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阴道镜检查及HPV-DNA分型检测在HSIL患者诊断中的作用
&&&&&&&&&近日，北京大学第一医院妇产科研究人员发表论文，旨在了解阴道镜检查和HPV-DNA分型检测在高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者诊治中的作用。研究指出，在HSIL患者中,经单次阴道镜检查仅检出62.4%的≥CIN2患者,HPV-DNA分型检测可增加阴道镜的检出率,对于单次阴道镜检查未发现异常的HSIL患者应给予重视。该文发表在2012年第04期《中国妇产科临床杂志》上。
　　近日，北京大学第一医院妇产科研究人员发表论文，旨在了解检查和HPV-DNA分型检测在(HSIL)患者诊治中的作用。研究指出，在HSIL患者中,经单次阴道镜检查仅检出62.4%的&CIN2患者,HPV-DNA分型检测可增加阴道镜的检出率,对于单次阴道镜检查未发现异常的HSIL患者应给予重视。该文发表在2012年第04期《中国妇产科临床杂志》上。
　　对2005年1月至2007年12月北京大学第一医院妇产科宫颈细胞学检测为HSIL的患者551例行阴道镜检查,对于镜下有异常发现者519例行多点活检,对于不满意的阴道镜检查,多点活检同时加宫颈管诊刮术,分析单次阴道镜检查检出CIN2及以上级别病变(&CIN2)的情况,并对其中376例同时行HPV-DNA分型检测的结果进行分析。
　　551例HSIL患者中,阴道镜下多点活检检出CIN 1 患者58例(10.5%);CIN2、3患者344例(62.4%);宫颈浸润癌11例(2.0% )。&30岁、30~39岁、40~49岁、50~59岁和&60岁不同年龄组检出率比较,差异有统计学意义(P=0.034)。376例有HPV-DNA分型的HSIL患者中, HPV-DNA高危亚型感染率为87.5%,其中16亚型感染占第一位(45.7%);在HR-HPV 阳性组尤其是HPV-16亚型阳性组,检出&CIN2与HR-HPV阴性组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。
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邮&&&&箱：周峰（湖北省石首市人民医院病理科&& 434400）
【摘要】目的 通过研究各级别宫颈上皮内瘤变中所感染HPV的基因型，来探讨不同基因型HPV的临床意义。方法 对232例经活检证实的宫颈上皮内瘤变（CIN）患者的HPV检测结果进行分组分析，根据病变级别分为CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ3组。232例CIN患者均有细胞学检查结果，HPV检测采用亚能HPV基因分型检测系统进行23种HPV-DNA亚型分析。结果 HPV-16和58亚型感染位居各级别宫颈病变的前两位，说明这些亚型致病力强，更易导致宫颈的高级别病变。结论 本组CIN患者HPV感染的常见亚型是16、58、33、18、56、31，易导致宫颈高级别病变的亚型是16、58、18、31、35、56，HPV-DNA的分型检测对预测病变进展、评估预后、指导治疗有重要价值。
【关键词】 人乳头状瘤病毒（HPV） 基因型& 宫颈癌&& 宫颈上皮内瘤变（CIN）
&&&&&&& 宫颈癌是仅次于乳腺癌的最常见的妇科恶性肿瘤之一，威胁女性生命的第二大恶性肿瘤，全世界每年因宫颈癌死亡的人数为30万，我国宫颈癌的发生率和死亡率约占全世界的1/3，近年来，我国宫颈癌发病率和死亡率逐渐上升，并趋于年轻化，因此越来越受到人们的重视。目前，宫颈癌是人类所有癌症中唯一病因明确的癌症，即高危型人乳头瘤病毒的感染是宫颈癌发生的必要条件和主要病因。从HPV感染到宫颈癌的发生需要经过多年甚至数十年的时间，如能早期发现、早诊断和治疗，就可将宫颈癌的发病率降到最低，甚至可能杜绝宫颈癌的发生。HPV是一类双链、环形、嗜上皮性DNA病毒，目前已知有120多个亚型，约40种涉及生殖道感染，其中20种与肿瘤有关。依据其致癌能力的强弱分为低危型和高危型。低危型多引起外生殖器尖锐湿疣等良性病变，高危型则与CIN和宫颈癌有关。本研究主要应用基因芯片技术。检测宫颈癌及宫颈癌前病变中23种常见的HPV亚型，并探讨其应用于临床的价值和意义。
&&&&&&& 1、&材料与方法
&&&&&&& 1.1一般资料。病例均来源于2010年8月&&2012年2月在我院妇产科参加妇检的患者。对宫颈细胞学结果异常或阴道镜检查异常者，复诊时做HPV的分型检测和阴道镜下多点活检。病理诊断CIN232例，平均年龄36-57岁。所有研究对象均排除妊娠并且无宫颈锥切史。
&&&&&&& 1.2方法
&&&&&&& 1.2.1& HPV-DNA分型检测。采用亚能HPV基因分型检测系统进行23种HPV-DNA亚型分析。㈠样本采集：窥器暴露宫颈，轻轻拭去宫颈表面分泌物，用亚能专用宫颈刷伸入颈管内0.5cm，顺时针和逆时针各旋转4圈，收集宫颈分泌物中的脱落细胞，取出刷子置毛刷头于保存液中，保证所样本百分之百送检；㈡检测系统：该系统能同时检测23种亚型的HPV，包括18种高危亚型：HPV-16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，MM4，83；5种低危亚低：HPV-6，11，42，43，44；㈢检测原理：该方法利用人乳头状瘤病毒L区相对保守区设计简并引物，通过PCR反应对待测样品中可能存在的不同亚型HPV进行大量复制，同时对待测样品进行标记，再将扩增后的待测样品与固定在膜芯片上的含有各亚型的特异探针进行杂交，通过化学显色后的芯片插入HPV分型基因芯片阅读系统即可读取分型结果。
&&&&&&& 1.2.2宫颈细胞学检查。采用宫颈薄层液基细胞学检查（TCT）方法，㈠样本采集：用专用宫颈刷收集宫颈及宫颈管的脱落上皮细胞，置毛刷头于盛有保存液的小瓶中，放置24h后制片；㈡薄片制作：制片和染色由全自动薄层细胞制片机1次完成，避免了人工操作的误差，细胞学诊断采用TBS分级系统。
&&&&&&& 1.2.3.统计学方法。宫颈液基细胞学检查以&LSIL为阳性，宫颈活检病理诊断为金标准，以CINⅠ级以上为阳性，统计不同级别宫颈病变中HPV的感染率以及所感染HPV基因型的分布情况，比较CIN病例中HPV阳性率和液基细胞学异常率的差别，差异显著性分析采用x2检验。
&&&&&&& 2、结果
&&&&&&& 在232例CIN中，CINⅠ级89例、CINⅡ级93例、CINⅢ50例。HPV的检测结果。在232例CIN中，HPV阴性21例，占6.33%；HPV阳性211例，占93.67%。最多为3种型别同时感染，其中单一基因型感染131例，占58.22；二重感染25例，占11.11%；三重感染10例，占4.44%。由表1可见，HPV感染率随宫颈病变级别的增高面增高，在CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级中分别为86.9%、95.7%和98.2%，CINⅠ组与其他两组比较，感染率差异具有显著性（P＜0.01）。 HPV双重或三重感染在CINⅠ~Ⅲ级病变中分别占19.4%、27.9%和16.7%。
&&&&&&& 表1& HPV检测结果
&&&&&&& HPV基因型的分布以及与CIN的关系。232例CIN所感染HPV-DNA的亚型涉及所能检测的23型中的19型，其感染频度由高到低依次为HPV-16（30.2%）、58（18.2%）、33（8.6%）、18（7.1%）、56（4.9%）、31（4.4%）、11（3.2%）、35（2.2%）、45（1.6%）、6（1.6%）、52、59、68、43、39、66、73、83、42型，低危44型和高危51、53、MM4型未检出感染者；HPV-16型是各级别宫颈病变中最常见感染亚型，感染率为30.2%（70/232），并且随宫颈病变级别加重而明显增高，在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级中的感染率依次为19.4%、38.5%和57.3%，各级别间差异显著，P〈0.01。HPV-58型为各级别宫颈病变中第二常见感染亚型，占18.2%（42/232）。随宫颈病变级别不同，所感染HPV亚型亦有区别，在CINⅠ组感染HPV型别前6位依次（递减）为：16、58、33、18、31和56，CIN Ⅱ组为：16、58、33、18、56和52，CIN Ⅲ组为：16、58、18、31、35和56；各级别病变中感染HPV亚型的前6位均为高危型，16和58亚型感染在各级别宫颈病变中均居前两位，两者感染率占48.2%（112/232）。见表2。
&&&&&&& 表2& HPV基因型的分布情况
&&&&&&& CIN病例的HPV检测和液基细胞学结果比较。由表3可见，在232例CIN中，HPV阳性211例（93.6%），液基细胞学结果&LSIL187例（80.83%），两者差异显著，P&0.05。而且各级别宫颈病变中HPV阳性率均高于液基细胞学阳性率。
&&&&&&& 表3& HPV阳性率与液基细胞学异常率的比较
&&&&&&& 3、&讨论
&&&&&&& 3.1HPV感染途径：主要为性传播和直接皮肤接触。特别案例：有母亲分娩过程中传播至婴儿的口腔的报道。危险因素：1、年龄因素：30岁以后HPV感染率下降，但危险性提高。2、性行为的影响：初次性交年龄越小，性伴侣数量越多，感染率越高；3、避孕方法：尚无一致意见，但长期口服避孕药女性因免疫功能下降，感染率较采用其他避孕方式者高；4、免疫抑制状态使HPV感染的危险性增加：如HIV感染后、肾移植等。 通常HPV将在感染后的6-12个月内自行消失，1年后HPV持续感染率为30%，2年后渐下降，仅为9%。只有HPV持续感染，才是激发宫颈上皮恶性转化的最重要危险因素，HPV持续感染能使宫颈癌的发生风险提高250倍，Ho等学者［1］认为，HPV多重感染的患者出现持续感染的危险性更大。HPV混合感染率随着病理学级别的增高而增高。
&&&&&&& 3.2流行病学调查显示，高危型HPV导致宫颈癌的概率约为1.0%。而低危型仅为0.1%。现已明确高危型HPV持续感染是宫颈癌发生的根本原因。统计结果表明，大多数CIN伴有HPV感染，＞90.0%的宫颈癌都可以检测到HPV DNA。我国宫颈癌高发区筛查资料也显示。几乎所有宫颈癌患者HPV均为阳性。目前，HPV的主要检测方法是HPV DNA第一代杂交捕获试验（HCⅡ），其最大的缺点是不能进行分型，不利于流行病学和病因学的进一步深入研究。近年来，已采用基因芯片技术应用于HPV分型，结合了PCR扩增和原位杂交技术，其特点是高通量、敏感性高、特异性强。本研究得出的结果显示，高危型HPV感染率随着病理学级别的增高而上升，这Anderssom等［2］的报道基本相符。这不仅说明了HPV感染与宫颈癌的发生密切相关。同时，Tsuda等［3］研究显示，＞95.5%的宫颈癌是由高危型HPV感染引起的。
&&&&&&& 3.3全世界范围内共同的最常见感染亚型为HPV16型，在国际癌症研究协会（IARC）最新报道的包括全球25个国家的3607例宫颈癌患者中的多中心研究中HPV-16在所有HPV阳性的宫颈癌患者中的平均感染率为57.4%［4］。由IARC最新公布的15种最常见的亚型依次为（递减）16、18、45、31、33、52、58、35、59、56、39、51、73、68、66，除16亚型外，18亚型感染居第2位，占12.6%-25.7%，本资料结果亦显示，HPV-16型感染最常见，在CIN患者中的平均感染率30.2%，58型次之，占18.2%，两者合计感染率为48.4%，HPV-33型（8.6%）、18型（7.1%）、56型（4.9%）、31型（4.4%）感染位居第4-6位，此6型感染占CIN患者的73.4%。本院实验显示，HPV16为主要高危致病亚型，HPV18为第二高危致病亚型，还有少数患者感染HPV52、33、59、68高危亚型。低危型HPV在宫颈癌中尚未检测出来。但在宫颈炎和CINⅠ中检测出来，主要为HPV6、11亚型，由此证实宫颈癌主要由高危型HPV感染所引起。目前医学界比较一致的看法是HPV-16是导致宫颈鳞癌的主要原因，而HPV-18与宫颈腺癌的发生关系密切。
&&&&&&& 3.4宫颈上皮内瘤样病变（CIN）做为宫颈癌的前驱病变其发现和治疗是宫颈癌防治的关键，本资料显示232例CIN的HPV检测阳性率93.6%，与赵方辉［5］报道的74.63%（150/201）阳性率要高。其中在低度病变组（CINⅠ），HPV阳性率为86.9%，而在高度病变组（CIN ⅡCIN Ⅲ）HPV阳性率分别是95.7%和98.2%，明显高于低度病变组，组间差异有显著性，P＜0.01，由此可以发现，HPV感染与宫颈病变有很强的相关性。说明HPV阳性强烈预示着CIN的存在。而且在各级别宫颈病变中HPV阳性率均高于液基细胞学阳性率，两者有显著性（P＜0.05），说明HPV检测在发现宫颈上皮内瘤样病变（CIN）比细胞学更敏感。
&&&&&&& 3.5临床提示，从HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要8-10年。因此，必须采取适当的预防和筛查措施，才能够阻止宫颈癌的发生并有望最终消灭宫颈癌。在现代医学技术的支持下，病理科医生和妇科医生应该大有作为。(1)筛查对象：三年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女。(2)起始年龄：经济发达地区：25～30岁，经济欠发达地区35～40岁，高危人群起始年龄应相应提前。(3)终止年龄：65岁以上危险性极低。(4)筛查间隔：每年一次，HPV阴性请一年后复诊。复诊结果仍为HPV阴性，随访间隔可以延至3-5年。HPV阳性者请进行细胞学检测：1)细胞学检测结果正常者，需每年跟踪随诊一次。随诊时需同时进行HPV病毒及TCT检测；2)细胞学检测结果异常者（包括ASC-US），做阴道镜活检。
&&&&&&& 3.6HPV分型检测的意义：本实验应用基因芯片技术，对HPV（高、低危）进行分型检测，研究宫颈癌的发病机制；及时发现和确定宫颈癌高危人群；根据感染型别预测病变进展，评估预后；指导临床医生制定治疗方案；并可研制有针对性的基因疫苗，最终根除HPV感染，实现宫颈癌的一级预防；对最终预防和早期发现宫颈癌及癌前病变具有重要的意义。
参 考 文 献
[1]Ho GY，Bierman R，Beardsiey L，et al.Natural& history of cervicovaginal papillomavirus infection in young& women[J]。N Engl J Med，3-428.
[2]Andersson S，Safari H，MintsM，Type distribution，viral load and integration status of high-rlsk& human& papillomavirus in prestages ofcervicalcancer[J].Br J Cancer，）:.
[3]Tsuda H，Hashiguchi Y，Nishimura S，et al.Relationship between HPV typing and abnormality of GI cell& cycle regulators incervicalneoplasm[J].GynecolOnclOncol，-485.
[4］MunozN，Bosch FX，Castellsague X etal.Againstwhich human pap-illomavirus& types& shall we& vaccinate and& screen The international& per-spectivel& lnt J Cancer，（@）:278.
[5］赵方辉，李楠，马俊飞etal.山西省襄垣县妇女人乳头状瘤病毒感染与宫颈癌关系的研究，中华流行病学杂志，）:375.
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HPV（人乳头状瘤病毒）DNA检测报告
33：女 34岁 湖南 长沙 病情描述(发病时间，31，怎么得到更好的治疗，58：正常检测内容，11，CP8304（其中53：检测方法，39：高危型HPV病毒亚型16？;
低危型HPV病毒亚型6，66属于高危亚型，52；
中国人常见亚型53：
有高危型人乳头状瘤病毒感染
高危亚型，42，44，68，56：
阴性想得到怎样的帮助患者信息，18，45：人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测标本类型，66：宫颈脱落细胞标本状态：这是种什么样的病，59，51： 阳性-HPV68
低危亚型、主要症状等)；CP8304属于低危亚型）检测结果： 阴性
中间型，43，35？
HPV68不要紧的。不是尖锐湿疣，尖锐湿疣是低危感染。，美国的。清除病毒的药物改那个研制出来！可以用用瑞贝生这个药物！听取医生的建议吧
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宫颈有慢性炎症长期刺激的话，低危型的呈阳性才需要，就有可能会导致HPV病毒的感染。大多数会被机体免疫自然消褪掉。高危型阳性只能说明有HPV病毒感染，具有引发宫颈癌的潜能。 hpv病毒在自身也是有存在的，别的不能代表什么，多用干扰素，只是一般不会引起致病，当身体的免疫力下降这不是湿疣不会长出疣体也不需要用到冉迪▶植物液
你好，该症考虑尖锐湿疣，是由人类乳头病毒感染的性传播疾病，男性患者好发于包皮系带、冠状沟、包皮、尿道、阴茎、肛门周围和阴囊。病症初期为淡红或污红色粟状大小赘生物，性质柔软，顶端稍尖，逐渐长大或增多。可发展成乳头状或囊状，基底稍宽或有带，表面有颗粒。在肛门部常增大，状如菜花，表面湿润或有出血，在颗粒间常积存有脓液，散发恶臭气味，搔抓后可继发感染。　女性尖锐湿疣潜伏期平均为2-3个月，病变发展无自限性，症状为局部瘙痒、疼痛，少数病人无症状。生长部位：外阴、阴道、宫颈、肛周，常见两个部位同时发生，局部表现为淡红色或灰色小丘疹，呈疣状突起，常融合形成菜花样赘生物，有性乱史，用5%的醋酸涂后病变处变白。目前主要采用综合治疗，平时注意个人卫生
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