小木虫 --- 500万硕博科研人员喜爱的学术科研平台
&&查看话题
小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料，不知道如何处理，没有说明书-求指导！
小弟刚买回来100克葡聚糖G-15填料，不知道如何处理，没有说明书----求指导的大神帮帮忙吧！有谁用过的，或者有说明书的给小弟一份吧，我就是不知道，怎么处理，一直到装柱子，具体怎么操作，有谁用过的给指点一下吧！！！！！！谢谢大家了！！！！
答非所问，没做过的话最好不要误人子弟。从别的地方粘过来，却不知道这样的答案一点用处都没有。
您的回复太有用了，非常感谢啊！但是我看见一些资料说，先用50-60%的乙醇泡24小时，之后再用去离子水泡24小时，之后缓冲溶液泡才上柱子，这种方法靠谱么？还有小弟想请教一下，我的柱子大概60cm长，我现在有100克填料，我得大概取多少合适啊？
还有您说的第一步4克填料加50毫升水，这个比例是怎么来的？有参考？还是固定的？
其实好多方法都是大同小异，用乙醇，去离子水溶胀都可以，但是最后都要是水。还有上柱子的话最好是用水上，否则你弄得柱子和仪器上都是缓冲液，干了以后不好清洗，很容易腐蚀仪器。比例的话你可以看一下说明书，应该有个溶胀的比例。说明书在GE网站上都可以查到的。
因为买的是国产的，我看了一下它就有一个数据：膨胀体积：2.5-3.5ml/g,是不是意思就是我的一克填料大概能膨胀成3克左右，哪我是不是应该加乙醇和去离子水使其膨胀的前处理都是填料的3倍啊?就是我100克的调料加300毫升水？
还有您说的这句----再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次，使pH和离子强度达到平衡，最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡，凝胶可保存在缓冲液内。 那上柱子的时候这个凝胶不就是在缓冲溶液中么？
我是不是最后要把缓冲溶液去掉，之后再加入水，之后装柱子呢？求指教！
用乙醇和去离子水的膨胀比不一样的，用乙醇比去离子水的膨胀体积小。应该是1g填料膨胀到2.5-3.5ml。水可以加多点，膨胀完全了，本身就不再吸水了，静止的话会有上清的水出来的。
对的，上柱子的时候把缓冲液置换出来。
您好，那您说这个膨胀体积：2.5-3.5ml/g是加水的时候的膨胀体积是这么大是吧？大概是3倍左右，您说乙醇的膨胀体积比水小，那是不是我就应该多加点乙醇，比如100克填料加入400ML乙醇，这个乙醇和去离子水加多点没什么问题吧？是不是只要我加入的水或者乙醇淹没填料就可以了？
再多一些都没有问题，你上柱子的时候膨胀完的填料里面也要加水，要多出三分之一的清水才可以。
太感谢你的回复了，还有一个问题就是上样的时候，我查资料说，最好是凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，这个柱床体积是怎么计算的？我以前没过过柱子，不懂！
不好意思，我还有一个问题，就是上柱子前需要脱气，这个步骤是怎么操作的啊？
你装完柱子后，凝胶的体积。柱子底面积乘以高。
上柱子用的液体超声脱气，或者泵抽气。
我就把我的填料和去离子水的悬浮液的烧杯，直接放在超声仪里面，超声脱气就行了吧？大概多长时间，这个有限制么？
填料不超声呀，所用的溶液和水要超声
大概15-20分钟的时间
就是乙醇和水要超声之后，再倒入填料里面，还有就是加水或者乙醇的时候必须得搅拌是吧，这个搅拌的力度有要求么？就是有玻璃棒来回的搅拌就行吧？
好的！，太谢谢你了！真的不知道说啥！
搅拌力度没要求，但最好不要碰壁，因为这样容易破坏凝胶的结构。
OK,好的，哪我一会就考试试试！有什么问题我还是希望能够及时的向您请教！
客气了，尽我所能
大神，求助，就是我今天超声乙醇溶液的时候，在容量瓶刻度线附近大概聚集了大概10个左右气泡，超声半天也除不掉，这个怎么办啊？会不会影响呢？
没事，我已经解决了，我多超声一会气泡就没了，我现在已经泡上了，这个是不是得隔一阵子就得搅拌一下，是吧？
室温下，将干粉浸泡于50%-60%乙醇中至少24h,不断搅拌已保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
求问它这个最后一步，是不是就是用去离子水多洗几次把乙醇带出来？这个滤干怎么操作呢？
大神，这是我求到的一个方法，它这里没有提到用缓冲溶液泡，这个步骤靠谱么？
3.1 乙醇浸泡（300毫升无水乙醇加高纯水至500毫升定容）--超声15分钟脱气
& & 在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
3.2 无盐水浸泡（高纯水500毫升—超声脱气15分钟）
& & 室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀。
3.3 盐酸浸泡（取4.17毫升浓盐酸加水稀释到500毫升）----超声脱气15分钟
& & 在常温下再用0.1M HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性。
多洗几次就可以了
我没这么做过，你可以试一下。
我现在就是把上层的清澈的乙醇倒出来了，之后还有一部分乙醇和填料成浑浊，不能倒了，一倒填料就出来了，这样的话我就可以开始用水洗了是吧？
我泡盐酸那步今天已经快结束了，之后就是水洗到中性了，在上柱子之前，我看你给我留的建议中是---最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡--这步骤怎么操作啊？还有凝胶要是暂时不上柱子的话，就泡在去离子水里面行么？我看别人都说要泡在20%的乙醇中？哪个对啊？
泡在水里不行，都要保存在20%乙醇里面。你们有抽气泵吗？最好抽一下。
咱们实验室就有水泵和布氏漏斗，抽滤瓶这套仪器，行么？这个操作是把凝胶倒在布氏漏斗里面之后抽滤么？
放在烧杯里，然后放真空干燥器密闭，抽气
这个方法行，我下午试试，还有就是这个抽气的时候，是去离子水和凝胶混合在在一起放烧杯里面抽气，还是把去离子水先倒出来，就单单剩下的凝胶抽气啊？抽完气之后是不是就可以直接上柱子了？最后一步了吧？呵呵！
一块抽就可以了，抽完就可以上柱子了。你会装柱子吗？
我们隔壁实验室倒是有一个会的，我得问问他，如果行的话就最好了，不行的话我找请教你吧！非常感谢！
对了，我还有个问题一直拿不准就是为啥保存在水里面不行，必须保存在20%的乙醇里面呢？什么原因？
抑菌用的，长时间的话加叠氮化钠。
明白了，太有用了！还有就是我泡完盐酸后，不是要用水洗到中性么，我现在就是把凝胶表面的水倒出来，之后加入去离子水搅拌，之后把表面的水再倒出来，之后再加入去离子水，我都洗大概5次左右了，但是我用PH试纸试验还是显酸性，是我的操作不对吗，还是要继续洗啊？
洗的差不多就行，这样洗的话怎么着都有残留，或者你倒在柱子里，洗脱一遍。
对啊，我觉得这么洗的话怎么都会有残留的，但是不是很严格的要求必须PH到中性么？要不我就洗的差不多就行，最后我在上样前，多冲几遍柱子是不是也行？
对，可以的
我又来请教你了，呵呵！就是我快要上柱子了，但是我这个产物吧应该是不太好溶解在水里面，我看文献是用水作洗脱剂的，你说这个应该怎么办呢？我可以稍微加热一下再上柱子么？
今天装柱子出现起泡裂痕，我想把凝胶倒出来重新装柱子，怎么弄出来啊？求助！
不好意思，最近没怎么上，你把下面柱头打开，给流速冲下来就行，下面可以用烧杯接着
我没碰到过这样的情况呢，如果加热，你要看一下凝胶的耐受温度是多少。
没事，我感觉你应该最近没上比较忙，呵呵！我那个搞定了，现在的问题就是我有个疑问，就是这个葡聚糖柱子是我的样品先出来，之后是杂质，不过杂质走的比较慢，那你说，我上样一次没上完，那第二次上样我是不是必须得等到杂质也流出来之后才能上样啊？
还有我过完柱子后，这个柱子上的残存的东西用什么洗掉啊？是在柱子里面洗呢？还是把葡聚糖倒出来放在烧杯里面洗呢？求教！
肯定是要第一次都流出来以后才能上第二次的样呀，用0.1MNaOH洗柱子。在柱子里洗，洗完用水洗，再用20%乙醇洗。
我想请教一下你怎么知道你的杂质都流出来了啊？点板看么？是不是就是最后流出来的是水应该就可以上第2次样了？
还有洗柱子的时候可以用加压泵加压么？我看见有人说不能加压，但是那样流的超级慢啊？
一般分子筛洗脱一个柱体积就可以了，但是怕有些蛋白会吸附到柱子上，洗完一个柱体积后最好用NaOH洗一次。这个还是要看你样品了，自己把握。你用的什么仪器纯化呀？我用的是GE的AKTA。我不知道你指的加压什么意思？AKTA上会有三个压力，系统压力，柱子的进口压和出口压。柱子的进出口压差不能大过柱子和凝胶的耐受压。
分子筛洗脱?我也没有用过这个啊？你不说直接用NaOH洗一次不就行了吗？纯化？没有仪器啊？我用的加压的就是类似于给鱼加氧的小泵，不过加上那个泵，感觉流的稍微快点！不过我就怕把填料压坏了！
对了，我的杂质里面没有蛋白，就是盐和间硝基苯酚。就这两个！
有点无语了！应该补补课了。你这个就叫做分子筛层析，也叫凝胶色谱。不同的柱子和凝胶都有不同的耐压，这个要看测定的压力，你如果没有压力测定的东西直接加泵加压肯定不行。没有的话你就可以上第二次样品了。
哦，这样啊，关键我确实不太懂这个，我直知道凝胶色谱这个定义，不好意思啊！还有这个压力我也没有仪器啊？怎么测定呢？我以为就像他们过硅胶的柱子，直接加压不是流速就加快了吗，呵呵！
建议你加个压力表，不然就用重力让他自己流吧
好吧，感谢你的回复，我都不好意思了，天天老麻烦你！确实不好意思！我刚才看了一眼我用的小泵是0.02Mpa,不过我看下说明书上写着填料的最大压力应该是100cm的水柱，我换算一下大概应该是0.01Mpa,超过了，我很担心会不会把我的填料压坏，哎！
泵压连在柱子上，表示的是系统压力，跟柱压差还不一样。
再请教一下，就是上次和我说的洗柱子的问题，是0.1M的氢氧化钠-蒸馏水-20%乙醇--是这个顺序吧？这个每个都要洗多久呢？
每种最好都要一个柱体积吧
好的，最后还是要保存在20%乙醇里面对吧！谢谢！
你好，我看了你们的帖子很有帮助，我现在需要处理保存在叠氮化钠中的葡聚糖G25，想知道具体处理方法？还是和上面一样？
研究生必备与500万研究生在线互动！
扫描下载送金币
浏览器进程
打开微信扫一扫
随时随地聊科研真菌D葡聚糖G实验《6.25是啥意思
真菌D葡聚糖G实验《6.25是啥意思
基本信息：女&&68岁
所患疾病：肺癌（已到医院就诊）
病情描述及疑问：真菌D葡聚糖G实验《6.25是啥意思检查及治疗情况：肺部有结节病变
您输入的回答少于20个中文字，请补充输入。
&&&内科_呼吸内科
擅长： 擅长常见的内科疾病，呼吸系统疾病：1肺炎、2慢支、3支哮、5肺结核、肺癌。
心血管系统系统疾病：1心肌炎、2心肌病、3心绞痛。消化系统疾病：1胃炎、2胃溃疡、3反流性食管炎、4十二指肠溃疡、5肝炎、6胆囊炎、7胰腺炎、、8肝吸虫。.泌尿系统疾病：1肾炎、2肾结石、3肾结核、4肾癌、5膀胱炎、6膀胱结石、7膀胱结核、8膀胱癌。生殖系统疾病：1睾丸炎、2睾丸结核、3睾丸肿瘤、4子宫内膜炎、2子宫内膜结核、3子宫内膜癌。以上疾病的诊断与治疗，尤其是诊断。
网友满意：
回答速度：
新华中心医院&&&内科_呼吸内科
分析：该情况可以考虑是肺癌
建议：你好，由于你患的是肺癌，伴癌结节。建议你再查一下你的肺癌是否有其他部位的癌转移来的，不知你肺部的结节是单个还是多个？
有关的更多问题，
为保障患者权益，我们仅接受有资质的医学专业人士的回答，请您先认证为医生定义/G试验
G试验检测的是真菌的细胞壁成分---(1,3)-β-D-葡聚糖，人体的吞噬细胞吞噬真菌后， 能持续释放该物质，使血液及体液中含量增高（浅部真菌感染无类似现象）。 1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。
应用/G试验
适用于除隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、根霉菌等）外的所有深部真菌感染的早期诊断，尤其是念珠菌和曲霉菌，但不能确定菌种。
假阳性的情况/G试验
以下情况可出现假阳性：（1）使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；（2）静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；（3）链球菌血症；（4）操作者处理标本时存在污染。另外，使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性，食用菌类，如蘑菇等食物可以导致假阳性。
&|&相关影像
互动百科的词条（含所附图片）系由网友上传，如果涉嫌侵权，请与客服联系，我们将按照法律之相关规定及时进行处理。未经许可，禁止商业网站等复制、抓取本站内容；合理使用者，请注明来源于。
登录后使用互动百科的服务，将会得到个性化的提示和帮助，还有机会和专业认证智愿者沟通。
此词条还可添加&
编辑次数：5次
参与编辑人数：5位
最近更新时间： 07:21:23
贡献光荣榜> 真菌检测实验方法:G试验与GM试验专题
侵袭性真菌感染的发病率呈逐年上升趋势。因此对真菌抗原的检测试验受到极大关注，对于真菌细胞壁(1,3)-β-D-葡聚糖和曲霉半乳甘露聚糖抗原检测的应用已成为真菌感染的诊断标准之一。本专题详细介绍G/GM试验原理及方法。
G试验检测的是真菌的细胞壁成分1,3-β-D-葡聚糖(BG)，人体的吞噬细胞吞噬真菌后，能持续释放该物质，使血液中含量增高。定植时BG很少释放入血，因此可有助于鉴别真菌侵袭与定植。
GM试验检测的是半乳甘露聚糖(glactomannan，GM)，半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原，主要适于侵袭性曲霉菌感染。
<img alt="曲霉 半乳甘露聚糖抗原检测 - EIA 微孔板测定" height="302" src="http://www./webroot/web/images/cdg/products/microbiology/product_detail/global/cmd_62794_pdp.jpg" width="470" />
已知曲霉菌属在生长期间会释放菌表抗原：在患有侵袭性曲霉病的患者的生物体液中检测到低水平的循环半乳甘露聚糖抗原。夹层结构ELISA Platelia(TM) 曲霉菌EIA 能够检测出每ml 血清中的1 ng 半乳甘露聚糖抗原。
1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎(Limulus)变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。
葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，1,3--D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌细胞壁上的特有成分。以1,3--糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链，以分支状1-6--D葡萄糖残基作为侧链。
(1,3)--D-葡聚糖在真菌细胞壁成份中占50%以上，其他微生物、动物及人的细胞不含该成份，因此可用于侵袭性真菌感染的早期诊断。
1，3-β-D葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。侵袭性真菌感染。可诊断多种致病真菌感染：念珠菌、曲霉菌 一.1，3-β-D葡聚糖检测(简称G试验)。
近年来，侵袭性曲霉菌感染(IAI)的发生率和病死率也逐年上升。通过检测GM 抗原即GM 试验，可作为早期诊治和预后评价及医院感染防治依据。
侵袭性真菌病(IFD)既往称侵袭性真菌感染(IFI)，是恶性血液病的严重并发症。近年来随着广谱抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂及抗肿瘤化疗药物的广泛应用以及器官移植的广泛开展，侵袭性真菌病的发病率和病死率逐年上升。
Bio-Rad公司的PlateliaTM曲霉菌抗原检测试剂盒采用酶联免疫双抗体夹心分析法检测血清中半乳甘露聚糖抗原。经典的ELISA检测流程，卓越的品质和产品性能，高度的敏感性和特异性分别达到了92.1% 和97.5%，最低检出限为 0.4ng/ml。
研究中作者选用了美国Bio-Rad的PlateliaTM曲霉菌抗原检测试剂盒。通过该研究同时也验证了PlateliaTM试剂盒的性能，即准确性和特异性高，尤其肺泡灌洗液的特异性优于血清检测的特异性。
近年随着广谱抗生素和免疫抑制剂的使用，侵袭性真菌感染(Invasive Fungal Disease，IFD)的发病率逐年上升。其中侵袭性曲霉菌病(Invasive Aspergillus，IA)在IFD中比例逐年增高。
Bio-Rad公司的 Platelia(TM)曲霉菌抗原检测试剂盒采用酶联免疫双抗体夹心分析法检测血清中半乳甘露聚糖抗原。
GM抗原检测是EORTC/MSG推荐的侵袭性曲霉菌病的真菌学检测标准之一，美国Bio-Rad公司研发的用于检测血清中GM抗原的PlateliaTM Aspergillus Ag Assay试剂盒已在2014年初获得CFDA批准。该试剂盒的上市为临床带来空前的利好价值，并受到众多国内专家的高度关注与评价。
Platelia(TM) 曲霉菌抗原检测试剂是 Platelia(TM) 曲霉菌 EIA 试剂盒的升级版本，可用来检测成人和小儿血清样本以及成人支气管肺泡灌洗 (BAL) 液体样本中的循环曲霉菌 半乳甘露聚糖抗原。真菌感染诊断，G试验、GM试验，这些必须知道！
真菌感染诊断，G试验、GM试验，这些必须知道！
侵袭性真菌病是临床常见的感染类型，其发病率在器官移植受体、恶性肿瘤等免疫受抑制患者中高达 20% ~ 40%,也日益成为此类患者的重要死亡原因。作者：李贺来源：医学界呼吸频道侵袭性肺真菌病临床表现不典型易被基础疾病所掩盖，确诊通常需要侵入性的组织标本，而侵入性的操作过程常因患者的病情所限难以实施。因此有较高的漏诊率。目前国内大多数医院都在开展非侵袭性实验室技术如G试验和GM试验，成为真菌感染的诊断标准之一，以提高真菌感染的阳性率。但G试验、GM试验在诊断真菌感染中究竟有多大意义？两者有何区别？本文做一阐述。一、什么是G试验、GM试验？1、G试验：又称1,3-β-D葡聚糖试验，检测的是真菌的细胞壁成分1,3-β-D葡聚糖，人体的吞噬细胞吞噬真菌后，能持续释放该物质，使血液及体液中含量增高。1,3-β-D葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。2、GM试验：检测的是半乳甘露聚糖（glactomannan,GM），半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原，可以通过酶联免疫吸附试验法进行检测。二、两者在诊断真菌感染中的意义根据侵袭性肺真菌病诊断指南，真菌感染的诊断因素包括宿主因素、临床特征、微生物学检查、组织病理学。确诊疾病必须依赖组织病理等有创检查和操作，培养过程又需要一定时间，从而无形中增加了漏诊率，而新的血清学诊断方法，包括G试验、GM试验以及对于真菌特异DNA的PCR技术，与临床征象、微生物培养，尤其是CT扫描一起，为开始抢先治疗、监测疾病病程、评价治疗反应提供了更多有参考价值的资料。其中G试验、GM试验连续2次阳性为有意义的检查结果。人体的吞噬细胞吞噬真菌后， 能持续释放1,3-β-D葡聚糖，使血液及体液中含量增高。通过 G 试验检测1,3-β-D葡聚糖的含量能够及时反映真菌感染情况。G试验适用于除隐球菌和接合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期诊断，虽能测得包括曲霉和念珠菌在内的更多致病性真菌，且初步的临床研究显示有较好的敏感性和特异性，假阳性率较低，但它只能提示有无真菌侵袭性感染，并不能确定为何种真菌感染，这是此方法的缺陷。同时以下情况可出现假阳性：（1）使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；（2）静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；（3）链球菌血症；（4）操作者处理标本时存在污染。另外，使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性。GM试验主要针对于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。曲霉菌感染部位主要集中在肺部，从而引起肺部侵袭性曲霉，诊断曲霉菌在肺部是定植还是侵袭性生长，关键在于其是否合成GM.如果痰液或肺泡灌洗液标本培养到曲霉菌 且GM试验检测结果为阳性，即可诊断为曲霉菌侵袭性感染。GM试验常可在患者临床症状出现前5-8d获得阳性结果，并可对血清、脑脊液、肺泡或支气管灌洗液进行检测，因而往往可以使诊断提前。所以GM试验是诊断侵 袭性曲霉感染的微生物检查证据之一，通过检测GM值也可以作为治疗效 果的参考指标之一。GM试验对其他真菌检测无效，且敏感性和特异性受诸多因素影响，以下情况可出现假阳性：（1）使用使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦；（2）新生儿和儿童；（3）血液透析；（4）自身免疫性肝炎等；（5）食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物和污染的大米等。以下情况可出现假阴性：（1）释放入血循环中的曲霉GM（包括甘露聚糖）并不持续存在而是会很快清除；（2）以前使用了抗真菌药物；（3）病情不严重；（4）非粒细胞缺乏的患者。三、临床应用注意（1）G 试验和 GM 试验检测的物质不同，代谢规律存在差异，影响因素也有较大差别，二者不能互相取代。二者联合应用可以提高对侵袭性真菌病的诊断能力。（2）GM 试验和G试验均存在假阳性结果，可以通过多次检测来降低假阳性率。因此，G 试验和 GM 试验阳性的病例仍需结合临床表现综合判断是否存在真菌感染。（3）我国的侵袭性真菌病指南把连续 2 次 GM 阳性作为微生物感染的标准，临床上经验性治疗早期应用，会使血清 GM 浓度降低，出现假阴性，连续 2次血清 GM 阳性的标准不易达到，会给临床医生带来困惑。（4）影响 GM 试验结果最常见的因素为 β-内酰胺类抗菌药物的使用，尤其是哌拉西林/他唑巴坦，因此在检测曲霉菌半乳甘露聚糖时，应避免给患者使用此类药物。
发表评论：
TA的最新馆藏