北方網日新聞匯總
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药物毒理学实验方法与技术
丛&&&&&&&&书：&
作&&&&&&&&者：&,,
编&&&&&&&&号：&42198
书&&&&&&&&号：&7
出&&版&&社：&
出版日期：&
定&&&&&&&&价：&139.0 元
&&&&本书介绍了药物毒理学实验的一些总体要求，重点阐述了药物非临床安全性评价研究各项实验内容的技术要求和方法，以及靶器官毒理学实验技术和方法。主要内容有：药物毒理学概述；常用实验仪器和实验操作技术；实验动物饲养管理；实验影响因素和数据的统计处理；GLP及管理要点；药物非临床安全性评价各主要研究内容(安全药理学实验、急性毒性实验、长期毒性实验、毒代动力学实验、遗传毒理学实验、生殖毒性实验、致癌性实验和其他毒性实验等)的技术要求和实验方法；药物靶器官(心血管、呼吸、神经、免疫、血液、内分泌系统和肝、肾等)毒理学实验方法与技术；药物毒性病理学和分子毒理学实验方法与技术；计算机技术在药物毒理学实验中的应用等。本书可供新药研发人员、药物毒理学和其他毒理学研究人员、研究生、药物毒理学相关医药专业学生、老师等参考。
第一章概述1第一节药物毒理学2一、定义和术语2二、目的和意义3三、研究领域和内容6第二节药物毒理学发展简史8一、古代的药物毒理学9二、近代的药物毒理学10三、现代的药物毒理学12第三节药物毒理学发展趋势14一、药物安全性的多学科综合评价14二、药物毒理学新技术15三、关于3R研究16四、发现毒理学17五、毒理组学技术18参考文献19第二章常用实验仪器21第一节自动生化分析仪器21一、基本结构和工作原理简介21二、自动生化分析仪实例22三、注意事项25第二节血液分析仪器26一、基本结构和工作原理简介26二、血液分析仪实例27三、注意事项31第三节血液凝固分析仪器32一、基本结构和工作原理简介32二、血凝仪器实例33三、注意事项33第四节尿液分析仪器34一、基本结构和原理简介34二、尿液分析仪实例35三、注意事项36第五节安全药理实验常用仪器36一、生物机能实验系统36二、自主活动记录仪38参考文献39第三章实验动物的饲养管理40第一节毒性实验常用的实验动物的种类和特征40一、小鼠40二、大鼠46三、豚鼠48四、家兔51五、犬53六、猕猴54第二节毒性实验的实验动物设施、设备和使用管理57一、实验动物设施的功能设置情况57二、实验动物设施的运转监测59第三节毒性实验的实验动物日常饲养管理63依据实验计划书订购动物63第四节实验动物的微生物管理66一、实验动物微生物对实验的影响66二、实验动物设施的微生物监测67第五节实验动物管理各种操作的标准操作规程70一、实验动物管理各种操作的标准操作规程制作70二、实验动物管理各种操作的标准操作规程内容71参考文献72第四章动物实验设施和实验准备73第一节动物实验观察室环境设施设备条件与要求73一、环境设施的一般要求73二、环境设施的分类73三、饲养观察室内应具备的一些基本设备74四、饲养观察室内可配备的一些特殊设备74第二节普通环境下动物实验观察与日常管理要求74一、毒性实验中小动物的日常管理要求74二、感染试验中动物的日常管理要求75三、手术后动物日常管理要求75第三节屏障环境内动物实验观察与操作规范76一、屏障环境的一般特点76二、屏障环境的一般工作流程76三、屏障环境内的消毒措施77四、饲育器具的清洗和灭菌78五、辅助工作78第四节隔离环境内动物实验观察与操作规范79一、隔离器的组装与灭菌79二、隔离器的使用80第五节简易隔离环境内的操作规范83一、操作规程及注意事项83二、维护83三、微型隔离环境的使用83第六节动物手术室设备及管理要求84一、动物手术室设备要求84二、动物手术室的管理要求84第七节实验动物准备与要求84一、实验动物饲料的准备84二、实验动物饮水的准备85三、实验动物垫料的准备85四、实验动物笼具的准备85五、实验动物电子秤的准备85六、实验动物的准备85第八节实验器材的清洗和准备86一、实验器具的清洗和准备86二、常用清洁液、抗凝剂和麻醉液的配制86三、实验试剂的准备87第九节动物病理解剖的准备89一、动物解剖前的准备89二、组织病理固定液的配制89三、组织病理染液的配制89四、蜡块的准备90五、载玻片和盖玻片的浸泡与准备90第十节动物样品的采集90一、动物血液的采集方法90二、动物体液的采集法95参考文献99第五章动物实验常用操作技术100第一节实验动物临床检查基本方法100一、全身状态的一般检查100二、系统检查内容及方法102三、实验室检查104第二节实验动物病理解剖技术114一、实验动物的处死114二、实验动物的尸体剖检116三、动物组织学标本的选取121第三节动物实验基本操作技术122一、健康动物的识别122二、实验动物的抓取与固定122三、实验动物性别的判定124四、实验动物的编号与标记125五、实验动物的脱毛方法127六、实验动物的麻醉方法129七、实验动物的给药途径和方法133参考文献140第六章常用统计方法141第一节半数致死量的常用计算方法141一、急性毒性试验和半数致死量141二、LD50计算常用的统计方法141第二节药物毒理学研究中常用的统计方法146一、t检验146二、方差分析149三、秩和检验153四、χ2检验157参考文献160第七章影响药物毒理学实验的因素161第一节受试物对毒性实验的影响161一、脂水分配系数161二、电离度162三、溶解度162四、赋形剂163第二节实验动物对毒性实验的影响164一、实验动物的种属差异164二、实验动物的个体差异167第三节给药方法对毒性实验的影响169一、给药途径169二、其他影响因素170第四节实验环境对毒性实验的影响171一、饲料171二、温度172三、湿度174四、其他因素174第五节其他因素对毒性实验的影响175一、捕捉、固定动物175二、操作技术176三、观察、记录及保存176四、病理切片操作176五、统计处理177参考文献177第八章GLP实验室的组织管理178第一节历史与现状178一、国外发展历史与现状178二、国内发展历史与现状179第二节实施GLP的目的和意义179一、GLP的目的和意义179二、GLP的适用范围179第三节GLP的内容180一、GLP的基本内容180二、我国GLP的主要内容180第四节GLP实验室管理要点184一、组织管理中需要重点关注的环节184二、我国GLP与其他国家或组织GLP的主要差异188三、目前存在的问题和建议188参考文献189第九章安全药理学实验方法与技术190第一节概述190一、目的和意义190二、国内外进展190三、基本原则191第二节国内一般药理学实验技术要求192一、主要研究内容192二、实验系统193三、受试物193四、剂量设计和分组193五、给药途径193六、给药频率194七、检测指标194八、观察时间194九、统计处理和结果评价194第三节ICH的技术要求194一、安全药理学的实验内容194二、安全药理学实验的基本原则196三、实验系统的选择197四、实验设计198参考文献199第十章急性毒性实验技术要求200第一节概述200一、急性毒性实验的定义、目的和意义200二、基本内容和技术要求200第二节急性毒性实验常用方法203一、限度实验204二、固定剂量法204三、上下法205四、累积剂量设计法（金字塔法，pyramiding&studies）206五、半数致死剂量法207六、急性毒性实验中应注意的问题207第三节ICH对急性毒性实验的要求209第四节国外急性毒性实验指导原则简介210参考文献210第十一章长期毒性实验方法与技术212第一节概述212一、目的和意义212二、基本原则212第二节实验方法与技术213一、实验条件213二、对受试物的要求213三、动物选择214四、剂量设计215五、给药方法218六、指标确定221七、毒物代谢动力学227八、实验结果分析227九、实验评价229参考文献231第十二章皮肤给药毒性试验方法与技术232第一节皮肤给药急性毒性实验232一、定义232二、受试物232三、实验动物及实验条件232四、剂量设计233五、实验操作233六、观察指标233七、结果评价234第二节皮肤给药长期毒性实验234一、定义234二、受试物234三、实验动物及实验条件234四、剂量设计234五、给药期限235六、给药频率235七、恢复期限235八、实验操作235九、观察指标236十、结果评价236第三节皮肤刺激性实验236一、定义236二、受试物236三、实验动物及实验条件236四、实验操作237五、观察指标237六、结果评价237七、需要/不需要进行该实验的情况238第四节过敏性实验238一、皮肤过敏性实验239二、啮齿类动物局部淋巴结实验241三、被动皮肤过敏实验242四、皮肤光毒性实验244五、皮肤光过敏反应实验246六、全身主动过敏实验247参考文献249第十三章局部给药毒性实验方法与技术250第一节腔道给药的急性毒性实验250一、定义250二、受试物250三、实验动物及实验条件250四、剂量设计251五、实验操作251六、观察指标251七、结果评价251第二节腔道给药的长期毒性实验252第三节刺激性实验252一、眼刺激性实验252二、血管刺激性实验254三、肌肉刺激性实验255四、直肠刺激性实验256五、阴道刺激性实验257六、滴鼻剂和吸入剂刺激性实验257七、口腔用药和滴耳剂刺激性实验258第四节溶血性实验259一、定义259二、常规的体外试管法（肉眼观察法）259三、体外溶血性实验法（分光光度法）260四、体外红细胞计数法261五、体内溶血实验法（红细胞计数法）261参考文献261第十四章遗传毒理学实验方法与技术262第一节体外遗传毒理实验方法263一、鼠伤寒沙门菌诱变性实验263二、体外哺乳动物细胞染色体畸变实验268三、小鼠淋巴瘤细胞L5178&YTK+/-基因突变实验271四、姐妹染色单体交换实验274五、枯草杆菌DNA修复实验276六、SOS显色实验278七、单细胞凝胶电泳技术280八、V79（CHO）/HGPRT基因位点突变实验283九、程序外DNA合成实验285第二节体内遗传毒理学实验方法290一、动物体内骨髓细胞微核实验290二、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变实验292三、小鼠精子畸形实验294四、显性致死实验296五、小鼠睾丸染色体畸变实验297参考文献299第十五章生殖毒性实验方法与技术300第一节一般生殖毒性实验300一、基本原理300二、材料与方法301三、实验设计302四、雄性动物的观察和检查303五、雌性动物的观察和检查312六、一般生殖毒性实验的统计处理318七、一般生殖毒性实验的质量保证321八、实验结果的报告321第二节围生期生殖毒性实验321一、基本原理321二、材料与方法322三、实验设计322四、母体数据的采集324五、子代数据的采集326六、统计分析341七、围生期生殖毒性实验的质量保证343八、实验结果的报告344第三节致畸敏感期生殖毒性实验345一、基本原理345二、材料与方法345三、实验设计348四、致畸敏感期生殖毒性实验的质量保证366五、实验结果的报告366参考文献367第十六章致癌性实验方法与技术368第一节啮齿类致癌实验368一、基本原理369二、实验设计369三、实验的实施376四、实验结果的评价386第二节叙利亚地鼠胚胎细胞体外恶性转化实验387一、基本原理387二、SHE原代细胞的制备387三、细胞转化实验388四、集落分离389五、染色体数目与核型分析389六、细胞凝集实验390七、半固体琼脂培养基中集落形成率测定390八、动物接种致瘤实验390参考文献391第十七章药物依赖性实验方法与技术392第一节身体依赖性实验方法392一、自然戒断实验393二、替代实验394三、催促实验395四、诱导实验396第二节药物的精神依赖性评价方法396一、自身给药实验397二、药物辨别实验399三、条件性位置偏爱试实验401参考文献402第十八章毒代动力学实验方法与技术403第一节概述403一、毒代动力学的基本概念403二、毒代动力学研究的目的与意义404三、毒代动力学与药代动力学的区别与联系404第二节毒代动力学的研究对象、研究内容和基本技术要求405一、研究对象405二、研究内容405三、基本原则410四、实验研究的基本要求410第三节生物样品分析方法的建立和确证414一、特异性415二、标准曲线与定量范围415三、精密度与准确度415四、灵敏度和定量下限416五、样品稳定性416六、提取回收率416七、质控样品与质量控制416八、免疫学和生物学法417第四节生物样品的预处理和储存417一、预处理的目的417二、预处理的方法与步骤418三、生物样品的储存422第五节常用分析方法423一、光谱法423二、色谱法424三、免疫学方法430四、生物学检定方法435第六节结果分析与评价436一、暴露的定量436二、结果分析中应考虑的因素436参考文献437第十九章心血管系统毒性实验方法与技术438第一节心血管毒理学概念438第二节心血管系统生理438一、心血管系统构成438二、心脏生理438三、血管生理439第三节作用于心血管药物的毒性439一、作用于心脏的药物439二、作用于血管的毒物443第四节心血管药物的毒理学实验方法和技术445一、实验系统的选择446二、血管毒性评价技术和方法446三、心脏毒性评价技术和方法447四、实验中应注意的问题454第五节心血管药物的毒性作用机制455一、心脏毒性作用机制455二、血管毒性作用机制457参考文献457第二十章神经系统毒性实验方法与技术459第一节神经系统毒性概述459一、神经系统毒性的特点459二、神经系统毒性的表现460三、神经系统毒性的影响因素462四、神经系统毒性物质463第二节神经系统毒性的研究方法概述464一、功能观测组合检查方法464二、神经学检查464三、形态学方法465四、生化检查465五、电生理学方法465六、神经细胞培养的方法465七、神经毒理学的动物模型466八、行为学检测方法466第三节学习及记忆的评价方法467一、实验方法及参数的选择467二、学习及记忆测试组合数目的选择468三、促动性刺激468四、试验类型的选择469五、学习及记忆功能测试从属变量数目469六、评价学习及记忆功能的实验动物469第四节活动功能的评价方法470一、活动度测定470二、运动协调功能测试471三、震颤471四、评价动物活动的测试组合472参考文献472第二十一章免疫系统毒性实验方法与技术473第一节概述473一、引言473二、实验设计473三、实验方法的鉴定和验证474第二节免疫抑制474一、与免疫毒性有关的标准毒理学研究475二、免疫毒性或免疫功能研究477第三节超敏反应实验491一、动物模型491二、检测特异性抗体的方法492三、评价呼吸性超敏反应的方法492四、评价接触性超敏反应的方法492第四节自身免疫反应实验495参考文献496第二十二章血液系统毒性实验方法与技术498第一节造血组织的结构与功能498一、骨髓498二、脾与网状内皮系统499三、淋巴组织500四、胸腺501五、血细胞发生过程的形态演变502第二节药物对于造血细胞与微环境的毒性作用503一、骨髓抑制503二、对红系细胞的毒性504三、对白细胞的毒性505四、对血小板与止血功能的影响506第三节血液毒性的研究方法507一、血液一般检验507二、凝血检测509三、骨髓检查511四、体外血液毒理学检测方法513参考文献515第二十三章肝脏毒理学实验方法与技术516第一节肝损伤的体内评价方法516一、肝细胞损伤的血清酶学检测516二、肝功能实验521三、肝纤维化测定526第二节肝损伤的体外评价方法527一、离体肝脏灌流技术527二、肝细胞原代培养530第三节肝损伤的动物模型532一、急性肝损伤动物模型532二、肝纤维化动物模型535三、小鼠免疫性肝损伤模型537第四节细胞色素P450酶系（CYP450）实验方法538一、大鼠肝脏微粒体酶诱导方法539二、肝脏微粒体的制备539三、肝脏微粒体蛋白定量（Lowry基本法）541四、细胞色素P450及其主要亚型活性测定542第五节肝细胞其他常用亚细胞组分的制备方法547一、肝脏线粒体的制备547二、肝脏亚线粒体颗粒的制备548三、肝细胞膜的制备548参考文献549第二十四章肾脏毒理学实验方法与技术551第一节整体实验551一、肾小球滤过率实验法551二、肾小管功能测定法——葡萄糖重吸收试验552三、功能生化检验法553第二节离体实验558一、肾脏灌流技术558二、肾切片技术559三、游离肾小管、肾小球悬液560四、肾细胞培养实验法560第三节体外药物肾毒性实验方法562一、细胞形态学562二、细胞生长和增殖活性562三、细胞结构损伤563四、细胞周期的改变564五、细胞代谢功能564参考文献565第二十五章呼吸系统毒理学实验方法与技术567第一节呼吸系统毒性概述567一、呼吸系统毒性研究意义567二、药物及其毒副作用568三、对受试物的要求569四、给药途径与周期569五、动物选择570六、剂量选择570七、观察指标570第二节呼吸系统毒理学实验方法571一、呼吸功能测定571二、物理学检查577三、生化检测577四、体外实验591五、体内实验596六、病理组织学检查610第三节结果与评估612参考文献613第二十六章内分泌系统毒性实验方法与技术614第一节概述614第二节内分泌系统的一般概况615第三节内分泌激素的生化测定方法616一、放射免疫法616二、酶联免疫吸附法619三、免疫放射分析法622四、酶扩大免疫测定技术623五、化学发光免疫测定法624六、荧光免疫分析法624七、单克隆抗体测定法627八、基因表达法629九、多聚酶链反应629参考文献630第二十七章药物毒性病理学检查基本方法631第一节实验动物剖检632一、解剖室条件632二、大动物剖检方法633三、小动物剖检方法636第二节组织制片637一、取材637二、组织固定640三、组织脱水644四、组织透明645五、组织浸蜡和包埋646六、组织切片647七、骨组织脱钙650八、眼球切片的准备652第三节组织切片染色652一、&常规染色653二、胶原纤维染色657三、弹力纤维染色659四、网状纤维染色660五、肌组织染色661六、神经组织染色664七、肝组织染色667八、肾组织染色667九、胰岛三种细胞染色669十、垂体三种细胞染色670十一、脂类物质染色671十二、糖类物质染色673十三、细菌染色674十四、真菌染色675十五、组织内铁和钙的显示677第四节免疫组织（细胞）化学678一、免疫荧光细胞化学679二、免疫酶细胞化学680三、亲和免疫细胞化学682四、免疫组化技术的基本要求和条件控制685第五节脏器重量和脏器系数689一、脏器称重和脏器系数计算689二、脏器重量和脏器系数的意义及局限性690第六节组织学检查692一、一般原则692二、读片程序692三、分析判别693第七节电子显微镜及超薄切片技术695一、样品制备概述696二、取材696三、固定696四、脱水697五、浸透和包埋698六、电镜标本的超薄切片698七、超薄切片染色699参考文献700第二十八章分子毒理学实验方法与技术701第一节核酸的分离与纯化701一、DNA的分离纯化702二、RNA的分离纯化703第二节核酸的分子杂交704一、Southern印迹杂交704二、RNA的Northern印迹杂交707第三节蛋白质转移印迹技术708一、蛋白质样品的制备和纯化708二、蛋白质含量的测定711三、蛋白质的SDS?聚丙烯酰胺凝胶电泳713四、蛋白质的转移印迹技术715第四节聚合酶链反应717一、PCR的基本原理717二、PCR反应成分和作用718三、PCR反应引物的设计720四、PCR反应产物的检测720第五节转基因动物技术721一、转基因技术722二、转基因个体的建立723三、转基因小鼠个体的检测725第六节生物芯片技术725一、生物芯片的类型725二、生物芯片应用的大致操作流程——探针的设计、合成与芯片的制作726三、生物芯片应用的具体操作方法727四、生物芯片在毒理中的应用729第七节蛋白质组学技术731一、概述731二、蛋白质组学研究的技术体系731三、蛋白质组学实验的操作过程737四、蛋白质组学的应用741第八节代谢组学技术742一、概述742二、代谢组学技术研究的对象——生物体液742三、代谢组学技术研究的核心——核磁共振技术（NMR）744四、代谢组学技术研究的支柱——模式识别技术744五、代谢组学技术研究的应用745参考文献747第二十九章计算机技术在药物毒理学实验中的应用749第一节计算机系统在新药安全评价研究应用中的基本要求749一、明确各层次人员的职责749二、人员的培训750三、维护和灾难恢复750四、数据的采集和维护751五、安全性751六、计算机系统的确证751七、文件要求752八、资料保管752九、计算机系统的审查752第二节实验室信息管理系统753一、实验室信息管理系统简介753二、LIMS的分类753三、LIMS技术的发展754四、LIMS的设计特点754五、LIMS的组成模块与设计755六、LIMS的确证755七、结语755参考文献755附录1常用统计学界值表756附录2常用浓度换算与常用试剂配制766一、常用酸碱溶液的比重及配制方法766二、常用缓冲液配制767三、常用染色剂的配制774四、常用洗涤剂的特性和配制777五、去污渍的方法779六、常用实验动物生物学数据779参考文献783