各种实验中对流式细胞仪的选择_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
各种实验中对流式细胞仪的选择
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩2页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢流式细胞仪检测血小板表面膜蛋白_论文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
您可以上传图片描述问题
联系电话：
请填写真实有效的信息，以便工作人员联系您，我们为您严格保密。
流式细胞仪检测血小板表面膜蛋白
||文档简介
中国最大最早的专业内容网站|
总评分0.0|
&&目​的​：​探​讨​对​流​式​细​胞​仪​检​测​血​小​板​表​面​膜​蛋​白​中​可​能​出​现​的​问​题​,​方​法​：​试​管​中​加​入​抗​血​小​板​表​面​膜​蛋​白​相​应​抗​体​及​富​血​小​板​血​浆​(​P​l​a​t​e​l​e​t​ ​R​i​c​h​ ​P​l​a​s​m​a​,​P​R​P​孵​育​洗​涤​后​上​机​测​定​。​结​果​：​血​小​板​表​面​膜​蛋​白​测​定​受​样​品​采​集​,​抗​凝​剂​选​择​、​试​剂​种​类​、​正​确​设​计​及​图​像​分​析​等​因​素​的​影​响​,​结​论​：​为​保​证​测​定​结​果​的​准​确​性​,​应​尽​快​按​质​控​要​求​完​善​保​证​措​施​,​建​立​本​单​位​参​考​值​,​开​展​室​内​质​控​。
试读已结束，如果需要继续阅读或下载，敬请购买
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢血小板功能检测及其临床应用_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
血小板功能检测及其临床应用
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩5页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢百度拇指医生
&&&普通咨询
您的网络环境存在异常，
请输入验证码
验证码输入错误，请重新输入关注今日：3 | 主题：464693
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】流式细胞仪检测细胞周期protocol步骤作用
页码直达：
这个帖子发布于4年零299天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
①操作中的第一步必须是70%预冷乙醇固定吗？是什么作用？如果是新消化获得的细胞直接染色立马上机检测，这一步是不是必须的？②RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA？是的话，RnaseA能直接穿膜吗？不是的话，胞内的双链RNA不管了？③阴参的设定是不是健康成人外周血的淋巴细胞就可以了？具体要怎么处理才算标准？
新人求指教，谢谢各位了。
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
细胞只有用乙醇固定后，PI染料和RNA酶才能进入细胞。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
1、根据你的染色方法而定。原理都是先打孔再染色，因为PI没有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。现在基本有两种方法，一种就是乙醇固定。70-75%浓度效果都差不多，优点是作用比较轻柔，可长时间固定，一般一个月都没问题，更长时间我没试过。适用于不能预计上机时间的战友，可以先固定好几批细胞然后再一起染色上机。缺点就是打孔时间较长，至少过夜才能保证打孔效果。另一种就是用Triton打孔，这种方法比较激烈。优点是速度快，消化以后可以马上打孔染色上机，而且不使膜蛋白变性，不容易造成粘连。缺点就是不能长时间保存样品，一般最好半个小时内检测，不然时间越久细胞DNA含量的离散度越高，图像越难看。不过现在很多厂家的试剂盒都是用这种快速打孔的方式。所以你用的可能是这种方式，就不需要乙醇固定。2、上面可以回答。膜通透性改变以后酶可以进去。3、阴性对照要跟据你的实验来定，具体不好说，可以的话请给出实验组别。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
didi_zhou 1、根据你的染色方法而定。原理都是先打孔再染色，因为PI没有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上。现在基本有两种方法，一种就是乙醇固定。70-75%浓度效果都差不多，优点是作用比较轻柔，可长时间固定，一般一个月都没问题，更长时间我没试过。适用于不能预计上机时间的战友，可以先固定好几批细胞然后再一起染色上机。缺点就是打孔时间较长，至少过夜才能保证打孔效果。另一种就是用Triton打孔，这种方法比较激烈。优点是速度快，消化以后可以马上打孔染色上机，而且不使膜蛋白变性，不容易造成粘连。缺点就是不能长时间保存样品，一般最好半个小时内检测，不然时间越久细胞DNA含量的离散度越高，图像越难看。不过现在很多厂家的试剂盒都是用这种快速打孔的方式。所以你用的可能是这种方式，就不需要乙醇固定。2、上面可以回答。膜通透性改变以后酶可以进去。3、阴性对照要跟据你的实验来定，具体不好说，可以的话请给出实验组别。谢谢你的解答，基本问题现在差不多搞明白了。其实主要就是不清楚BD试剂盒里面的A液除了酶之外还有什么主要成分，看来是Triton了。另外，有一点就是阴性对照的设定不是为了检验机器的CV值，以及确定采集图像中二倍体峰值的位置（是不是一般调到200的那一块区域）吗？我现在主要做的就是想检测人类间充质干细胞在复苏细胞后经培养24h，所获得的细胞的大体生长状态及增值能力。简单来说，就是看看细胞大都处于有丝分裂的哪一个时间段。这样的话是不是就可以用健康成人外周血的淋巴细胞作为阴参了？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
1、机器调CV值一般有两种情况。一般的小机器都是固定光路，不需要调试，所以CV值一般都是调试的时候固定的，除非有巨大改动，会有工程师去调试。另外一种是比较早期的大机器，由于功能较多，比如不同激发光做门控等等，所以需要对光路进行手动调控，这种机器的光路基本都是不固定的，由于温度、机械等等的外界变化，所以每次开机的时候需要手动调试来调整最佳状态，其中包括CV值。很早期一般使用鸡血来调整，但现在基本使用的是Flowcheck荧光微球，他所要求的是其均一性较好，而且几乎在每个接受波段都有发射光，所以微球是现在的选择。机器的CV值固定下来以后不随样品变化，样品的CV值表示其离散度，一般不会用你的样品去调CV值的。2、因为上面的原因，周期中的峰值位置还要在上样中具体调整电压和增益，没有固定位置，只要适合你做分析就好。这个都是用你的Control细胞来做的，其他样品以Control细胞为基准，参数不再变化。3、细胞的生长状态及增殖能力不能通过Flow的Cell cycle来做评判。周期结果最直观的反应就是你说的“细胞处于分裂的时间段”，也就是说你所检测的细胞在三个周期里面的具体分布。如果都是保持匀速增殖的细胞，他的近一步意义可表示为细胞在一个周期内所经过各个时期所需要的时间为多少，而不包含其他信息。例如一个细胞增值一倍的时间为10个小时（举例），这时，他的细胞周期分布为，G0/G1 50%, S 30%, G2/M 20%，那么它所经过一个完整的周期所需要的时间就是G0/G1 5小时, S 3小时, G2/M 2小时。这个结论是通过周期结果所能推到出的唯一结论。其他结论，比如，增殖能力及速度还要结合MTT、Brdu等技术来综合判断。并不能得出某些人认为S期较多的细胞就能增殖得快，较少就反之的结论。某些S期较低的细胞可能一样比S期较它多的增殖得快，这只能说其通过S期的速度更快而已。4、所以建议你首先做其它实验来检测其增殖能力或速度，而Flow的结果作为辅助。另外你的阴性对照还是看你自己的目的，你认为要跟什么“正常增殖”的细胞来做对比反映其能力的强弱。由于本人跟你研究的领域有所不同可能不能给你更多的帮助。愚见，望各高手批评指正。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
didi_zhou 1、机器调CV值一般有两种情况。一般的小机器都是固定光路，不需要调试，所以CV值一般都是调试的时候固定的，除非有巨大改动，会有工程师去调试。另外一种是比较早期的大机器，由于功能较多，比如不同激发光做门控等等，所以需要对光路进行手动调控，这种机器的光路基本都是不固定的，由于温度、机械等等的外界变化，所以每次开机.................................愚见，望各高手批评指正。谢谢指点，现在基本已经差不多了解了检测细胞周期的相关知识，通过你的介绍我感觉获益匪浅啊，再次感谢！最后，再请教一个问题，BD FACSCailbur型号的流式机器是不是属于不需要手动调节CV的，用的时候只要检测一下是不是在可接受范围以内就可以了？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
是，所以接受不接受都要接受了，哈哈哈。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
整天对着机器，好多东西都不会。。。悲催。。。。本科生的悲哀。。。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
想请教一下预冷乙醇RNA酶以及PI的量要怎么把握？对于多少的细胞我要加多少量
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园