液相色谱—同位素稀释串联质谱法测定人血清中尿素、尿酸及肌酐的量值--《北京化工大学》2010年硕士论文
液相色谱—同位素稀释串联质谱法测定人血清中尿素、尿酸及肌酐的量值
【摘要】：
人血清中尿素、尿酸与肌酐含量的测定是临床检测中关键的生化指标,为临床诊断和观察病情提供了依据。目前已有多种方法应用于临床实验室中尿素、尿酸与肌酐的含量测定,为保证测量结果的准确可比,实现测量的标准化迫切需要建立准确、可靠的参考方法,研制相关标准物质满足来临床检验的需求。
本文以13C,15N2-尿素作为内标,乙腈为蛋白沉淀剂,用带有电喷雾离子源的三重四极质谱的多重反应监模式(MRM)检测目标离子对(m/z61.1-44,64.1-46),使用括号法定量,分别考查了血清尿素准确测量的所需的前处理条件、液相色谱分离条件、质谱条件和测量条件建立了测定血清中尿素的液相色谱-同位素稀释串联质谱方法。
应用本法对两种浓度的血清尿素进行定值,结果的相对标准偏差(RSD)均小于1%,使用美国NIST标准物质909b LevelⅠ对方法进行验证,测量结果与靶值的偏差为-0.38%且在给定的不确定度范围内。方法的检测限为0.55μg/g(3倍信噪比),方法的平均回收率为100.1%和99.9%,通过参加RELA2009血清尿素量值比对,进一步对方法进行确证。对盲样进行了准确测定,全面分析了影响测量结果的因素,并对不确定度进行了评定,对于两个水平的血清尿素不确定度分别为1.2%和0.84%。
本文提出的血清中尿素测量的液相色谱-同位素稀释串联质谱法,原理可靠、前处理简单、定量准确,可作为血清尿素测量的候选参考方法。
中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所组织了中、日、韩三国计量院的血清中代谢物(尿酸、肌酐)量值比对,应用液相色谱-同位素稀释串联质谱法对目标物进行测定,各国的测量结果等效一致。
【关键词】：
【学位授予单位】：北京化工大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：R446.1【目录】：
ABSTRACT7-18
第一章 文献综述18-27
1.1 概述18-19
1.1.1 尿素18
1.1.2 尿素在人体中的代谢及临床意义18-19
1.2 血清中尿素的测定方法19-23
1.2.1 波氏比色法19
1.2.2 脲酶电极法19
1.2.3 脲酶速率法19-20
1.2.4 离子电导法20
1.2.5 二乙酰肟法20-21
1.2.6 邻苯二甲醛法21
1.2.7 干化学法21
1.2.8 气相色谱/同位素稀释质谱法21-23
1.2.9 液相色谱/大气压电离质谱法23
1.3 血清中尿酸、肌酐标准物质的测定方法23-24
1.3.1 液相色谱—同位素稀释谱法测定血清中尿酸23
1.3.2 气相色谱—同位素稀释谱法测定血清中肌酐23-24
1.3.3 液相色谱—同位素稀释谱法测定血清中肌酐24
1.4 本课题研究的目的和意义24-26
1.4.1 血清尿素参考方法的建立24-25
1.4.2 血清代谢物标准物(尿酸、肌酐)的质量值比对25-26
1.5 本课题的难点与创新点26-27
第二章 液相色谱—同位素稀释/串联质谱法测定血清中尿素27-39
2.1 仪器、试剂与实验材料27-28
2.1.1 仪器27
2.1.2 血清样品27
2.1.3 试剂27-28
2.2 溶液配制及样品预处理28
2.2.1 标准溶液配制28
2.2.2 校准比值混合溶液配制28
2.2.3 血清样品制备28
2.3 血清中尿素的测定实验方法选择28-35
2.3.1 沉淀剂用量29
2.3.2 色谱条件29
2.3.3 质谱条件29-34
2.3.4 分析过程34
2.3.5 数据处理34-35
2.4 结果与讨论35-37
2.4.1 方法的精密度35-36
2.4.2 回收率36
2.4.3 线性范围和检测限36-37
2.4.4 方法的确证37
2.5 定值结果37-38
2.6 小结38-39
第三章 血清尿素的量值比对-RELA 200939-46
3.1 仪器、试剂与实验材料39
3.1.1 仪器39
3.1.2 血清样品39
3.1.3 试剂39
3.2 溶液配制及样品预处理39-40
3.2.1 标准溶液配制39-40
3.2.2 校准比值混合溶液配制40
3.2.3 血清样品制备40
3.3 血清中尿素测量条件40-41
3.3.1 色谱条件40-41
3.3.2 质谱条件41
3.3.3 分析过程41
3.4 测量结果41-42
3.5 测量不确定度分析42-43
3.5.1 随机因素产生的不确定度42
3.5.2 非随机因素产生的不确定度42-43
3.6 不确定度计算43-44
3.6.1 尿素测量不确定度43-44
3.7 比对样品定值结果44-45
3.7.1 血清中尿素-水平A44-45
3.7.2 血清中尿素-水平B45
3.8 小结45-46
第四章 血清代谢物标准物质(尿酸、肌酐)的量值比对46-59
4.1 仪器与试剂46
4.1.1 仪器46
4.1.2 血清样品46
4.1.3 试剂46
4.2 血清中尿酸测量条件46-48
4.2.1 液相色谱测量条件47
4.2.2 质谱测量条件47
4.2.3 溶液配制47-48
4.2.4 样品前处理48
4.3 血清中肌酐测量条件48-49
4.3.1 液相色谱测量条件48
4.3.2 质谱测量条件48
4.3.3 溶液配制48-49
4.3.4 样品前处理49
4.4 测定与计算方法49-51
4.5 测量结果51-53
4.5.1 血清中代谢物(多组分)标准物质-水平151-52
4.5.2 血清中代谢物(多组分)标准物质-水平252-53
4.6 测量不确定度分析53-54
4.6.1 随机因素产生的不确定度53
4.6.2 非随机因素产生的不确定度53-54
4.7 不确定度计算54-56
4.7.1 尿酸测量不确定度54-55
4.7.2 肌酐测量不确定度55-56
4.8 标准物质定值结果56-57
4.8.1 血清中代谢物(多组分)标准物质-水平156-57
4.8.2 血清中代谢物(多组分)标准物质-水平257
4.9 标准物质量值的国际验证57-58
4.10 小结58-59
第五章 结论59-60
参考文献60-63
研究成果及发表的学术论文64-65
作者简介65
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京公网安备74号下面来测试一下温和性~
先来介绍下皮肤的PH值~
由于在人体皮肤表面存留着尿素、尿酸、盐分、乳酸、氨基酸、游离脂肪酸等酸性物质，所以皮肤表面常显弱酸性。
(1)正常皮肤表面ph值约为5.0～7.0。
(2)最低可到4.0，最高可到9.6.
(3)皮肤的ph值平均约5.8。病情分析:尿素氮是一种蛋白素代谢产物,在肝脏制造,循环到肾脏,肾脏再排泄到尿液中.血液的尿素氮浓度就会大增.尿素氮的浓度,代表着人体的蛋白摄取量,蛋白代谢机能,肾功能等三项生理反应的调节结果. 意见建议:纳功能失整,尿素氮?偏高或尿素氮偏低. 肾功能失调,尿素氮会偏高或偏低.偏高的尿素氮,与吃太多蛋白质,感染,发烧,糖尿病,甲状腺亢进有关. 也是原因. 尿素氮偏低,可能与蛋白质吃得太少,怀孕,肝衰竭有关. 生活护理:谢谢您的提问,希望我的回答能让您满意
病情分析:尿素氮偏低
经常是吃太少营养所致,宜增加食物的摄取.尤其是好的蛋白质例如动物的肉,鱼,奶,蛋,及大豆制品豆腐,豆干等食物. 意见建议:营养不好,吃些肉,都会上来.尿素氮是蛋白质代谢的指标,蛋白质不足,代谢的就少. 生活护理:你自己要经常去医院检查检查.
病情分析:你好,尿素氮偏低没有关系,偶尔偏高也是正常的.血尿素氮?肾功能主要指标之一 ,是人体蛋白质代谢的主要终末产物.意见建议:通常肾脏为排泄尿素的主要器官,尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收,但肾小管内尿流速越快重吸收越少,也即达到了最大清除率.和血肌酐一样,在肾功能损害早期,血尿素氮可在正常范围.在肾衰竭患者,当肾小球滤过率下降到正常的50％以下时,血尿素氮的浓度才迅速升高.生活护理:较易受饮食,肾血流量的影响,如有蛋白质分解因素?感染,肠道出血,甲亢等可使尿素氮升高.肾小球滤过率下降至正常的1/2~~1/3时,尿素氮逐步升高,一般情况下血尿素氮与血肌酐的比值是10.1,比值生高的原因有胃肠道出血,溶血,心功能不全和组织分解增强（烧伤,高热,肾上腺皮质激素治疗等）,多为肾前因素引起,比值降低见于蛋白质摄入过少,严重肝肾功能不全等.综合你的情况来看,你是因为蛋白质摄入过少引起的.平时多吃些鸡蛋,瘦肉,牛奶就可以了.
病情分析:你好 血尿素氮?肾功能主要指标之一 .所以尿素氮的变化对非蛋白氮数值的影响较大.临床上常选用尿素氮的检测来代替非蛋白氮的测定.　　尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物.氨基酸脱氨基产生NH3,和C02,两者在肝脏中合成尿素,每克蛋白质代谢产生尿素0.3g.尿素中氮含量为28／60,几乎达一半.通常肾脏为排泄尿素的主要器官,尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收,但肾小管内尿流速越快重吸收越少,也即达到了最大清除率.和血肌酐一样,在肾功能损害早期,血尿素氮可在正常范围.当肾小球滤过率下降到正常的50％以下时,血尿素氮的浓度才迅速升高.正常情况下,血尿素氮与肌酐之比(BUN／Scr)值约为10,高蛋白饮食,高分解代谢状态,缺水,肾缺血,血容量不足及某些急性肾小球肾炎,均可使比值增高,甚至可达20～30;而低蛋白饮食,肝疾病常使比值降低,此时可称为低氮质血症. 意见建议:正常成人空腹BUN为3.2-7.1mmol／L(9-20mg／d1).各种肾实质性病变,如肾小球肾炎,间质性肾炎,急慢性肾功能衰竭,肾内占位性和破坏性病变均可使血尿素氮增高.多肾外因素也可引起血尿素氮升高,如能排除肾外因素,BUN),21.4mmol／L(60mg／d1)即为尿毒症诊断指标之一. 　降低：急性肾小管坏死. 　　血肌酐〈Scr〉和尿素氮〈BuN〉两者分别为含氮的有机物和蛋白质代谢的终末产物,在肾功能正常的情况下,这些小分子物质从肾小球滤出,故可用作肾小球滤过功能的诊断和过筛指标.当肾小球滤过功能减低时,血肌酐和尿素氮 因潴留而增高.生活护理:你的尿素氮的值只比正常值稍低了一点而且你自己自生也没有感觉有什么症状 应该不会有什么问题的 但是还是建议你做一个肾脏方面的检查
病情分析:血尿素氮?肾功能主要指标之一 .所以尿素氮的变化对非蛋白氮数值的影响较大.临床上常选用尿素氮的检测来代替非蛋白氮的测定.　　尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物.氨基酸脱氨基产生NH3,和C02,两者在肝脏中合成尿素,每克蛋白质代谢产生尿素0.3g.尿素中氮含量为28／60,几乎达一半.通常肾脏为排泄尿素的主要器官,尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收,但肾小管内尿流速越快重吸收越少,也即达到了最大清除率.和血肌酐一样,在肾功能损害早期,血尿素氮可在正常范围.当肾小球滤过率下降到正常的50％以下时,血尿素氮的浓度才迅速升高.正常情况下,血尿素氮与肌酐之比(BUN／Scr)值约为10,高蛋白饮食,高分解代谢状态,缺水,肾缺血,血容量不足及某些急性肾小球肾炎,均可使比值增高,甚至可达20～30;而低蛋白饮食,肝疾病常使比值降低,此时可称为低氮质血症. 　　正常成人空腹BUN为3.2-7.1mmol／L(9-20mg／d1).意见建议:您是不是常吃素食?先排除一下生理因素 长期素食主义者是有这种可能的.血液尿素氮的来源主要来自食物的蛋白质,它是人体最大的氮源,如果你没有其他肾功指标的异常,相信可能就是蛋白质摄入过少,看来你需要增加营养了. 生活护理:建议您增加营养,增加蛋白质的摄入量,尤其是好的蛋白质例如动物的肉,鱼,奶,蛋,及大豆制品豆腐,豆干等食物.
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我发豆芽该什么时候浇尿素水？吃了对人体有害吗
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发了牙之后就可以浇
自己吃就不要浇了 肯定是对人体有害的 尿素是农药啊 又没见阳光 呵呵 最好就不要加了 加少耷熏察吭亟咎铲汛扯陌量也是可以的 但不要常吃 采纳哦
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出门在外也不愁阅读（15302）回复（40） 一个中国人一天要食用多少尿素？看下题你来算[转贴]
尿素： 1、作为农业肥料。调节花量、疏菜、瓜果、水稻制种、防治害虫等。
　　　　2、作为养殖业：牛羊属复胃反刍动物,有发达的瘤、网胃系统,胃内寄生有数以亿 计的微生物在活动,可利用饲料中的非蛋白质含氮化合物合成微生物蛋白质,在消化酶的作用下,被牛羊消化吸收.尿素是非蛋白质含氮化合物,含氮量约为46%,而蛋白质的平均含氮量是16%,因此可以认为1千克尿素(含氮量)相当于7.03千克含粗蛋白质40.9%的机榨豆饼(7.03千克×40.9%×16%=460克),能合成2.88千克粗蛋白质(1千克×46%÷16%=7.03千克×40.9%=2.88千克).因此,使用尿素可代替反刍动物日粮中一部分蛋白质饲料,解决了畜牧业发展中蛋白质饲料的严重不足.而尿素又是化工产品,能大批生产,成本低,数量多,是养牛养羊业很有前途的蛋白质补充料。
　　　3、化妆品也会用到尿素；
4、也可以用于漂白助剂；
　　　　５、尿素豆芽
　　　　６、国*家质量监督要异口同声的说是不法之徒加入了三聚氰氨，其实就是为为了掩盖一个更可怕的问题，那就是加入的其他毒性更大的东西，说穿了就是尿素，尿素作为一种便宜的农家化肥，真是经济实惠的“好添加剂”。 （转贴）
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作者：发表于： 09:39:56sofa
作者：发表于： 09:46:21我得２Ｇ
作者：发表于： 09:47:42尿素不是用来种菜的？种菜还不是给我们吃？那现在提早点吃？
作者：发表于： 09:48:47我们的生活离不开它啦，
作者：发表于： 09:49:20尿素人生
作者：发表于： 09:52:26谁能算一下？很难吗
作者：发表于： 09:56:36?
作者：发表于： 10:21:56所有氨类化工原料都有作假蛋白的可能性。
作者：发表于： 10:23:06请大家支持黑龙江省的乳制品企业！俺们东北人都是活雷锋哈！
请大家支持黑龙江省的乳制品企业！俺们东北人都是活雷锋哈！
请大家支持黑龙江省的乳制品企业！俺们东北人都是活雷锋哈！
作者：发表于： 10:28:08李长江该以死谢罪,李的上司该辞职!
作者：发表于： 10:32:30所有氨类化工原料都有作假蛋白的可能性。
可别错加了 氰化钾
个人签名：Q 作者：发表于： 10:38:50尿素有毒吗？人尿中也能检出尿素是怎么回事？
作者：发表于： 11:12:25那说说日常食品中那些东西是可以正常信用的?恐怕很难找到能安全信用的食品了吧? 个人签名：抵制日货 从我做起! 作者：发表于： 11:15:52再这样下去，所有的国人都将变成百毒不侵 金钢不坏之身，因为都练出来了。吃的用的穿的找得出来没毒的吗？
作者：发表于： 11:19:57信仰缺失，道德沦丧！ 个人签名：穷则独善其身，达则兼善天下。 作者：发表于： 11:28:38不怕，吃毒吃多了，我们中国人个个都能变成西毒欧阳峰了~~~到时候真的百毒不侵了~~牛B呀~~~