通过选择性磷酸二酯酶4抑制剂来治疗非过敏性鼻炎的制作方法
专利名称通过选择性磷酸二酯酶4抑制剂来治疗非过敏性鼻炎的制作方法
技术领域本发明涉及羟基吲哚基乙醛酰胺作为磷酸二酯酶4抑制剂用于治疗非过敏性鼻炎的用途。
背景技术 非过敏性鼻炎是指包括慢性鼻炎症状但没有过敏原的一系列疾病。非过敏性鼻炎出现的一般症状是鼻塞/充血和流鼻涕而没有打喷嚏和结膜刺激症状。经常打喷嚏和结膜刺激是过敏性鼻炎出现的主要症状。非过敏性鼻炎患者的过敏皮肤测试呈阴性或是临床上不相关的，并具有正常的血清IgE水平。尽管难以确定非过敏性鼻炎的存在，但是美国国家鼻炎分类特别工作队(National RhinitisClassification Task Force)公布的数字是，在所有慢性鼻炎患者中有23％是非过敏性鼻炎，34％是混合型，43％是过敏性鼻炎。
未知原因的持久性病症中包括血管舒缩性鼻炎，即慢性非传染性iodiopathische疾病，它没有升高的血浆IgE水平，并且与炎症和/或嗜酸粒细胞增多(Eosinophilie)无关。它是以充血和流鼻涕为主要症状的非过敏性鼻炎的最常见形式。这种疾病的病理生理学还不清楚，通过非免疫刺激例如冷空气、吸烟、化学刺激、浓烈的味道或物理用力和应激能引发出现鼻部过度反应(Zeiger，R.S.，过敏和非过敏性鼻炎。分类和发病机理；第II部分。非过敏性鼻炎，AmericanJournal of Rhinology(1989)，)。
具有嗜酸粒细胞综合征(eosinophilensyndrom)的非过敏性鼻炎(NARES)的特征是偶尔打喷嚏，水样鼻分泌物，鼻部刺激和鼻涂片嗜酸粒细胞增多没有过敏体征。NARES出现的症状比血管舒缩性鼻炎或过敏性鼻炎的症状更剧烈。NARES是一种伴随哮喘、阿斯匹林过敏或与鼻息肉相关而出现的独立疾病。
一些其它鼻炎综合征的病因是相当清楚的。慢性鼻窦炎是一种慢性粘膜炎症，在大多数情况下不是由细菌引起的。药物性(medikament?se)鼻炎是由一些物质例如β-阻断剂、ACE抑制剂、口服避孕药或哌唑嗪引起的。其间质水肿的特征要比血管舒张的特征明显。鼻息肉通常与慢性非过敏性鼻炎有关并使其症状更为明显(Zeiger(1989)，supra)。
除了提到的鼻炎综合征外，非过敏性鼻炎经常作为气道包括鼻旁窦感染的症状而出现。这些感染情况是由病毒、细菌、真菌或由所述细菌联合引起的。原生动物或多细胞寄生虫是引起鼻炎(rhinitides)的不常见因素。感染，即上述细菌的移生可以出现在这些情况中例如鼻病毒感染，其被局部限制在上气道粘膜或流感病毒感染处，除上气道外它还影响了整个机体。对所有这些感染来说，通常鼻粘膜的炎症变化是可观察到的症状。这可以有更明显的渗出特征(流鼻涕)或更明显的水肿特征(由肿大而引起鼻塞)。这些感染疾病中的大多数都有急性过程，而慢性过程则是已知的。和其它慢性(非过敏性)鼻炎一样，这些慢性鼻炎通常会导致鼻粘膜增生，也就是所谓的鼻息肉。
过敏性鼻炎，也指花粉热，与非过敏性类鼻炎显著不同。和所有的过敏性疾病一样，过敏性鼻炎基于慢性、连续递增的复杂细胞炎症反应，其特征是嗜酸性粒细胞不断聚集，血浆IgE水平增加。过敏性鼻炎由对变应原例如花粉、室尘、螨、动物毛发或化学物质的高度敏感而引起。
过敏性鼻炎的主要症状是鼻分泌物增多，鼻充血则归咎于水肿的形成，经常打喷嚏和结膜刺激。除了治疗症状外，治疗的主要目的在于抑制鼻粘膜的炎症，该炎症受介体的控制。尽管进行了深入的研究活动，但是过敏性疾病的发病机制还没有被完全阐明。
虽然目前许多药物能治疗不同类型的鼻炎，但是在多数情况下治疗不令人满意。对非过敏性类鼻炎的治疗尤其匮乏，尽管使用了药物产品，但这些疾病通常显示出慢性病程。
目前对非过敏性和过敏性鼻炎最有效的治疗剂是局部或口服给予的类皮质酮(甾类化合物)。长期使用甾类化合物通常会伴有严重的副作用(例如骨质疏松，生长迟缓)(Forth，W.，Henschler，D.，Rummel，W.，Starke，K.，Allgemeine und speziellePharmakologie und Toxikoloqie，Bibliographisches Institut &F.A.Brockhaus AG，Mannheim(1993)，562-563)。因此，通常只在疾病的早期阶段由患者和治疗医师给予这些药物。由此带来的危险是1)由相对较轻的鼻炎(鼻结膜炎)发展成支气管哮喘(程度改变)，和2)疾病潜在的炎症将有所发展。所以这将改变下气道的组织结构。取代逆转变化的是不可逆的形态学改变过程(remodelling)，这会致使气道狭窄。在非过敏性鼻炎症状治疗中使用的其它药物产品是局部抗组胺药，抗胆碱能药或血管收缩剂，其抑制了鼻分泌物但对组织炎症没有作用，鼻塞时没有缓解作用。这样的药物仅可以短期使用，因为长期使用会破坏组织(血管收缩剂例如α-肾上腺素物质(Bachert，C.，Ganzer，U.，Dienasale Hyperreaktivit?t. Die allergischeRhinitis und ihre Differentialdiagnosen-Konsensusbericht zurPathophysiologie，Klassifikation，Diagnose und Therapie.；鼻过敏。过敏性鼻炎和各种诊断-喉-鼻-耳科学的病理生理学、分类、诊断和治疗的共同报告(1997)，72(2)65-76)。
已知给予PDE4同功酶的选择性抑制剂能治疗过敏性鼻炎或过敏性支气管哮喘。这些同功酶在机体中有不同的作用，在各个细胞类型中有不同表达(Beavo，J.A.，Conti，M.和Heaslip，R.J.，多环核苷酸磷酸二酯酶。Mol.Pharmacol.，-405；Hall IP.，同功酶选择性磷酸二酯酶抑制剂潜在的临床应用，Br.J.Clin.Pharmacol.)。对不同类型PDE同功酶类型的抑制会致使细胞中cAMP或cGMP聚集，这能用于治疗(Torphy，T.J.，Livi，G.P.，Christensen，S.B.，治疗哮喘的新型磷酸二酯酶抑制剂，DrugNews and Perspectives -214；Torphy，T.J.，磷酸二酯酶同功酶新型抗哮喘药的分子靶标。Am J Respir Crit Care Med-370)。
环腺苷一磷酸(cAMP)是所谓的细胞内信使中的一种，信使的胞内浓度由磷酸二酯酶(PDE)同功酶调节。研究表明PDE4同功酶的选择性抑制剂能提高cAMP的胞内浓度，这样就抑制了许多细胞(例如嗜酸性和嗜中性粒细胞)的致炎活性。选择性PDE 4抑制剂也能抑制巨噬细胞的组胺释放或者稳定在鼻粘膜中的血管中的内皮细胞，这使得这些活性物质也适于治疗过敏性鼻充血的急性症状(Barnette，M.S.，哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)中的磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂。ProgressDrug Research(1999)，53，E.Jucker Ed.，Birkh?user Verlag，Basle(瑞士)；Dyke，H.J.和Montana，J.G.，PDE 4抑制剂的治疗潜力，Exp Opin Invest Drugs，(1999)，8(9))。
DE 记载了PDE 4抑制剂羟基吲哚基-乙醛酰胺。尤其优选的化合物是化合物N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]乙醛酰胺(AWD 12-281)。使用这些羟基吲哚基乙醛酰胺能治疗炎性气道疾病例如过敏性鼻炎。其它优选的化合物包括AWD 12-322(N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[5-羟基-1-(4-羟基苄基)-1H-吲哚-3-基]乙醛酰胺)和AWD 12-298(N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-[1-(2，6-二氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]乙醛酰胺半醋酸乙酯)。
然而，PDE 4抑制剂对非过敏性类鼻炎的作用完全出乎意料而且是全新的。迄今为止还没有记载选择性PDE 4抑制剂对鼻粘膜和上呼吸道支气管上皮细胞这些疾病类型的作用。另一个未知的事实是PDE 4抑制剂能避免化学物质例如醋酸对组织尤其是粘膜的毒性作用。在以血管舒缩性非过敏性鼻炎症状为模型的动物实验中可以看到，与标准治疗剂相比PDE 4抑制剂对血管舒缩性鼻炎有非常好的作用。用于这种疾病类型的标准药物是甾类化合物例如氯地米松或抗胆碱能药，例如异丙托溴铵。这些物质在大鼠鼻炎模型中对鼻粘膜中由乙酸引起的血管通透性有剂量依赖作用。
血管舒缩性鼻炎是非过敏性鼻炎最常见的一种形式。通过兴奋或毒性刺激患者的鼻粘膜副交感神经来通过副交感神经的超反应而导致出现过多的水样鼻溢。能显著扩张血管的物质也能导致严重的鼻分泌物并形成粘膜水肿。
在动物实验中通过醋酸对动物鼻粘膜的作用能形成这些鼻分泌物增多的非过敏性形式。暴露在醋酸中后出现的增加水样鼻炎是由两个因素引起的。一方面，吸入了醋酸蒸汽或带有醋酸的鼻粘膜的混悬液诱导了鼻粘膜血管瞬时扩张，这形成了较高的血管通透性。由于这种作用能被感觉神经毒素辣椒素抑制，因此醋酸的毒性作用就归因于对鼻粘膜感觉神经纤维的刺激(Stanek，J.，Symanowicz，P.T.，Olsen，J.E.，Gianutsos，G.，Morris，J.B.，感觉神经介导的应答吸入的乙醛和醋酸蒸汽而产生的鼻血管扩张，Inhalation toxicology(2001)，13(9)807-822)。另一方面，醋酸能增加鼻粘膜感觉神经纤维的副交感神经的活性。带有浓烈味道的化学物质象醋酸也能引起对鼻部腺体的副交感神经活性的神经反射刺激，这致使生成过多的水样分泌液，因此增加了鼻分泌物。醋酸对粘膜有毒性作用并导致组织细胞中三磷酸腺苷(ATP)减少。平滑肌细胞和血管内皮细胞中的ATP的减少导致细胞松散(Erschlaffung)且这对血管扩张呈剂量依赖性(Kilgour，J.D.，Simpson，S.A.， Alexander，D.J.，Reed，C.J.，用于预测上呼吸道毒性体内-体外相关性的大鼠鼻上皮细胞模型，Toxicology(2000)，145(1)39-49)。
本发明一方面涉及式(I)羟基吲哚-3-基-乙醛酰胺用来治疗非过敏性鼻炎的用途， 其中R1是-C1-C6-烷基，直链或支链、饱和或部分不饱和，其任选被具有3-14个环原子的饱和单-、双-或三环或单-或多不饱和碳环或具有5-15个环原子和1-6个杂原子优选N、O和S的饱和单-、双-或三环或单-或多不饱和杂环一次或多次取代，其中碳环和杂环取代基可以依次被取代，其任选被-OH、-SH、-NH2、-NHC1-C6-烷基、-N(C1-C6-烷基)2、-NHC6-C14-芳基、-N(C6-C14芳基)2、-N(C1-C6烷基)(C6-C14芳基)、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-O-C1-C6-烷基、-O-C6-C14-芳基、-C1-C6-烷基、-C6-C14-芳基或/和-COOH一次或多次取代，其中碳环和杂环取代基中的每个C1-C6-烷基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和C6-C14-芳基一次或多次取代，其中碳环和杂环取代基中的每个C6-C14-芳基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和C1-C6-烷基一次或多次取代，R2、R3可以是氢或-OH，其中这两个取代基中至少有一个必须是-OH；R4是具有6-14个环原子的单-或多环芳香碳环或具有5-15个环原子的单-或多环杂环，其中杂原子选自N、O和S，其任选被-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-SH、-NH2、-NH(C1-C6-烷基)、-N(C1-C6-烷基)2、-NH(C6-C14-芳基)、-N(C6-C14芳基)2、-N(C1-C6-烷基)(C6-C14-芳基)、-NO2、-CN、-O-C1-C6-烷基、-O-C6-C14-芳基、-C1-C6-烷基、-C6-C14-芳基或/和-COOH一次或多次取代，其中每个C1-C6-烷基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和-C6-C14-芳基一次或多次取代，每个C6-C14-芳基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和C1-C6-烷基一次或多次取代。
R1优选是任选取代的C1-C3-烷基残基，例如n-丙基、异丙基、环戊甲基或苄基残基，其本身可被卤素如-F、-O-C1-C6-烷基或-O-C1-C6-卤代烷基如-OCH3或OCF3，或/和-C1-C6-烷基或C1-C6-卤代烷基如-CH3或-CF3一次或多次取代。
R4优选是单-或双环芳香碳环或杂环。R4尤其优选是苯基或吡啶基，特别是4-吡啶基。
对R4来说进一步优选被-F、-Cl、-Br或/和I一次或多次取代。最优选的是化合物AWD 12-281。
进一步优选的化合物包括AWD 12-322(N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[5-羟基-1-(4-羟基苄基)-1H-吲哚-3-基]乙醛酰胺)和AWD12-298(N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-[1-(2，6-二氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]乙醛酰胺半醋酸乙酯)。
除了式(I)化合物外，也还可以使用其药学上可接受的盐。药学上可接受的盐可以通过用适宜的有机或无机碱或酸将化合物中和来得到。
式(I)化合物能用于治疗性治疗或/和预防各种类型的非过敏性鼻炎，例如血管舒缩性鼻炎、带有嗜酸性粒细胞综合征的非过敏性鼻炎、慢性鼻炎、药物性鼻炎和其它类型的非过敏性鼻炎。
本发明的化合物优选以药物组合物的形式给予，其中除了活性成分外，还包括药学上可接受的载体、助剂或稀释剂。
活性成分的剂量可以多种多样，这取决于给药途径、年龄、患者体重、受治疾病的种类和严重程度以及类似的因素。日剂量可以以给药的单一剂量的形式每日给予一次或分成两或多个日剂量给予，通常是0.001到100mg，例如0.01到50mg。
适宜的给药形式的实例有口服、非胃肠道、静脉内、经皮、局部、吸入和鼻内制剂，优选吸入和鼻内制剂。
使用的常规盖仑药物制剂有例如片剂、糖衣丸、胶囊剂、可分散粉末、颗粒剂、水溶液、水性或油性混悬液、糖浆剂、液体或滴剂。尤其优选以雾化液体制剂形式给予，例如气雾剂或喷雾剂。
本发明化合物或含有这些化合物的药物产品也可以与其它药物活性成分联合给予，例如具有抗炎活性的产品如类皮质酮(甾类化合物)(如氯地米松)或白三烯拮抗剂(如孟鲁司特)，分泌抑制剂例如抗胆碱能药(如异丙托溴铵)，抗组胺药例如氮卓斯汀，血管收缩剂例如盐酸赛洛唑啉，具有抗病毒活性的药物例如奥塞米韦或金刚烷，具有抗菌活性的产品例如抗生素(如青霉素)或具有抗真菌(杀真菌剂或制霉剂)作用的产品。
也通过以下实施例对本发明进行说明。
具体实施例方式
实施例在斯普拉格-道利大鼠(非过敏性鼻炎模型)中对醋酸诱导的血管通透性的影响在实验当天通过i.p.注射0.9-1ml/动物2.5％浓度的硫喷妥钠溶液麻醉重280-320g的雄性斯普拉格-道利大鼠。然后露出会厌下部的气管并在两端切开。将聚乙烯导管插入通肺(orthograd)气管的较低端口并用麻线系住固定以维持呼吸。将带有LUER锁连接器(从Original-Perfusor?-线切开)以便后推灌注鼻腔的第二个聚乙烯导管导入上端口并事先后推至后鼻孔的内开口处，这样溶液就能流入鼻腔内。共将总共8只动物分别仰卧置于特制的塑料手术台上，这样灌注液能从鼻孔内滴中，并在流分收集器中被收集。在此期间，看到头部的一半并且鼻子在手术台的边缘的下边。
将聚乙烯注入管与导管的LUER锁连接器相连，其中导管已经被后推固定在每个动物上并通过滚动泵在装有配制灌注液的容器内浸润。调节滚动泵至恒定输送量0.5ml液体/分钟。启动红灯为动物加温。
最初用PBS灌注鼻腔30分钟来清洗鼻部粘液。在此期间，启动流分收集器，并在15分钟流分部分处(2分段)收集从鼻孔滴出的灌注液。第二个流分部分用作实验的正常值。
给予醋酸前局部给予受试物质。以摩尔浓度将它们加到灌注介质中(PBS，Dulbecco)。根据其分子量用1mg 1N NaOH稀释4.6mg AWD12-281或其它受试物质例如AWD 12-322或AWD 12-298(4.6mg AWD12-322或5.2mg AWD 12-298)然后加入二次蒸馏水至10ml。在超声浴中用2ml 1N NaOH和4ml 96％纯乙醇处理5.2mg氯地米松2分钟，然后加入二次蒸馏水至10ml，加入PBS以得到最终的浓度，作为参考文献1。用1mg 1N NaOH稀释1.4mg异丙托溴铵然后加入二次蒸馏水至10ml，加入PBS以得到最终的浓度，作为参考文献2。借助滚动泵用这些溶液灌注鼻子30分钟，弃去从流分收集器得到的2个样本。然后关闭滚动泵。
灌注这些物质后，将伊凡斯蓝血浆标记物(PBS中的1％浓度溶液)，每个动物1ml，注射到颈静脉中，然后通过管道或滚动泵将0.1％浓度的醋酸溶液加到鼻腔中，直到从鼻状物质中滴出2-3滴醋酸溶液。然后关闭滚动泵。醋酸溶液在鼻腔中保留30分钟，以便确定鼻粘膜的最终渗透性。
暴露30分钟时间后，再次打开滚动泵和分流收集器，并通过鼻腔后推注入溶在PBS中的0.1％浓度的醋酸溶液60分钟(以0.5ml液体/分钟的恒定传递)。在此期间，连续将从鼻孔中滴出的灌注液收集到玻璃管中，15分钟收集4个时段。将包括对照样本在内的样本等分部分置于微量滴定器中并用Digiscan光度剂于620nm波长处相对于对照样本(空白)进行测定。用60分钟内作为AUC(曲线下面积，AUC0-60分钟，以μg/l表示)计算对鼻粘膜血管通透性的作用曲线(Grunwald，C.，AUC 1.0，“曲线下面积”(AUC)值的计算和图形绘制，Inter reportof Arzneimittelwerke Dresden GmbH，1995年8月)。通过式1计算每15分钟4个收集流分中以μg/ml表示的流出来的灌注液中的伊凡斯蓝的含量
tn时间间隔(15分钟)yn每个时间间隔的伊凡斯蓝的含量(每15分钟的μg/l)减去基线值(带有PBS Dulbecco的初始输注液的第二流分)从而计算出一小时时间内的醋酸诱导的血管通透性AUC′0-60分钟＝AUC0-60分钟-基线值×60分钟计算对照组或用物质预处理的动物组中各个动物的AUC’平均值和标准偏差(x±SD)。用百分比表述对血管通透性的抑制率。通过设定从用载体处理的对照动物中收集到的流分的平均染色含量为100％以及通过比较相对于此的从用物质预先处理的动物中收集到的流分的平均染色含量(x％抑制率)来进行计算。在4到8只动物上测定每个物质的浓度和每个相应的载体溶液。
统计分析在不成对观察中按照斯徒登t-检验用来计算统计学显著性。P＜0.05和低于此的数值被认为是具有显著性。
表1在输注0.1％浓度的醋酸溶液前60分钟进行单独的30-分钟输注(将物质溶解在输注液中)，AWD 12-281对用醋酸诱导的大鼠鼻粘膜血管通透性的影响
AUC’＝基于基线值的“曲线下面积”值n＝每组的动物数*，**＝p＜0.05，p＜0.01统计学显著性，与载体对照组比较通过斯徒登t-检验计算得到。
表2在输注0.1％浓度的醋酸溶液前60分钟进行单独的30-分钟输注(将物质溶解在输注液中)，AWD 12-322对用醋酸诱导的大鼠鼻粘膜血管通透性的影响
AUC’＝基于基线值的“曲线下面积”值n＝每组的动物数**＝p＜0.01统计学显著性，与载体对照组比较通过斯徒登t-检验计算得到。
表3在输注0.1％浓度的醋酸溶液前60分钟进行单独的30-分钟输注(将物质溶解在输注液中)，AWD 12-298对用醋酸诱导的大鼠鼻粘膜血管通透性的影响
AUC’＝基于基线值的“曲线下面积”值n＝每组的动物数*＝p＜0.05统计学显著性，与载体对照组比较通过斯徒登t-检验计算得到。
表4在输注0.1％浓度的醋酸溶液前60分钟进行单独的30-分钟输注(将物质溶解在输注液中)，氯地米松对用醋酸诱导的大鼠鼻粘膜血管通透性的影响
AUC’＝基于基线值的“曲线下面积”值n＝每组的动物数*，**＝p＜0.05，p＜0.01统计学显著性，与载体对照组比较通过斯徒登t-检验计算得到。
表5在输注0.1％浓度的醋酸溶液前60分钟进行单独的30-分钟输注(将物质溶解在输注液中)，异丙托溴铵对用醋酸诱导的大鼠鼻粘膜血管通透性的影响
AUC’＝基于基线值的“曲线下面积”值n＝每组的动物数*＝p＜0.05统计学显著性，与载体对照组比较通过斯徒登t-检验计算得到。
结果及讨论在醋酸诱导的大鼠鼻炎模型中，选择性PDE 4抑制剂AWD 12-281和12-322在从0.1到10μmol/l的实验范围内显示出鼻粘膜的血管通透性的浓度依赖性抑制。衍生物AWD 12-298在3到10μmol/l的浓度范围内具有浓度依赖性活性。与之相比，治疗非过敏性鼻炎的标准治疗药物例如类皮质酮氯地米松(Beclomethason)和抗胆碱能药异丙托溴铵，具有大致相同的活性。PDE 4抑制剂对由醋酸诱导的血浆溢出物产生的抑制是完全出乎意料的并且是新的发现，这是迄今还没有描述过的。
1.通式(1)化合物用于治疗非过敏性鼻炎的用途， 其中R1是-C1-C6-烷基，直链或支链、饱和或部分不饱和，其任选被具有3-14个环原子的饱和单-、双-或三环或单-或多不饱和碳环或具有5-15个环原子和1-6个杂原子优选N、O和S的饱和单-、双-或三环或单-或多不饱和杂环一次或多次取代，其中碳环和杂环取代基可以依次被取代，其任选被-OH、-SH、-NH2、-NHC1-C6-烷基、-N(C1-C6-烷基)2、-NHC6-C14-芳基、-N(C6-C14芳基)2、-N-(C1-C6烷基)(C6-C14芳基)、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-O-C1-C6-烷基、-O-C6-C14-芳基、-C1-C6-烷基、-C6-C14-芳基或/和-COOH一次或多次取代，其中碳环和杂环取代基中的每个C1-C6-烷基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和C6-C14-芳基一次或多次取代，其中碳环和杂环取代基中的每个C6-C14-芳基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和C1-C6-烷基一次或多次取代，R2、R3可以是氢或-OH，其中这两个取代基中至少有一个必须是-OH；R4是具有6-14个环原子的单-或多环芳香碳环或具有5-15个环原子的单-或多环杂环，其中杂原子选自N、O和S，其任选被-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-SH、-NH2、-NH(C1-C6-烷基)、-N(C1-C6-烷基)2、-NH(C6-C14-芳基)、-N(C6-C14芳基)2、-N(C1-C6-烷基)(C6-C14-芳基)、-NO2、-CN、-O-C1-C6-烷基、-O-C6-C14-芳基、-C1-C6-烷基、-C6-C14-芳基或/和-COOH一次或多次取代，其中每个C1-C6-烷基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和-C6-C14-芳基一次或多次取代，并且每个C6-C14-芳基残基本身可以被-F、-Cl、-Br、-I、-OH或/和C1-C6-烷基一次或多次取代。
2.如权利要求1的用途，其特征在于，所述化合物是N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-[1-(4-氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]乙醛酰胺(AWD 12-281)、N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[5-羟基-1-(4-羟基苄基)-1H-吲哚-3-基]乙醛酰胺(AWD 12-322)和N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-[1-(2，6-二氟苄基)-5-羟基吲哚-3-基]乙醛酰胺-半醋酸乙酯(AWD 12-298)或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1或2的用途，其特征在于，非过敏性鼻炎选自血管舒缩性鼻炎、带有嗜酸性粒细胞综合征的非过敏性鼻炎、慢性鼻窦炎和药物性(medikament?ser)鼻炎。
4.如权利要求1或2的用途，其特征在于，由感染引起的鼻炎是由病毒或细菌感染、或是真菌或寄生虫或这些所述细菌联合引起的感染所致的、不是过敏引起的征状，其选自血管舒缩性鼻炎、带有嗜酸性粒细胞综合征的非过敏性鼻炎、慢性鼻窦炎和药物性鼻炎。
本发明涉及羟基吲哚基乙醛酰胺作为磷酸二酯酶－4抑制剂治疗非过敏性鼻炎的用途。
文档编号A61K31/7SQ
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者C·伦德菲尔德特, H·库斯, N·赫夫根 申请人:埃尔比昂股份公司疾病调理：
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自从四十多年前发现5-羟色胺(5-HT)以来，积累的多种研究结果已表明，5-羟色胺在哺乳动物体内，不论在中枢神经系统和在外周系统都有重要的功能作用。对中枢神经系统的形态学研究表明，起源于脑干的5-羟色胺能神经元形成了一个非常扩散的系统，与脑和脊髓的大部分区域都有投射联系。R.A.O′Brien,Serotonin in MentalAbnormalitise(5-羟色胺与精神失常)，1:41(1978)；H.W.M.Steinbusch,Handbook of Chemical Neuroanatomy(化学神经解剖学手册)，Vol.3.partⅡ,68(1984)；N.E.Anden,et al,Actaphysiologica Scandinavia,67:317(1966)。生物化学证据对这些研究作了补充，证明脑和脊髓内存在高浓度5-HT。H.W.M.Steinbusch，同上。
对于这样一个扩散性系统，证明5-HT与某些行为的表达、与一些生理学反应、以及与一些起源于中枢神经系统的疾病有关是不会令人惊奇的。这些包括诸如睡眠、进食、痛感觉、体温控制、血压控制、抑郁、精神分裂症，以及其它身体状况等广泛的方面。R.W.Fuller,Biologyof Serotonergic Transmission(5-羟色胺能传递的生物学)，221(1982)；D.J.Boullin,Serotonin in Mental Abnormalities(5-羟色胺与精神失常)1:316(1987)；J.Barchas,et al.,Serotonin andBehavior(5-羟色胺与行为)(1973)。
5-羟色胺在外周系统也起重要的作用。例如，体内大约90％的5-羟色胺是在胃肠道系统内合成的，并且已发现，5-羟色胺在此系统内中介导各种收缩、分泌、和电生理作用。5-羟色胺可被血小板吸收，一经引起血小板凝集，5-羟色胺又被释放，使心血管系统成为对5-羟色胺非常敏感的外周网络中的另一个例子。鉴于5-羟色胺在体内的广泛分布，可以理解到，对于能影响5-羟色胺能系统的药物具有巨大的兴趣。特别是受体特异性激动剂和拮抗剂对治疗广泛的疾病是有价值的，包括焦虑、抑郁、高血压、周期怀偏头痛、强迫性失常，精神分裂症、孤独症，神经退化性疾病如阿尔海茨墨症，帕金森氏病和亨氏舞蹈病，以及癌症化疗引起的呕吐。M.D.Gershon,et al,The PeripheralActions of 5-Hydroxytryptamine(5-羟色胺的外周性作用)，246(1989)；P.R.Saxena,et al,Journel of CardiovascularPharmacology,15:Supplement7(1990)。
5-羟色胺通过与细胞表面的特异性受体相结合发挥其细胞生理学作用。对包括5-羟色胺在内的许多神经递质和激素存在多种类型的受体。存在多种结构不同的5-羟色胺受体，为能生产出亚型选择性药剂提供了可能性。开发这种化合物可能导致产生具有更少副作用的新型高选择性治疗药剂，因为，激活单个受体亚型就可能发挥影响中枢和/或外周5-羟色胺能系统不同部分特异性作用的功能。
通过用血管系统作例子，可为这种特异性提供例证。对于某些血管，刺激内皮细胞上的某种5-HT受体产生血管舒张作用，而刺激平滑肌细胞上的某种5-HT受体则产生血管收缩作用。
根据其药理学或结构差异，目前被正式分类的主要5-羟色胺(5-HT1、5-HT2,5-HT3,5-HT4,5-HT5,5-HT6，和5-HT7)受体种类包含大约14-18种不同的受体。〔有关各种5-HT受体的药理学作用和临床意义的出色综述，参见Glennon et al.,Neuroscience and Behavioral Reviews(神精科学与行为述评)，14:35(1990)〕。
一种5-羟色胺受体是5-HT2。已知这种受体存在几个亚型。这些亚型包括5-HT2A,5-HT2B，和5-HT2C。亚型5-HT2A定位于血管平滑肌，血小板，肺，中枢神经系统和胃肠道。认为这种受体与血管收缩，血小板凝集，和支气管收缩有关。5-HT2B受体定位于大鼠肺，胃底部，子宫，膀胱，和结肠。对于人，5-HT2B重要的定位区包括，但不局限于，脑和血管。亚型5-HT2C定位于中枢神经系统，脉络丛中具有高密度。
长时间认为花粉是引起过敏性鼻炎的原因，通常被称为“枯草热”。花粉含有蛋白酶，它能诱导肥大细胞释放介体，从而刺激IgE生物合成。由IgE引起的肥大细胞脱颗粒作用，使之释放组胺，导致引起鼻窦充血，发痒和肿胀的炎症反应。感觉神经释放的炎症性神经肽，如P物质，也能引起肥大细胞的脱颗粒作用。肥大细胞脱颗粒后释放的组胺可激活感觉神经增加释放炎症性神经肽，并传递信号至脑，引起打喷嚏，过敏性反应还扩散至附近其它区域，例如引起流泪。以此方式，感觉神经参与了炎症过程。有鼻粘液的过敏病出现很多嗜曙红白细胞，而有感染性鼻粘液的患者出现很多嗜中性白细胞。
抗组胺剂是常用的药物，口服时常有镇静作用。另一方面，含有色甘酸钠的喷鼻剂是由于色甘酸阻断过敏原与组织肥大细胞反应而有效。但是，色甘酸并不完全有效，因为看来它不与某些刺激肥大细胞脱颗粒，并从肥大细胞产生组胺的炎症介体或IgE生物合成激活剂相结合。
炎症是组织对不同刺激或损伤的一种非特异性反应，并导致在炎症部位释放引起疼痛的物质。现在认识到，肥大细胞，嗜中性的白细胞，T-细胞和感觉神经与皮肤炎症的病理生理状态以及其它的生理失常有关。肥大细胞在由IgE引起脱颗粒之后，是急性炎症中组胺最大的来源，也是胃促胰酶最大的来源。
“感冒”是内科医生、同时也是非专业人员用于识别急性轻呼吸道病症的一个时代赋予的称呼。自从1956年鉴定鼻病毒以来，对感冒的病原学和流行病学已获得相当大的知识体系。认识到感冒不是一个单独的病症，而是由几个病毒家族成员引起的一组病症，包括付流感病毒，鼻病毒，呼吸道合胞病毒，肠道病毒，和冠状病毒。对鉴定引起感冒的病毒已进行了大量的工作。此外，对最重要的感冒病毒，鼻病毒的分子生物学有了更详尽的认识。相反，尽管有这些成就，对感冒的治疗却进展缓慢。虽然现在已发现有大量化合物对细胞培养的感冒病毒表现出抗病毒活性，但是对患者的抗病毒化合物仅有局限的效果。
因为对受感染人群中的感冒和过敏性鼻炎目前市场推行的治疗法普遍不满意，所以需要有更有效，更满意的治疗法。本发明提供了这样一种治疗法。
本发明提供了一种治疗或缓解哺乳动物感冒或过敏性鼻炎症状的方法，包括对需要治疗的哺乳动物给予有效剂量具有5-HT2拮抗剂活性的化合物。
用于制剂和实施例中的名词和缩写具有其正常的含义，除非另有标明。例如“℃”指的是摄氏度，“N”指的是正常或正常状态，“mmol”指的是毫摩尔，“g”指的是克，“ml”表示毫升，“L”表示升，“M”指的是摩尔的或摩尔浓度，“MS”指的是质谱测定法，“IR”指的是红外光谱测定法，“NMR”指的是核磁共振光谱测定法。
在此使用的名词“过敏性鼻炎”应理解包括药物性鼻炎(rhinitismedicamentosa)，干燥性鼻炎，和萎缩性鼻炎。
本发明的方法使用了5-HT2受体。存在5-HT受体的3个5-羟色胺2(5-HT2)家族成员，5-HT2A,5-HT2B和5-HT2C受体。这些受体是G-蛋白结合受体，至少在这些受体的克隆化型式中它们与磷酸次黄嘌呤核苷酸代谢作用发生正偶联。这些受体具有序列同源性，具有相同的内含子和外显子模式。这些受体对配体类似的特异性进一步显示出在此家族中受体的共性。虽然本发明的方法可使用任何5-HT2受体亚型，但是更优选的受体亚型是5-HT2B。
本发明提供了一种治疗或缓解感冒或过敏性鼻炎症状的方法，包括给需要治疗的哺乳动物有效剂量的5-HT2受体拮抗剂。本发明的一个更优选的实施方案提供了一种治疗或缓解感冒或过敏性鼻炎症状的方法，包括给需要治疗的哺乳动物有效剂量的5-HT2B受体拮抗剂。
新近的出版物中描述了许多可用于本发明方法的不同的5-HT2受体拮抗剂。
例如，在此引入作为参考的美国专利第5,428,036号描述了一组具有结构式Ⅱ和其药用盐的5-HT2拮抗剂
其中X选自CO,CS和CH2，如果X是CO或CS，则R选自如下的基团ⅰ)氢，C1-C24烷基，C2-C24烯基，C3-C8环烷基，C3-C8环烯基或C4-C32环烷(烯)基烷(烯)基，这些基团可任选地以1个或2个羟基取代，或者是任选地以1个或多个选自如下取代基取代的苯基卤素，三氟甲基，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，C1-C4烷硫基，酰氧基或氰基，或ⅱ)YR1，其中Y是O或S，R1选自上面ⅰ)中对R限定的取代基，ⅲ)NR2R3，其中R2和R3独立地选自上面ⅰ)中对R限定的取代基，或者R2和R3结合形成4-8元杂环，其含有1-3个氮原子和0-3个氧或硫原子，或者如果X是CH2时，R选自如下的基团ⅳ)如在(ⅱ)中限定的基团YR1，ⅴ)如在ⅲ)中限定的基团NR2R3，或ⅵ)基团OC(O)R4，其中R4是对R1限定的基团。
另一组5-HT2拮抗剂包括在此引入作为参考的美国专利第5,229,382号中描述的化合物，它们具有通式Ⅲ的结构
还有另外一组5-HT2拮抗剂是在此引入作为参考的美国专利第5,457,115号中描述的，具有结构式Ⅳ的拮抗剂及其可药用盐或前药
其中Ar是一个苯基；被至少一个选自如下取代基取代的苯基卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，三氟甲基，和氰基；或是选自如下的芳香杂环基2-噻吩基，3-噻吩基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-噁唑基，2-咪唑基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基；每条虚线是一个任选的双键；X和X1独立地选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，低级烷硫基，低级烷基磺酰基，低级烷氨基，低级二烷氨基，氰基，三氟甲基，和三氟甲硫基；或者X和X1在一起形成5-7元碳环；R1选自氢，低级烷基和被1个或2个羟基取代的烷基；前提条件是当X是氢或氟时，R1不是氢；R是具有如下结构式的取代基
其中n是2-6的整数，w是氧或硫；V1选自OR4,SR5,CHR6R7和NR8R9；其中R3-R9独立地选自氢，低级烷基，低级烯基，环烷基，被一个或二个羟基取代的低级烷基，以及被一个或二个羟基取代的低级烯基。
还有一组可用于本发明方法的5-HT2拮抗剂，包括在此引入作为参考的美国专利第5,480,885号中描述的结构式Ⅴ的拮抗剂，其外消旋体及其酸加成盐。
其中R1,R2和R3独立地代表一个氢原子或者直链或支链的C1-C6烷基；X代表一个氢原子或一个卤素原子；Z代表羰基或亚甲基，C9
C10代表一个单键或双键。
上述各组化合物仅表明最近研制的5-HT2受体拮抗剂。在此列入的几组化合物不表示是全面的，本发明的方法可能使用任何一种5-HT2受体拮抗剂，不局限于任何特定的一种化合物。
更优选的一类拮抗剂是结构式Ⅵ的5-HT2受体拮抗剂，其可药用盐或溶剂化物。其中R1是氢或C1-C3烷基；R3是氢或C1-C3烷基；R6选自氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、卤素、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C2-C6)烯基、COR5、C1-C10烷酰基、CO2R5′、(C1-C6烷基)m氨基，NO2、-SR5和OR5；R7和R8独立地选自氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、NO2、卤素、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C2-C6)烯基、COR5、C1-C10烷酰基、C7-C16芳烷基、CO2R5′、(C1-C6烷基)m氨基，-SR5和OR5；n是1、2或3；n′是1、2或3；m是1或2；
R5独立地是氢或C1-C4烷基；R5′是C1-C4烷基；---是任选的双键；结构式Ⅵ化合物的实例包括，但不局限于如下螺-9,9[2-(3,4-二氯)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-甲氧基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚，螺-9,9[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-甲基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚，螺-9,9[2-(3,4-二乙氧基)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-甲基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚，螺-9,9[2-(3,5-二氯)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-二甲氨基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚，螺-9,9[2-(3-氟，4-氯)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-乙基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚，螺-9,9[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-吲哚，螺-9,9[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-溴-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚，螺-9,9[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氢化萘基]-5-氯-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚。
这些化合物的合成在提交的共同未决美国临时专利申请序列号06/014,119，律师案卷号P-10656中已有描述，在此引入作为参考。包括在六个特定实施例中的这类典型化合物的合成将在下面详述。
结构式Ⅵ化合物可用本领域熟知的化学方法制备。这些实施例仅是说明性的，不打算限制本发明的范围。
吲哚原料下面的吲哚原料(1a,1b和1c)中购买(1a)，按照Bartoli的方法制备(1b)〔G.Bartoli,et al.Tetrahedron Lett,9〕，或者从2-碘-4,6-二甲基苯胺(5?)合成(1c)。可用如下反应路线说明此方法
反应路线Ⅳ
2-碘代-4,6-甲基苯胺(5?)的合成可按如下完成在氩气下，向在30ml无水三乙基胺中的5?(24mmol),CuI(0.05当量)和(PPh3)2PdCl2(0.05当量)悬浮液中加入三甲基甲硅烷基乙炔(1.1当量)，并对形成的混合物搅拌3小时。然后在真空下除去溶剂，残留物通过快速层析法纯化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)作洗脱液，以定量产率产生6?。将6?(23mmol)和CuI(2当量)在50ml无水二甲基甲酰胺中的浆状物，在氩气中100℃加热2.5小时。冷却至室温之后，将反应混合物过滤，固体物用乙醚(20ml)洗2次。此有机相用水洗(3×50ml)，用Na2SO4干燥，然后将溶剂蒸发至干。此粗制品通过快速层析法纯化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)作洗脱液，获得1c(1.5g,45％)。
将相应的色胺盐酸盐(3a)(1g)和相应的二甲氧基萘满酮(3b)(1g)在乙醇(10ml)中的悬浮液回流加热128小时。此后，使反应混合物降温至室温并过滤，洗粗制固体并干燥。熔点261℃
理论值 测定值C
6.98实施例2
将相应的色胺盐酸盐(2a)(575mg)和相应的酮(2b)(464mg)在乙醇(10ml)中的悬浮液回流加热128小时。此后，使反应混合物降温至室温并过滤。洗粗制固体并干燥。产量525mg理论值测定值C74.43 74.36H6.84
8.25MS(质谱分析)301实施例3
将相应的色胺盐酸盐(2a)(500mg)和相应的酮(2b)(396mg)在乙醇(10ml)中的悬浮液回流加热72小时。此后使反应混合物冷却至约0℃，并过滤。洗粗制固体并干燥。产量262mgMS:274实施例4
将相应的色胺盐酸盐(4a)(500mg)和对应的酮(4b)(396mg)在乙醇(10ml)中的悬浮液回流加热72小时。此后使反应混合物冷却至约0℃，持续约24小时再过滤。洗粗制固体并干燥。
提交作质谱分析，发现mi为274。
将相应的色胺盐酸盐(5a)(500mg)和相应的酮(5b)(397μl)在乙醇(10ml)中的悬浮液回流加热72小时。此后使反应混合物冷却至约0℃，持续约14小时再过滤。洗粗制固体并干燥。产量630mg理论值 测定值C73.95
73.32H6.52
8.59MS:288实施例6
将相应的色胺盐酸盐(4a)(1g)和相应的酮(4b)(800mg)在乙醇(10ml)中的悬浮液回流加热72小时。此后使反应混合物冷却至约0℃，持续约24小时，再过滤。洗粗制固体并干燥。产量550mg理论值测定值C70.67 70.88H7.06
7.88在此引入作为参考的WO95/24200中描述了另一种优选的具有如下结构式Ⅰ的5-HT2受体拮抗剂或其可药用盐或溶剂化物
其中Q是氢或(CHR2)R4；R1是氢或C1-C3烷基；R2是氢或C1-C3烷基；R3是氢或C1-C3烷基；R4是C5-C8环烷基，取代的C5-C8环烷基，C5-C8环烯基，取代的C5-C8环烯基，二环的或取代二环的；A选自下式结构式
其中R6和R7独立地是氢，C1-C6烷基、C2-C6烯基、卤素、卤代(C1-C6)烷基，卤代(C2-C6)烯基、COR5、C1-C10烷酰基、CO2R5′、(C1-C6烷基)m氨基，NO2、-SR5或OR5；m是1或2；R5独立地是氢或C1-C4烷基；
R5′是C1-C4烷基；R8独立地选自R6的基因，取代的C3-C8环烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-(C1-C3)烷基、C5-C8环烯基、取代的C5-C8环烯基、C5-C8环烯基-(C1-C3)烷基、C7-C16芳烷基，或者R6和R7同基团A的碳原子一起构成5-8元碳环。
结构式Ⅰ化合物的例子包括但不局限于如下化合物8-甲基-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚，8-溴-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐，6,8-二溴-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚，6-甲基-8-溴-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；8-甲氧基-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6,8-二氟-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；7-甲基-8-溴-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-(1,1-二甲基乙基)-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-1-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；5-氟-6-甲基-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；7,8,9,10-四氢-10-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-11H-苯并[g]吡啶并[3,4-b]吲哚；6-环己基-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；5,8-二甲基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4 b]吲哚盐酸盐；6-(1-甲基乙基)-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；
6,8-二甲基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚盐酸盐；5,7-二甲基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚盐酸盐；6,7-二甲基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6-乙基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6-溴-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；7,8-二甲基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1,2,3,4-四氢-1-〔(3,4-二甲氧苯基)甲基〕-9H-吡啶并[3,4b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(3,4,5-三甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2,3,4-三甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2-甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2,5-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2,4,5-三甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-(1-甲基乙基)-1-〔(2,3,4-三甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(3,4-二甲氧基-5-硝基苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(3-碘代-4,5-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；
6-甲基-1-〔(3,4-二甲氧基-5-氨基苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二盐酸盐；6-甲基-1-〔(3-甲氧基-4-丙氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-1-〔(4-二甲氨基苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b ]吲哚二盐酸盐；6-甲基-1-〔(4-二丁基氨基苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二盐酸盐；6-甲基-1-〔(3-氟-4-甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(3,4-二甲基苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2-氯-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2-氯-3-甲氧基-4-羟基苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]-吲哚盐酸盐；5-氟-6-甲基-1-〔(2-氯-3,4-二甲氧苯基)甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-(环己基甲基)-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐；6-甲基-1-〔(2-溴-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[2,4-b]吲哚；以及6-碘代-1-〔(3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐。
实施例7制备6-甲基-1-〔(2-氯-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐
将2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛(10.45g),N-乙酰甘氨酸(11.9g,0.10mol)和乙酸钠(8.4g,0.1mol)在乙酸酐(100ml)中的溶液加热至100，维持2小时。使反应混合物冷却至环境温度，然后被倾倒在冰水(300ml)上，同时搅拌。过滤分离出产物，用水洗(3×50ml)，再用乙醚洗，然后减压干燥(5.26g)。
将上面制备的氮杂内酯(1.34g,4.76mmol)和5-甲基色胺盐酸盐(1.0g,4.75mmol)在1N HCl(30ml)中的悬浮液，在氮气中加热回流24小时。使反应混合物冷却至环境温度后，过滤分离出粗制产物。将此固体在乙醇中研磨碎，再用乙醚洗。过滤分离出产物(1.19g)。
m/e=370,m.p.244(分解)。
计算值测定值C61.92 61.67H5.94
6.94实施例8制备6-甲基-1-〔(2-溴-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚以和实施例7中所述相同的方法制备实施例8的化合物，仅有如下不同用2-溴-3,4-二甲氧基苯甲醛作原料，而不是2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛。最终的化合物
具有79.2％的产率，M/I416,414,mp:272-4℃。
计算值测定值C 55.83 55.57H 5.35
5.36N 6.20
6.09实施例9制备6-碘-1-〔(3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐以和实施例7相同的方法制备实施例9化合物，仅有如下不同用3,4-二甲氧苯甲醛而不是2-氯-3,4-二甲氧苯甲醛，用5-碘-色胺而不是5-甲基-色胺作原料。反应完成后立即用碳酸钾水溶液中和此混合物，并用氯仿萃取。合并氯仿相，用无水碳酸钠干燥后减压浓缩。产物在硅胶柱上作层析纯化，用含2％甲醇的氯仿洗脱。合并含有产物的组分并浓缩。将残留物溶解在乙醚中并用HCl气体处理。过滤分离出形成的HCl盐并减压干燥。最终的化合物
具有31.3％的产率，M/I448,mp:270-3℃。
计算值测定值C 49.55 49.62H 4.57
4.51N 5.78
5.66对于认为是有效的5-HT2受体拮抗剂的化合物，其生物学效力首先可通过应用初筛测定法证实，此测定法可快速、准确地测定待测化合物对5-HT2受体的结合。一旦确定了待测化合物的结合，就可以证实在体内待测化合物对受体的活性。本领域的技术人员都熟知用于评价5-HT2拮抗剂的测定法。下面将列举各种5-HT2受体的测定法。结合5-HT2B受体的活性用如下面列举的标准方法测定化合物结合5-HT2B受体的能力。测定方法本发明的某些化合物和中间体可用于调节5-HT2B受体。对结合5-HT2B受体最有效的化合物可用下面的方法鉴定。进而在下面还要提供一个有用的体内模型，用于证实5-HT2B活性。放射性配体对5-HT2B结合的研究转化细胞膜的制备通过在4℃以2,200xg离心15分钟收集表达克隆化大鼠5-HT2B受体的悬浮细胞。J.D.Kursar,et al,Mol,Pharmacol.42:549-557(1992)。通过在50mM Tris-HCl,pH7.4缓冲液中(0.5×109个细胞/30ml)旋转搅拌此沉淀制备用于结合测定的膜。然后将此组织悬液在4℃以39,800xg离心10分钟。用此方法重复总共洗3次，在洗第一次和第二次之间37℃温育10分钟。最后的沉淀用Tissumizer(匀浆器)(Tekmar,Cincinnati,OH)作匀浆，在67mM Tris-HCl,pH7.4的缓冲液中(分别以2000万-4000万和1250万和细胞/ml，原细胞成员，分别为5-HT2B受体低水平表达和比较高水平表达的细胞)，仪器设定位置65，匀浆15秒。5-HT结合研究用Biomek1000(Beckman Instruments,Fullerton,CA)自动进行结合测定，总量0.8ml的样品一式3份平行进行测定。将膜悬液200μl(0.04-0.27mg蛋白质)和药物水稀释液200μl加到含有〔3H〕5-HT，优降宁(pargyline),CaCl2，和L-抗坏血酸的400μl67mM Tris-HCl,pH7.4缓冲液中。优降宁，CaCl2和L-抗坏血酸的最后浓度分别为10μm,3mM和0.1％。以37℃15分钟或者以0℃2小时温育样品试管(以此二种条件检验结合平衡)，然后用Brande细胞收集器(MB-48R型-Brende,Gaithersburg,MD)使样品快速过滤通过whatman GF/B滤纸，此滤纸已在0.5％聚乙烯亚胺中预浸透，并用冰冷的50mM Tris-HCl,pH7.4缓冲液预冷了。接着将此滤纸用1ml冰冷的50mM Tris-HCl,pH7.4缓冲液快速洗4次。借助于液体闪烁光谱测定法(Ready Protein and Beckmen LS6000IC,Beckman Instruments,Fullerton,CA)测定滤纸上捕获的〔3H〕5-HT量。对于饱和性实验，是通过对平行的饱和性实验的上清液取样来测定实际的游离放射性配体浓度，其中被结合的放射活性已通过离心分离出。对于以0℃和37℃温育的饱和性实验，〔3H〕5-HT的浓度范围分别是0.02-5nM，和0.6-63nM。非特异性结合界定在5-HT 10μM或1-萘基哌嗪(1-NP)10μM。对于竞争性实验，使用了不同药物的6-12个浓度，跨越了6个对数单位，〔3H〕5-HT的最后浓度是2nM。借助于Bradford的方法测定蛋白质，用牛血清白蛋白作标准。M.M.Bradford,Anal,Biochem.,72:248-254(1976)。统计学分析为了最好地适合于一位点或二位点结合模型，来自饱和实验的Kd和Bmax值可用部分F-检验(partial F-test)来检测。A.De Laan,et al,Mol,Pharmacol,21∶5-16(1981)。如下等式适用于一位点结合模型，
在此结合量(Bound)=〔3H〕5-HT特异性结合量，Bamx=最大结合位点数目，Kd=平衡离解常数，以及〔L〕=游离的〔3H〕5-HT浓度，如下等式适用于二位点结合模型，
在此结合量(Bound)=〔3H〕5-HT特异性结合量，Bmax1=高亲和性结合位点的最大数目，Bmax2=低亲和性结合位点的最大数目，Kd1=高亲和性位点的平衡离解常数，Kd2=低亲和性位点的平衡离解常数，以及〔L〕=游离的〔3H〕5-HT浓度。来自竞争性实验的IC50值，对IP3标准曲线的结合参数，以及来自IP3测定的EC50和Emax值，可通过对四个参数对数等式(parameter logistic equations)作非线性回归分析来确定(Systat,Systat Inc,Evanston,IL),A.De.Lean,etal,Mol.Pharmacol.21:5-16(1981)。可用Cheng-Prusoff等式将IC50值转换成Ki值。Y.Cheng,et al,Biochem.Pharmacol,22:73)。5-HT2B体外测定法通过颈脱法活杀雄性Wistar大鼠(150-375g，实验室提供，Indianapolis,IN)，制备胃底纵向片段用于体外测定。从1个大鼠胃底制备4个标本。如Hooker所述制备抽出的颈静脉环状标本，BloodVessels,14:1(1977)和M.L.Cohen,J.Pharmcol,Exp.Ther.227:327(1983)。将组织标本安装在器浴槽内，其中含有10ml改进的Krebs液，由如下成分结成(毫摩尔浓度)NaCl.118.2；KCl4.6；CaCl2·H2O,1.6；KH2PO4,1.2；MgSO4,1.2；葡萄糖10.0；和NaHCO3,24.8。使组浴液维持在37℃，并以95％O2和5％CO2平衡。使组织标本处于最适静止张力(4g)下，在暴露于待测药物之前使其平衡稳定约1小时。在带有Statham UC-3换能器的Beckman Dynograph上记录标本的等长收缩，以张力改变的克数表示。
测定近似的拮抗剂离解常数胃底标本对5-HT的非积蓄性收缩浓度-反应曲线，以及颈静脉标本的积蓄性浓度-反应曲线，可通过在洗去前面的浓度之后每隔15-20分钟逐步增加浓度来得到。每个激动剂浓度与组织标本保持接触大约2分钟，测定对每个化合物浓度的最大反应。ED50值以产生半数最大收缩的激动剂浓度表示。得到对照反应之后，组织标本以适当浓度的缓冲液或拮抗剂温育1小时。然后在存在拮抗剂的情况下，重复测定对5-HT的反应。每个组织标本的浓度反应仅采用了一个激动剂的一个拮抗剂浓度。通常在有缓冲液处理的情况下，持续的激动剂反应不会改变(平均剂量比是1.28+/-0.21)。
对于每个拮抗剂浓度，可按照如下等式确定近似的拮抗剂离解常数(KB)KB=〔B〕/(剂量比-1)在此〔B〕是拮抗剂浓度，剂量比是在拮抗剂存在时激动剂的ED50除以对照ED50。通常在存在拮抗剂时，浓度-反应曲线会发生平行位移。这些结果可以KB的负对数表示(即-logKB)。可用已知的方法进行计算。B.R.Zaborowsky,J.Pharmacol.Methods.4:)。在5-HT2B转化细胞中IP3的形成IP3的形成和提取对A600K-2-3-MTX细胞作悬浮培养，通过以200xg离心收集细胞，然后再悬浮在无蛋白质的细胞培养基中。将此细胞(2.5-3×106个细胞/管125μl)在37℃温育10分钟之后，加入125μl在无蛋白质培养基中稀释的待研究的化合物。所有的培育都以一式3份平行进行。当需用拮抗剂抑制5-HT的作用时，可先将细胞与拮抗剂37℃共温育10分钟，然后加入5-HT。加入激动剂之后，再在37℃对细胞悬液作旋转搅动和温育10秒钟(此10秒钟包括旋转动的时间)。然后加入250μl冰冷的10％高氯酸终止反应。先将样品试管在冰上冷却10分钟，然后以1500xg离心10分钟。离心之后，取400μl上清液作样品。下面的IP3提取程序是根据已发表的程序(E.S.Sharps.etal.以高效液相色谱法测定培养细胞中32P对磷酸化代谢产物的掺入，Anal.Biochem.124:421-424(1982)和K.A.Wreggett,et al.硝酸肌醇酯及其异构体的快速分离法，Biochem.J.245:655-660(1987))作了修改。将此400μl样品加到内有100μl 10mM EDTA.pH9.0的1.5ml mierofuge试管中。随后加入500μl1,1,2-三氯三氧乙烷/三-正-辛胺(1∶1,v/v)。将此试管剧烈旋转搅动5-7分钟，然后以1500xg离心2分钟，使之分离成三层。从上面的水层取样100μl用于以下述的测定法测定IP3的含量。
IP3结合测定按照从已发表的程序(P.F.Worley.et al.对结合在脑中的三磷酸肌醇酯受体的鉴定。J.Biol.Chem.262:(1987)和D.S.Bredt et al，对生物组织中1,4,5-三磷酸肌醇酯的一种快速、灵敏，和特异性的放射受体测定法，Biochem,mun,159:976-982(1989))改进的结合测定法，用大鼠小脑膜作为IP3-结合蛋白质的来源。通过匀浆大鼠小脑制备膜，在30倍体积的匀浆缓冲液(1mM EDTA和1mM 2-巯基乙醇，配制在50mMTris.HCl.pH7.7缓冲液中)中，用Tissumizer(Tekmar)匀浆器作匀浆，仪器设定位置65，匀浆15秒钟。在4℃以39800xg将此匀浆离心。重复此步骤3次以上，总共洗4次。最后将沉淀悬浮于30倍体积的IP3结合缓冲液(以64.3mM Tris.HCl.pH7.0缓冲液配制的1mM EDTA和1mM 2-巯基乙醇)中，-70℃冷冻待用。
将含有〔3H〕IP3和50μl结合蛋白质匀浆的结合缓冲液(350μl)加到已按上述提取步骤处理的100μl提取的IP3样品或已知的IP3标准品中。〔3H〕IP3的最后浓度是1nM。先将样品试管在0℃冷却15分钟，然后通过使用Brandel细胞收集器，使之过滤通过Whatmen GF/B滤纸〔预先用水浸湿，并用2ml冰冷的IP3漂洗缓冲液(配制在50mM Tris.HCl.pH9.0缓冲液中的1mM EDTA)预冷〕。然后用1ml冰冷的IP3漂洗缓冲液将滤纸快速漂洗2次。借助于液体闪烁计数器测定捕获在滤纸上的〔3H〕IP3含量。可通过与标准曲线相比较，确定样品中IP3的含量。
如果在加入5-HT之前，将表达5-HT2B受体的细胞预先与mianserin，催产素，萝芙素，或1-NP共同温育，则相对于仅加入5-HT,5-HT曲线已向移，Emax值也降低了。结合5-HT2A和5-HT2C受体的活性用如下列举的标准程序测定化合物与5-HT2A或5-HT2C受体结合的能力。
测定方法来自转化细胞株的膜制备品。
用以人-5-HT2A或5-HT2C受体稳定转化的AV12细胞(金黄地鼠成纤维细胞，ATCC no.CRL9595)制备细胞膜(Wainscott etal，新克隆的大鼠5-羟色胺2F受体的药理学特征，Mol.Pharmacol.48:419-426(1993))。概括地说，将表达待研究受体的细胞作悬浮培养，然后通过离心收集细胞。将细胞再悬浮在最少量低渗缓冲液，50mM Tris-HCl.pH7.4缓冲液中，-70℃冷冻备用。在测定的当天融化此悬液，并用50mM Tris-HCl,pH7.4缓冲液稀释至35ml/0.5×102个细胞的原细胞数，再在4℃以39800xg离心。将形成的沉淀通过旋转搅动重新悬浮，并在37℃温育10分钟，然后在4℃以39800xg离心。再次将此沉淀悬浮并离心。为了得到均匀的膜悬液，最后用Tissumizer匀浆器(Tekmer,Cincinnati,OH)将沉淀再作成悬液，仪器设定在75，处理10-15秒，对于表达人或大鼠5-HT2A受体的细胞，在67mMTris-HCl.pH7.4缓冲液中作悬液，或者对于表达人5-HT2C受体的细胞，在含有13mM MgCl2和0.67mM EDTA的67mM Tris-HCl,pH7.4缓冲液中作悬液。
5-HT2A·2C[125I]DOI结合研究用基本上用对〔3H〕5-HT结合5-HT2B受体所述的方法进行人5-HT2A或5-HT2C的结合研究，仅有如下区别。测定缓冲液含有(最后浓度)10mM优降宁(pargyline),9.75mM MgCl2,0.5mM EDTA,0.1％抗坏血酸钠，以及50mMTris-HCl,pH7.4。对于5-HT2A和5-HT2C受体，分别加入约40mg和30mg蛋白质在37℃温育30分钟，然后过滤通过Whatman GF/C滤纸，此滤纸已在0.5％(w/v)聚乙烯亚胺中预先浸透，并用4ml冰冷的漂洗缓冲液预冷了。随后用1ml冰冷的漂洗缓冲液快速洗滤纸4次。用γ-计数器检测捕获在滤纸上的〔125I〕DOI量。对于5-HT2C和5-HT2A受体，非特异性结合分别以10mM miansrin和1mM Ketansrin确定。对于竞争性实验，最后的〔125I〕DOI浓度大约是0.07-0.15mM。
统计学分析如以前所述(Wainscott et al.新克隆的大鼠5-羟色胺2F受体的药理学特征，Mol.Pharmacol.48:419-426(1993))对饱和性和竞争性测定曲线进行非线性回归分析。先对pK1值(即logK.，摩尔)进行差异的单向分析(One-way analysis)，随后进行Tukay-Kramer Honestly差异显著性测定(JMP；SAS Institute Inc.Cary,NC)。用Cheng-Prusoff(1973)等式将来自竞争性测定曲线的IC50转变成Kd值。对于〔125I〕DOI-标记的受体，可通过重新整理Cheng-Prusoff等式确定对5-HT2A或5-HT2C受体的〔125I〕DOI的Kd值，得到Kd=IC50-〔L〕，在此IC50是引起特异性〔125I〕DOI结合50％抑制的未标记DOI的浓度，〔L〕=游离的〔125I〕DOI浓度。在5-HT2A和5-HT2C转化的细胞中IP3的形成以如5-HT2B转化的细胞中IP3形成测定同样的方法，对5-HT2A和5-HT2C转化的细胞中IP3形成进行测定，区别在于，对于5-HT2C用人AHSIC-3S细胞，对于5-HT2A用人Hu2-3S细胞。
下面的实验用于测定5-HT2拮抗剂对治疗或缓解感冒或过敏性鼻炎症状的效果。实例#1对Wistar大鼠(250-350g,Harlan Sprague Dawley,Indianapolis,IN)，或Hartley豚鼠(250-350g,Charles River Laboratories,Inc.Wilmington,MA)用戊巴比妥钠麻醉(分别胶腹内注射65mg/kg或45mg/kg)。
暴露出股静脉，按50mg/kg剂量静脉内注射一种荧光染料伊文思兰(1ml/kg)。大约2分钟之后，再静脉内注射一次mCPP,α-甲基5-羟色胺，或生理盐水。在血液中伊文思兰与蛋白质络合，对蛋白质外渗起标记物作用。正好在注射激动剂或生理盐水后15分钟，通过放血杀死动物，冲洗出血管中遗留的血液和染料。夹住动物的后腔静脉和主动脉，并切开右心房以便于操作。通过对左心室注射生理盐水(40ml)，以大约lmL/秒的灌流速度进行灌流放血。
分离出双侧的鼻粘膜样品，在纸巾上吸干并称重。然后将样品分别放入加有3ml甲酰胺的试管内，在37℃温育18-24小时。温育之后从组织样品中分离出甲酰胺，用Beckmen OU-7型分光光度计在620nm测定其光密度。用三个已知浓度伊文思兰染料的光密度绘制标准曲线，根据标准曲线可确定未知样品的伊文思兰染料浓度。通过原先的组织样品重量，对全部测定值进行校正。结果静脉内注射mCPP或α-甲基5-羟色胺，与注射生理盐水的对照相比较，都可引起鼻粘膜组织中以伊文思兰染料指示的蛋白质渗出量增加。实验#2对Wistar大鼠(250-350g,Harlan Sprague Dawley,Indianapolis,IN)，或Hartley豚鼠(250-350g,Charles River Laboratories,Inc.Wilmington,MA)用戊巴比妥钠麻醉(分别腹膜内注射65mg/kg或45mg/kg)。
暴露出股静脉，以50mg/kg剂量的伊文思兰和某一剂量的如下化合物之一合并静脉内给药6-甲基-1-〔(2-氯-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐、螺-9,9-〔2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氢化萘基〕-5-甲基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚、6-甲基-1-〔(2-溴-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚，或6-碘-1-〔(3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐。大约2分钟之后，再静脉内注射一次mCPP,α-甲基5-羟色胺，或生理盐水。在血液中伊文思兰与蛋白质络合，对蛋白质外渗起标记作用。正好在注射激动剂或生理盐水后15分钟，通过放血杀死动物，冲洗出血管中遗留的血液和染料，夹往动物的后腔静脉和主动脉，并切开心房以便于操作。通过对左心室注射生理盐水(40ml)，以大约1ml/秒的灌流速度进行灌流放血。
分离出双侧鼻粘膜样品，在纸巾上吸干并称重，然后将样品分别放入加有3ml甲酰胺的试管内，在37℃温育18-24小时。温育之后从组织样品中分离出甲酰胺，用Beckman OU-7型分光光度计在620nm测定其光密度。用三个已知浓度伊文思兰的光密度绘制标准曲线，根据标准曲线可确定未知样品的伊文思兰染料浓度。通过原先的组织样品重量，对全部测定值进行校正。结果静脉内注射mCPP或α-甲基5-羟色胺，与注射生理盐水的对照相比较，都可引起鼻粘膜组织中以伊文思兰染料指示的蛋白质渗出量增加。在注射激动剂之前2分钟给予如下化合物之一时，对激动剂诱发的鼻粘膜组织蛋白质渗出增加有剂量依赖性抑制作用6-甲基-1-〔(2-氯-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐、螺-9,9-〔2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氢化萘基〕-5-甲基-1,2,3,9-四氢-8H-吡啶并吲哚、6-甲基-1-〔(2-溴-3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚，以及6-碘-1-〔(3,4-二甲氧苯基)-甲基〕-1,2,3,4-四氢-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚盐酸盐。制剂虽然有可能不作任何配制直接地给予本发明方法中使用的化合物，但是，这些化合物通常是以药物制剂的形式给药，含有药剂学允许的赋形剂以及至少一种活性成分(本发明的化合物)。这种组合物可含有按重量大约0.1％-90％本发明化合物。这些组合物可以通过各种途径给药，包括口服，直肠内，透皮(贴剂)，皮下注射，静脉内注射，肌肉内注射，以及鼻内给药。本发明方法中使用的许多化合物作为注射和口服组合物都有效。这些组合物可按照药剂学领域中所熟知的方法来制备，含有至少一种活性化合物。参见例如，Remington′s PharmaceuticalSciences,(16th ed.1980)。
在制备用于本发明的组合物时，通常是将活性成分同赋形剂混合，被赋形剂稀释或者被封装在这样一种可成为胶囊、药囊、纸型，或其它容器形式的载体中。当赋形剂作为稀释剂时，它可以是固体，半固体或液体物质，对活性成分起赋形剂、载体或基质的作用。这样，该组合物可成为如下多种形式片剂、丸剂、粉剂、锭剂、药囊剂、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆剂、气雾剂(固体或在液体基质中)、软膏剂，例如含有按重量达10％的活性化合物，软、硬明胶胶囊剂、栓剂、无菌注射液，以及无菌封装的粉剂。
制备一种制剂时，有可能必须先将活性化合物碾磨成适当大小的颗粒，然后与其它成分合并。如果活性化合物是基本上不溶解的，则通常被碾磨成小于200目的颗粒。如果活性化合物是基本上水溶性的，则颗粒大小通常借助于碾磨调整，以便在制剂中获得基本上一致的，例如约40目的颗粒分布。
某些适合的载体，赋形剂和稀释剂的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍质、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、黄蓍质、明胶、水、糖浆和甲基纤维素。这类制剂还可以补充包括润滑剂如滑石粉、硬酯酸镁，和矿物油，湿润剂，乳化剂和悬浮剂，防腐剂如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯，甜味剂，以及芳香剂。本发明的组合物还可以配制成在使用本领域熟知的方法对患者给药后，使活性成分能快速释放，缓慢释放，或延迟释放。
本发明的化合物还可能用已知的透皮给药系统或赋形剂，通过透皮给药。最优选地是，将本发明的化合物用渗透增强剂混合，并掺合成贴剂或类似的给药系统，渗透增强剂包括，但不局限于，丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯，和氮杂环烷烃-2-酮。另一些赋形剂包括胶凝剂，乳化剂和缓冲液，也可以加入到所述的透皮制剂中。
对于口服给药，理想地可将本发明的化合物同载体和稀释剂混合，并模压成片剂或封装在明胶胶囊中。
优选地可将本组合物配制成单位剂量形式，每个剂量含有活性成分大约0.05-150mg，更通常是大约1.0-100mg。名词“单位剂量形式”指的是适合于作为单一剂量用于患者或其它哺乳动物的物理学独立的单位，每个单位含有经计算可产生理想治疗效果的预定量活性物质，并与适当的药物赋形剂结合。
本活性化合物通常在一个很宽的剂量范围内都是有效的。例如，正常情况下每天的剂量在大约0.01-30mg/kg体重的范围内。用于成年人治疗时，特别优选的剂量范围是大约0.1-15mg/kg/天，单次或分次用药。但是，应该认识到，本化合物的实际给药量将由医生决定，根据有关的情况和患者症状的严重程度决定，有关的情况包括待治疗的病情，选择的给药途径，实际给予的一个或几个化合物，患者的年龄、体重，以及个体反应，因此，不打算以上面的剂量范围对本发明的范围作任何形式的限制。在某些情况下，低于上述范围的下限剂量水平可能更适合，而另一些情况下，可能使用更大的剂量也不引起任何有害的副作用，只要将此较大的剂量先分成几个较小的剂量用于全天给药。
为了更充分地说明本发明的实施效果，将提供下面的制剂实施例。这些实施例只是说明性的，不打算对本发明给予限制。这些制剂可能使用本发明的任何化合物作为活性成分(化合物)。
制剂1配制含有如下成分的明胶硬胶囊成分含量(mg/胶囊)活性成分(一种或几种)100.0淀粉235.0硬脂酸镁5.0将上述成分混合，以340mg的量装入每个明胶硬胶囊。
制剂2用下面的成分配制片剂成分 含量(mg/片)活性成分(一种或几种)
100.0微晶纤维素 125.0胶态二氧化硅
硬脂酸5.0将各成分混匀，模压成片剂，每片重240mg。
制剂3配制含有如下成分的干粉吸入制剂成分重量％活性成分(一种或几种) 5乳糖 95将活性成分与乳糖混匀，混合物被装入干粉吸入器。
制剂4每片含有30mg活性成分的片剂按如下配制成分 含量(mg/片)活性成分(一种或几种)30.0mg淀粉45.0mg微晶纤维素
35.0mg聚乙烯吡咯烷酮(10％水溶液)
4.0mg羧甲基淀粉钠4.5mg硬脂酸镁0.5mg滑石粉
1.0mg总量120.mg使活性成分，淀粉和纤维素通过No.20目的U.S筛，并彻底混匀。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与形成的细粉混匀，然后使之通过16目的U.S.筛。将这样产生的颗粒在50-60℃干燥，再通过16目的U.S筛。先使羧甲基淀粉钠，硬脂酸镁和滑石粉通过No.30目U.S筛，然后将它们加入到上面的颗粒中，混匀后在压片机上压片，产生每片重120mg的片剂。
制剂5按如下制备每个含有40mg药物的胶囊成分
含量(mg/胶囊)活性成分(一种或几种) 40.0mg淀粉 109.0mg硬脂酸镁 1.0mg总量 150.0mg
将活性成分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混匀，通过No.20目U.S筛，以每个150mg的量装入明胶硬胶囊内。
制剂6按如下制备每个含25mg活性成分的栓剂成分
含量活性成分(一种或几种)
25mg加饱和脂肪酸甘油酯至
2000mg使活性成分通过No.60的U.S.筛后，悬浮在预先用最少必需热量熔化的饱和脂肪酸甘油酯内。然后将此混合物倒入通常2.0g容量的栓剂模具中，使其冷却。
制剂7按如下配制每5.0ml剂量含有50mg药物的悬浮剂成分
含量活性成分(一种或几种)
50.0mg黄原胶4.0mg羧甲基纤维素钠(11％)微晶纤维素(89％)
50.0mg蔗糖
1.75g苯甲酸钠
10.0mg香料和色素适量纯水
5.0ml将药物，蔗糖和黄原胶混匀，通过No.10目的U.S.筛，然后与预先溶解于水中的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合。以少许水稀释苯甲酸钠，香料和色素，并加到上面的混合物中，同时搅拌。然后加入足够的水至所需的体积。
制剂8按如下制备每个含有15mg药物的胶囊成分 含量(mg/胶囊)活性成分(一种或几种)15.0mg淀粉407.0mg硬脂酸镁3.0mg总量425.0mg
将活性成分，纤维素，淀粉和硬脂酸镁混匀，通过No.20目的U.S.筛，以每个425mg的量装入明胶硬胶囊。
制剂9按如下制备静脉注射制剂成分
含量活性成分(一种或几种)
250.0mg等渗生理盐水
1000ml制剂10按如下制备局部用药制剂成分
含量活性成分(一种或几种)
1-10g乳化状蜡
30g液体石蜡
20g白凡士林
至100g将白凡士林加热至熔化。掺入液体石蜡和乳化状蜡，搅拌至溶解。然后加入活性成分，继续搅拌至均匀分散。再使混合物冷却成固体。
制剂11按如下制备每片含有10mg活性成分的舌下片或含片成分每片含量活性成分(一种或几种)10.0mg甘油210.5mg水
143,0mg柠檬酸钠4.5mg聚乙烯醇26.5mg聚乙烯吡咯烷酮
15.5mg总计410.0mg将甘油，水柠檬酸钠，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮混合在一起，连续搅拌并保持在大约90℃。当聚合物成为溶液后，使此溶液冷却至大约50-55℃，缓慢地加入药物，使之混匀。将此均匀的混合物倒入由惰性材料制成的模具中，制成厚度约2-4mm的含有药物的扩散基质片。然后将此扩散基质片切制成具有适当大小的单个片剂。
另一种用于本发明方法的优选制剂是采用透皮给药法(“贴剂”)。这种透皮性贴剂有可能用于使本发明的化合物按控制剂量连续或间断地浸入体内。用于药剂给药的透皮贴剂，其构成和用途是本领域熟知的。参见例如U.S.Patent 5,023,252,发布的，在此引入作为参考。这种贴剂可能被构成用于连续、间断地或者需要时给予药剂。
普遍优选的间接技术通常包括，通过将亲水性药物转变成脂溶性药物或药物前体，把组合物配制成具有药物潜伏作用(drug latentiation)。潜伏作用一般可通过如下处理达到阻断存在了药物上的羟基，羰基，硫酸基和伯氨基，使药物变成更具脂溶性，更适合于透过血-脑屏障。另一方面，亲水性药物的给药效果可能通过高渗液的动脉内渗入作用可暂时开放血-脑屏障而提高。
用于对本发明方法中所用化合物给药的剂型，可能取决于所使用的特定化合物，据给药途径和化合物所预期的药物动力学分布类型，以及患者的状况。
1．具有作为5-HT受体拮抗剂活性的化合物或组合物在制备治疗或缓解哺乳动物感冒或过敏性鼻炎症状的药物中的应用。
2．具有作为5-HT2受体拮抗剂活性的化合物或组合物在制备治疗或缓解哺乳动物感冒或过敏性鼻炎症状的药物中的应用。
3．根据权利要求2的应用，其中的5-HT2受体拮抗剂是5-HT2A受体拮抗剂。
4．根据权利要求2的应用，其中的5-HT2受体拮抗剂是5-HT2B受体拮抗剂。
5．根据权利要求2的应用，其中的5-HT2受体拮抗剂是5-HT2C受体拮抗剂。
6．下式的5-HT2受体拮抗剂或者其可药用盐或溶剂化物在制备治疗或缓解哺乳动物感冒或过敏性鼻炎症状药物中的应用
其中R1是氢或C1-C3烷基；R3是氢或C1-C3烷基；R6选自氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、卤素、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C2-C6)烯基、COR5、C1-C10烷酰基、CO2R5′、(C1-C6烷基)m氨基，NO2、-SR5和OR5；R7和R8独立地选自氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、NO2、卤素、卤代(C1-C6)烷基、卤代(C2-C6)烯基、COR5、C1-C10烷酰基、C7-C16芳烷基、CO2R5′、(C1-C6烷基)m氨基，-SR5和OR5；n是1、2或3；n′是1、2或3；m是1或2；R5独立地是氢或C1-C4烷基；R5′是C1-C4烷基；---是任选的双键。
7．下式的5-HT2受体拮抗剂或者其可药用盐或溶剂化物在制备治疗或缓解哺乳动物感冒或过敏性鼻炎症状药物中的应用
其中Q是氢或(CHR2)R4；R1是氢或C1-C3烷基；R2是氢或C1-C3烷基；R3是氢或C1-C3烷基；R4是C5-C8环烷基，取代的C5-C8环烷基，C5-C8环烯基，取代的C5-C8环烯基，二环的或取代二环的；A选自下式基团
其中R6和R7独立地是氢，C1-C6烷基、C2-C6烯基、卤素、卤代(C1-C6)烷基，卤代(C2-C6)烯基、COR5、C1-C10烷酰基、CO2R5′、(C1-C6烷基)m氨基，NO2、-SR5或OR5；m是1或2；R5独立地是氢或C1-C4烷基；R5′是C1-C4烷基；R8独立地选自R6基团，取代的C3-C8环烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基-(C1-C3)烷基、C5-C8环烯基、取代的C5-C8环烯基、C5-C8环烯基-(C1-C3)烷基、C7-C16芳烷基，或者R6和R7同基团A的碳原子一起构成5-8元碳环。
8．一种药物组合物，它包括用于治疗或缓解哺乳动物感冒或过敏性鼻炎症状的，具有作为5-HT2受体拮抗剂活性的化合物或组合物。
本发明提供了一种治疗或缓解感冒或过敏性鼻炎症状的方法,包括对需要治疗的哺乳动物给予5－HT
文档编号A61P43/00GK194611
公开日日 申请日期日 优先权日日
发明者K·W·约翰逊, D·L·G·纳尔逊, L·A·菲布斯 申请人:伊莱利利公司