益肾汤对糖尿病大鼠肾脏核转录因子-κB的影响--《中药材》2012年09期
益肾汤对糖尿病大鼠肾脏核转录因子-κB的影响
【摘要】：目的:探讨益肾汤对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾组织NF-κB的影响。方法:将41只大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病缬沙坦治疗组、糖尿病益肾汤治疗组。干预8 w后检测空腹血糖、血肌酐、血尿素氮、24 h尿总蛋白、尿白蛋白排泄率,免疫组化测定肾组织NF-κB表达。结果:与模型组比较,益肾汤及缬沙坦治疗组尿白蛋白排泄率均显著降低(P0.05)、肾组织NF-κB的表达受到抑制(P0.05);肾组织NF-κB表达量与空腹血糖、24 h尿总蛋白、尿白蛋白排泄率呈显著正相关(r与P值分别为:r=0.63,P=0.001;r=0.53,P 0.007;r=0.84,P0.001)。结论:益肾汤可减少尿白蛋白排出、减少肾脏NF-κB的表达;益肾汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用与其下调肾脏NF-κB的活化有关。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R285.5【正文快照】：
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)主要的微血管并发症之一,也是导致终末期肾病的主要原因。DN早期特征性病理改变为肾小球毛细血管基底膜增厚和微量白蛋白尿。目前的研究显示炎症反应是DN发生发展的启动因素〔1〕,调控和转录很多炎症因子
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京公网安备74号作者：甘宁 谭毅青 陈社安
&&&&单位：P佛山市第一人民医院肾内科 (528000)
&&&&关键词：24 h尿白蛋白排泄率；相对密度；尿肌酐浓度
&&&&广东医学990915 【摘要】 目的 探讨一种估计24 h尿白蛋白排泄率的简便方法。方法 利用尿常规的十联试纸比色法，测定尿相对密度(旧称比重)。先用尿相对密度推算出尿肌酐浓度，然后算出尿蛋白浓度和尿肌酐浓度估计值间的比值(Pro/UcrE)。结果 该比值与实际测得的24 h尿白蛋白排泄率有极高度的相关性，且其敏感性和特异性分别达到87.2%和90.2%。结论 Pro/UcrE比值是一种简便、经济的筛选方法，便于门诊和基层单位使用。
&&&&24 h尿白蛋白排泄率能反映肾功能受损的程度，特别是对糖尿病患者，尿微量蛋白的测定有助于诊断糖尿病肾病和判断其预后，因此，24 h尿白蛋白排泄率具有重要的临床指导价值，但需留取24 h尿液，不仅繁琐费时，而且费用较高。在本研究中，我们探讨一种能反映24 h尿白蛋白排泄率的新方法，该方法简便、省时而又经济实用，值得在基层医院推广，现报道如下。
&&&&1 材料与方法
&&&&1.1 对象 我院1998年6月～1999年3月门诊和住院病人共50例，其中男28例，女22例，平均年龄32.5±12.5岁。基础疾病包括慢性肾小球肾炎19例，糖尿病肾病24例，高血压肾损害7例。平均24 h尿白蛋白排泄率为0.92±2.2 g/24 h(0.07～10.8 g/24 h) ......&&&&百拇医药网
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大鼠尿白蛋白放免测定方法的建立及血管紧张素转换酶抑制剂对其排泄率的影响(2)
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结果 　　一、大鼠尿白蛋白放免分析方法的方法学鉴定 　　1.标准曲线：采用双管测定，以Logit B/B0为纵坐标，标准浓度的自然对数为横坐标绘制标准曲线，连续测定十条标准曲线呈直线回归(图1)。 图1　rAlb标准曲线(&s) Fig 1　rAlb standard curves (&s) 　　经回归计算：Logit Y=5.243-LogX，r=0.997 　　样本用PB作1:10～1:200稀释，尿中白蛋白含量计算按公式：尿白蛋白含量=稀释倍数&尿量(L)&X，X为尿样的实测值。 　　2.灵敏度：以一次测定10管B0均值&2s结合率所相当的剂量表示，本方法灵敏度为9.78&g/L。 　　3.精密度：对不同浓度的三份样品各取10管做重复测定，求其批内变异系数，高、中、低浓度样品批内变异系数分别为6.1、3.9、2.2，平均为4.1；并于不同时间将上述3种不同浓度样品重复测定10次，求其批间变异系数，高、中、低浓度样品批间变异系数分别为5.7、7.7、11.7，平均为8.3。 　　4.回收率：用一个已知较低浓度样品进行稀释，将rAlb分别配制成50、500、800&g/L，测定回收率。所测结果分别为97.2%、106.6%、89.2%，平均(97.6&5.0)%。 　　5.平行试验：将一份高值的尿样品用0.05mol/L PB做倍比稀释，以各自的结合率为纵坐标，以浓度为横坐标，在半对数纸上作图(图2)。 图2　平行实验 Fig 2　Parallel test 　　图2显示：稀释曲线与标准曲线平行良好。 　　6.方法的稳定性：将同一批的抗血清置于4℃，125I-rAlb置于-40℃保存。从首次放免测定结果(B0/T 59.4%, NSB 210cpm)与放置80天测定结果(B0/T 46.4%, NSB 333cpm)相比较，B0结合率下降13.0%，NSB上升1.2%。提示本方法稳定性良好，符合放免测定要求(表1)。 表1　加样程序表(&l) Tab 1　Procedures 试剂或样品 Reagent or specimen T NSB B0 标准 Standardsolution 样品 Specimen PB - 300 100 - - 标准液 Standard solution - - - 100 - 样品Specimen - - - - 100 125I-rAlb 100 100 100 100 100 抗rAlb血清 Antiserum of rAlb - - 200 200 200 混匀homo-mixed 37℃ 1h 二抗 Second antibody - 100 100 100 100 混匀 homo-mixed 4℃ 1h PEG - 500 500 500 500 注：混匀，3 000rpm，离心20分钟，弃上清，用全自动&放免仪测量沉淀部分homo-mixed, contrifuged at 3 000rpm for 20 minutes, supernatant discarded, precipitate was determinated with automatic radioimmunoassay analyzer 　　二、培哚普利治疗前后各组大鼠所测指标 　　1.各组生化结果：DM组和DP组各时点血糖、HbA1c和BUN均明显高于NC组(P＜0.05，P＜0.01)，肌酐只有2周时高于NC组(P＜0.05)。DM组和DP组各时点血糖、HbA1c、肌酐和BUN均无差异(P＞0.05)，提示DM组和DP组生化指标具有较好的可比性。 　　2.三组大鼠UAE的变化(表2)。 表2　各组大鼠治疗前后尿白蛋白测定结果(mg/24h) Tab 2　Urinary albumin excretion in different rat subgroups at pre- and post- treatment stages 组别 治疗前 1个月 3个月 6个月 Group Pre-therapy 1 month 3 months 6 months NC(n) 0.24&0.03(11) 0.36&0.14(5) 0.35&0.07(8) 0.41&0.14(6) DM(n) 0.70&0.13▲(21) 1.32&0.26▲(14)* 1.01&0.21▲(11) 2.30&0.30▲▲(16)##** DP(n) 0.58&0.11▲(12) 0.53&0.11(6) 0.67&0.13(16) 0.73&0.12(11) 注：与NC组比较Compared with NC subgroup,▲P＜0.05,▲▲P＜0.01；与DP组比较Compared with DP subgroup,##P＜0.01；与0(DM大鼠成型后2周，治疗开始前)比较Compared with subgroup (2-weeks diabetic rats, pre-therapy),*P＜0.05,**P＜0.01 　　从表2可以看出，DM组从糖尿病成型2周后UAE便开始升高(与NC组比较，P＜0.05)，1、6个月与治疗前比较，P＜0.05、P＜0.01。DP组除治疗前UAE高于NC组外(P＜0.05)，治疗后1、3、6个月与NC组比较无明显差异(P＞0.05)，并且在6个月UAE明显低于DM组(P＜0.05)，提示培哚普利具有明显抑制糖尿病大鼠UAE升高的作用。 讨论 　　大鼠白蛋白相对分子质量约为68 000，是一种中分子蛋白。在正常情况下，尿中只有微量白蛋白。当糖尿病时肾小球处于高滤过状态，加之基底膜的损伤，更多白蛋白被漏出并超过了肾小管重吸收能力，可导致尿中白蛋白排泄的增加，因此测定尿中微量白蛋白可以了解肾小球早期损伤的情况。人尿白蛋白的测定早已广泛应用于临床，尤其是为糖尿病肾病的早期诊断提供了重要依据〔4-6〕。但由于种属差异，大鼠尿白蛋白的测定方法国内至今尚无报道，也缺乏糖尿病大鼠肾病模型早期诊断的指标，检测尿白蛋白对糖尿病大鼠肾病的早期诊断具有重要价值。本方法的建立为糖尿病大鼠肾病模型和其它肾病的研究工作提供了一个较为客观的、灵敏的早期诊断指标，将有助于糖尿病大鼠肾病模型和其它肾损伤动物模型研究工作的进一步开展。 　　上述实验结果表明：本方法各项性能指标均符合要求，批内、批间平均变异系数分别为4.1%和8.3%，回收率为89.2%～112.0%，与人白蛋白、牛白蛋白和大鼠IgG的交叉反应均为阴性，平行实验显示稀释曲线与标准曲线呈良好的平行关系，方法非常稳定。提示本方法具有高度的特异性，完全符合放免分析要求，并且简便、快速，当天即可出结果。 　　本方法测定范围宽达25～1 600&g/L，灵敏度高达9.78&g/L。高灵敏度加上宽的测定范围是本方法的突出优点。高灵敏度确保了低浓度样品检测的准确性和稳定性；宽的测定范围允许同批样品浓度相差较大，因此，对高浓度样品容易做到一次稀释到位，减少多次稀释复查的机率。测定前正常大鼠和糖尿病大鼠尿液要稀释10～200倍，有利于减少尿液中其它成分对测定的干扰，提高了方法的准确性和稳定性。 　　ACEI能够抑制蛋白尿的形成，减少尿白蛋白的排泄已被许多实验所证实〔7-11〕。本实验结果再次明确表明糖尿病大鼠成型2周后，UAE便明显增加(与NC组比较，P＜0.05)，DM组1、6个月与治疗前比较，P＜0.05、P＜0.01，与Resch报道的结果相似〔12〕。这一方面说明本文建立的大鼠尿白蛋白放免检测方法在实践中确实具有很高的灵敏度；另一方面也提示糖尿病大鼠在早到成模2周时就有肾脏功能的损害。本组大鼠DP组培哚普利治疗后1、3、6个月与NC组无明显差异(P＞0.05)，并且在6个月时DP组UAE明显低于DM组(P＜0.01)，提示培哚普利具有明显的抑制糖尿病大鼠尿白蛋白的排泄，对糖尿病大鼠肾脏有一定的保护作用。
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大鼠尿白蛋白放免测定方法的建立及血管紧张素转换酶抑制剂对其排泄率的影响
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王立　潘长玉　黄兆坚　汪寅章　刘艳芳 　　【摘要】　目的　建立大鼠尿白蛋白放免测定方法及其应用意义。方法　用大鼠白蛋白免疫青紫蓝兔，制备抗血清，采用双抗加PEG法。结果　本方法测定范围25～1 600&g/L，灵敏度为9.78&g/L，回收率89.2%～112.0%，批内、批间平均变异系数分别为4.1%和8.3%。大鼠在糖尿病成模2周时，24小时尿白蛋白排泄率(UAE)升高，而培哚普利治疗组尿白蛋白与正常大鼠组无明显差异，在治疗6个月后尿白蛋白明显低于糖尿病(P＜0.01)，培哚普利能明显抑制糖尿病大鼠尿白蛋白排泄，对糖尿病大鼠肾脏有某种保护作用。结论　大鼠尿白蛋白放免测定方法的建立为糖尿病大鼠肾病模型和其他肾病的研究工作提供了一个客观的、灵敏的早期诊断指标。 　　【关键词】　大鼠　　白蛋白　　放免测定方法　　血管紧张素转换酶抑制剂　　尿白蛋白排泄率 Establishment of a radioimmunoassay method for urinary albumin excretion and the effect of ACEI on the excretion in rats WANG Li,PAN Changyu,HUANG Zhaojian,et al. Department of Endocrinology,Xuan Wu Hospital,Beijing,100053 　　【Abstract】　Objective　To establish a radioimmunoassay method for determination of urinary albumin excretion (UAE) in rats and to evaluate its significance. Methods　The rabbits were immunized with rat albumin. Rat urinary albumin excretion was determined radioimmunologically with the prepared antiserum and second antibody-PEG technique. Results　The measurement range of this second antibody-PEG method was 25～1 600&g/L. Recovery rate and intra- and inter-batch variation coefficients were 89.2%～112.0%, 4.1% and 8.3% respectively. 24h UAE was measured in rats which were divided into three groups: the diabetic controls (DM group), the group treated with Perindopril (DP group) and the normal controls (NC group). The 24h UAE in DC group was elevated at 2 weeks and increased significantly thereafter, whereas there was no significant difference in 24 h UAE between DP and NC groups, suggesting that Perindopril might have some renal protective effects. Conclusion　The establishment of a radioimmunoassay method for UAE might provide a reliable and sensitive means of early diagnosis in experimental diabetic nephropathy. 　　【Key words】　Rat　　Albumin　　Radioimmunoassay　　ACEI　　UAE (Chin J Endocrinol Metab, -167) 　　动物实验已经表明血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)能够减少糖尿病大鼠尿白蛋白的排泄，并且对糖尿病早期由于高滤过引起的微量白蛋白也有作用，而尿白蛋白的排泄率是糖尿病肾病早期诊断指标。但由于国内缺少大鼠白蛋白检测方法，至今尚无有关方面的报道。本文旨在建立大鼠尿白蛋白放免分析方法的基础上，初步探讨培哚普利对糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率(UAE)的影响。 材料和方法 　　一、大鼠尿白蛋白放免分析方法 　　1.抗血清制备 　　免疫动物：健康雄性青紫蓝兔4只，兔龄1.0～1.5月，体重1.0～1.5公斤。 　　免疫方法：首次免疫时，取完全福氏佐剂10ml，加入大鼠白蛋白(rAlb，购自Sigma公司)5mg，充分乳化。将青紫蓝兔背部剪毛，清毒后于背部多点皮内注射，每只兔平均注射2ml。加强免疫用不完全福氏佐剂乳化，rAlb剂量减半，每三周免疫一次，共五次。最后一次免疫后10天，颈内动脉插管放血，分离血清，检测抗体效价，分装后-70℃保存。 　　抗体效价检测：选择抗体效价最高的4号兔为工作血清，共效价免疫扩散法为1:64倍阳性，放免法1:64 000稀释抗血清的结合率为55%，达到所要求的滴度。应用时用0.05mol/L pH 7.4 PB(磷酸盐缓冲液)内含0.05mol/L EDTA、0.5% BSA(牛血清白蛋白)将大鼠抗血清稀释至1:8&104。 　　抗血清的亲和常数K：根据K=6YO/(1-YO)(2-YO)(4-YO)(3ED50-ED25)公式〔1〕，计算出K=3.22&1010(L/mol)。YO为结合率(以小数表示)，ED50和ED25为B/B0=50%和25%时的有效剂量(mol/L)。 　　抗血清特异性：rAlb抗血清与人白蛋白、牛白蛋白、大鼠IgG(800、1 600、8 000、160 000&g/L)分别作交叉试验，结果均为阴性，表明本抗血清对rAlb具有高度的特异性。 　　2.rAlb放免测定：125I-rAlb的制备：采用Iodogen标记法〔2〕，Iodogen(Sigma公司)10&g溶于50&l二氯甲烷，加入玻璃管底、氮气吹干后，加入脱脂rAlb 50&g/250&l和Na125I(国产)1.85MBq/6&l，封口，手摇，室温反应10分钟，加PB 200&l，终止反应。经Sephadex G-50柱(1.0cm&4.0cm)层析，收集125I-rAlb峰。鉴定免疫活性合格后分装，-40℃中保存。应用时稀释至1.1～1.2万cpm/100&l。 　　二、培哚普利治疗分组 　　1.糖尿病大鼠模型的建立：选择250g左右成年雄性Wistar大鼠，用STZ方法建立糖尿病大鼠模型，血糖&13.8mol/L列为糖尿病大鼠。 　　2.实验分组及治疗：自糖尿病形成第三天开始，采用长效胰岛素(PZI，丹麦NOVO公司)经生理盐水稀释后皮下注射，2周后按随机方法将糖尿病大鼠分成2组，即糖尿病大鼠组(DM组)和培哚普利治疗组(DP组)。DM组单用胰岛素治疗，根据血糖及糖尿病情况给予PZI 1～4U/日。DP组PZI用法与DM组完全相同，另外应用培哚普利(法国施维雅药厂)剂量为1mg.kg-1.d-1〔3〕，经灌胃给药。正常对照组(NC组)鼠龄、体重均与糖尿病大鼠一致，用等体积生理盐水代替PZI作皮下注射，1次/日。 　　3.标本采集：于糖尿病形成后15天，即治疗前(0)及治疗后1、3、6个月分别用代谢笼饲养，收集24小时尿标本，离心3 500rpm，15分钟后取上清，经叠氮钠处理后，置于-30℃冰箱中保存待测，并采用上述放免方法进行尿白蛋白检测。试验结束时在乙醚麻醉下，取球后静脉血1.5ml，测定血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、肌酐、BUN。由于标本采集技术原因，各时段、组别血尿标本例数不尽相同。 　　三、统计学处理 　　所有数据用平均数&标准误(&)表示，采用方差分析、Q检验进行统计学处理。
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施亚雄 郑善德 【摘要】 目的 观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂(AT1Ra)洛沙坦(Losartan)...
许光武 俞茂华 叶红英 颜贻谦 【摘要】 目的 研究小剂量牛初乳短链胰岛素样生长因子-...
段宇 刘超 蒋须勤 覃又文 刘翠萍 武晓泓 【摘要】 目的 研究白细胞介素-6(IL-6)，-干...
黄勤 邹大进 郭志勇 【摘要】 目的 探讨地塞米松治疗Graves眼病(GO)的作用机制。方法 ...
任艳 田浩明 刘瑞 刘秉文 梁荩忠 【摘要】 目的 探讨载脂蛋白CⅢ(apo CⅢ)基因SstⅠ酶...
伍贤平 廖二元 陆泽元 黄干 邓小戈 彭健 【摘要】 目的 探讨双能X线吸收法 (DXA)测量...
姚吉龙 王洪复 黄敏丽 金慰芳 高建军 魏道林 朱芝玲 【摘要】 目的 观察新型双膦酸盐B...
廖二元 伍贤平 邓小戈 黄干 龙兆丰 彭...
苏青*　综述　罗敏　审校
　　2型糖尿病是一种严重危害人类健康的常见内分泌-代谢疾...
沈菲菲　舒子正　朱姿英　罗勇
　　患者，女，32岁，病案号：316893。因纳差乏力、...
【摘要】　目的　分析我国成人中糖尿病家族史阳性率及其特点。方法　对1994年我国25岁...
A case report of cervical small cell neuroendocrine carcinoma and review of lite...
姚孝礼　高慧　尹爱萍　冯学亮　马秀萍
　　临床上发现自身免疫甲状腺病常常合并远...
冯耀良　朱磊　李麟荪
　　手术无法切除或有手术禁忌的嗜铬细胞瘤(Ph)患者在临床治...
廖二元 伍贤平 邓小戈 黄干 龙兆丰 彭...
郑以漫* 孙荣 李小英 朱达 高梅 赵列宾 许曼音 陈家伦
【摘要】 目的 为研究载脂...
王玺凤 张佰元 全顺玉
13:02:23 中华现代中西医杂志 2004年9月第2卷第9期 ...
王颜刚　王伟　闫胜利　杨立庭　于宏伟
　　近年研究发现，胰岛素抵抗导致的高胰岛...
徐向进　吴学贵　陈频　冯修高　雷勇
　　我们观察了普伐他汀对2型糖尿病高脂血症及...
王艳林　余斌杰　黎宗保*　何哲明　胡少眉
　　【摘要】　目的　探讨过氧钒烟酸(PO...扫扫二维码，随身浏览文档
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通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织a-SMA表达影响的实验研究
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