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促甲状腺素释放激素对烧伤休克大鼠脂质过氧化的影响
安徽医科大学学报 2000年第4期第35卷 基础医学研究
作者：陈旭林　李守生　汪昌荣　王永杰
单位：安徽医科大学第一附属医院烧伤科，合肥　230022
关键词：普罗瑞林；药理学；烧伤；休克；过氧化脂质类；代谢
　　摘要　目的　探讨促甲状腺素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone, TRH)对烧伤休克大鼠氧自由基所引起的脂质过氧化损伤的作用。方法　复制大鼠40% TBSAⅡ°烧伤休克动物模型，烧伤后0.5 h给予TRH(5 mg．kg-1体重)，观察烧伤前后平均动脉压的动态变化，烧伤后生存时间，烧伤后1、3、5 h血浆、心、肝、肺、肾SOD活力和MDA含量的变化。结果　TRH能提高烧伤休克大鼠的血压并维持在高水平，明显抑制生命器官组织MDA含量的上升，提高SOD活力，大鼠的生存时间明显延长。结论　TRH在抗大鼠烧伤休克的同时，具有良好的抗脂质过氧化损伤作用，适合于烧伤早期应用。
　　中图分类号　R977.1； R605.971
　　文献标识码　A　文章编号　00)04-0269-03
Protective effect of thyrotropin-releasing hormone against lipid peroxidation injury during burnt shock in rats
Chen Xulin, Li Shousheng, Wang Changrong et al
　　(Dept of Burns, The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei　230022)
　　Abstract　Objective　To determine the effects of thyrotropin-releasing hormone (TRH) on peroxidation in burnt shock rats. Methods　A 40% TBSAⅡ degree burnt rat model was used, and TRH was intra-arterial infused (5 mg．kg-1) 0.5 h postburn. The dynamic changes of mean arterial pressure (MAP) and the survival time were observed. Blood and tissue specimens were taken at 1,3 and 5 h after scald. The content of malondialdehyde (MDA), activity of superoxide dismutase (SOD) in plasma, heart, liver, lung and kidney were examined. Results　Along with the administration of TRH, the MAP raised, the activities of SOD in plasma and organs ascended, the contents of MDA in plasma and organs reduced, and the survival time prolonged. Conclusion　TRH has antishock effects and attenuated oxygen free radical-induced lipid peroxidation in burnt shock rats, recommended for the early postburn stage.
　　MeSH　Protirelin/ lipid peroxides/metabolism
　　严重烧伤后由于血管通透性的增加，大量血浆样液体外渗，有效循环血量的降低，导致休克。研究表明：氧自由基引起的脂质过氧化损害是烧伤休克发生发展中的一个极为重要的因素〔1〕。在抗休克治疗中某些药物如肾上腺素、去甲肾上腺素等不仅不具有清除氧自由基的作用，反而在代谢过程中可导致氧自由基的产生〔2〕。我们的前期研究表明：促甲状腺素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone, TRH)对烧伤大鼠具有抗渗、提高动物血压、延长生存时间，对烧伤休克具有良好的治疗作用〔3〕。本实验采用大鼠40% TBSAⅡ°烧伤休克动物模型，检测血浆、心、肝、肺、肾等组织超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化，探讨TRH是否对烧伤休克大鼠的氧自由基介导的脂质过氧化损伤具有保护作用。
　　1　材料与方法
　　1.1　实验动物和分组　健康成年SD大鼠80只，体重203 g±18 g，♀♂不拘，由安徽医科大学动物中心提供(皖医实动准字第01号)。随机分为以下几组：①正常对照组，8只；②烧伤NS对照组和TRH治疗组，分伤后1、3、5 h 3个时相点，每时相点8只；③生存时间NS对照组和TRH治疗组，每组12只。
　　1.2　烧伤休克动物模型的复制和处理　13.3%乌拉坦+1%氯醛糖肌肉注射(6 ml·kg)-1麻醉大鼠，分离出左侧颈总动脉，插入动脉导管连接二道生理记录仪，描记血压曲线，用80℃水烫伤大鼠腰部以下身体(以髂前上棘为界)30 s，造成大鼠40% TBSAⅡ°烫伤(病理证实)，复制烧伤休克动物模型。TRH治疗组大鼠烫伤后30 min，以0.2 ml·kg-1体重(以生理盐水配成2.5 g*L-1)TRH(上海丽珠东风生物技术有限公司生产)经颈总动脉一次性给予。NS对照组给予等量的生理盐水。除观察生存时间组外各组大鼠至实验期限经颈总动脉快速放血致死，留血浆，取心、肝、肺、肾组织。正常对照组大鼠麻醉后进行左侧颈总动脉插管和模拟烫伤(室温水浴大鼠腰部以下身体30 s)，但不给任何药物。
　　1.3　实验的观察指标和方法
　　1.3.1　SOD活力的测定　SOD活力测定采用改良的黄嘌呤氧化酶法，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，严格按照说明书操作。血浆SOD活力用103 NU*L-1表示，心、肝、肺、肾的SOD活力用103 NU*g-1蛋白表示，蛋白的测定采用双缩脲法，试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司，严格按照说明书操作。NU为一个亚硝酸盐单位，是指每ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量。
　　1.3.2　MDA含量的测定　MDA含量测定采用硫代巴比妥酸比色法〔4〕。血浆的MDA含量μmol·L-1表示，组织中的MDA含量用nmol·g-1组织表示。
　　1.4　统计学处理　所有数据均以±s表示，分别采用t检验或方差分析判断组间差异，所有的统计均在686微机上用SAS统计软件完成。
　　2　结果
　　2.1　平均动脉压(MAP)的改变　在烫伤前，NS对照组和TRH治疗组的MAP分别(17.08±0.84)kPa和(17.06±0.86)kPa，烫伤后5 min内MAP急骤下降，5～10 min后开始缓慢回升，伤后30 min NS对照组和TRH治疗组的MAP分别为(10.91±1.03)kPa和(10.60±0.72)kPa，两组给药前各时相点的MAP之间相比差异均无显著性(P＞0.05)。
　　在颈总动脉一次性给予TRH后，MAP开始迅速上升，5 min后达高峰，为(17.05±1.87)kPa，基本恢复到烫伤前水平，较NS对照组高出近4 kPa(P＜0.01)。随后MAP逐渐下降，但TRH治疗组MAP一直明显高于NS对照组(P＜0.01)且下降缓慢，烧伤后5 h MAP较给药后下降了25.3%，而NS对照组下降了67.1%(图1)。
　　2.2　生存时间　TRH治疗组的大鼠存活(9.8±0.6) h，而NS对照组的大鼠存活(5.5±0.7) h，两者差异具有高度显著性(P＜0.01)。
　　2.3　SOD活力的变化　从表1可以看出：NS对照组烧伤后3 h肝、肺、肾的SOD活力较正常对照组明显降低(P＜0.05)，伤后5 h血浆、心、肝、肺、肾的SOD活力均降低(P＜0.05)；TRH治疗组伤后1、3、5 h血浆、心、肝、肺、肾SOD活力较正常对照组虽略有降低，但差异不显著(P＞0.05)，伤后1 h的心脏和伤后3 h的血浆、肾脏的SOD活力明显高于NS对照组，伤后5 h的血浆、心、肝、肺、肾的SOD活力均明显高于NS对照组(P＜0.05)。
图1　烧伤前后MAP的变化
　　2.4　MDA含量的变化　从表2可以看出：NS对照组伤后1 h心脏和肝脏的MDA含量就较正常对照组显著上升(P＜0.05)，血浆和肺脏的MDA含量从伤后3 h开始上升，伤后5 h血浆、心、肝、肺、肾MDA含量均较正常对照组上升(P＜0.05)；TRH治疗组伤后5 h血浆、肝、肺、肾MDA的含量较正常对照组未见上升，与NS对照组相比差异具有显著性，伤后5 h心脏的MDA含量虽较正常对照组上升，但与NS对照组差异有显著性(P＜0.05)。
表1　各组不同器官组织SOD活力的变化(±s)
　　(103 NU·L-1)
　　(103 NU·g-1蛋白)
　　(103 NU·g-1蛋白)
　　(103 NU·g-1蛋白)
　　(103 NU·g-1蛋白)
正常对照组
　132.42±5.36
　59.30±5.00
　10.81±0.24
　15.38±0.66
　19.03±0.61
　NS对照组
131.15±9.96
49.25±4.95
9.87±0.96
12.19±2.37
18.12±1.10
　TRH治疗组
131.43±6.87
58.15±2.87**
10.70±0.84
14.47±1.90
18.70±2.03
　NS对照组
112.61±12.39
46.88±11.8
8.48±0.90#
11.33±2.58#
13.06±4.27#
　TRH治疗组
131.93±11.73*
56.03±4.34
9.36±1.11
13.61±1.82
17.75±1.04*
　NS对照组
100.46±10.81#
41.78±7.52#
7.98±1.62#
10.41±2.35#
12.13±1.27#
　TRH治疗组
125.82±18.34*
52.78±6.47*
9.21±0.86*
13.48±1.57*
17.24±2.11**
　　与正常对照组相比：#P＜0.05，##P＜0.01；与NS对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01表2　各组不同器官组织MDA含量的变化(±s)
　　(μmol·L-1)
心(nmol·g-1)
肝(nmol·g-1)
肺(nmol·g-1)
肾(nmol·g-1)
正常对照组
　　24.30±1.62
　　237.0±28.7
　　392.0±30.4
　　286.0±25.2
　　261.0±17.9
　NS对照组
26.30±1.82
257.0±25.8#
433.0±66.2#
300.0±33.1
302.0±35.3
　TRH治疗组
24.30±4.12
247.0±38.1
402.0±40.3
294.0±26.4
268.0±18.5
　NS对照组
28.10±2.98#
269.0±30.2#
457.0±54.3#
327.0±28.8#
318.0±45.6
　TRH治疗组
24.50±4.04*
250.0±31.9
410.0±51.2*
296.0±33.4
275.0±32.1
　NS对照组
31.60±3.52#
308.0±24.7#
475.0±56.7##
339.0±38.7#
337.0±38.5#
　TRH治疗组
25.60±3.63*
258.0±25.9*#
423.0±63.1*
302.0±42.7*
283.0±30.8*
　　与正常对照组相比：#P＜0.05，##P＜0.01；与NS对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01
　　3　讨论
　　氧自由基引起脂质过氧化产生多种脂质过氧化物，最终代谢成MDA。因此，MDA的含量测定可以反映机体氧自由基的代谢情况。本结果表明：NS对照组大鼠血浆心肝肺肾MDA含量在烧伤后逐渐升高，证实烧伤后氧自由基始终处于异常代谢状态，存在严重的脂质过氧化损伤。一般认为，烧伤后氧自由基的产生是由多种原因引起的〔5〕。首先，严重烧伤有效循环血量的不足，组织缺血缺氧，ATP代谢为次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的作用下转化为黄嘌呤，并有大量的O*2产生。其次，烧伤后大量的化学介质的释放，促使中性粒细胞聚集活化，氧耗量增加，所摄取的氧绝大多数经细胞内的NADPH氧化酶和NADH氧化酶的作用形成氧自由基。此外，由于缺氧，Ca2+内流增加，线粒体细胞色素氧化酶系统功能失调，以致进入细胞内的氧经单电子还原而形成的氧自由基增多。SOD作为体内主要氧自由基清除系统，将O*2歧化为H2O2，避免O*2对机体的损害。本结果表明烧伤后SOD活力明显下降，主要是因为烧伤后过量的氧自由基产生，消耗或直接破坏体内SOD。
　　本实验结果再次证实烧伤休克大鼠给予TRH治疗能明显提高休克动物的血压，延长生存时间，对烧伤休克具有良好的治疗作用。并且应用TRH治疗能明显抑制休克动物生命器官组织MDA含量的上升，提高SOD活力，说明TRH具有良好的抗烧伤休克大鼠脂质过氧化损伤的作用。TRH能改善休克动物的血压和心血管功能，改善微循环，增加重要脏器的供血供氧〔6〕，并且具有改善休克细胞的线粒体的氧化磷酸化功能，从而能保障细胞正常代谢所需的能量供应〔7〕。由于这些作用，使得经黄嘌呤氧化酶途径和线粒体单价泄泼途径产生的氧自由基明显减少。另外，有人研究证实，TRH具有抑制磷脂酶A2的活性，从而减少生物活性物质的释放，而且TRH具有直接对抗白三烯的作用，从而抑制中性粒细胞的聚集活化和氧自由基的释放〔8〕。
　　综上所述，烧伤休克时存在严重的氧自由基介导的脂质过氧化损伤，TRH具有良好的抗烧伤休克作用，同时也具有抗脂质过氧化损伤作用。
　　作者简介：陈旭林，男，28岁，医师；
　　李守生，男，62岁，教授，主任医师，硕士生导师
　　参考文献
　　1，Redl H, Gasser H, Schlag G et al. Involvement of oxygen radicals in shock related cell injury. Br Med Bull, ):556～565
　　2，金惠铭主编. 病理生理学. 第4版， 北京：人民卫生出版社，
　　3，陈旭林，李守生，汪昌荣 等. 促甲状腺素释放激素抗大鼠烧伤休克的作用. 中国烧伤创疡杂志， )：4～7
　　4，Gavino VC, Miller JS, Ikharebha SO et al. Effect of polyunsaturated fatty acids and antioxidants on lipid peroxidation in tissue cultures. J Lipid Res, ):763～769
　　5，郇京宁，葛绳德，陈玉林 等. 烧伤病人血清LPO含量和红细胞SOD活力的变化. 第二军医大学学报， )：473～476
　　6，Hu DY, Chen HS, Liu LM et al. Antishock property of TRH and its mechanism. Chin J Traumatol, ):22～25
　　7，蒋建新， 汪江淮， 陈惠孙 等. TRH对创伤性休克大鼠线粒体呼吸功能的影响. 中国药理学与毒理学杂志， )：64～66
　　8，胡志前，王元和，吴德敬 等. 肠缺血性休克犬血清PLA2活性和MDA含量及促甲状腺素释放激素对其影响. 中国病理生理杂志， )：392～395
收稿，修回
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水产养殖禁用药物66种21类和禁用的原因介绍.doc5页
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