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N-末端脑利钠肽与内皮素在左、右心功能不全患者中水平的比较
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16N甲基D天门冬氨酸诱导Wistar乳鼠癫痫发作及脑电图改变
ＪＡｐｏｐｌｅｘｙａｎｄＮｅｒｖｏｕｓＤｉｓｅａ；２００５，Ｖｏｌ２２，Ｎｏ．４；文章编号：１００３―２７５４（２００５）０４；０３３８一０３；Ｎ一甲基一Ｄ一天门冬氨酸诱导Ｗｉｓｔａｒ乳鼠；癫痫发作及脑电图改变；东，贾飞勇，王江涛，宋晓颖；摘要：目的观察Ｎ一甲基一Ｄ一天门冬氨酸（ＮＭＤＡ；１２日龄Ｗｉｓｔａｒ乳鼠腹腔注射ＮＭＤＡ可诱导癫；其对婴幼儿时期的癫痫
ＪＡｐｏｐｌｅｘｙａｎｄＮｅｒｖｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓ，Ａｕｇｕｓｔ２００５，Ｖｏｌ２２，Ｎｏ．４文章编号：１００３―２７５４（２００５）０４０３３８一０３Ｎ一甲基一Ｄ一天门冬氨酸诱导Ｗｉｓｔａｒ乳鼠癫痫发作及脑电图改变梁东，贾飞勇，王江涛，宋晓颖摘要：目的观察Ｎ一甲基一Ｄ一天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）诱导Ｗｉｓｔａｒ乳鼠的癫痫发作表现及皮质脑电图特点，以１２日龄Ｗｉｓｔａｒ乳鼠腹腔注射ＮＭＤＡ可诱导癫痫发作，其痫性其对婴幼儿时期的癫痫进行更加深入的研究。方法发作的特点和皮质脑电图变化均做相应记录。结果１２日龄的Ｗｉｓｔａｒ乳鼠引出甩尾等自动症及前弓反张发作，且上述行为发作期间出现某些特征性皮质脑电图改变。结论１２日龄Ｗｉｓｔａｒ乳鼠腹腔注射ＮＭＤＡ产生一种独特的、年龄依赖性癫痫发作与婴幼儿时期Ｗｅｓｔ综合征在发作表现和脑电图改变有相似之处。关键词：Ｎ一甲基一Ｄ一天门冬氨酸；癫痫发作；中图分类号：７４２．１行为；皮质脑电图；乳鼠文献标识码：ＡＮ―ｍｅｔｈｙｌ―Ｄ―Ａｓｐａｒｔａｔｅ（ＮＭＤＡ）ｉｎｄｕｃｅｄｓｅｉｚｕｒｅｓｉｎＷｉｓｔａｒｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇＪ１ＡｒａｔｓａｎｄＥＣｏＧｃｈａｎｇｅｓＬＩＡＮＧ＇Ｄｏｎｇ，Ｆｅｉ―ｙｏｎｇ，ＷＡＮＧ。ｌｉａｎｇ―ｔａｏ，ｅｔａ１．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ∥Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔｏｌ，ｄｉＬｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｉｓｔｈｅｓｅｉｚｕｒｅｓｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｂｅｈａｖｉｏｒａｌｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｅｌｅｃｔｒｏ―ｔｏｃｏｒｔｉｃｏｇｒａｍ（ＥＣｏＧ）ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｓｔｕｄｙｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＮＭＤＡｉｎｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｒａｔｓ，ａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｉｎ１２－ｄａｙ―ｏｌｄｇｉｖｅｂｙａｆｕｒｔｈｅｒｔｈｅｓｅｉｚｕｒｅｓ．ｏｆｃｈｉｌｄｈｏｏｄ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｓｅｉｚｕｒｅｓｗｅｒｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓＮＭＤＡｉｎ―ｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｎｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｏｔｏｒｓｅｉｚｕｒｅｓＲｅｓｕｌｔｓａｎｄｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆＥＣｏＧｒａｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．ＮＭＤＡ―ｉｎｄｕｃｅｄａｕｔｏｍａｔｉｓｍｓａｎｄｅｍｐｒｏｓｔｈｏｔｏｎｕｓｉｒｌ１２－ｄａｙ―ｏｌｄｗｅｒｅｅｌｉｃｉｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｃｈａｎｇｅｓｏｆＥＣｏＧｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＤＡｉｎｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｒａｔｓＴｈｅｕｎｉｑｕｅｓｅｉｚｕｒｅｓｗｉｔｈａｇｅ―ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｎＮＭ―ｐａｒｔｉａｌｌｙｒｅｓｅｍｂｌｅｓＷｅｓｔｓｙｎｄｒｏｍｅｉｎｃｈｉｌｄｈｏｏｄｔｈｅａｓｐｅｃｔｓｏｆｂｅｈａｖｉｏｒａｌｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓａｎｄＥＣｏＧｃｈａｎｇｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｉｎｇ；ＤｅｖｅｌｏｐｉｎｇＮ―Ｍｅｔｈｙｌ―Ｄ―ａｓｐａｒｔａｔｅ；ｒａｔｓＳｅｉｚｕｒｅｓ；Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ；Ｅｌｅｃｔｒｏｃｏｒｔｉｃｏｇｒａｍｒｅｃｏｒｄ―研究人类癫痫发病机制及治疗的有效捷径是选择适当、有价值的癫痫动物模型。在癫痫的发病机制中，兴奋性氨基酸所起的作用是毋庸置疑的。放射性配基及电生理实验证实，在动物发育不同时期，脑内ＮＭＤＡ受体密度有明显变化。通常情况下，ＮＭＤＡ受体密度在幼年期高于成年，并在出生后２～４周内出现一过性高峰期。根据谷氨酸的代谢型受体分类，ＮＭＤＡ是兴奋性氨基酸之一。研究发现，惊厥易感性与ＮＭＤＡ受体的年龄依赖性的表达特点密切相关，由此可见ＮＭＤＡ和／或其受体在婴幼儿时期癫痫动物模型的制备中显得尤为重要［１］。因此，我们选取１２日龄Ｗｉｓｔａｒ乳鼠腹腔注射ＮＭＤＡ，观察给药后其痫性发作特点，并进行皮质脑电图记录。１材料与方法１．１下由母鼠喂养，所有的鼠均保持标准的１２／１２ｈ昼／夜循环，并可以自由摄取水和食物。１．２药物ＮＭＤＡ购自美国Ｓｉｇｍａ公司。１．３脑电图仪７２０９型日本。１．４实验动物制作及分组取Ｗｉｓｔａｒ乳鼠（１２日龄）３２只，雌雄不限，随机分成ＮＭＤＡ处理组和对照组（各１６只），ＮＭＤＡ按照每次１５ｍｇ／ｋｇ［２３进行腹腔注射，对照组注射与药物同体积的生理盐水。每组动物于注药后连续观察２ｈ，对痫性发作的潜伏期、发作类型及发病率和行为的改变等方面均做相应记录。１．５皮质脑电图记录取Ｗｉｓｔａｒ乳鼠（１２日龄）３２只，雌雄不限，随机分成ＮＭＤＡ处理组和对照组（各１６只）。动物于清醒状态下，立体定位仪固定，动物清洁级Ｗｉｓｔａｒ乳鼠６４只（１２日收稿日期：２００５―０５―０８；修订日期：２００５―０６―２０作者单位：（吉林大学第一医院儿内二科，吉林长春１３００２１）龄，相当于人类婴儿期），雌雄不限，体重（２０±５）ｇ，由长春市高新医学动物研究中心提供，在常规条件　中风与神经疾病杂志２００５年８月第２２卷第４期总第１１０期用小型牙科钻在相当于大脑皮质双侧额区及枕区位置的颅骨上钻孔，其定位以参考文献［３“３为依据。并在相应位置安置４根镀银电极并用牙科水泥将其固定，另取２根电极分别置于鼻骨作为接地电极及置于一侧耳旁作为参考电极，排除插入电极可能对脑组织造成损伤，确定动物处于正常脑电活动状态下，用１３本７２０９型脑电图仪进行记录。纸速３０ｍｍ／ｓ，灵敏度５０ｐｖ／１．２ｍｍ，开始记录５ｍｉｎ后，ＮＭＤＡ组按１５ｍｇ／ｋｇ注射药物，对照组注射与药物同体积的生理盐水，观测各组动物皮质脑电图变化。２结果２．１１２日龄Ｗｉｓｔａｒ乳鼠行为表现ＮＭＤＡ处理组的Ｗｉｓｔａｒ乳鼠于注药后几分钟出现自动症（咀嚼、头部颤动、咬爪子、甩尾等，以甩尾最常见），继之运动亢奋和后肢运动失调（后半部身体左右剧烈扭动及猛烈甩尾伴快速四处走动，后肢无力，行走时后肢伸直拖着走路），此后出现前弓反张发作，表现为高度屈曲痉挛（其头和脊柱屈曲、前肢和后肢内收、后肢的膝关节伸直，整个身体呈球形），每次发作保持这种姿势几秒钟，几分钟内反复发作，随后这种发作持续时间逐渐延长，经历前弓反张后所有的Ｗｉｓｔａｒ乳鼠都发展为强直阵挛性发作。对照组未见惊厥发作。２．２皮质脑电图记录对照组：无痫性发作改变，仅偶有棘波发放，无特殊意义；ＮＭＤＡ处理组：１２日龄的Ｗｉｓｔａｒ乳鼠在药物注射后的不同阶段出现多种特征性脑电图改变。（１）甩尾期：见到高幅节律紊乱的脑电图，在不规则高幅慢波背景的基础上，散发尖波、棘波和尖慢波、棘慢波（见图１），时尔有与甩尾同步出现的在正常背景基础上阵发性出现棘波节律；（２）前弓反张发作时显示：在正常背景的基础上阵发性出现棘波节律（见图２，图３），正常节律转为散发、重复的棘慢波时痉挛发作（见图４）；（３）前弓反张发作期：有时出现弥漫性波幅降低、常被间断出现的锯齿样波所打断（见图５，图６）；（４）强直阵挛发作期：在正常背景的基础上阵发性出现棘波及棘波节律。３讨论３．１小儿时期神经递质发育特点及易患癫痫的原因癫痫是４，ＪＬ时期最常见的神经系统疾病之一。１０岁以内起病的患者超过５０％。探索其原因，发现年龄依赖的ＮＭＤＡ受体发育特点与惊厥易感性密切相关。在人的前脑皮层中，ＮＭＤＡ受体的发育在出生后１～２年达到高峰，１０岁后每１０年以９％速率递减。ＮＭＤＡ受体发育过程中的短暂超射可能是　‰蛾‰帆螂“蜊呐酬‰０瓣掣―哪州脚榔叫‰触―胪娜订Ｎ确ｍ孵飞ｌ㈣盼砖垆飞瓜妒姻艄糊㈣，“州”ｋｗ川哪埘蚋艚译蛐埘蛐瑚啊槲图２前弓反张开始时出现棘节律讯蚺撕‰‘褂枇ｐ如文“脚舻佩如吣忡Ⅵ黼沁．嘞蠢＾曲一．枞ｈ“僻舾幽蠢，图３前弓反张期间出现的癫痫样放电图４前弓反张期问出现散发重复棘慢波＾■－一－。●－＿＿?Ｈ－－＿＿＿●－＿＿＿’＿?一图５前弓反张发作期州出现的弥漫性低电压｝∥ｐ多多，一ｅ幻气彬勺泡峨．∥，心一以｛：；∥埘趣科。趣一。“‰∥蝴以承以一瓜加ｐ儿●氏碰＾凡风．＾Ｋ小械，该受体调节神经元发育的可塑性及惊厥易感性产生的基础。发育中的一些其他生理因素也可促进惊厥的产生及在脑中扩散，如幼年时Ｍｇ抖对ＮＭＤＡ受体敏感性增高，从而增加对惊厥等疾病的易感并易造成脑损伤。３．２依赖性癫痫发作：即前弓反张，表现为高度屈曲痉挛、头颈和脊柱屈曲、前肢和后肢内收、后肢的膝关节伸直、整个身体呈球形。每次发作保持这种姿势几秒钟，在几分钟内反复发作。而且脑电图改变与人类婴儿痉挛也基本符合：（１）甩尾期经常见到一种高幅节律紊乱的相当于Ｗｅｓｔ综合征发作间期的高峰节律紊乱脑电图；（２）前弓反张发作开始时出现棘节律或散发、重复的棘慢波与Ｗｅｓｔ综合征患儿发作开始的脑电改变相似（基础杂乱尖慢波变成多相棘波，在双侧顶枕区出现高幅双向尖慢波）；（３）前弓反张发作期出现弥漫性波幅降低及锯齿样波相似于Ｗｅｓｔ综合征痉挛发作期出现的中到高波幅的慢波，经常被低波幅的快活动所打断和弥漫性的低电压的脑电记录相似。Ｖｅｌｉｓｅｋ提出理想的Ｗｅｓｔ综合征模型应满足以下７个标准：（１）在生长发育的特定时期自发性的癫痫发作；（２）痉挛性的癫痫发作（屈曲性、伸展性、混合性）；（３）弥漫非特异的发作间期脑电图改变；（４）正常脑功能发育受到重大损害；（５）常见的抗癫痫药难以治愈；（６）对皮质醇、促肾上腺皮质激素、丙戊酸钠、维生素Ｂ６、７－氨基丁酸类药物及一些新药非氨酯有些效果；（７）在正常或受损伤的脑均可诱发这种模型［２］ＮＭＤＡ诱发的Ｗｉｓｔａｒ、乳鼠癫痫模型具有年龄依赖性特点，基本满足了Ｗｅｓｔ综合征动物模型标准中的（２）（３）（７）３条。该模型应满足的其它标准，７条标准中的（４）（５）（６）条在国外文献中已得到部分证实，但结果还不十分令人满意，需要进一步验证，至于标准（１）则更需要深入研究，以便于使这个Ｗｅｓｔ综合征模型更加完善并得到国际公认。［参考文献］［１］吴希如，林庆主编．小儿神经系统疾病基础与临床［Ｍ］．人民卫生出版社，２０００．３５３６．ＮＭＤＡ诱发Ｗｉｓｔａｒ乳鼠癫痫发作特点与ＮＭＤＡ诱发婴儿时期类似的癫痫综合征比较Ｗｉｓｔａｒ乳鼠癫痫发作特点与婴儿时期类似的癫痫综合征有：大田原综合征和Ｗｅｓｔ综合征。此两个综合征的特点均有年龄依赖性，即均在婴儿期起病，前者在生后２～３个月以内起病，但多为生后１个月以内起病；而后者多在生后４～７个月起病。两者均为难治性癫痫，预后不良。病因多为症状性，可能与代谢异常、脑的成熟度、脑发育异常有关，部分患者查不到病因被认为隐源性。临床发作形式：大田原综合征主要为强直性痉挛发作，单个或成簇出现，也可见部分性发作，但很少见阵挛发作；Ｗｅｓｔ综合征发作形式为一连串的强直性痉挛，可分为屈曲型、伸展型、混合型３种表现形式。在临床工作中，此两个癫痫综合征在发作形式上有时极难区别。脑电图特点：大田原综合征为暴发一抑制，呈高波幅慢波及棘波组成，持续１～４秒，随之为一波幅低平的抑制波，几乎呈平坦直线持续３～４秒，在清醒和入睡后均可见到。Ｗｅｓｔ综合征的脑电图特点为：（１）发作间期较典型改变为高峰节律紊乱；（２）痉挛发作开始阶段的改变为在基础杂乱尖慢波上变成多相棘波、双侧顶枕区出现高幅双向尖慢波口，５３；（３）发作期的脑电有３种典型改变：①中到高波幅的慢波，经常被低波幅的快活动所打断；②中波幅的纺锤波样活动；③弥漫性的低电压。根据以上比较，ＮＭＤＡ诱发Ｗｉｓｔａｒ乳鼠癫痫发作表现及脑电图特点基本符合婴儿时期Ｗｅｓｔ综合征的临床发作表现及脑电图特点。３．３［２］ＰａｖｅｌＭａｒｅｓ．Ｌｉｂｏｒｖｅｌｉｓｅｋ．Ｎ―ＭｅｔｈｙｌＤ―ａｓｐａｒｔａｔｅ（ＮＭＤＡ）一ｉｎ―ｄｕｃｅｄｓｅｉｚｕｒｅｓｌｎｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｒａｔｓ［Ｊ］．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｒａｉｎＲｅＮＭＤＡ诱发的癫痫模型有望成为Ｗｅｓｔｓｅａｒｃｈ，１９９２，６５：１８５―１８９．综合征动物模型的支持点Ｒａｄｋａ［３］ＲａｄｋａｓｐｅｃｉｆｉｃｔｈｅＫａｂｏｒａ，ＳｏｎａＬｉｐｔａｋｏｖａ。Ｒｏｍａｎａｓｌａｍｂｅｒｏｖａ，ｅｔａ１．ＡｇｅｆｏｒＫａｂｏｒａ等报道ＮＭＤＡ诱发的癫痫综合Ｎ―Ｍｅｔｈｙｌ―Ｄ―ａｓｐａｒｔａｔｅ―ｉｎｄｕｃｅｄｓｙｎｄｒｏｍｅｓｅｉｚｕｒｅｓ：ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ征与婴儿痉挛的发作表现极为相似，同时应用常规方法获得了较为满意的１８日龄乳鼠（相当于人类儿童期）脑电图记录结果。而对１２～１３日龄乳鼠（相当于人类婴儿期）的脑电图记录不理想。我们将其脑电图检测方法加以改进，成功地获得了１２日龄乳鼠的脑电图结果。我们的研究表明在１２、１３日龄Ｗｉｓｔａｒ乳鼠中腹腔注射ＮＭＤＡ可诱导出一种独特的年龄ｗｅｓｔｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ，１９９９，４（）：（１０）１３５７１３６９．［４］ＲｅｎｅｅＳｃｈｉｃｋｒｏｖａ，ＰａｖｅｌＭａｒｅｓ．ＴａｎｉｓｌａｖＴｒｏｊａｎ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｔｗｅｅｎｅｌｅｃｔｒｏｃｏｒｔｉｃｏｇｒａｐｈｉｃａｎｄｍｏｔｏｒｂｅ―ｂｙｐｈｅｎｏｍｅｎａｉｎｉｎｄｕｃｅｄｐｅｎｔａｍｅｔｈｙｍｅｎｔａｌｌｅｎｅｔｅｔｒａｚｏ［ｄｕｒｉｎｇｏｎｔｏｇｅｎｅｓｉｓｒａｔｓ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｉＮｅｕｒｏｌｏｇｙ．１９８４，８４：１５３―１６４．ＳｐａｓｍｓＥＪ］．Ｐｅ［５］ＭｉｃｈａｅｌＷｏｎｇ，ＥｄｗｉｎＴｒｅｖａｔｈａｎＭＰＨ．ＩｎｆａｎｔｉｌｅｄｉａｔｒＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００１，２４：８９―９８．　包含各类专业文献、中学教育、行业资料、专业论文、幼儿教育、小学教育、生活休闲娱乐、应用写作文书、高等教育、16N甲基D天门冬氨酸诱导Wistar乳鼠癫痫发作及脑电图改变等内容。房颤合并血栓栓塞患者血浆N末端脑钠肽前体水平的临床意义_百度文库
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