凝固酶阳性葡萄球菌-学术百科-知网空间
凝固酶阳性葡萄球菌
凝固酶阳性葡萄球菌
用于细菌鉴定中的生化试验之一。1....平板法：用于检测葡萄球菌凝固酶的阳性菌种。试验菌种可接种在含有柠檬酸的血浆或纯血纤蛋白原和凝血酶原的培养基平板上，培养一昼夜后，凡凝固酶阳性的菌落，其周围都被浓稠的血纤蛋白沉淀圈包围。本法可测定在食
与"凝固酶阳性葡萄球菌"相关的文献前10条
建立凝固酶阳性葡萄球菌环介导等温扩增方法(LAMP),运用在食品样品检测中,与实时荧光PCR方法及国家标准检测方法进行比较。以毒力因子——凝固酶的编码基因coa为目的基因设计引物
正 长期以来,人们习惯将凝固酶阳性葡萄球菌(Coagulase positive staphylococcus,CPS)鉴定为金黄色葡萄球菌(S.aureus),而对CPS的鉴定
正 美国学者用改良的Baird—parker琼脂和加有吖啶黄的P琼脂的生长试验、3—羟基丁酮的产生、甘露醇的厌氧发酵以及β—半乳糖苷酶的存在试验对3种240株葡萄球菌(金黄包葡萄
目的利用血浆凝固酶试验快速鉴定血培养阳性瓶中的金黄色葡萄球菌。方法血培养仪阳性报警后,立即采集血培养阳性标本进行革兰染色,涂片结果判断为葡萄球菌的标本进行血浆凝固酶试验,同时按常
目的:利用血浆凝固酶试验快速鉴定血培养阳性瓶中的金黄色葡萄球菌。方法:血培养仪阳性报警后,立即采集血培养阳性标本进行革兰染色,涂片结果判断为葡萄球菌的标本进行血浆凝固酶试验,同时
目的探讨血培养仪阳性报警时间(TP)对所检出的凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)性质鉴别中的应用价值。方法对236例血培养检出CoNS的新生儿血培养标本TP和定量血培养(QBCs)检
正 作了116个(男73个、女43个)大学生之咽拭培养,将分离的葡萄球菌用试管法作了血浆凝固酶试验,并转种到血液琼脂、碲酸盐甘油琼脂和Colbeck蛋黄琼脂等培养基以测定其特性。
实验室用定量法,在一定时期内,对获自不同临床标本的194株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)进行了胞外黏质物(ESS)检测,结果表明,ESS总阳性检出率47%,其中以血液、前列腺液和尿
正 A蛋白是一种特异性抗原,具有一定潜在的致病因素的作用。本文报导从鼻、咽腔分泌物(开放腔)、痰、胸膜腔内含物(闭合腔)和疑似败血病血液中分离的173株葡萄球菌,细胞壁存在A蛋白
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原料奶中金黄色葡萄球菌分离鉴定及产毒菌株的快速检测
?第5期覃艳华等?原料奶中金黄色葡萄球菌分离鉴定及产毒菌株的快速检测
球菌研究也有报道。王英杰等采用金黄色葡萄球菌中的血浆凝固酶序列设计特异性引物,建立了金黄色葡萄球菌性乳腺炎的快速诊断方法。寨鸿瑞等[7]针对金黄色葡萄球菌23SrRNA设计引物建立PCR鉴定方法,与传统生化鉴定结果的符合率为90.32%。
为建立一种快速、特异性好、灵敏度高的PCR方法对采集的原料奶样品进行金黄色葡萄球菌鉴定,并运用min-iVIDAS分析仪快速检测分离菌株
的产毒情况,为及时防止由金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病提供可靠的技术支持,也为原料奶的安全生产提供科学依据。
1材料与方法
1.1.1分离材料原料奶:采至贵阳市几个主要奶牛场,总共21份。将采集的原料奶放入冰盒中保存,并在12h之内分离样品。1.1.2对照菌株金黄色葡萄球菌标准株ATCC-13565,由贵州大学动物科学学院周碧君教授惠赠。1.1.3主要试剂VIDAS葡萄球菌肠毒素(SET2)试剂盒(法国生物梅里埃公司产品);亚碲酸钾(上海新宝精细化工厂);兔血浆、质量浓度为3.8%的枸橼酸钠,按照文献[8]制备;细菌基因组DNA提取试剂盒(TIANGEN公司),其他试剂均为国产分析纯或进口分装。1.1.4主要仪器2-16K高速冷冻离心机(sigma公司);TG16-W微量高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);CHA-SA恒温振荡器(常州澳华仪器有限公司);PCR仪(Bio-Rad公司);凝胶成像分析仪(Bio-Rad公司);全自动荧光免疫分析仪(法国生物梅里埃公司)。1.1.5主要培养基贝尔德-帕克氏培养基(Baird-Parker,上海盛思生化科技有限公司);血平板培养基(郑州博赛生物科技股份有限公司);却浦曼琼脂培养基、普通营养琼脂培养基、7.5%NaCl营养肉汤均按照参照文献[9]制备。1.2方法
1.2.1菌株的分离纯化在制作Baird-Parker(BP)培养基时,每95mL已灭菌的BP培养基中加入5mL无菌卵黄亚碲酸钾增菌剂,摇匀后倾入无菌平皿,于4?冰箱内储存,48h内使用。在无菌操作下各取10mL奶样加入90mL7.5%NaCl营养肉汤中,37?、180r/min条件下培养24h,将上述培养液按十倍稀释,取10-8~10-3稀释液涂布于BP培养基上,每个稀释度3次重复。37?倒置培养24h,挑取表面光滑、边缘完整、黑色突起的菌落于普通培养基上,分离纯化3次后,用草酸铵结晶紫染色观察细胞的个体形态特征。选择球状、葡萄串状排列的菌株,斜面培养后保存于4?冰箱中备用。1.2.2生理生化鉴定分离菌株对分离的菌种分
别进行革兰氏染色、过氧化氢酶试验、兔血浆凝固酶试验、溶血试验、却浦曼试验等,记录试验结果。1)革兰氏染色按参考文献[9]进行。2)过氧化氢酶试验、VP试验、糖发酵试验(D-葡萄糖、D-蔗糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇)、硝酸盐试验、三糖铁试验按照参考文献[10]和[11]进行。3)兔血浆凝固酶试验:于健康家兔的心脏采血[8],按每10mL兔全血加入2~3mL灭菌的质量浓度为3.8%枸橼酸钠抗凝剂,在转速为5000r/min下冷冻离心10min,无菌操作取上清血浆,置于-20?保存备用。将血浆用无菌生理盐水按质量比为1?9稀释。取一环菌体加入血浆稀释液中,摇匀,置于37?恒温培养箱内,每隔30min观察1次,共观察6h,若出现凝固现象即为阳性。同时用已知阳性和阴性标准菌株做对照,重复3次。4)溶血试验:用划线接种法将分离菌株接种到血平板培养基上,在37?恒温培养24h,观察菌落周围是否出现溶血圈,有溶血圈者为阳性。5)却浦曼试验:用划线接种法将菌株接种于却浦曼培养基上,37?恒温培养24~48h,观察培养基颜色的变化,培养基颜色由粉红色变为黄色者为阳性。
1.2.3金黄色葡萄球菌的PCR鉴定取生理生化试验鉴定为金黄色葡萄球菌的菌种接种于LB液体培养基中,37?、180r/min条件下培养12h,取1mL培养液10000r/min离心1min,按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明书提取细菌基因组DNA。利用Primer5.0软件对金黄色葡萄球菌特有的耐热
核酸酶基因(nuc)设计引物,PCR鉴定分离菌株。nuc的引物序列为nucr:5?-GCGATTGATGGT-GATACGGTT-3?和nucf:5?-AGCCAAGCCTT-GACGAACTAAAGC-3?,其理论扩增长度为279bp。PCR反应体系为20.0?L,各组成成分分别为模板1.0?L、上下游引物各0.4?L、Mix10?L,ddH2O8.2?L。PCR反应条件为94?预变性594?变性40s、54?退火40s、72?延伸45s,共30个循环;最后72?延伸6min。取6?LPCR产物于1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳检测,凝胶成像系统观察结果。
1)nuc基因特异性检测:以大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubit-ilis)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、志贺氏菌(Shigellasp.)、沙门氏菌(Salmonellasp.)、表皮葡萄球菌(Staphyllococcusepidermidis)的基因组DNA为模板分别进行PCR反应。
2)nuc基因敏感性检测:参照文献[13]的方法进行。将试剂盒提取的ATCC-13565菌株的基因组DNA,用双蒸水按10倍系列稀释的方法进行稀释,取每个稀释度作为模板进行PCR反应。
1.2.4快速检测产毒型金黄色葡萄球菌将分离鉴定为金黄色葡萄球菌的菌株接种于10mL/支的LB培养液试管中,于37?、180r/min条件下培养36h,将培养液5000r/min离心15min,去除菌体。
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( 4 0140 04 - 原料奶中金黄色葡萄球菌分离鉴定及产毒菌株的快速检测覃艳华, 谢和 , 胡萍, 李荔枝 ( 贵州大学 生命科学 学院, 贵州 贵阳 ...[ 3 ] 覃艳华,谢和,胡萍,李荔枝.原料奶中金黄色葡萄球 菌分离鉴定及产毒菌株的快速检测. 贵州农业科学, :140~143. [ 4 ] 吕艳,王华,王君玮...检测牛奶中是否感染有金黄色葡萄球菌并鉴定_生物学_自然科学_专业资料。检测牛奶...华,谢和,胡萍,李荔枝.原料奶中金黄色葡萄球菌分离鉴 定及产毒菌株的快速检测...掌握 金黄色葡萄球菌增菌培养技术、分离技术、鉴定...中金黄色葡萄球菌存活及产毒情况观察[J ] . 中 ...阴性菌株,C 型抗 原在致病性和非致病性菌株中都...原料乳中金黄色葡萄球菌风险评估基础研究_闫军_农学_...氏菌 、 单增李斯特氏菌等 10 种致病菌检测, ...防止病原菌的繁殖 及产毒,进而造成食物中毒的发生...发酵食品中金黄色葡萄球菌快速检测方法研究进展_生物学...由原料 乳干酪中毒事件中多数是由金黄色葡萄球菌引起...$%%&#* 过观察菌株颜色,即凡是紫红色、红色和粉红...实验五 乳制品中金黄色葡萄球菌检测 生物学特性 --...菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶...存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越 短; ...结论: 成功建 立了快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌 ...大肠杆菌和无乳链球菌为本实验室分离鉴定保 存; 健康...S. 下游引物 P2: aureus 标准菌株、对照菌株以及...许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝 酸盐,液化...产 毒时间越短; √存放地点,通风不良氧分压低易...金黄色葡萄球菌的检验 2、增菌及分离培养 吸取5 ...酶PCR及显色培养 基分离培养的快速检测方法,为今后食源性疾病的 快速诊断和排查...(nuc 基因)设计一对引物,该基因不仅为金黄色葡萄球菌 所特有,而且在不同菌株...&#xe621; 上传我的文档
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实验动物金 黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立及初步探究
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实验动物金 黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立及初步探究
官方公共微信<font color="#07年04月20日 Arch Otolaryngol Head Neck Surg. ):1176-81.
为比较2项研究期间儿童头颈部脓肿社区相关的耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)发生的比率，研究人员开展了一项回顾性研究，对于1999年7月到2001年12月期间和2002年1月到2004年6月期间头颈部脓肿患儿，进行脓肿切开和引流后，培养的病原微生物种类和抗生素敏感性。结果可见，研究人员在1999年7月到2001年12月期间发现19例患儿的21个脓肿，2002年1月到2004年6月期间发现32例患儿的32个头颈部脓肿。在第一个研究期间的21个脓肿中，15个脓肿中发现病原体生长，而第二个研究期间则有29个脓肿发现病原体。第一个研究期间，15个脓肿中的6个(40%)发现金黄色脓葡萄球菌，而第二个研究期间29个脓肿中则有17个(58.6%)发现。第一个研究期间发现MRSA的比例由0% (0/6)上升至第二个研究期间的64.7% (11/17) (P<.01)。所有MRSA感染均认为是社区获得的。因此，儿童头颈部发生社区相关的MRSA感染显著升高。
日期：日 - 来自[]栏目
&&&&&&&&研究人员发现，令人闻之色变的的金黄色葡萄球菌，可以在72&&个小时之内制造一种会造成患者死亡的肺炎。&&
&&&&&&&&金黄色葡萄球菌（S.&&aureus）可以将编码毒素的基因与其它菌株交换，而且很明显地，这个交换基因的过程经常发生。&&
&&&&&&&&根据这篇发表于最新一期Science的研究报告，这种毒素称为Panton&&Valentine&&leukocidin&&或PVL，会导致肺炎，而可能杀死健康组织。&&
引领研究的德州A&M&&健康科学中心Gabriela&&Bowden表示，幸运的是，受到感染的患者会马上发高烧，所以细心的医生一下子就可以辨认出这种细菌感染。&&
&&&&&&&&去年12月，带有新毒素的MRSA杀死了二名英国患者，而这种肺炎被称为坏死性肺炎。患者受到感染后，肺部组织会被破坏且会导致一些免疫细胞死亡。PVL&&本身的毒性强到可以破坏肺部，而且毒素完全不受抗生素影响。&&
&&&&&&&&目前最普遍的超级病菌，为抗甲氧苯青霉素金黄葡萄球菌，简称MRSA（methicillin-resistant&&Staphylococcus&&aureus）。在许多国家，金黄色葡萄球菌是造成院内感染的主要致病菌之一。日期：日 - 来自[]栏目 【概述】
肺表面暴露在许多传染物中，如果呼吸道的防御机能减弱，就易感染发生细菌肺炎。肺的防御功能有会厌反射，可防止受感染的分泌物的吸入；纤毛运动，用来清除带有微生物的呼吸道上皮细胞；咳嗽反射，使异物和下呼吸道粘液（附着空气传播中的微生物）排出；淋巴管，引流终末支气管和细支气管内容物；吞噬细胞，清除肺泡微生物。病毒感染能够破坏这些防御机能，它常常发生在细菌性肺炎发病前若干天。我国从50年代开始，对病毒性肺炎的研究工作成绩卓著。但对细菌性肺炎还认识不足。说明我国细菌性肺炎的确切发病情况和病原谱有待进一步研究。小儿细菌性肺炎病原学诊断问题值得重视。
早期金黄色葡萄球菌肺炎常不易认识。起病急，肺炎症状迅速发展时可考虑本病。如近期有上呼吸道感染、皮肤小疖肿或乳母患乳腺炎的病史，可以协助诊断。
【治疗措施】
本病的一般治疗与支气管肺炎相同。因病情多较严重，在早期疑为金黄色葡萄球菌肺炎时即应给以积极治疗控制感染。可用青霉素10万～50万U/（kg?d），肌注或静滴。对耐青霉素G金葡菌肺炎，可用苯唑西林（P12）、邻氯青霉素、甲氧西林、红霉素、氯霉素、杆菌肽、利福平、万古霉素、林可霉素等。此外可用头孢菌素，其中第一代如头孢唑啉、头孢噻吩对耐药金葡菌作用较第二代及第三代头孢菌素强。前者可肌肉或静脉给药，剂量为每日20～30mg/kg，重症可加量到50～100mg/kg；后者静脉给药每日50～150mg/kg。对耐甲氧西林金葡感染应用万古霉素及其新衍生物teicoplanin。一般在体温正常后7天，大部分肺部体征消失时始可停用抗生素，疗程至少3～4周。发展成脓胸或脓气胸时，如脓液量少可采用反复胸腔穿刺抽脓治疗；但多数患儿脓液增长快、粘稠度大而不易抽出，宜施行闭式引流术排放。胸腔内注入抗生素的疗效不肯定。
【病因学】
金黄色葡萄球菌肺炎（staph ylococcus aureus
pneumonia）
是由金黄色葡萄球菌（一般为凝固酶阳性）所致的肺炎。由于滥用抗生素的结果，抗药性金黄色葡萄球菌的菌株明显增加，金黄色葡萄球菌感染也见增多。本病大多并发于葡萄球菌败血症，多见于幼婴及新生儿，年长儿也可发生。以冬、春两季上呼吸道感染发病率较高的季节多见。常在医院内或婴儿室内发生交叉感染引起流行。葡萄球菌能产生多种毒素和酶，如溶血素、葡萄球菌激酶、凝固酶等。一般认为凝固酶和细菌毒性有一定关系，如为凝固酶阴性（如表皮葡萄球菌）则多为条件致病菌，很少引起严重疾病，但为医院内感染的常见细菌之一。对青霉素G耐药金葡菌已成为全世界难题，80年代国内外报道耐甲氧西林金葡菌（methicillin
resistant staphylococcus aureus，MRSA）已成为院内感染的主要病原。
【病理改变】
金黄色葡萄球菌所致的原发性支气管肺炎，以广泛的出血性坏死、多发性小脓肿为其特点。肺脏的胸膜表面覆盖着一层较厚的纤维素性脓性分泌物。脓肿中有金黄色葡萄球菌、白细胞、红细胞及坏死的组织碎片。胸膜下小脓肿破裂，则形成脓胸或脓气胸。有时可侵蚀支气管形成支气管胸膜瘘。若继发于败血症之后，则除肺脓肿外，其它器官如皮下组织、骨髓、心、肾、肾上腺及脑都可发生脓肿。
【临床表现】
1.症状和体征&
金黄色葡萄球菌肺炎常见于1岁以下的幼婴。在出现1～2天上呼吸道感染或皮肤小脓疱数日至1周以后，突然出现高热。年长儿大多有弛张性高热，但新生儿则可低热或无热。肺炎发展迅速，表现呼吸和心率增速、呻吟、咳嗽、青紫等。有时可有猩红热样皮疹及消化道症状，如呕吐、腹泻、腹胀（由于中毒性肠麻痹）等。患儿嗜睡或烦躁不安，严重者可惊厥，中毒症状常较明显，甚至呈休克状态。肺部体征出现较早，早期呼吸音减低，有散在湿罗音。在发展过程中迅速出现肺脓肿，常为散在性小脓肿。脓胸及脓气胸是本症的特点。并发脓胸或脓气胸时，叩诊浊音、语颤及呼吸音减弱或消失。
2.X线检查&
①临床症状与胸片所见不一致。当肺炎初起时，临床症状已很重，而X线征象却很少，仅表现为肺纹理重，一侧或双侧出现小片浸润影；当临床症状已趋明显好转时，在胸片上却可见明显病变如肺脓肿和肺大泡等现象。②病变发展迅速，甚至在数小时内，小片炎变就可发展成脓肿。③病程中，多合并小脓肿、脓气胸、肺大泡。严重的还并发纵隔积气、皮下气肿及支气管胸膜瘘。④胸片上病灶阴影持续时间较一般细菌性肺炎为长，在2个月左右阴影仍不能完全消失。
【辅助检查】
白细胞一般高过15×109～30×109/L（1），中性粒细胞增高，白细胞内可出现中毒颗粒。半数幼婴可减低到5×109/L（5000）以下，而中性粒细胞百分比仍较高。白细胞总数减低多示预后严重。C反应蛋白增高。对气管咳出或吸出物及胸腔穿刺抽出液进行细菌培养阳性者有诊断意义。
【鉴别诊断】
金葡菌肺炎须与下列疾病相鉴别：肺炎链球菌、流感嗜血杆菌或肺炎杆菌肺炎，原发性肺结核伴空洞形成或干酪性肺炎，气管异物继发肺脓肿及横膈疝等。X线上表现的特点，如肺脓肿、大泡性肺气肿及脓胸或脓气胸等存在都可做为金葡肺炎诊断的根据；但须与其它细菌性肺炎所引起的脓胸及脓气胸鉴别。因而病原学诊断十分重要。
除肺炎概述中所叙述的预防措施之外，必须重视幼托机构居室的卫生清洁，并应及时检查工作人员是否带菌，带菌者及时适当处理。
并发金葡脑膜炎和心包炎或婴儿张力性气胸则预后严重。病死率高达10%～20%。并发症如脓胸、脓气胸预后较好，治愈者长期随访无后遗肺功能障碍。
日期：日 - 来自[]栏目
<font color="#07年01月05日 中华心血管病杂志 2006 Vol.34 No.8 P.744-746
（武汉）为了初步探讨金黄色葡萄球菌对心脏瓣膜巨噬细胞集落刺激因子(MCSF-1)及其受体的影响和感染性心内膜炎(IE)的发病机制。研究者高低两种剂量金黄色葡萄球菌注射联合手术造成心脏瓣膜损伤的方法分别建立4组IE家兔模型,RT-PCR法检测各组瓣膜的MCSF-1及其受体(c-fms)mRNA的表达水平。结果 32例动物中存活26例，其中14/26(53.8%)例发生IE。小剂量组中赘生物产生、细菌培养阳性率显著低于大剂量组(P＜0.05)。手术+细菌注射可诱导二尖瓣、三尖瓣MCSF-1 mRNA表达明显增加，c-fms mRNA表达明显降低。大剂量细菌注射比小剂量细菌注射诱导二尖瓣MCSF-1 mRNA表达更明显(P＜0.01)，三尖瓣表达差异无统计学意义。可见 MCSF-1/c-fms可能是参与IE发生的重要因子之一。左、右心腔对大剂量细菌入侵有不同的抗感染免疫反应，这可能是左、右心IE有不同临床特点的原因之一。
日期：日 - 来自[]栏目
　　Survey of a food poisoning accident due to contamination with Staphylococcus aureus.
　　XU Zhuo-jun.
　　（Xinhui District Center for Disease Control and Prevention，Jiangmen529100，Guangdong，P.R.China）&&&& 　　摘要:目的 调查某学校发生以呕吐为主要症状的集体食物中毒的发病原因和传染源。 方法 采用流行病学调查方法和对病人呕吐物、肛拭、可疑食物进行实验室检查，糕点加工场员工的肛拭、咽拭等样本按食品卫生微生物学检验和变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则附录A方法进行检验。 结果 金黄色葡萄球菌检出率为呕吐物88%、肛拭80%、墨西哥面包100%，从业人员1人检出此菌。 结论 这是一起从业人员感染金黄色葡萄球菌再污染墨西哥面包而引起的细菌性食物中毒。&&& 　　关键词:食物中毒;金黄色葡萄球菌;调查
　　日中午，江门市新会区某小学早餐后发生了集体食物中毒事件。经流行病学调查，结合中毒患者临床症状及实验室检查，证实是一起由金黄色葡萄球菌污染墨西哥面包而引起的细菌性食物中毒。现将调查结果报道如下。
　　1 流行病学调查&&& 　　发病经过:10月14日早餐后约1h后有人发病，随即被送到新会人民医院就诊，至11时增至28人。患者主要症状为呕吐、腹痛、恶心。症状比例为呕吐（28/28）、腹痛（23/28）、恶心（18/28）。潜伏期最短1小时，最长12h。经对症治疗，患者全部痊愈。流行病学调查显示，该校有1084人于当天在学校吃早餐，其中一、三、五年级进食淡菜粥、墨西哥面包、蛋糕。所有患者都有吃墨西哥面包，具有共同就餐史。该校早餐中的墨西哥面包、蛋糕由新新饼店生产并供应，经调查该店生产的墨西哥面包、蛋糕加工后放置6～7h才送到学校。
　　2 实验室检查&&& 　　入院治疗患者呕吐物16份、肛拭子5份，该校留样墨西哥面包1份，新新饼店墨西哥面包、蛋糕各1份，新新饼店员工肛拭子4份、咽拭子4份、足趾伤口拭子1份。共采集样本33份。全部进行肠道致病菌及致病性球菌检测。按照GB/T《食品卫生微生物学检验》和变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则附录A方法进行检验进行检测。31份样本中分离出金黄色葡萄球菌22株，培养特征:在7.5%氯化钠肉汤呈混浊生长，在血平板上菌落呈金黄色、圆形、不透明、表面光滑、周围有透明溶血圈，取菌落涂片染色，形态为革兰阳性球菌、呈葡萄球状排列，血浆凝固酶试验阳性，生化鉴定结果符合金黄色葡萄球菌的特性。实验结果显示，患者和新新饼店员工的肛拭子、呕吐物、咽拭子、足趾伤口拭子及墨西哥面包中均检出金黄 色葡萄球菌，结果见表1。&&& 　　表1 31份样品中金黄色葡萄球菌检出结果（略）&&& 　　3 讨论&&& 　　根据流行病学特点和临床症状，结合实验室检验结果，本次中毒符合由金黄色葡萄球菌感染引起的细菌性食物中毒。从检测结果表明，由于医院在收到病人后立即通知区卫监所和区疾病预防控制中心，因而在患者呕吐物和肛拭子中检出率高、分别达88%、80%。所有患者具有共同就餐史，在新新饼店员工咽拭子、伤口拭子样本中检出金黄色葡萄球菌为同一人，因而引起这次细菌性食物中毒的传染源为该员工，由他感染金黄色葡萄球菌再污染墨西哥面包而引起。因此，卫生监督部门应加强对糕点加工场和学校食堂的监督管理和卫生知识培训，加强对食品从业人员的健康检查，避免因从业人员因卫生知识的缺乏而引起食物中毒事件的发生。由于实验室条件所限，未能作金黄色葡萄球菌肠毒素检测。今后应加予改进，开展这方面的工作，提高检测水平。
　　作者单位:江门市新会区疾病预防控制中心，广东江门 529100.
日期：日 - 来自[]栏目
　&&& 摘要:目的 了解金黄色葡萄球菌的生物化学和代谢特征，以及其半乳糖醇酶与产生肠毒素的关系。 方法 利用PCR方法从金黄色葡萄球菌标准株中扩增出金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶，克隆到pmD-18T载体上并转化到E.coli JM109菌株。 结果 用特异引物扩增800bp的基因片段，目的基因被克隆，经双酶切和DNA序列测定为金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因。 结论 金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因片段可以被特异性扩增和克隆。
&&& 关键词:金黄色葡萄球菌;基因克隆;半乳糖醇酶&&& &&& Cloning of dulcitol enzyme gene of staphylacoccus aureus.
　　HE Lian-hua，GAO Shi-tong，GENG Yi-jie，et al.
　　（Shen-zhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）
&&& Abstract:Objective To understand the character of biochemistry and motabolism of Staphylococcus aureus，and relationship between entertoxin product and expression of dulcitol enzyme gene. Methods Dulcitol enzyme gene of Staphylococcus aureuswas amplified from Staphylococcus aureus genome with PCR，gene was cloned into pmD-18T，then was transferred to E.coli JM109. Results 800bp gene fragment was amplified by PCR from Staphylococcus aureusgenome，and also was cloned plasmid pmD-18T，farget gene was identified from transferred on to plasmid pmD-18T by the way of DNA sequence and double enzyme cut. Conclu-sion Dulcitol enzyme gene of Staphylococcus aureus could be amplified and cloned specially.
　　Key words:SGDulcitol enzyme
　　金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是导致人畜共患细菌病的重要病原体之一，其代谢产物肠毒素是引起食物中毒的主要成分，可引起人和动物败血症、肺炎、肠炎、皮肤软组织感染等，其突变菌种是引起院内感染的主要病原体 ［1～3］ 。目前细菌分离培养是金黄色葡萄球菌检测的常规方法，该法费时、费力，不能满足快速检测的需要，国外采用放射免疫和酶联免疫法进行检测，但国内还未推广引用 ［4～6］ 。
　　金黄色葡萄球菌能产生多种毒力强度不同的毒素和酶，其中nuc基因编码的耐热核酸酶（Themostable nuclease，Themonuclease［Tnase］），不仅为金黄色葡萄球菌所特有，而且在不同株之间具有较高的保守性;半乳糖醇酶又称卫矛醇酶（Dulcitol enzyme）的基因表达可能与肠毒素的产生有密切的关系，了解这个基因及其产物的生物学功能，对于研究肠毒素的产生及其抑制具有重要意义，同时为半乳糖醇酶类药物的研究和开发奠定基础。
　　1 材料与方法
&&& 1.1 材料 金黄色葡萄球菌和E.coli JM109为本室保存;7.5%NaCl肉汤培养基和LB培养基为本室配制;Taq DNA polymerase，buffer，dNTP，T4DNA Ligase，pmD-18T载体，胶回收及质粒提取试剂盒均购自大连宝生物公司;琼脂糖购自BBI生物制品公司，其余产品均为国产分析纯;Sprint PCR仪是英国Hybaid公司产品，离心230由IEC（International E-quip2ment Company）公司制造，基因脉冲转化仪为Bio2Rad产品;DF2D电泳仪为北京东方特力科贸中心产品。
&&& 1.2 方法
&&& 1.2.1 PCR引物设计及反应条件根据文献设计一对特异性引物:F5'-GGATCC AGCG AGA AAA GCG;R-3'R5'-GCGC GTCGAC ACTT GTA TAT AAA T-3'，PCR条件:97℃1min。95℃45s;40℃45s;72℃1min，共30个循环。72℃5min，以金葡菌半乳糖醇酶基因组DNA为模板，按照上面的条件进行PCR扩增。1.2.2 PCR产物回收 按大连宝生物公司试剂盒说明使用。
&&& 1.2.3 PCR产物与T载体的连接 按下列体系混合:PCR产物4μl，PmD-18T载体1μl，solution5μl共10μl，于15℃过夜。取5μl转化感受态细胞。
&&& 1.2.4 感受态细胞的制备和转化方法将JM109LB培养基于37℃摇床培养过夜，然后按第三版《分子克隆实验指南》中的方法操作。
&&& 1.2.5 DNA序列测定 将6个阳性克隆同时以DNA序列分析仪（Perkin Elmer）进行序列测定，按照Renli Zhang所描述的方法（Parasit.Int.，～242.）。
　　2 结果
　　2.1 金葡菌半乳糖醇酶基因组DNA的提取 接种金葡菌于7.5%NaCl肉汤培养基中（含50mg/L Amp），37℃摇床培养过夜，离心得细菌。按照文献 ［7］ 提取基因组DNA，结果见图1（略）。&&&& 2.2 基因克隆及筛选 被扩增目的DNA装入T载体转入E.coli JM109感受态细胞后，将其涂于带有Amp抗生素的LB平板上放于37℃温箱培养过夜。第2d挑菌保种并进行PCR对半乳糖醇酶基因进行扩增。电泳可以看出有效地扩增出所预期的约700bp的特异带。
&&& 2.3 酶切鉴定 用北京赛百盛基因技术公司的质粒提取试剂盒对筛选的阳性克隆菌株液体培养提取质粒，用BamⅠ和SalⅠ进行双酶切，切出约800bpDNA片段，如图3（略）所示。
&&& 2.4 重组质粒的序列测定 经PCR扩增和双酶切证实的阳性克隆进一步进行DNA序列测定，DNA序列测定的结果表明克隆的目的基因片段与基因文库所登录的金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因序列有99%的同源性（dbjAP004822Staphylococcus aureus subsp.au-reus MW2DNA，complete genome，strain:MW2）。&&&& 3 讨论
　　从食物中毒样品中分离出的强毒力株金黄色葡萄球菌作为模板，利用PCR技术成功地扩增出半乳糖醇酶基因，并克隆了半乳糖醇酶基因，且在原核或真核细胞成功表达，对金黄色葡萄球菌生理及其生物化学特性提供了一定的条件。
&&& 本研究通过对金黄色葡萄球菌分离株半乳糖醇酶基因部分序列测定，进一步证实了克隆的可靠性。从食物中毒样品中分离出的强毒力株半乳糖醇酶基因，与基因GenBank收录的金黄色葡萄球菌日本株乳糖醇酶基因的相应序列有较高的同源性（99%），说明金黄色葡萄球菌乳糖醇酶基因有较高的保守性。
&&& 金黄色葡萄球菌是引起医院感染和细菌性食物中毒的主要病原体，该菌可以分泌20多种毒蛋白，克隆和表达这些基因、分析其功能及其生物化学特征及其了解其毒性的机理是很有必要的。
　　参考文献:
&&& ［1］A LlanGJ，Frank E，Peter S，et al Staphylococcus aureus meningitis［J］.&&& Aroh Intern Med，02～1908.&&& 　　［2］Michal E.Nosocomial Staphylococcus outbreaks［J］.Scand J Infect Dis，～54.
&&& ［3］于恩庶，林继惶，陈观今，等.中国人畜共患病杂志［M］.福州:福建科学出版社，1996.&&& ［4］萧佩蘅，刘瑞三，催中道，等.实验动物医学［M］.北京:农业出版社，1992.
&&& ［5］NagakiM，Muto Y，Ohnishi H，et al.Hepatic injury and lethal shock in galactosamine sensitized mice induced by the superantigen Staphylococcal enterotoxin B gastroenterology［J］，0～458.
&&& ［6］王小红，谢笔钧，史贤明.金黄色葡萄球菌致病因子检测的PCR方法［J］.Food and Machiney，）:48～50.
&&& ［7］MartinM，Dinges，Paul M，et al.Schlievent exotoxins of Staphyococcus au-&&& reus［J］.Clinical microbiology reviews，）:16～34.　　　　作者单位:深圳市疾病预防控制中心，广东深圳 518020.
　　作者简介:贺连华（），女，主管技师，主要从事病原生物学研究.
　　通讯作者:张仁利，MD，Ph.D.深圳市疾病预防控制中心分子生物学研究室.
　　收稿日期:
日期：日 - 来自[]栏目
　　&2005年9月，本中心接到报告，有2例因吃蛋糕引起的以呕吐、腹痛、腹泻为主要症状的患者，我们立即前往采样，并在2例患者吃剩的蛋糕中检出一株不典型的金黄色葡萄球菌，现将分离鉴定的过程报告如下。
&&& 1& 材料与方法
&&& 1.1& 材料& 检验材料为患者吃剩的蛋糕。
&&& 1.2& 方法
&&& 1.2.1& 实验仪器和试剂& 实验仪器：恒温培养箱、梅里埃ATB& Expression 细菌鉴定仪及VIDAS免疫诊断分析系统，试剂：甘露醇高盐琼脂购自广东环凯微生物科技公司，血平板（使用人血）、卵黄琼脂平板、1mol/L的盐酸、3%H2O2为本单位自制，生化鉴定用的ID32 STAPH细菌鉴定卡及VIDAS葡萄球菌肠毒素试剂盒为法国梅里埃公司生产，其余均购自北京陆桥技术责任有限公司，试剂均在有效期内使用。
&&& 1.2.2& 检验方法& 按GB/T03《食品卫生微生物检验》［1］，DNA酶测定按《微生物学和微生物学检验》［2］中的方法，细菌鉴定卡、葡萄球菌肠毒素的检测按法国梅里埃试剂使用说明书操作。
&&& 2& 结果
&&& 2.1& 增菌及分离& 剩余蛋糕经7.5％NaCl肉汤增菌后，同时接种于血平板、甘露醇高盐琼脂平板上，37℃培养24h后，取出观察菌落形态，在血平板上见白色、不透明、圆形、光滑、突起、周围有透明溶血圈、直径约1mm的小菌落；在甘露醇高盐琼脂平板上见黄色、圆形、光滑、突起、直径约1mm的优势菌落。挑起以上两种形态的单个菌落各3个做革兰染色镜检，均为革兰阳性球菌、部分呈葡萄状排列，同时接种于营养琼脂平板和双糖管上，置37℃、24h做纯培养。取纯培养物划线接种Baird-Parker平板及卵黄琼脂平板上，置37℃、24h培养，在Baird-Parker平板呈圆形、光滑、突起、黑色、其周围却不见浑浊带和透明圈，且直径约为0.7～1mm。在卵黄琼脂平板上呈圆形、光滑、突起、原始区的菌苔呈淡黄色、单个菌落呈白色、直径约为1～1.3mm、其周围可见浑浊带和透明圈。
&&& 2.2& 生化试验& 取营养琼脂平板上的纯培养菌落做下列生化试验：氧化酶(-)，触酶(+)，血浆凝固酶：玻片法(+)，试管法(+)，DNA酶(+)，按要求将菌液接种于ID32 STAPH细菌鉴定卡，置37℃培养24h后用梅里埃ATB细菌鉴定仪自动读数，判断为非常好的鉴定结果，99.7%符合金黄色葡萄球菌，全部生化反应见表1。将菌株送厦门市CDC做葡萄球菌肠毒素检测，用自动定量酶联荧光免疫分析法测定，选用法国梅里埃公司生产VIDAS葡萄球菌肠毒素(SET2)试剂盒，产品编号：30705，结果判断：TV值小于0.13为阴性、大于或等于0.13为阳性，在此试验中阴性质控样TV值为0.00、阳性质控样TV值为1.00、菌株的TV值为2.32，即该菌株葡萄球菌肠毒素为阳性。表1& 生化反应结果
&&& 3& 讨论
&&& 典型的金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落形态为金黄色、圆形、光滑、大而突起、周围有溶血圈；在Baird-Parker平板上为圆形、光滑、突起、直径约2～3mm、菌落中心呈灰黑色、周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。而此次分离到的金黄色葡萄球菌在血平板上虽为圆形、光滑、周围有溶血圈，但因其不产生色素而呈白色，且菌落较小直径约1mm；在Baird-Parker平板上虽呈黑色、其周围却不见浑浊带和透明圈（可能是冻干的卵黄较难溶解之故），直径约为0.7～1mm，很容易导致漏检，又因此菌株为能引起食物中毒的肠毒素阳性的金黄色葡萄球菌，所以提醒各位同仁在金黄色葡萄球菌的检验中，不仅要注意典型菌落，对这种在血平板上呈白色、有透明溶血圈、较小的菌落也要重视，建议先做革兰染色镜检及血浆凝固酶试验筛检，若符合，再继续做各项试验鉴定，以提高金黄色葡萄球菌的检出率，防止漏检。
&&& 【参考文献】
&&& 1& 中华人民共和国卫生部/中国国家标准化管理委员会．GB/T89.31-.食品卫生微生物检验.
&&& 2& 俞树荣.微生物学和微生物学检验，第2版．北京：人民卫生出版社，114.
&& 作者单位：361100 福建厦门，厦门市同安区疾病预防控制中心
　 (编辑：若& 木)
日期：日 - 来自[]栏目&&&& 芝加哥大学研究员近日说，他们已研发出一支可预防金黄色葡萄球菌感染的新疫苗。研究报告刊于《美国科学院公报》。
&&&&研究小组对金黄色葡萄球菌的19种蛋白质进行试验，选择出最能激发老鼠免疫反应的四种蛋白质，再以这四种蛋白质研发出这支疫苗。
&&&&研究员用五种会使人类感染的金黄色葡萄球菌对老鼠进行实验，初步结果证实，这支疫苗皆充分发挥预防作用，未接种疫苗的老鼠则发生细菌性脓肿。研究结果让赞助这项研究的美国过敏症与传染病研究所大感欣慰。
&&&&研究使用的方法称为理性药物设计。大部分疫苗用的是完整的病毒或细菌，只是病毒或细菌已死掉或作用已减弱，注射到人体后可激发免疫系统的反应。但是这个方法对金黄色葡萄球菌无效。
&&&&金黄色葡萄球菌是医院感染最常见的病原体，可能导致心内膜炎、中毒性休克症候群、严重肺部感染、和食物中毒。美国疾病防制中心（CDC）指出，这些在医院发生的感染每年造成9万人死亡，耗费45亿美元的医疗成本。
&&&&日期：日 - 来自[]栏目共 14 页，当前第 11 页
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