6319例高危型人乳头瘤病毒核糖核酸定量检测的结果分析
作者信息:南京柱1，李秀娟2，杨
秀1，童红莉1，李海潮1，田亚平1
(1.解放军总医院生化科，北京.新华医院检验科，北京101100)
摘要：目的探讨健康女性高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染亚型分布情况及年龄特点。方法
采用双通道实时荧光定量PCR检测方法，对6319例女性高危型HPV-DNA 16型、HPV-DNA 18/45型、HPV-DNA
31型、HPV-DNA 33/52/58/67型进行定量分析，比较不同年龄组HPV-DNA阳性率及不同型别HPV-DNA的分布。结果
6319例健康女性中检出HPV-DNA阳性患者794例，总阳性率为12.6%。51～60岁组与≥61岁组的阳性率均为15.8%，且高于其他年龄组差异有统计学意义（P&0.05），其次为21～30岁组阳性率为13.8%。不同类型HPV-DNA阳性率从高到低依次为HPV-DNA
33/52/58/67型（69.3%）、HPV-DNA 16型（21.5%）、HPV-DNA
18/45型（12.1%）、HPV-DNA 31型（6.9%）。结论
高危型人乳头瘤病毒核糖核酸定量检测可用初筛女性宫颈癌的人群，更应作为年龄在38～58岁的女性健康体检时的必选项目，且对宫颈癌的诊断和药物治疗具有重要意义。
关键词：高危型;人乳头瘤病毒;宫颈癌;双通道;
实时荧光定量PCR
Detection of High
Risk Human Papilloma Virus in 6319 Cases
Jing-zhu，LI Xiu-juan，YANG
Xiu，TONG Hong-li，LI Hai-chao，TIAN Ya-ping
(Department of
Clinical Biochemistry, Chinese PLA General Hospital, Beijing,
100853, China)
Abstract：Objective To investigate the genotype and age
distribution of high risk papilloma virus (HPV) infection in
female. Methods The HPV-DNA genotypes HPV-DNA 16, HPV-DNA 18/45,
HPV-DNA 31 and HPV-DNA 33/52/58/67 in 6319 cases were detected by
dual-channel real time fluorescence quantitative PCR, and the high
risk HPV-DNA genotypes of positive rate and distribution in
different age groups were analyzed. Results 794 cases positive
samples were detected in 6319 female with a positive rate of 12.6%.
The age 51-60 group and ≥61age group had same positive rate of
15.8% and significantly higher than that of the other groups
(P&0.05). The age 21-30 group had the secondly
highest positive rate (13.8%). Different high risk genotypes of
positive rate from high to low was HPV-DNA 33/52/58/67 (69.3%),
HPV-DNA 16 (21.5%), HPV-DNA 18/45 (12.1%) and HPV-DNA 31 (6.9%).
Conclusion High risk HPV-DNA testing is an effective screening
method for cervical cancer. It should be a project of required to
choose in health examination for female in the age from 38.2 -
57.6, and it has great significance in diagnosis and treatment of
cervical cancer.
Key words: High
HPV; C Dual- Real time fluorescence
quantitative
人乳突病毒（Human
virus，HPV）是一种乳突病毒，感染人体的表皮与黏膜组织。目前约有130类型的HPV被判别出来，有些类型的HPV入侵人体后会引起疣或癌症，尤其是与女性宫颈癌的发生、发展密切相关[1]。宫颈癌作为妇科恶性肿瘤之一，几乎所有的宫颈癌细胞中均可检测到HPV-DNA存在[2]。但由于HPV感染通常没有明显的临床症状，其检出率也因各种方法而异。本文开展高危型HPV-DNA定量检测，有效的筛查高危人群、监控HPV感染患者药物治疗的疗效。本文就HPV感染女性的年龄分布及不同年龄段HPV亚型的分布及病毒含量进行分析。
对象和方法
2010年7月至2011年7月在本院健康体检中心进行健康体检的女性6319例，年龄21～80（46±9）岁。分为21～30岁组;31～40岁组;41～50岁组;51～60岁组;≥61岁组。
试剂与仪器 HPV基因分型定量检测试剂盒（REALQUALITY
RQ-HPV HR,AB ANALITICA
s.r.l）由意大利高级生物科技有限公司生产，由深圳创强医疗器械有限公司提供。仪器使用ABI 7300
双通道荧光PCR扩增检测仪，并采用双通道实时荧光定量PCR检测方法，通过5组高特异性引物和探针，能在一次反应中同时对高危型HPV-DNA
16型、HPV-DNA 18/45型、HPV-DNA 31型、HPV-DNA
33/52/58/67型进行分型定量。
2．2 标本采集
用无菌生理棉球洗去宫颈外分泌物，将棉拭子插入宫颈管内鳞状上皮交界处采样，转动3～4圈，停留数秒，将棉拭子置于无菌容器，密闭送检。
向无菌容器中加入1.5mL生理盐水，充分震荡混匀，挤干棉拭子；吸取全部液体转移至1.5mL离心管中，16000rpm,离心5min；去上清，沉底中加入50&LDNA提取液充分混匀；100℃水浴10min，待冷却，16000rpm,离心5min；取上清2&L加入事先准备好的反应液中进行DNA扩增。反应体系为20&L。
2．2结果判定
当HPV定量值≥1.00E+2拷贝数/mL，则判定该定量值（基因拷贝数）为此待测样本的定量值（阳性）；当HPV定量值小于1.00E+2拷贝数/mL时，则判定此待测样本为阴性。
统计学方法
数据采用SPSS
17.0进行统计学分析。率和构成比的比较采用χ2检验，P&0.05为差异有统计学意义。
HPV感染者年龄分布
HPV感染者年龄分布见图。
从图中可见，6319例健康体检者中HPV感染者为794例，年龄分布在38.2～57.6岁。2
各年龄组HPV-DNA阳性率
各年龄组HPV-DNA阳性率，见表1。
中可见，6319例健康体检者中，有794例阳性，总阳性率为12.6%。各年龄组数据显示，51～60岁组与≥61岁组的阳性率均为15.8%，显著高于其他组，差异有统计学意义（P&0.05）。其次为21～30岁组，阳性率为13.8%。数据显示，30岁以后随着年龄的增加HPV-DNA阳性率也随之增加。
不同年龄组HPV-DNA亚型分布
不同年龄组HPV-DNA亚型分布，见表2。
从表3 可见，HPV-DNA
33/52/58/67型的
基因拷贝数较其他基因型拷贝数高为4.34E+6拷贝数/mL，且HPV-DNA
18/45型的基因拷贝数最低为1.29E+5拷贝数/mL。
人乳头瘤病毒（HPV）作为一种分子较小（直径为55nm）的DNA病毒，具有高度的宿主专一性，感染人类生殖器官的皮肤及黏膜,并且与女性宫颈癌的发生息息相关。流行病学调查数据显示，女性宫颈癌发生的根本原因为高危型HPV-DNA的持续感染。高危型HPV-DNA
16型、HPV-DNA 18型、HPV-DNA 31型、HPV-DNA
33型等，易造成宫颈癌。
本文表明，在6319例健康体检的女性中，感染高危型HPV-DNA阳性例数为794例，总阳性率为12.6%，低于国内文献报道的阳性率[3]。高危型HPV-DNA感染者年龄分布在38.2～57.6岁，与王平等[4]报道的宫颈癌发病年龄40.1～59.9岁相符。数据显示，21～30岁组阳性率为13.8%（35例）；51～60岁组阳性率为15.8%（243例）；≥61岁组阳性率为15.8%（79例）；且51～60岁组与≥61岁组的阳性率显著高于其他年龄组（P&0.05），而在31岁之后HPV-DNA感染率呈逐渐增高的趋势。高危型HPV-DNA感染具有两个感染高峰：
21～30岁组和51岁以上年龄组。21～30岁组阳性率高与性行为因素有关，且大多数HPV感染都可以通过机体的免疫系统清除。51岁以上组阳性率高与免疫因素有关，随着年龄的增长免疫功能受损或免疫缺陷使得女性更容易感染HPV，引起临床症状及病理改变，且导致癌前病变[5]。
本文采用双通道实时荧光定量PCR检测方法，对HPV-DNA 16型、HPV-DNA
18/45型、HPV-DNA 31型、HPV-DNA 33/52/58/67型进行定量分析。在结果中出现HPV-DNA
18/45型或者HPV-DNA 33/52/58/67型阳性，说明该标本感染了一个或多个HPV基因分型。数据显示，HPV-DNA
33/52/58/67型阳性率最高达69.3%，这可能与本试剂盒一次扩增可同时检测HPV-DNA
33、52、58、67型四种基因型有关。其他类型阳性率从高到低依次为HPV-DNA 16型为21.5%、HPV-DNA
18/45型为12.1%、HPV-DNA
31型为6.9%。HPV感染型别具有地域差异性[6]，且在各种族及民族中的差异可能与各个地区的种族和民族的遗传特点有关[7]。
目前对于HPV感染暂无有效治疗方法。但本研究表明，年龄在38～58岁的健康女性有必要每年至少做一次宫颈脱落细胞HPV-DNA分型检测，以作为宫颈癌的早起筛查，对宫颈癌的早起诊断和治疗具有重要意义。
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人乳头瘤病毒检测在临床应用中的误区
本文刊登于《中国实用妇科与产科杂志》5-398页作者：隋&&龙，丛&&青作者单位：复旦大学附属妇产科医院，上海&200011通讯作者：隋龙，电子信箱suilong@& & & &高危型HPV的持续感染是宫颈癌和宫颈癌前病变发生的重要原因。高危型HPV检测有效提高了宫颈癌前病变检测的灵敏度，显著降低了漏诊率，已成为宫颈癌筛查的重要方法。目前，国际上HPV检测主要有三大策略：21岁以上细胞学的分流管理、25岁以上初筛、30岁以上与细胞学联合筛查。此外，还可用于宫颈病变患者治疗后疗效评估、HPV疫苗注射后效果随访等。但在临床应用中，由于HPV检测方法众多，各种检测方法的设计、原理以及临床阳性阈值设定存在差异等因素，容易存在以下误区。1&误区一：检测低危型HPV具有临床价值& & & &临床上我们常看到患者HPV检测报告上包括低危型，事实上，检测低危型HPV是一种误解，误认为低危型与高危型同样具有患癌风险。国家食品药品监督管理总局（CFDA）发布了《人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测及基因分型、试剂技术审查指导原则》明确了我国HPV检测的型别范围——只针对用于宫颈癌相关预期用途的18种HPV基因型核酸检测。该指导原则依据世界卫生组织（WHO）、国际癌症研究机构（IARC）及其他国际组织的研究成果，建议将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68共13种基因型列为高危型，26、53、66、73、82共5种基因型列为中等风险型，要求均只针对用于宫颈癌相关预期用途的上述18种HPV基因型核酸检测；同时专门指出，低危型HPV一般与尖锐湿疣或低级别鳞状上皮内病变相关，检测的临床价值尚不明确。因此，对无法起到宫颈癌筛查作用的低危型HPV进行检测是一种误区。2误区二：HPV检测的目的在于查找有无病毒& & & & 80%的妇女一生中都可能感染HPV，其中大多数是一过性感染，能够被自身免疫系统清除，因而并不产生病变，也就是说感染不等于病变。因此，HPV检测是用于查找宫颈病变[如宫颈上皮内瘤变（CIN）2+]的患者，而不是用于查找病毒有无！目前，HPV检测技术还不能很好满足临床需求。理想的HPV检测方法需要高度的临床灵敏度和特异度，临床灵敏度不同于分析灵敏度，前者需要大样本长时间的临床验证试验才能获得，而分析灵敏度则是指实验室条件下检测方法所能检测出HPV的最低HPV拷贝数或滴度，前者是针对临床查找患者，而后者目的在于查找HPV病毒的有无。因此，一个好的临床HPV检测方法在保证对CIN2+的患者具有非常高的检出率的同时，尽量减少因未经临床验证而无法确定临床检测阈值（cut off）而造成的高假阳性率。CFDA在《体外诊断试剂HPV检测的性能要求》指南中明确指出，一项HPV检测技术如需获得审批，必须要有确定的cut off值，这是临床检测判定为阳性和阴性的界限。2013年WHO《宫颈癌筛查和管理指南》中，针对HPV检测cut off值的设定有具体建议，推荐高危型HPV检测cut off值≥1.0 ng/L。但是，即使是FDA认证的高危型HPV检测技术阳性预测值也不够高（4.3%～20.1%）。临床实践中使用未经过临床验证试验评估的HPV DNA检测方法易造成过度诊疗，引起一系列社会问题和医疗成本的增加。3误区三：HPV定量检测数值越高，病变越严重&&&&& 目前，临床使用的所有HPV检测方法尚无定量HPV检测方法；从现有检测方法看，难以溯源或重复是无法实现定量检测的根本原因所在。二代杂交捕获（the hybrid capture，HC2）HPV检测技术采用相对光单位/临床阈值（RLU/CO，relative light units/cut off）检测高危型HPV。不少临床医生误认为RLU/CO值越高，病变越严重，RLU/CO值越低，病变越轻。事实上，只要HPV阳性（RLU/CO≥1.0），无论RLU/CO值高低，均可导致CIN和宫颈癌。一项对349例细胞学ASC-US的HC2阳性行宫颈组织学检查的研究发现，组织学检查正常、CIN1、CIN2+的RLU/CO中位数分别是42.68，146.45和156.43，且3组的可信区间广泛重叠，结论是RLU/CO值与CIN的存在显著相关，但与病变严重程度关系不大。需要注意的是，该研究中的RLU/CO值是被检测者HPV病毒载量的总和，也就是说如果感染多种亚型，RLU/CO值代表其所有阳性亚型病毒载量总和。而对于仅感染同一种HPV亚型（如HPV16）的妇女而言，测定值越高，发生CIN2+的风险有所增加（HR：1.34，95%CI 1.10～1.64）。总之，HPV检测值高低和病变严重程度之间无绝对对应关系。&4误区四：不同HPV检测技术的检测结果应当相同&&& & & &&事实上，临床上HPV检测产品众多，由于检测目的基因片段、方法及HPV亚型不同，不同产品的检测结果可以不同。目前，共有4种HPV检测技术通过美国FDA认证，用于宫颈癌初筛，即HC2、Cervista、Cobas、Aptima，分别于2003年、2009年、2011年4月和2011年10月通过美国FDA认证。HC2通过核酸杂交的信号扩大法检测13种高危型HPV（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）基因组所有基因片段，即E1、E2、E4、E5、E6、E7、L1、L2、LCR共9个基因片段，由于HC2试验无需初级放大，因此，很少受交叉污染和标本采集因素的影响，而这些因素有时可能对PCR试验和结果造成影响；Cervista采用Invader——一种用于检测特定核苷酸序列的信号放大法来检测14种高危型HPV（前文13种及66亚型）的L1、E6、E7基因片段；Cobas采用聚合酶链反应（PCR）的靶扩增法检测上述14种高危型HPV L1基因片段，在美国是惟一经FDA批准单独用于宫颈癌初筛的HPV检测技术；Aptima采用转录介导扩增（TMA）的靶扩增法检测上述14种高危型HPV的E6、E7 mRNA片段。所以，即使是FDA认证的HPV检测技术，检测的目的基因片段、方法和亚型也不尽相同，结果也可能不同。&&&& & &研究表明，65%～75%的宫颈癌由HPV16和18亚型引起，其他高危型占25%～35%。因此，HPV16和18亚型相比其他亚型致癌风险更高，这也是FDA批准Cobas HPV16、18和非16、18分型检测方法用于25岁以上妇女初筛的重要原因。值得关注的是，不同于前3种HPV DNA检测技术，Aptima检测目标为HPV E6、E7 mRNA。当HPV DNA在宿主基因组外复制时，E6、E7 mRNA不表达或低表达，当HPV DNA整合进入宿主基因组后，E6和E7癌基因激活，转录水平和蛋白表达升高易导致宫颈病变。近年来，多项大型临床研究表明，Aptima检测HPV的灵敏度与HC2、Cobas相当，而特异度和阳性预测值显著提高。有意义的是，两个独立研究小组分别对细胞学结果异常，进行HPV分流时将Aptima和HC2进行比较研究，结果显示，Aptima相比HC2减少了21%～23%的阴道镜转诊率。这意味着在保证宫颈病变检出率不变的前提下，Aptima方法的假阳性率更低，从而减少不必要的阴道镜转诊和宫颈活检率。5误区五：HPV是宫颈癌发生的必要条件，HPV阴性者不会发生宫颈癌&&& & & &&临床上，我们会发现HPV阴性者同样可能查出宫颈癌。究其原因，一方面是特殊类型宫颈癌如宫颈微偏腺癌、内膜样癌、浆液性癌、透明细胞癌等可能与HPV感染无关，这类宫颈癌蜡块组织中HPV检测阳性率仅为0～27.3%；另一方面，任何一种HPV检测方法都存在一定假阴性率，这与检测目的基因片段、检测方法及其灵敏度有关。因此，必须清楚地意识到，现有筛查方法尚无法达到100%的敏感度和特异度。6误区六：&90%HPV感染是一过性的，在1～2年内清除&&&&&&原文来源于美国癌症协会、美国阴道镜和宫颈病理协会以及美国临床病理协会于2012年联合推出的宫颈癌预防和早期筛查指南，依据于以下两篇文献。一篇是2007年发表于J Infect Dis题为《细胞学ASC-S或LSIL妇女2年HPV持续感染的前瞻性研究》的论著。该研究纳入美国4个临床中心6个月内5060例涂片筛查提示ASC-US（3488例）和（1572例）妇女，统计时研究者剔除了所有随访期间诊断为CIN3或癌症妇女，结论是91%（（95% CI 90%～92%）入组时HPV感染者在24个月内清除。我们认为，剔除所有随访期间诊断为CIN3或癌症妇女并不正确，原因是入组时已经过较充分的细胞学和组织学诊断。因此，91%妇女在24个月内清除这一比例被高估。另一篇文献是2008年发表于J Natl Cancer Inst题为《HPV的快速清除及持续性感染临床焦点的应用》的文章，我们认为这项来自哥斯达黎加纳入599例的800次高危型HPV检测阳性、入组时细胞学和组织学检查排除CIN2+的人群队列研究统计分析更合理。研究者每6个月随访1次共随访30个月，结论是感染一般快速清除，随访6个月和12个月时分别55%（95%CI 52%～59%）和67%（95%CI 63%～70%）的HPV感染清除；持续感染超过12个月、随访30个月时，＜30岁妇女30个月HPV持续感染率为9%（35/393，95%CI 6%～12%）≥30岁妇女为21%（86/407，95%CI 17%～25%）。91%这一数据与1998年发表于N Engl J Med题为《年轻妇女宫颈阴道HPV感染的自然转归》一致性高，研究入组608例年龄（20±3）岁的女大学生，调查其HPV感染的自然转归，结论是12个月时70%妇女转阴，24个月仅9%持续感染。&&&&因此，2年91%的清除率是限定在年龄＜30岁的妇女中，＞30岁妇女中79%～80%是一过性感染。说明HPV感染自然转阴率与年龄相关，当年轻妇女无法清除HPV时进入持续感染阶段，持续感染状态的妇女随着年龄增大比例增加，这是对年龄较大或性生活时间较长的妇女进行HPV检测更有意义的原因所在。7误区七：HPV检测适用于所有妇女& & & &&临床上应避免对＜25岁的妇女进行HPV初筛，应在细胞学ASC-US时进行HPV分流。原因一：这个年龄段的妇女HPV感染率最高，但大部分（91%）会在2年内自行清除病毒。原因二：宫颈癌多见于40岁以上妇女，持续高危型HPV感染到发生宫颈癌需要较长时间，从CIN发展为浸润癌一般需10～15年，但约25%的患者5年内发展为浸润癌。年，美国检测了1921例代表性妇女人群感染率，结果显示，14～59岁美国妇女HPV总感染率为26.8%（95%CI 23.3%～30.9%），14～19岁妇女HPV感染率为24.5%（95%CI 19.6%～30.5%），20～24岁妇女HPV感染率为44.8%（95%CI 36.3%～55.3%），25～29岁妇女HPV感染率为27.4%（95%CI 21.9%～34.2%），30～39岁妇女HPV感染率为27.5%（95%CI 20.8%～36.4%），40～49岁妇女HPV感染率为25.2%（95%CI 19.7%～32.2%），50～59岁妇女HPV感染率为19.6%（95%CI 14.3%～26.8%）。因此，虽然FDA批准Cobas对25岁以上妇女使用HPV进行宫颈癌初筛，我们的观点是对年龄＜30岁妇女使用细胞学初筛和HPV分流的策略，即细胞学ASC-US妇女行HPV检测，30岁以上妇女可进行细胞学和HPV联合筛查。因此，对于＜30岁的妇女，尤其＜25岁，不宜轻易进行HPV检测，避免HPV一过性感染导致不必要的心理负担和家庭矛盾。同时，不应短期如3～6个月内反复检测随访人群的HPV，以减少HPV检测的过度使用，减轻患者负担。& & & &&总之，作为临床医生，我们要明确临床上HPV检测是用于查找宫颈病变，HPV检测值高低不代表病变严重程度，不应检测低危型HPV，要理解不同HPV检测技术对同一样本的检测结果可能不同，所有HPV检测方法均存在一定假阴性率，宫颈癌患者HPV检测结果可以为阴性，30岁以下（尤其是25岁以下）年轻妇女一过性HPV感染高达91%，此时，HPV检测以分流细胞学异常者为目的，而30岁以上妇女既可采用细胞学筛查，也可采用HPV筛查，当然细胞学和HPV联合筛查效率最高。
TA的最新馆藏一、目前宫颈稳态检测收费情况:；1、陈处长说的宫颈癌筛查200元/次收费,按严格；E6300copies/ml；E7300copies/ml；2、我们的产品为：宫颈稳态检测（化学发光法），说；3、HPV在体外是只有DNA的，但在体内转变为m；4、先前HPV检测的国家条形码名称是“人乳头瘤（；5、以下是这次医改之后的HPVDNA的条形码，没；二、宫颈稳态检测收
一、目前宫颈稳态检测收费情况:
1、陈处长说的宫颈癌筛查200元/次收费,按严格意义上来讲一次只能收200，如果是200元/项就可以收两项400了，当然陈处长说可以收两次那就收收看，主要看主任能不能收，估计麻烦，出报告的时候注意E6和E7两个分两行出报告，虽然其结果都是一样的，象舟山人民的报告就是这样出的，如E6\e7mRNA实际是300copies/ml，出报告为：
300copies/ml
300copies/ml。
2、我们的产品为：宫颈稳态检测（化学发光法），说明书没有明确检测什么，其实宫颈稳态试剂盒是包括hpv DNA和mRNA的。
3、HPV 在体外是只有DNA的，但在体内转变为mRNA了，其实HBV病毒等DNA病毒在体外虽然都是只有DNA，但在体内都是有mRNA的，其是借助宿主细胞的各种元件生成的mRNA，最后生成病毒所需要的各种蛋白质或酶这样才能完成其病毒的繁殖，生成mRNA和各种蛋白质也就是病毒进入宿主细胞的原因，否则不进入是无法自我繁殖的。（这个需要和处长解释清楚为什么HPV mRNA存在的。mRNA阳性不仅代表病毒存在，而且代表病毒在繁殖，在产生致癌致病作用。
4、先前HPV检测的国家条形码名称是“人乳头瘤（HPV）核酸检测”（请小伊上网查到国家医疗器械收费的出处及条形码编号，最好打印出来），告诉陈处长浙江HPV检测收费都是统一的，无论是什么方法，无论是HPV DNA还是RNA，都是用这个收费（请小伊上网查到浙江医疗器械收费的出处及条形码编号，最好打印出来），其条形码实际的“核酸”概念是包括DNA(脱氧核糖核酸）和mRNA（核糖核酸）。由于先前各地物价都是套HPV DNA收费，没有报HPV mRNA收费，唯一只有浙江地区统一用了人乳头瘤（HPV）核酸检测，没有区分DNA、mRNA或另外取名字。因此目前新的国家医改之后只有了“人乳头瘤病毒脱氧核糖核酸扩增检测”了，忽视了还有“人乳头瘤病毒核糖核酸扩增检测”，
5、以下是这次医改之后的HPV DNA的条形码，没有HPV mRNA的了。
二、宫颈稳态检测收费解决方案：
一）、现在申请国家新增的条形码：新增名称用“宫颈稳态检测”，放在病理科收费范畴内：
1、优点：由于注册证和收费名称很好的对应了，方便今后各省份的物价审批了。
1）国家新增条形码目前陈处长说需要5个省份上报，据我所知上次医改文件下发，说在清理老的收费结束前各地原则上都不接受新增物价的申报（这块出处文件请小伊上网查到后打印出来，标注清楚）；
2）即使能上报，时间来的急吗，如何上报呢。
3）“宫颈稳态检测”一般都不好放病理科收费范畴的，新的国家条形码病理科一般都是技术收费的。
二）、现在申请国家增补旧的条形码：保留“人乳头瘤病毒核酸检测”这个老的条形码，如果各地对于筛除的老的条形码有异议，请于明年5月份向省物价局提出申请，申请通过继续保留，没有通过就取消。（请小伊下载医改文件的原话，打印标注出来）或者增补条形码“人乳头瘤病毒核糖核酸非扩增定量检测”；
1、优点：无论是保留，还是增补较之新增“宫颈稳态检测”这个条形码从政策上、可操作性上来说都更靠谱。
2、缺点：我们的产品注册证是“宫颈稳态检测试剂盒”在各省进行物价申报的时候可以会遇到麻烦，而且还是二类证，在专家过会的时候会遇到不小的障碍，象浙江这样的省份就非常麻烦，如果是三类证问题还好办。
三）、医改之后使用新条形码申报物价：
1）无需上报新的编码，节省开支，各省份估计明年5月份就可以开始申报
2）有些省份是有这个物价的，名称为“其他病原体RNA检测”，广东是150
元/项，广东代理商准备以后收这个物价。
2、缺点：由于其物价收费是“项”，计算单位为“每个病原体为一项”而我们不
知道一项的收费是多少，我们13种亚型收13项很难或者收两项以上，因为我们就一个数据，两项E6、E7还说的过去，浙江省就没有物价（小伊可以查下“其他病原体RNA检测”，这个物价多少省份有价格，都是多少）
四）、医改之后申请国家新的条形码：明年医改之后，等明年年底三类证“HPV E6、E7 mRNA（bDNA杂交技术）”出来后，申报“分子病理学技术与诊断”栏中“组织/细胞支链DNA（bDNA）杂交检查诊断” ，其模仿的是医改之后的原位杂交
1、优点：一劳永逸了，不仅是现有的项目，今后所有的bDNA杂交技术的项目
都有收费了，而且别人还不能借我们的收费。
2、缺点：估计申请新的条形码需要5个省份申报，申报起点还要是等三类证出
来，明年年底估计才能出来，申报下来不知道什么时候了，之后各省再报物价，更加不知道什么时候，时间点的把握很难，可能远水解不了近渴。
五）、宫颈稳态检测改做HPV E6、E7 DNA:权宜之计，已装机的小医院或者客情好的医院还会继续开展，客情关系好的医师还能开单；同时收费会下降，如浙江从240，降到了200，二级代理商基本没有利润了，销售额估计至少减少50%。
六）、宫颈稳态检测套收原位杂交收费：权宜之计，已装机的小医院或者客情好的医院还会继续开展，医生开单可能由于客情费用减少会有一些减少，收费降低，如浙江从240，降到了200，二级代理商基本没有利润了，销售额估计至少减少50%。
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