运动对慢性冠状动脉狭窄后侧枝循环生成的影响--《中国康复医学会第四届会员代表大会暨第三届中国康复医学学术大会论文汇编》2001年
运动对慢性冠状动脉狭窄后侧枝循环生成的影响
【摘要】：目的 冠心病的康复治疗中运动疗法一直是主导模式,但是其中心效应尚未得到公认.本研究的目的是在建立慢性冠状动脉狭窄模型的基础上进行运动训练研究其对冠状动脉侧枝循环生成的影响.方法 健康三月龄猪18只(体重22.5±2kg),手术放置 Occluder于冠状动脉左回旋支(LCX)主干上以形成慢性冠状动脉狭窄模型.术后恢复4周,然后通过平板运动分别训练4周、6周和8周后采用微粒体技术观察缺血心肌的局部血流改变,并通过病理学检查观察形态学改变.结果(1)大体标本证实术后存活超过4周的13只猪全部稳定形成LCX完全闭塞;(2)微粒体检测证实运动组LCX血管支配区心肌局部血流量较对照组明显增加;(3)病理学检查证实运动组LCX血管支配区毛细血管密度增加;(4)训练结束后运动组猪的平板运动能力较对照组明显增加.结论 运动可以促进慢性冠状动脉狭窄模型的冠状动脉侧枝生成增加.
【作者单位】：
【分类号】：R49
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白藜三醇对猪急性闭塞冠状动脉侧技循环建立的影响及机制研究
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方法：选取18头健康家猪随机分为3组,白藜三醇组(RV组)、硝酸甘油组(NG组)和对照组(C组),每组6头。动物称重,麻醉后仰卧固定于DSA手术台上,穿刺右股动脉,置入动脉鞘管,经鞘管送入多普勒导丝至左冠状动脉回旋支(LCX)中段。先记录正常状态LCX中段血流频谱,随后应用球囊闭塞LCX近中段,冠脉造影示LCX完全闭塞,血流TIMI0级,多普勒导丝测得血流速度保持在0cm/s左右,完成急性冠状动脉闭塞动物模型的建立。应用多普勒导丝连续测量LCX闭塞远端血流60min,观察闭塞血管侧枝循环建立情况。各组均于LCX闭塞60min后经冠脉途径给予相应药物,给药后再次连续记录LCX闭塞远端的血流频谱,得到平均峰值流速(APV)、APV峰值、舒张期与收缩期流速比值(DSVR)等指标。同时记录各时间点心率(HR)和平均动脉血压(MBP)。于模型制备前、给药前及APV峰值时留取血液标本,采用化学法检测eNOS的活性,亚硝酸盐还原法检测NO浓度水平。　　
结果：　　
1.在正常状态下,RV组、NG组及对照组LCX中段血流APV值分别为:44.33±2.73cm/s、46.83±4.07cm/s、47.62±3.43cm/s,三组问比较差异无统计学意义。LCX闭塞即刻RV组、NG组及对照组闭塞血管远端血流APV值分别为:1.02±0.96cm/s、0.98±0.76 cm/s、1.12±0.95cm/s,三组间比较差异无统计学意义。LCX闭塞60min时RV组、NG组及对照组闭塞血管远端血流APV值分别为:1.36±0.72cm/s、1.18±0.81cm/s、1.05±0.94cm/s,三组间比较差异无统计学意义。　　
2.在冠状动脉闭塞即刻,闭塞血管远端血流APV值明显低于正常水平;血管闭塞后10 min、30min和60 min时,闭塞血管远端血流APV值较闭塞即刻增加不明显。　　
3.RV组及NG组给药后,闭塞血管远端血流呈反向或双向,血流APV的绝对值逐渐增加,其峰值分别为:8.22±0.80cm/s、8.43±1.28cm/s,较闭塞即刻血流APV值明显增加差异有统计学意义,但两组间比较差异无统计学意义；RV组及NG组APV增高持续时间分别为:107.83±12.13min、30.20±3.29min,RV组APV增高持续时间明显长于NG组,差异有统计学意义。对照组给药后,闭塞血管远端血流APV峰值为:1.36±0.72cm/s,较闭塞即刻及干预前差异无统计学意义。　　
4.RV组、NG组及对照组间DSVR、MAP始终无明显差异。RV组及对照组各观察时间点心率无明显差异;NG组在正常状态下、闭塞即刻及APV峰值时心率分别为:110.7±2.4次/分钟、112.7±2.9次/分钟、117.5±2.7次/分钟,APV峰值时心率较正常状态及闭塞即刻增加,但差异无统计学意义。　　
5.在正常状态下,RV组、NG组及对照组血清中NO浓度分别为:61.33±4.32umol/l、60.83±5.30umol/l、62.66±5.20umol/l,三组间比较差异无统计学意义；RV组、NG组及对照组血清中eNOS活性分别为:20.16±2.78U/ml、21.16±2.48U/ml、21.83±2.78U/ml,三组间比较差异无统计学意义。　　
6.在闭塞血管远端血流APV达峰值时,RV组、NG组血及对照组血清中NO浓度分别为:82.66±6.34umol/l、84.66+_5.92umol/l、51.16±4.38umol/l,RV组、NG组血清中NO浓度较对照组明显增高,差异有统计学意义;RV组与NG组之间差异无统计学意义。RV组闭塞血管远端血流APV值与血清中NO浓度水平正相关。　　
7.在闭塞血管远端血流AP达V峰值时,RV组、NG组血及对照组血清中eNOS浓度分别为:42.33±4.08U/ml、24.50±1.87U/ml、20.16±2.78U/ml,RV组eNOS的活性高于硝酸甘油组和对照组,差异有统计学意义;且RV组血清中NO浓度与eNOS的活性正相关。　　
结论：　　
①猪急性闭塞冠状动脉自身侧枝循环建立不足。　　
②白藜三醇可以有效促进猪急性闭塞冠状动脉侧枝循环的建立,使侧枝循环开放维持时间长于硝酸甘油。　　
③白藜三醇有效促进猪急性闭塞冠状动脉侧枝循环的建立可能是通过促进内皮细胞eNOS活性,提高血清NO浓度来实现。"/>
目的：通过闭胸法建立猪急性冠状动脉闭塞动物模型,应用多普勒导丝技术评价急性闭塞冠状动脉侧枝循环建立的情况,同时与硝酸甘油对比研究白藜三醇对猪急性闭塞冠状动脉侧枝循环建立及血清中eNOS活性、NO浓度的影响。为临床急性心肌梗死患者早期使用有效药物治疗以改善局部血供,缩小梗死面积提供直接实验依据。　　
方法：选取18头健康家猪随机分为3组,白藜三醇组(RV组)、硝酸甘油组(NG组)和对照组(C组),每组6头。动物称重,麻醉后仰卧固定于DSA手术台上,穿刺右股动脉,置入动脉鞘管,经鞘管送入多普勒导丝至左冠状动脉回旋支(LCX)中段。先记录正常状态LCX中段血流频谱,随后应用球囊闭塞LCX近中段,冠脉造影示LCX完全闭塞,血流TIMI0级,多普勒导丝测得血流速度保持在0cm/s左右,完成急性冠状动脉闭塞动物模型的建立。应用多普勒导丝连续测量LCX闭塞远端血流60min,观察闭塞血管侧枝循环建立情况。各组均于LCX闭塞60min后经冠脉途径给予相应药物,给药后再次连续记录LCX闭塞远端的血流频谱,得到平均峰值流速(APV)、APV峰值、舒张期与收缩期流速比值(DSVR)等指标。同时记录各时间点心率(HR)和平均动脉血压(MBP)。于模型制备前、给药前及APV峰值时留取血液标本,采用化学法检测eNOS的活性,亚硝酸盐还原法检测NO浓度水平。　　
结果：　　
1.在正常状态下,RV组、NG组及对照组LCX中段血流APV值分别为:44.33±2.73cm/s、46.83±4.07cm/s、47.62±3.43cm/s,三组问比较差异无统计学意义。LCX闭塞即刻RV组、NG组及对照组闭塞血管远端血流APV值分别为:1.02±0.96cm/s、0.98±0.76 cm/s、1.12±0.95cm/s,三组间比较差异无统计学意义。LCX闭塞60min时RV组、NG组及对照组闭塞血管远端血流APV值分别为:1.36±0.72cm/s、1.18±0.81cm/s、1.05±0.94cm/s,三组间比较差异无统计学意义。　　
2.在冠状动脉闭塞即刻,闭塞血管远端血流APV值明显低于正常水平;血管闭塞后10 min、30min和60 min时,闭塞血管远端血流APV值较闭塞即刻增加不明显。　　
3.RV组及NG组给药后,闭塞血管远端血流呈反向或双向,血流APV的绝对值逐渐增加,其峰值分别为:8.22±0.80cm/s、8.43±1.28cm/s,较闭塞即刻血流APV值明显增加差异有统计学意义,但两组间比较差异无统计学意义；RV组及NG组APV增高持续时间分别为:107.83±12.13min、30.20±3.29min,RV组APV增高持续时间明显长于NG组,差异有统计学意义。对照组给药后,闭塞血管远端血流APV峰值为:1.36±0.72cm/s,较闭塞即刻及干预前差异无统计学意义。　　
4.RV组、NG组及对照组间DSVR、MAP始终无明显差异。RV组及对照组各观察时间点心率无明显差异;NG组在正常状态下、闭塞即刻及APV峰值时心率分别为:110.7±2.4次/分钟、112.7±2.9次/分钟、117.5±2.7次/分钟,APV峰值时心率较正常状态及闭塞即刻增加,但差异无统计学意义。　　
5.在正常状态下,RV组、NG组及对照组血清中NO浓度分别为:61.33±4.32umol/l、60.83±5.30umol/l、62.66±5.20umol/l,三组间比较差异无统计学意义；RV组、NG组及对照组血清中eNOS活性分别为:20.16±2.78U/ml、21.16±2.48U/ml、21.83±2.78U/ml,三组间比较差异无统计学意义。　　
6.在闭塞血管远端血流APV达峰值时,RV组、NG组血及对照组血清中NO浓度分别为:82.66±6.34umol/l、84.66+_5.92umol/l、51.16±4.38umol/l,RV组、NG组血清中NO浓度较对照组明显增高,差异有统计学意义;RV组与NG组之间差异无统计学意义。RV组闭塞血管远端血流APV值与血清中NO浓度水平正相关。　　
7.在闭塞血管远端血流AP达V峰值时,RV组、NG组血及对照组血清中eNOS浓度分别为:42.33±4.08U/ml、24.50±1.87U/ml、20.16±2.78U/ml,RV组eNOS的活性高于硝酸甘油组和对照组,差异有统计学意义;且RV组血清中NO浓度与eNOS的活性正相关。　　
结论：　　
①猪急性闭塞冠状动脉自身侧枝循环建立不足。　　
②白藜三醇可以有效促进猪急性闭塞冠状动脉侧枝循环的建立,使侧枝循环开放维持时间长于硝酸甘油。　　
③白藜三醇有效促进猪急性闭塞冠状动脉侧枝循环的建立可能是通过促进内皮细胞eNOS活性,提高血清NO浓度来实现。
摘要： 目的：通过闭胸法建立猪急性冠状动脉闭塞动物模型,应用多普勒导丝技术评价急性闭塞冠状动脉侧枝循环建立的情况,同时与硝酸甘油对比研究白藜三醇对猪急性闭塞冠状动脉侧枝循环建立及血清中eNOS活性、NO浓度的影响。为临床急性心肌梗死患者早期使用有效药物治疗以改善局部血供,缩小梗死面积提供直接实验依据。　　
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无创性指标对冠脉狭窄的预测及hTK基因修饰EPCs对侧枝循环建立的研究
【摘要】：研究背景：诊断冠脉狭窄的金标准为冠脉造影(coronary angiography, CAG),但是一种创伤性检查,近期美国医院综合报道其阳性检测率仅有62.4%,而肥胖、高血压、高血糖、高血脂、抽烟、喝酒等是目前公认的主要的心血管危险因素,因此对进行冠脉造影患者进行初筛是否提高CAG的阳性检出率,是目前前研究的热点。
目的：评估冠脉造影(CAG)对冠状动脉狭窄的检出率与其有关联危险因素进行分析,建立用非创伤性指标预测冠脉狭窄程度,为提高冠脉造影阳性检出率提供依据。
材料和方法：对我院2008年3月至12月冠脉造影检查623例资料总结分析,按照冠脉狭窄程度的评分标准为：0分为没有发现冠脉狭窄、1分为直径狭窄1%-25%、2分为直：径狭窄25%-50%、3分为直径狭窄50%-75%、4分为直径狭窄大于75%。观察厶主冠状动脉(LM)、左主干分出的左前降支(LAD)、回回旋支(LCX)及右冠状动脉(RCA)狭窄的阳性检出率。采用多项式Logistic回归模型分析有关联的危险性因素,分类资料组间比较采用x~2检验,依据发现的危险性因素建立判别分析方程,并采用ROC分析确定其预测诊断的灵敏度和特异度。
结果：狭窄直径25%(评分＞1分)为阳性,则LM的狭窄阳性检出率为15.41%；LAD、LCX和RCA的狭窄阳性检出率分别为76.24%、53.61%和61.16%。综合4枝冠脉分支总评分在5分及以上诊断阳性检出率,则总的检出率为64.21%。其中年龄≤59男性的阳性检出率为56.19%,女性则为32.47%；年龄≥60男性的阳性检出率为79.59%,而女性为74.19%。与冠脉狭窄相关危险因素包括：性别、年龄、吸烟、高血糖、高血压；血生化指标包括：A/G、TBA、TG、HDL、GLU、Cr、 FIB和HGB(P＜0.05)。依据非创伤性指标建立的判别方程预测有无冠脉狭窄的灵敏度为54.4%,特异度为89.9%。
结论：采用与冠脉狭窄有关联的危险性因素,对患者是否需要进行冠脉造影进行初筛,预期可以提高冠状动脉疾病的检出率。今后应根据该预测方法进行临床实践观察,评估可以提高ICA阳性检出率的程度。
研究背景：随着外周血.中骨髓来源血管内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)的发现,以及其易于分离、高增殖潜能、定向归巢特性和促进血管生成能力逐渐被阐明,这为冠心病和周围血管病的闭塞病变的治疗提供了新的思路和手段。EPCs是内皮细胞的前体细胞,在血管损伤及组织缺血时动员进入血液循环,参与血.管内皮的修复及微血管的形成。但是循环中的EPCs数量有限,体外进行基因修饰从而使EPCs高表达某些血管生成因子、调节血管发生过程中的信号转导或者改良其生存和迁移等生物学性状,将有助于克服EPCs治疗的局限性和进一步优化治疗性血管生成。从另一个角度来说,这种方法是将细胞治疗和基因治疗结合起来,既解决基因治疗中病毒类载体缺乏安全性的问题,又能提高细胞治疗的效果。
大量实验证明人类组织性激肽释放酶(Human Tissue Kallikrein, hTK)是血管新生强有力的调剂因子,其在冠脉侧支循环的形成中其重要作用,携带有hTK基因的病毒注入小鼠缺血下肢促进其血流的恢复,最近的研究中发现hTK改善心肌梗死的缺血,糖尿病微血管病、外周缺血,降低中风的死亡率和功能障碍。
目的：探讨hTK基因修饰EPCs是否增强其增殖、迁移、粘附能力及促进大鼠缺血肢体的血流恢复,有助于侧支循环的建立。
方法：1.建立高表达hTK的PCs(hTK-EPCs)细胞模型体外分离、培养并鉴定大鼠骨髓EPCs,激光共聚焦显微镜观察Dil-acLDL摄取和FLTC-laheled lectin双染色阳性。
2. EPCs细胞行为能力的研究2.1EPCs增殖能力：采用CCK-8法,细胞经胰酶消化,接种于96孔板24小时,加10μlCCK-8试剂共培养1.5h,酶标仪读取在490nm的吸光度。2.2EPCs迁移能力：采用Transwell小室法,细胞：悬浮于无生长因子的血清中,并以2×10~5／200μl接种于小室上层,在37°C孵育24h,下层用PBS冲洗,多聚甲醛固定,结晶紫染色,进行细胞计数。2.3EPCs粘附能力：细胞经胰酶消化后,以1×105/ml悬浮于24孔板1h,PBS冲洗,多聚甲醛固定,进行结晶紫染色,进行细胞计数。
3.大鼠下肢缺血模型血管生成研究：采用Wistar大鼠,戊巴比妥钠麻醉后结扎-侧股动脉,静脉注射hTK修饰的EPCs或对照组EPCs,多普勒激光血流计测量大鼠下肢血流,免疫组化观察毛细血管和微动脉生成情况。
结果：1.原代培养的细胞在3-4天后贴壁,呈集落样生长,6-7天后细胞呈长梭形,2周后生长成鹅卵石样内皮细胞层,内皮祖细胞DiI-acLDL和FITC-labeled lectin双染阳性,hTK基因逆转录病毒成功转染EPCs,并且在蛋白水平成功表达,表达持续时间长达2周。
2.hTK基因转染的EPCs繁殖能力明显比绿色荧光蛋白转染组与没有转染的内皮祖细胞组增强,(0.60±O.02versus0.50±0.02,P0.05;0.51±0.03,P 0.05).hTK基因转染的EPCs组迁移能力比无转染的EPCs组增加0.29倍(98.60±7.83vesus76.40±6.20,P0.01)。在体外实验中,hTK修饰的基因比绿色荧光蛋白转染组与无转染的内皮祖细胞粘附能力也明显增强(204.20±10.46vesus186.40±16.22,P0.05；187.30±16.65,P0,05)。
3.采用多普勒激光血流计测量大鼠下肢血流,下肢动脉结扎后结扎侧血流明显下降,血压和心率没有明显变化,Ad/hTK-EPCs组末梢血流比Ad/GFP-EPCs和nontransduced EPCs组恢复更明显。
结论：1.人组织型激肽释放酶能够明显增强内皮祖细胞的增殖、迁移、粘附能力。
2.hTK基因修饰EPCs能够明显促进大鼠缺血肢体的血流恢复,促进毛细血管和小动脉的新生,有助于侧支循环的建立。
【学位授予单位】：山东大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2013【分类号】：R543.3
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