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中药多糖抗病毒作用研究进展
作者：孔树佳,徐先祥&&&&作者单位：中国药科大学,江苏 南京 210009
【关键词】& 中药；多糖类；抗病毒；综述
多糖是广泛存在于动植物中的化学成分,也是众多中药发挥疗效的重要物质基础。多糖大多具有调节免疫、抗肿瘤、抗糖尿病等共同的药理作用。随着研究的深入,人们发现很多中药的多糖成分具有明显的体内外抗病毒活性。进一步深入研究中药多糖的抗病毒作用及其机制具有重要价值。
　　1& 抗呼吸道病毒
&&& 流感病毒是引起感冒等急性上呼吸道感染的主要病毒,研究表明,紫菜多糖具有抗甲1型流感病毒活性[1]。
　　黄芪多糖溶液100 g/L浓度滴鼻给药,对流感病毒引起的小白鼠肺炎实变有明显的抑制作用；200、100 g/L浓度组能抑制流感病毒增殖；200 g/L浓度组能延长流感病毒感染的小鼠生存时间,有明显的抗流感作用；黄芪多糖200 g/L浓度组在体外有广谱抑制呼吸道病毒的作用；直接在鼻咽和口咽部给予抗病毒药物,可以直接作用于感染靶位,给药剂量较口服途径小数十到数百倍,方便实用且有宣通开窍、消除症状的作用。黄芪抗流感病毒的作用机制可能为：膜稳定作用,增强抵抗能力；直接的抗病毒物质和(或)诱导干扰素、NK细胞活性,从而杀灭部分病毒,减轻对心肌细胞的损害[2]。
&&& 经人参多糖刺激后的动物NK细胞的杀伤活性明显增高,说明人参多糖具有增强NK细胞杀伤活性的作用。经腹腔注射人参多糖后,小鼠腹腔液的抗融合活性有明显提高,对于呼吸道合胞病毒特有的细胞融合病变有抵抗、缓解作用。人参多糖通过诱生细胞毒因子,增加NK细胞的杀伤力及抗呼吸道合胞病毒(RSV)的融合病变而抵抗RSV对机体感染,并对减弱损伤起到积极作用[3]。
　　2& 抗疱疹病毒
　　黄精多糖体外抗单纯疱疹病毒试验表明对非洲绿猴肾细胞(Vero cell)的最大无毒浓度为16 mg/mL。在对Vero细胞无毒性浓度下对单纯疱疹病毒1型(Stoker株)和2型(333株和Sav株)均有显著的抑制作用。对Stoker株的半数抑制浓度(IC50)为3.95 mg/mL,最小有效浓度(MIC)为1.0 mg/mL；对333株的IC50为8.0 mg/mL,MIC为8.0 mg/mL；对Sav株的IC50为7.72 mg/mL,MIC为4 mg/mL。MTT染色的结果表明,黄精多糖能显著提高病毒感染的Vero细胞活力,对细胞有保护作用[4]。
　　3& 抗柯萨奇病毒(CV)
&&& 大蒜多糖对腹腔注射感染CVB3的雄性BALB/c小鼠进行治疗,能提高小鼠存活率,减少心肌酶LDH、AST、CK、CK-MB的释放；可降低心肌组织中病毒滴度,改善心肌病理变化,表现为心脏质量/体质量降低,心肌坏死灶数量和范围显著减少,炎性细胞浸润减轻,心肌病理积分降低,虽然也存在着心肌细胞变性,但比病毒感染组较轻,证实大蒜多糖在体内确有治疗病毒性心肌炎的作用。其作用机制可能为抑制小鼠体内的脂质过氧化反应,降低血清MDA含量,提高GSH-Px的活力,降低心肌组织中病毒滴度及iNOS 表达,减少血清中NO的含量,从而起到治疗病毒性心肌炎的作用[5]。
&&& 甘草多糖(GPS)可影响CV的吸附及进入细胞的功能,达到保护细胞作用,其保护率为59.0%,因此,可认为GPS 可吸附于细胞表面或进入细胞内,以防止病毒的吸附和进入,可适用于预防病毒感染和治疗[6]。
&&& 黄芪多糖对CVB感染大鼠心肌细胞钙内流量呈显著抑制作用,同时细胞中CVBs-RNA含量显著少于对照组,提示黄芪具有钙拮抗作用,可减少病毒感染引起的心肌钙内流量升高,减轻感染细胞的继发性钙损伤,并对细胞中病毒RNA复制有抑制作用[7]。多序岩黄芪经水煎醇沉后在625～125 mg/mL范围内,不仅具有直接灭活CVB作用,而且在细胞被感染后仍具有抑制病毒繁殖作用,对病毒感染细胞有明显保护作用[8]。
&&& 羊栖菜多糖对Vero细胞的毒性较小,CC50均大于5 000 mg/L,对CVB3的抗病毒效果均明显优于病毒唑。从分组实验中可知,羊栖菜多糖不仅具有直接杀灭病毒作用,而且还可进入细胞或吸附在细胞表面,从而达到抑制或杀伤病毒的效果[9]。
&&& 高山红景天多糖能明显的抑制体外培养心肌细胞在受到CVB3感染后导致的心肌酶释放；显著降低病毒在心肌细胞中的增殖量；对在SD大鼠心肌细胞内增殖的CVB3具有一定的抑制作用。另外,高山红景天多糖对感染CVB5小鼠心肌功能改善和免疫功能提高也具有明显的促进作用,增强了小鼠抗CVB5感染的能力,并对由CVB感染性疾病也有一定的防治作用[10]。
　　4& 抗乙肝病毒
&&& 虫草多糖对四氯化碳肝损伤具有明显的保护作用,但不能改善硫代乙酰胺引起的肝小叶弥漫性水肿变性[11]。另发现香菇多糖[12]和猪苓多糖[13]具有抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用。猪苓多糖[13]还具有影响抗HBS出现的时间和滴度的作用。
　　体外实验研究发现,猪苓多糖可抑制人肝癌细胞系(PLC/ PRF/5)HBSAg的产生[14]。有研究表明,牛膝多糖本身无抗病毒活性,但其硫酸化产物具有直接抑制HBsAg、HBeAg等的作用[15]。用转染了HBV-DNA的Hep G2细胞212115细胞株培养方法来考察猪苓多糖与卡介苗联合的直接抗病毒效应,未得到阳性结果,故多糖对病毒的直接作用尚缺乏证据[16]。一般认为,多糖对病毒性肝炎的治疗作用是通过免疫调节作用实现的。
&&& 黄芪多糖ASP不仅对HBsAg、HBeAg 的分泌有不同程度的抑制作用,而且抑制HepG2-2.2.15细胞的增殖,提示黄芪多糖有体外抗HBV的作用,ASP抑制HBsAg、HBeAg的分泌和HepG2-2.2.15细胞增殖的半数有效浓度大于黄芪总苷。ASP体外抗HBV作用的机制可能与其抑制HepG2-2.2.15细胞增殖以及对乙肝病毒基因复制的抑制有关[17]。
　　抗乙肝病毒作用机制的研究结果表明,猪苓多糖能提高NK细胞活性,香菇多糖、猪苓多糖和分枝杆菌多糖能使慢性乙肝患者外周血T细胞亚群中的CD4细胞数增加,CD8细胞数减少,CD4/CD8复常；香菇多糖还能促进DBMC上的Tac蛋白(IL-R)表达,抑制sIL-R表达,降低血清TNF水平,诱生&-干扰素及促进分泌抗HBV抗体淋巴细胞的增生[18]。此外,还发现分枝杆菌多糖具有升高白细胞和保护细胞免疫功能的作用。也有研究认为,香菇多糖无明显促进IL-R及抑制sIL-R的作用[18]。事实上,多糖与其他药物在临床上的联合应用基于这样一个推理：多糖可强化HBV的抗原刺激,打破病毒损伤机体免疫系统造成的免疫耐受,提高免疫系统对HBV的识别,从而提高临床疗效,这在一些临床研究中得到了验证。
　　5& 抗人免疫缺陷病毒(HIV)
&&& 银耳多糖及其硫酸酯在0.2 g/L时具有抑制牛免疫缺陷病毒引起的合胞体形成的作用,故其可以作为爱滋病高危人群的预防用药,及联合其他药物用于爱滋病病人的治疗[19]。
　　香菇多糖与不同浓度的感染/未感染HIV的人单个核细胞(PBMC)经体外培养,发现PBMC在感染HIV前后与香菇多糖体外共培养60 h后,都可检测到IL-2、IL-12、IFN-&分泌增加、IL-4、IL-10、TNF-&分泌减少,感染HIV组表现更为明显,并且表现出浓度依赖关系。说明香菇多糖促进感染/未感染HIV的PBMC分泌Ⅰ类细胞因子,抑制分泌Ⅱ类细胞因子,抑制感染HIV-1的PBMC分泌TNF-&,有利于控制HIV-1感染的进展,可以恢复HIV-1感染造成的Ⅰ、Ⅱ类细胞因子稳态失衡,并能通过抑制分泌TNF-&而间接干扰HIV的转录[20]。
　　GPS作为抗病毒制剂,对艾滋病病毒有较明显拮抗作用,其抑制率为36.2%,可影响病毒合胞体形成,达到保护细胞作用[6]。
&&& 红藻多糖提取物抗AIDS病毒作用的体外实验研究结果表明,红藻多糖(RP1、RP2)对BIV病毒的生长具有明显的抑制作用,其抑制率分别为85.196%和88.165%,与临床批准使用的抗AIDS药物叠氮脱氧胸腺嘧啶(AZT)近似[21]。
　　6& 小结与展望
&&& 中医药治疗病毒感染性疾病历史悠久,毒副作用小,药源丰富,显示出了独特的优势。中药多糖来源广泛,价格低廉,临床基础深厚,可以通过调节整体免疫功能抑制病毒复制,阻止病毒致细胞病变。随着多糖的分离纯化、结构、合成、药理及临床研究不断深入,中药多糖抗病毒作用研究前景广阔。
　　多糖分子量大,粘度大,离子性很差,但经化学修饰后可使支链带上负电荷,因此能与囊膜病毒蛋白的正电荷区域结合,从而达到抑制或封闭病毒感染细胞的目的,使中药多糖的抗病毒活性增强。进一步强化多糖类的基础研究,阐明构效关系,有望开发出安全、有效、可控、稳定的抗病毒药物。
　　中药具有多成分、多靶点的特点,不同中药抗病毒的物质基础和作用机制不完全相同,如有的中药抗病毒的主要活性成分是大分子多糖,有的是小分子物质(如生物碱)；有的是体外抑制病毒增殖或灭活作用,有的则是通过改善非特异性免疫、调节细胞因子合成和释放等间接发挥抗病毒作用。因此,中药治疗病毒感染性疾病,不单纯着眼于直接的抗病毒作用,而是重视病毒-机体-中药三者的关系,重视体质因素,强调辨证论治,通过改善机体整体状态来增强抗病毒感染的能力,因而具有更广泛的适应性。鉴于人类对病毒和病毒性疾病的认识尚且有限,应用中药在防治病毒性疾病的实践基础显得尤为可贵。具有抗病毒作用的多糖类物质不仅存在于清热解毒类中药, 也是人参、黄芪、甘草等扶正补虚中药发挥疗效的重要物质基础。
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论文写作技巧又定睛一看题主的问题居然是请教专家的~我厚颜的回答了(?o??ωo???)感觉好有兴趣就顺手在网上查了两篇文献关于艾滋病动物模型的。灵长类动物黑猩猩感染HIV1型猴感染猴免疫缺陷病毒SIV(SIV猴模型作为替代AIDS模型)目前已成功用HIV2型感染狒狒，恒河猴，食蟹猴等，但感染后与人类症状不同。利用生物技术将HIV1和SIV嵌各体病毒SHIV可以感染恒河猴食蟹猴D型猴逆转录病毒SRV引起各种猴子艾滋病天然宿主 旧大陆猴非灵长类病毒绵羊肺腺瘤拖欠性脑白质炎病毒MVV引起绵羊某些方面类似HIV感染山羊关节炎脑炎病毒CEAV与MVV在抗原上相关马传染性贫血病毒EIAV引起马与AIDS病人临床表现相似牛免疫缺陷病毒BIV引起牛与艾滋病相关病症小鼠本身没有没有相关的受体，本来不感染的但是为了方便实验人类制作了各种转基因小鼠来研究兔子 的淋巴系统和巨噬细胞系可感染HIV1猫免疫缺陷病毒FIV 在全球都有分布，潜伏期可以到8年(?o??ωo???)FIV的疫苗研制获得了很多成功~参考 夏祖昌，魏征，徐立然.非灵长类艾滋病动物模型的研究现J，中国组织工程与临床康复，)杨传波，徐兴然，蔡家利.人类艾滋病动物模型研究进展J，动物医学进展，)综上反正我找了一会没找到狗狗艾滋病研究的(?o??ωo???)
……艾滋目前认为只在灵长类动物中传播
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艾滋潜伏期应该比大多数狗的寿命长吧~
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官方公共微信BIV及MVV Vif降解宿主蛋白APOBEC3Z2-Z3的机制研究以及嵌合型stHIV-1的构建--《吉林大学》2015年博士论文
BIV及MVV Vif降解宿主蛋白APOBEC3Z2-Z3的机制研究以及嵌合型stHIV-1的构建
【摘要】：引发宿主重大疾病的许多病原体，包括HIV病毒在内，在长期进化过程中衍生出一系列拮抗宿主细胞内抗病毒因子的辅助感染蛋白，从而完成病毒在宿主体内的高效复制。另一方面，在HIV-1感染人类细胞过程中，宿主自身产生一类通过不同途径发挥抗病毒功能的蛋白，这类蛋白称为宿主限制因子。病毒辅助蛋白与宿主限制因子之间的相互作用机制研究是获得性免疫缺陷综合症研究领域的热点问题。现阶段已经被阐明的病毒辅助蛋白与宿主限制因子的作用机制包括：1.HIV-1的病毒感染因子Vif和宿主限制因子APOBEC3G；2.HIV-1的衣壳蛋白(capsid)与宿主限制因子TRIM5α；3.HIV-1的功能蛋白Vpu与宿主限制因子Tetherin(BST-2)；4.HIV-2附属蛋白Vpx与宿主限制因子SAMHD1。病毒辅助蛋白和宿主限制因子之间的相互作用存在种属特异性，主要表现为病毒辅助蛋白的跨种属活性以及宿主限制因子的广谱抗病毒活性。一方面，某些不能感染人类的病原体在长期进化过程中，产生能有效拮抗人类宿主限制因子的辅助蛋白，使病毒感染的种属范围扩大，从而产生了近些年来大量爆发的人畜共患病。因此对于其他种属的宿主限制因子与病毒蛋白的相互作用机制的研究可为防治人畜共患病研究领域提供理论依据。另一方面，病毒感染宿主范围的限制，导致药物开发中动物模型选择的局限性。HIV-1在非人类细胞中的感染力会被其他种属细胞内的同源宿主限制因子大大削弱，致使HIV-1病毒不能感染其他种属，比如非人灵长类动物。从而衍生出针对HIV-1病毒改造，使其能够在猴体内长期复制的研究领域。在本论文中，我们以宿主限制因子与病毒辅助蛋白的相互作用机制为出发点，围绕上述两方面内容进行讨论。
本论文的第一部分是围绕宿主限制因子APOBEC3蛋白在其他种属中与其对应的慢病毒Vif蛋白的作用机制展开研究。
慢病毒（lentiviruses）是逆转录病毒的一个亚家族，由于这种病毒在宿主体内会产生一个长的疾病潜伏期而得名。其中研究最多的是人类免疫缺陷病毒HumanImmunodeficiency Virus, HIV）和猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus，SIV），另外还有猫免疫缺陷病毒（Feline Immunodefiency Virus, FIV）以及一些感染偶蹄类动物的病毒包括牛免疫缺陷病毒（Bovineimmunodeficiencyvirus,BIV），绵羊梅迪-维斯那病毒（Maedi-visnavirus，MVV）以及马传染性贫血病毒（equineinfectious anemiavirus，EIAV)等。对于除EIAV之外的慢病毒，Vif蛋白都是与病毒感染、复制相关的重要辅助因子。其中HIV, SIV, FIV的Vif蛋白对相应宿主限制因子A3s蛋白的降解作用机制已经被广泛的研究，Vif蛋白通过招募ElonginB，ElonginC，Cullin5形成E3泛素连接酶复合物降解相应宿主的APOBEC3蛋白。但是BIV以及MVV的Vif对相应的宿主A3s蛋白的降解作用机制尚未被揭示。本论文对BIV以及MVV Vif介导的相应宿主APOBEC3蛋白的降解机制进行了研究。研究发现BIV以及MVV Vif介导的降解机制与已被阐述的HIV-1, SIV以及FIV Vif介导的降解机制既存在共同性又存在一定的不同之处：BIV以及MVV Vif同样是通过蛋白酶体途径降解宿主A3蛋白；BIV以及MVVVif中都存在对降解作用至关重要的与ElonginC结合的BC-Box。但它们所招募的E3连接酶复合物成员不完全相同：BIV Vif降解复合物成员包括ElonginB, ElonginC以及Cullin2，MVV Vif降解复合物成员包括ElonginB, ElonginC以及Cullin5，BIV以及MVV Vif介导的降解均不依赖CBF-β；与其他慢病毒的Vif蛋白在形成E3复合物中对Cullin蛋白的选择性不同， BIV Vif是唯一一个招募Cullin2蛋白的。锌离子螯合剂TPEN能够阻断BIV Vif对APOBEC3蛋白的降解，说明Zn2+对BIV Vif的活性有重要意义。通过序列比对以及点突变的方法我们证实了BIV Vif上与btCullin2之间相互作用的关键位点为C-x1-C-x1-H-x19-C基序。锌亲和层析实验表明BIV Vif与Zn2+间的相互结合依赖于C-x1-C-x1-H-x19-C基序，它是与以往报道的Zn指结构都不尽相同的一个全新的Zn2+结合环。MVVVif虽与Cullin5相结合，但在MVVVif上未发现Cul5-box或HCCH基序，并且MVV Vif对宿主APOBEC3蛋白的降解几乎不受TPEN的影响，说明MVV Vif介导的降解不依赖Zn2+的参与，这些都暗示MVV Vif与oaCul5之间的相互作用方式不同于HIV-1或SIV Vif。
本论文的第二部分内容是利用宿主限制因子的种属特异性，对病毒进行改造，试图突破种属间传播的限制瓶颈。1981年艾滋病发现至今短短30余年时间里，全球已有超过3400万人感染艾滋病。然而没有合适的动物模型是阻碍艾滋病药物与疫苗开发的关键因素之一。现阶段用于研究艾滋病的动物模型有两种：一种是HIV-1感染黑猩猩和SCID/hu鼠，但是它们的有效性和疾病特征严重限制了其应用。另一种是用猴免疫缺陷病毒SIV或经改造的SHIV感染恒河猴，尽管这种动物模型对于研究发病机理很有效，但由于SIV与HIV之间的差异，致使这种感染不能完全模拟HIV对人类的感染。因此该动物模型对于艾滋病治疗药物以及疫苗的评价存在一定的缺陷。那么，构建更加完善的用于评价艾滋病疫苗或药物的动物模型将有助于推动全球艾滋病的治疗。
猴分为两大种类：一种是新世界猴，如松鼠猴和通常的绒猴；另外一种是旧世界猴，如非洲绿猴（African green monkey, agm）和恒河猴（Rhesus Macacus, mac）。HIV在感染新世界猴的侵入阶段就被阻断，原因是病毒包膜蛋白gp120与细胞表面受体蛋白CD4和CCR5之间不能有效的相互作用。虽然HIV能有效的侵入旧世界猴，但在侵入后阶段受到宿主细胞限制因子的制约，导致病毒不能有效复制。三种宿主限制因子解释了侵入后阻断：三维基体蛋白5α（TRIM5α）和脂蛋白APOBEC3家族以及膜蛋白BST2。在本论文中，我们通过对HIV-1的NL43病毒株骨架进行基因替换来解除HIV-1感染旧世界猴的限制因素。人源的TRIM5α，APOBEC3以及BST-2能够分别被HIV-1的CA， Vif以及Vpu所拮抗，但恒河猴的同源宿主限制因子不能被HIV-1的CA,Vif以及Vpu拮抗，而是能够被SIVmac239的CA, Vif以及HIV-1稀有亚型DH12的Vpu所拮抗。我们将HIV-1的CA，Vif以及Vpu的穿膜区基因分别替换成SIVmac239的CA，Vif以及HIV-1DH12的Vpu穿膜区，获得了stHIV-1嵌合病毒质粒。我们在293T细胞中检测到嵌合病毒stHIV-1的结构蛋白的正常表达，并且能够成功包装出病毒颗粒。在此基础上，我们通过MAGI-CCR5细胞检测了包装出的病毒颗粒对人类细胞的感染能力，发现嵌合病毒能够成功感染人类MAGI细胞。替换部分的蛋白功能的验证结果表明：stHIV-1的Vif能够有效降解恒河猴的A3G蛋白，并且替换的Vpu能够拮抗Rh BST-2对病毒出毒的抑制。在检测stHIV-1的CA功能实验中，我们没能成功构建稳定表达恒河猴TRIM5α的人类T淋巴细胞系CEM×174，因此对于CA的功能验证需要在今后的stHIV-1感染恒河猴PBMC实验中进行间接验证。此外，我们还成功的检测到stHIV-1在CEM×174细胞系中的长期复制。在下一步计划中，我们需要完成在Rh PBMC细胞中检测stHIV-1的长期复制曲线，在此基础上对恒河猴进行病毒功毒以及病毒传代实验，我们希望改造的病毒能够在恒河猴体内稳定复制并且最终能导致恒河猴的致病。
本论文的研究补充了BIV Vif-btA3Z2-Z3以及MVV Vif-oaA3Z2-Z3蛋白之间相互拮抗作用的机制，为病毒在牛羊中的疾病进程以及潜在的种属间感染提供可参考的意义。另外stHIV-1的构建有望成为更加理想的AIDS动物模型，推动AIDS治疗药物及疫苗的发展。
【关键词】：
【学位授予单位】：吉林大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2015【分类号】：R512.91【目录】：
中文摘要4-7Abstract7-13第1章 前言13-37 1.1 HIV-1 简介13-14 1.2 APOBEC3G 蛋白与 HIV-1 Vif 相互作用机制的研究现状14-20
1.2.1 病毒辅助蛋白与宿主限制相互作用概述14-15
1.2.2 APOBEC3 的结构及抗病毒功能15-16
1.2.3 HIV-1 的性质与功能16-20 1.3 其他慢病毒 Vif 与宿主 APOBEC3 蛋白间相互作用机制研究进展20-24
1.3.1 SIV 以及 FIV Vif 降解 APOBEC3 蛋白的机制研究20-21
1.3.2 BIV 以及 MVV 简介21-23
1.3.3 bt/oa APOBEC3 蛋白以及 BIV/MVV Vif 简介23-24 1.4 艾滋病药物及疫苗的动物模型简介24-33
1.4.1 HIV-1 感染动物模型的研究现状24-25
1.4.2 非灵长类小动物模型研究现状25-27
1.4.3 SHIV 以及 stHIV-1 感染动物模型简介27-33 1.5 立题依据33-37
1.5.1 BIV 及 MVV Vif 降解宿主蛋白 APOBEC3Z2-Z3 的机制研究34
1.5.2 嵌合型 stHIV-1 的构建34-37第2章 BIV及 MVV Vif 降解宿主蛋白 APOBEC3Z2-Z3的机制研究37-73 2.1 材料与方法37-47
2.1.1 材料与常规试剂37-44
2.1.2 仪器与设备44-45
2.1.3 方法与相关试剂45-47 2.2 结果与讨论47-69
2.2.1 慢病毒 Vif 蛋白序列比对以及功能预测48-49
2.2.2 相关基因的调取，构建以及试表达49-50
2.2.3 BIV 以及 MVV Vif 通过蛋白酶体途径降解 btA3Z3-Z3 以及 oaA3Z2-Z3 蛋白50-53
2.2.4 BIV 以及 MVV Vif 复合物组成的确认53-60
2.2.5 E3 复合物中成员突变体对降解作用的影响60-69 2.3 讨论69-71 2.4 小结71-73第3章 嵌合型 stHIV-1 的构建73-93 3.1 材料与方法73-79
3.1.1 材料与常规试剂73-75
3.1.2 抗体75
3.1.3 方法与相关试剂75-79 3.2 stHIV-1 感染动物模型的构建结果79-90
3.2.1 嵌合病毒的质粒构建, 病毒蛋白表达以及病毒包装检测79-83
3.2.2 嵌合病毒替换蛋白的功能检测83-90 3.3 讨论90 3.4 小结90-93结论93-95参考文献95-105作者简历105-107致谢107
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