剂盒、血清葡萄糖试剂盒、猪IgG&ELISA试剂盒、猪IgA&ELISA试剂盒。　　1.2试验动物　　选取胎次、日龄、初重相近的长白×大白二元猪80头（25日龄）。　　1.3试验设计　　80头断奶仔猪随机分为2组，每组40头，分别为抗生素对照组（以下简称抗生素组）和乳酸肠球菌组。试验设计见表1，试验期为14d。各组均饲喂某品牌公司的教槽料。试验在湖北某养猪场开展。　　表1试验设计　　1.4饲养管理　　乳酸肠球菌制剂在饲喂前添加于饲料中并混合均匀。试验在同一栋双列封闭式猪舍内进行，且试验猪栏位朝向一致。环境温度和湿度按常规饲养管理方式进行。试验前对猪舍进行清洗、消毒。自由饮水；每天喂料2次（8：00，16：00），饲料计量不限量，以食槽中无剩余料为原则。免疫程序按猪场常规进行。　　1.5生产性能检测及方法　　在试验开始的第0d、14d分别测量每组仔猪的空腹体重。观察各组采食、饮水、活动等情况，记录各组每天采食量、腹泻次数等情况。计算各组平均日采食量、日增重、料肉比、腹泻率：　　平均日增重量=（试验后平均体重-试验前平均体重）/试验天数平均日采食量=总采食量/试验天数料肉比=总采食量/总增重量　　腹泻率=总腹泻次数×100%/（仔猪数×试验天数）&&&&1.6&样品的收集及检测试验结束后（即试验第14d），各组均随机选取10头仔猪，颈静脉采血5ml，凝集后离心获取血清，按照试剂盒检测血清中各项指标。同时采集仔猪新鲜粪便，用伊红美蓝培养基和MRS培养基分别测定粪便中大肠杆菌、乳酸杆菌的含量。　　1.7数据处理　　采用SPSS软件进行方差分析，试验结果以平均值±标准误（Mean±SE）表示。　　2结果与分析　　2.1乳酸肠球菌对断奶仔猪生长性能的影响　　试验结束，称取计算仔猪平均末重，乳酸肠球菌组仔猪体重高于抗生素组，且差异显著（P＜0.05）。将增加体重分至每日，计算出平均日增重，数据表明乳酸肠球菌组的日增重量比抗生素组多出23.5%，分别为252.4g和204.3g，两者差异显著（P＜0.05）。相比日增量，各组的日均采食量相差无几，差异也不显著（P＞0.05）。在料肉比方面，乳酸肠球菌组低于抗生素组，但统计学分析两者差异不显著（P＞0.05）。　　2.2　腹泻情况　　试验期间，仅有抗生素组仔猪出现过2次腹泻，乳酸肠球菌组未观察到腹泻情况。　　表3　试验期间各组仔猪腹泻情况　　2.3乳酸肠球菌对仔猪肠道菌群的影响　　检测结果表明，在饲料中添加乳酸肠球菌可以有效地提高仔猪肠道内的有益菌——乳酸杆菌数量（P＜0.05）；相对应，乳酸肠球菌组大肠杆菌数量下降，与抗生素组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。说明乳酸肠球菌可以抑制有害菌的生长，增加有益菌的数量。　　表4日粮中添加乳酸肠球菌对仔猪肠道菌群的影响注：同列数字上标小写字母相同表示差异不显著（P＞0.05），小写字母不相同表示差异显著（P＜0.05）。　　2.4断奶仔猪血液指标变化　　试验结束后各组仔猪血液指标变化情况如表5。在总蛋白、白蛋白和球蛋白方面，乳酸肠球菌组的含量均高于抗生素组，但差异均不显著（P＞0.05）。乳酸肠球菌组的血清尿素含量较抗生素组降低了24.3%，统计分析两者差异不显著（P＞0.05）。所测血液生化指标中，两组的血糖含量差异显著（P＜0.05）。检测血清中的IgG、IgA和IgM水平，两组抗体水平变化不大。试验期间，按正常程序进行免疫，检测猪瘟抗体水平发现，乳酸肠球菌组的抗体水平显著高于抗生素组（P＜0.05），阳性率也比抗生素组高；两组口蹄疫抗体水平相差不大，差别也无显著性差异。　　表5断奶仔猪血液指标的变化　　注：同列数字上标小写字母相同表示差异不显著（P＞0.05），小写字母不相同表示差异显著（P＜0.05）。　　3讨论　　本研究表明，饲喂仔猪0.01%的乳酸肠球菌能够显著提高日增重，降低部分料肉比，与大部分乳酸菌试验报道的结果一致（李路胜等，2006；文静等，2011）。乳酸菌包括乳酸肠球菌作为正常肠道微生物，产生乳酸等有机酸，降低肠道pH值，抑制多数不耐酸的致病菌繁殖，维持肠道健康。乳酸菌还能够分泌消化酶、维生素等营养物质，促进食物的消化吸收，进而提高动物的生产性能（Wierup&et&al.，1988）。此外，乳酸肠球菌的促生长作用与其防治腹泻有一定的关联。　　当肠道乳酸菌最低活菌浓度为106CFU/ml～107CFU/ml时，可抑制病原微生物生长，维持肠道微生物区系的平衡，增强仔猪的免疫力，降低腹泻等（Schillinger&et&al.，1996）。曹国文等（2003）研究发现RS-1、2、3、4、5、6六株乳酸菌发酵上清液对几种致病菌大肠杆菌均有较强的抑制作用，能提高断奶仔猪的生长性能。周霞等（1999）用乳酸菌0.25亿CFU/头的剂量饲喂仔猪，仔猪腹泻率下降32.1%。本试验中，乳酸肠球菌组试验期间未出现腹泻情况，但同时抗生素组腹泻次数也不高，这可能与试验时间较短有关。　　动物血清免疫球蛋白的主要成分是IgM、IgA、IgG，反映着机体的免疫水平。有研究表明肉鸡水中添加乳酸菌L-68型屎肠球菌，动物的免疫器官生长加快，抗体水平提高（温建新等，2008）。本实验中乳酸肠球菌组的IgM、IgA、IgG均稍低于抗生素组，而猪瘟抗体水平显著高于抗生素组。总结试验结果，乳酸肠球菌在提高日增重和促进免疫力方面有一定作用；抑制肠道大肠杆菌致病菌的生长，显著提高乳酸菌的数量。表明乳酸肠球菌可以改善肠道菌群，保证动物健康生长。(审核编辑: 猪猪侠)分享我来说两句（人参与评论）加载更多【销售】常年出售仔猪 １５２６６６６1农村养殖不易,别再用环保税吓唬老百35292我国猪场的环保设计与防污减排措施350831月22日评：猪价震荡调整
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扫一扫访问手机站更容易导致感染的发生或疾病迁延；不同感染类型的致病菌特点：；1．单纯性尿路感染病原菌主要为大肠埃希菌(70%；在年轻女性，单纯性尿路感染最重要的危险因素是性生；2．复杂性尿路感染与非复杂性尿路感染相比具有更广；与尿路结石相关的复杂性尿路感染，大肠埃希菌和肠球；菌、摩根氏菌和棒状杆菌，但克雷伯菌、假单胞菌、沙；3．尿脓毒血症微生物通过逆行、血行和淋巴途径进入；
更容易导致感染的发生或疾病迁延。
不同感染类型的致病菌特点：
1．单纯性尿路感染
病原菌主要为大肠埃希菌(70%～95%)、腐生葡萄球菌(5%～19%)，偶见奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌属、肠杆菌属、枸橼酸菌属及肠球菌属等。急性单纯性肾盂肾炎的病原菌中也以大肠埃希菌为主，占80%以上，其他为奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌和腐生葡萄球菌等[8,9]。再发性尿路感染的病原菌可为上述任何一种[10]。妊娠期无症状菌尿的常见病原菌为需氧革兰阴性杆菌和溶血葡萄球菌[11]。此外，在有尿路感染症状的患者中，10%～15%不能用常规方法从尿中分离出病原菌[8,12]。
在年轻女性，单纯性尿路感染最重要的危险因素是性生活活跃或近期有性生活，这是一个独立的危险因素[13]。此外，杀精子膜的使用、无症状菌尿、反复发作的尿路感染病史、首次尿路感染的年龄偏低（&15岁）以及有尿路感染的家族史（直系女性亲属）等也是潜在的危险因素[10,14,15]。有多项研究表明，雌激素水平降低是绝经后女性尿路感染的危险因素[16,17]。其他潜在的危险因素包括、应用避孕药进行节育、性生活后未及时排尿、穿紧身内裤、排便后的卫生习惯，使用盆浴以及非分泌型体质等[18]。对再发性尿路感染，前瞻性研究显示性生活与其并没有必然的联系，而主要取决于年轻时是否发生过尿路感染[19,20]。
2．复杂性尿路感染
与非复杂性尿路感染相比具有更广的菌谱，而且细菌更可能耐药（特别是与治疗有关的复杂性尿路感染）。但是，存在耐药性细菌本身并不足以诊断复杂性尿路感染，还必须同时合并有泌尿系疾病（解剖或功能方面）或者诱发尿路感染的潜在疾病。尿培养常见的是大肠埃希菌、变形杆菌、克雷伯菌、假单胞菌、粘质沙雷菌和肠球菌，大部分是肠杆菌科（60%～75%），其中最常见的是大肠埃希菌，特别是首次感染的患者[21-24]。除存在结石或异质体，葡萄球菌并不常见于复杂性尿路感染（0～11%）[21,25]。另外，在不同时间、不同医院，菌谱都有可能发生改变。社区和医院获得性复杂性尿路感染患者的病原体多变、抗菌药物耐药的发生率较高，如果潜在疾病没有得到纠正，治疗失败率也较高[26]。
与尿路结石相关的复杂性尿路感染，大肠埃希菌和肠球菌较少见，而变形杆菌和假单胞菌则较常见[26，27]。可产生尿素酶的细菌主要为变形杆菌,普罗威登斯
菌、摩根氏菌和棒状杆菌，但克雷伯菌、假单胞菌、沙雷氏菌和葡萄球菌在某种程度上也可产生尿素酶。88%的鹿角型结石患者在诊断时被发现有尿路感染，其中82%的患者感染上了可产生尿素酶的细菌[28]。尿素酶将尿素分解为二氧化碳和氨。结果使尿氨增加，损伤了氨基多糖（GAG）层，促进了细菌粘附和鸟粪石结晶的形成，后者聚集形成肾脏结石和导尿管上的硬壳[26，29-30]。
3．尿脓毒血症
微生物通过逆行、血行和淋巴途径进入泌尿道，但病原体必须进入血流才能引起尿脓毒血症。严重的尿路感染，如肾盂肾炎和急性细菌性前列腺炎，易引起菌血症，若合并尿路梗阻则可能发展成尿脓毒血症[30]。尿脓毒血症的易患人群包括：老年患者、糖尿病、免疫抑制患者（例如器官移植受体）、接受化疗的肿瘤患者和接受皮质激素治疗的患者、艾滋病患者[26,31]。尿脓毒血症的常见原因是尿路梗阻性疾病，如输尿管结石、尿路解剖异常、狭窄、肿瘤或神经源性膀胱功能障碍，另外尿路手术或者泌尿系统的实质脏器感染也可以发生尿脓毒血症[31,32]。
虽然脓毒血症的主要病原体是革兰阳性菌，但尿脓毒血症主要是革兰阴性菌，且真菌引起的脓毒血症比率逐渐上升。有关尿脓毒血症的细菌菌谱文献报道不多，通常以复杂性的和院内获得性尿路感染的细菌菌谱来替代[31,33,34]。总的来讲，大肠埃希菌大约占50%，变形菌15%，肠杆菌属和克雷伯菌属15%，铜绿假单胞菌5%，革兰阳性菌15%[35,36]。如果患者的抵抗力下降，毒力更低的细菌如肠球菌、凝固酶阴性葡萄球菌或铜绿假单胞菌也可以引起尿脓毒血症。
五、细菌耐药性
由于抗菌药物应用的不规范，细菌的耐药性逐渐增强。国内资料显示大肠埃希菌临床分离株对氟喹诺酮类、庆大霉素和哌拉西林的耐药率近50 %或以上,对阿莫西林/克拉维酸和复方磺胺甲f唑的耐药率分别为31 %和71 %[37]。国外报道有50.1%和22.1%的革兰阴性杆菌对氨苄西林和复方磺胺甲f唑耐药，而对左氧氟沙星和环丙沙星的敏感性较高达到91.9%[38]。在社区脊髓损伤截瘫患者中，大约24%对左氧氟沙星耐药，对氟喹诺酮类药物耐药的革兰阴性杆菌在长期应用抗菌药物的患者中较为普遍存在，其中非尿失禁的患者中相对较少，在尿失禁患者中使用间歇导尿的患者也相对较少[39]。革兰阳性球菌对万古霉素和呋喃妥因有很高的敏感性。复杂的尿路感染致病菌更容易产生耐药现象。
六、尿路感染的诊断
下尿路感染相关症状包括尿频、尿急、尿痛、耻骨上区不适和腰骶部疼痛，门诊尿路感染就诊患者95%为急性膀胱炎，最常见的症状依次为尿痛、尿急和尿频，可有肉眼血尿。
上尿路感染患者除了排尿症状外，多以全身症状就诊，包括寒战、发热、腰痛、恶心、呕吐等。但约1/3仅有膀胱炎症状的患者经进一步检查发现同时存在上尿路病变[40]。
对尿路感染有诊断意义的症状和体征为尿痛、尿频、血尿、背部疼痛和肋脊角压痛，如果女性患者同时存在尿痛和尿频，则尿路感染的可能性为90% [41]。
除一般查体外，应进行全面的泌尿系统体检，男性患者行外生殖器和直肠指诊检查。
急性膀胱炎患者可有耻骨上区压痛，但缺乏特异性。发热、心动过速、肋脊角压痛对肾盂肾炎的诊断特异性高。
盆腔和直肠检查对鉴别是否同时存在的合并疾病有意义。女性慢性、复发性、难治性尿路感染必须行盆腔检查。
当患者存在不明原因的发热、严重的低血压、感染中毒性休克时，要考虑存在肾盂肾炎的可能。
3．实验室检查
（1）尿常规检查：包括尿液理学检查、尿生化检查和尿沉渣检查。不同单位使用的检查方法不同，化验单上有说明，应用最普遍的是尿液的干化学分析仪检查和尿沉渣人工镜检。
1）尿液的理学检查：尿液外观浑浊对诊断症状性菌尿的敏感性为90.4%，特异性为66.4% [42]。
2）尿生化检查：现今最常用的是半自动或全自动的尿干化学分析仪，使用多联试剂带浸入一次尿液可同时测定多个项目。尿液生化检查用于诊断尿路感染的敏感性较低，阴性结果对除外尿路感染的特异性较高[43]。
尿液生化检查包含有8～11项检查，其中与尿路感染相关的常用指标包括： Ⅰ. 亚硝酸盐(nitrite, NIT)：正常值为阴性。阳性见于大肠埃希菌等革兰阴性杆菌引起的尿路感染，尿液中细菌数&105/ml时多数呈阳性反应，阳性反应程
度与尿液中细菌数成正比。应注意尿中有大量淋巴细胞时该结果为阴性。
Ⅱ. 白细胞酯酶（leukocyte esterase, LEU）：正常值为阴性，尿路感染时为阳性。
Ⅲ. 尿蛋白：正常定性为阴性，定量&100mg/24h。尿路感染可有蛋白尿，通常&2g/24h[44]。
3）尿沉渣检查：常用方法有尿沉渣显微镜检和尿有形成分分析仪检查
Ⅰ. 尿沉渣显微镜检：离心尿尿沉渣中WBC数1～2个/HP表示非离心尿中WBC数为10个/mm3。配合革兰染色可以作为感染的确定性诊断。有症状的女性患者尿沉渣显微镜检诊断细菌感染的敏感性60%～100%，特异性49%～100%[45，46]。应注意，尿检没有WBC不能除外上尿路感染，同时尿WBC也可见于非感染性肾疾病[44]。
镜下血尿（正常情况下尿红细胞数&3个/HP[1]）见于40%～60%的膀胱炎患者，对诊断尿路感染缺乏敏感性，但特异性较高[47，48]。
Ⅱ. 尿有形成分分析仪检查：尿有形成分分析仪会自动进行标本的定时、定速离心，留取定量的尿沉渣，在相差显微镜下，数码摄像系统对每个层流经过的标本摄像，计算机进行图像分析，提取尿有形成分特征，运用形态识别软件自动识别和分类尿液有形成分。与普通光学显微镜法相比，具有简便、高效、精确度高等优点。目前的尿有形成分分析仪主要有2大类：①尿有形成分直接镜检影像分析仪。②流式细胞术和电阻抗检测相结合的全自动尿有形成分分析仪。
在严格质量控制的前提下，对尿路感染诊断的敏感性94.4%～100%，特异性49.8%～73.4%，可以使38.5%～58.2%的患者免于尿培养检查[49]。临床应结合尿液干化学分析结果进行综合判断以提高尿沉渣检验结果的精确度和可靠性。此方法不能完全替代显微镜检，可作为显微镜检的筛选[50]。
（2）尿培养：治疗前的中段尿标本培养是诊断尿路感染最可靠的指标。
1） 关于尿培养细菌菌落计数数量的说明：自1960年起，尿培养细菌菌落计数≥105CFU/ml被认为是尿路感染的诊断指标[51]，此数值对尿路感染诊断的特异性较高。但1/3有下尿路症状的急性膀胱炎患者尿培养菌落计数小于105 CFU/ml[52]，因此，如果以菌落计数≥102CFU/ml作为尿路感染诊断标准的敏感性95％，特异性85％[48]；使用抗菌药物治疗者以≥103CFU/ml作为尿路感染诊
断标准的敏感性80％，特异性90％[52]。美国感染疾病学会(IDSA)和欧洲临床微生物学和感染疾病学会(ESCMID)规定的尿路感染细菌培养标准为[52]：急性非复杂性膀胱炎中段尿培养≥103CFU/ml；急性非复杂性肾盂肾炎中段尿培养≥104CFU/ml；女性中段尿培养≥105CFU/ml、男性中段尿培养或女性复杂性尿路感染导尿标本≥104CFU/ml。综上所述，现今人们发现并没有一个固定的数值可以用于在任何情况下诊断所有类型的尿路感染[26]，需要根据临床情况具体分析。
（3）影像学检查：年龄小于45岁的男性尿路感染患者通常不需要进一步的影像学检查[53]。因为阳性发现极少，故不推荐对女性单纯性膀胱炎施行静脉尿路造影或膀胱镜检查[54]。
反复发作的尿路感染、复发性肾盂肾炎、合并无痛血尿或怀疑合并有泌尿系结石或梗阻时，推荐进行进一步的影像学检查。
泌尿系超声作为首选项目，可以发现合并的尿路梗阻、积脓、结石等病变。在超声有阳性发现时，螺旋CT是进一步明确病变的有效检查，优于MRI。
尿路平片(KUB)和静脉尿路造影(IVU)可以发现上尿路结石和畸形。
（4）侵入性检查：
根据疾病具体情况可以考虑选择膀胱镜等相关检查。
七、鉴别诊断
1. 女性有尿路感染症状时应考虑是否存在阴道炎、生殖器溃疡或淋病。通过妇科检查可以明确，如果患者存在阴道分泌物或外阴炎症常可鉴别，盆腔双合诊可以除外盆腔肿块和盆腔炎。
2. 有下尿路症状并存在脓尿，但尿培养阴性的患者应考虑有无淋病双球菌感染或解脲支原体感染。
3. 对有下尿路症状但没有感染证据的女性患者，应与引起下尿路症状的其他疾病如膀胱过度活动等相鉴别。
4. 青年男性的尿路感染症状需与前列腺炎引起的下尿路症状相鉴别，中老年男性需与前列腺增生等疾病引起的下尿路症状相鉴别。
6. 缺乏充分感染依据的膀胱刺激征患者应除外有无膀胱原位癌的存在 对一般抗菌药物治疗无效的尿路感染应除外有无泌尿系结核。
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